脐血HLA-AB分型方法探讨

目的　探讨脐血HLA AB分型方法。方法　分别采用血清学方法和PCR SSP基因定型方法对 1 0 2份脐血HLA A、B位点进行检测。结果　两方法对比分析结果显示血清学近 1 8.6 %不能得出满意结果 ,HLA A、B位点错定率分别为 6 .1 %和 1 0 .8% ,总错误率 1 6 .9%。结论　脐血HLA表达水平低 ,单个核细胞反应弱及部分交叉反应是造成血清学不能确定或错定的主要原因     

脐血HLA-B15组血清学与DNA定型方法的比较研究

目的　探讨血清学方法对脐血HLA B1 5特异性组分型存在的误差 ,及应用PCR SSP方法分型的可行性。方法　分别采用微量淋巴细胞毒实验和PCR SSP方法对 1 37份脐血做分型对比研究。结果　DNA分型成功率 1 0 0 % ,特异性、敏感性好 ,血清学对B1 5组分型总误差 1 5 % ,主要发生在B62、B75、B1 51 1 / 1 50 8/ 4 6这几个位点     

HLA-B血清学纯合型标本的PCR-SSP基因分型

目的 探讨血清学和PCR—SSP 2种方法在HLA-B位点分型的应用价值。方法 对血清学分型HLA—B位点纯合型标本,用PCR—SSP方法进行基因分型。结果 血清学分型为纯合型的75例标本中,PCR—SSP方法基因分型有12例为杂合型。结论 HLA—B的PCR—SSP基因分型结果准确、可靠,而血清学分型方法成本低,快速简便。     

应用PCR—SSP进行HLA—AB基因分型及与血清学方法的比较

目的 建立HLAⅠ类基因分型技术并应用于骨髓七配型。方法 采用序列特异性聚合酶链反应（PCR－SSP）进行HLA－AB基因分型，并与HLAⅠ类血清学分型（微量淋巴细胞毒试验）进行比较。结果 运用PCR－SSP技术共对22例需骨髓移植的病人和48例供者进行基因分型，2例病人确认了HLA 新缘骨髓供者，其中1 已成功进行了骨髓移植；基因分型和血清分型比较，43例结果完全一致（61.4%），血清分型错误率高达38.6%(27/70)。结论 PCR－SSP分型技术具有准确性高，简便快速等优点，将取代传统的血清学方法。     

脐血HLA-AB分型方法探讨

目的 探讨脐血HLA-AB分型方法。方法 分别采用血清学方法和PCR-SSP基因定型方法对102份脐血HLA-A、B位点进行检测。结果 两方法对比分析结果显示血清学近18.6%不能得出满意结果，HLA-A、B位点错定率分别为6.1%和10.8%，总错误率16.9%。结论 脐血HLA表达水平低，单个核细胞反应弱及部分交叉反应是造成血清学不能确定或错定的主要原因。     

PCR—SBT法HLA基因分型模棱两可结果的判读及解决对策

目的研究PCR—SBT法HLA基因分型结果判读中出现的模棱两可问题并提出解决策略。方法对306名随机抽取的组织配型患者的DNA采用PCR-序列特异性引物（Sequence Specific Primer,SSP）低分辨方法检测,同时采用PCR—SBT法进行HLA—A,B,DRB1高分辨基因分型。PCR—SBT法模棱两可结果用PCR—SSP高分辨方法复核确认。结果所有306例检测标本的高低分辨血清学抗原一致,经PCR—SBT基因测序方法检测有111份模棱两可结果,占36．3％（111／306）。其中HLA—A座位有30对等位基因存在模棱两可结果,占所有检测标本等位基因总数的3．3％;HLA—B座位有66对,占7．2％;HLA—DRB1座位有36对,占3．9％。所有模棱两可标本经PCR—SSP HLA基因高分辨分型试剂PCR—SSP等方法复核确认。结论针对PCR—SBT法进行HLA—A,B,DRB1高分辨基因分型模棱两可结果所建立的解决策略,对于提高HLA数据分型的速度和分型准确性有重要意义。     

单克隆抗体法和PCR-SSP法行脐血HLA-DR、DQ抗原分型的比较

我们采用序列特异性引物聚合酶链反应（ＰＣＲＳＳＰ）技术对脐血ＨＬＡＤＲ、ＤＱ抗原进行分型,并与单克隆抗体（单抗）法进行比较,报告如下。材料和方法１　样本　脐血５０份,其中来源于足月产妇３０份（其中２０份为随机抽样脐血;１０例为地中海贫血家族同胞脐血）,妊娠４～６个月者２０份,水囊引产终止妊娠收集脐血。采集脐血量在８０～１６０ｇ之间,偶有２２０ｇ者,检测样本量２ｍｌ、１０ｍｌ,分别用于不同方法作对比研究。２　淋巴细胞的获得　用免疫磁珠分离Ｂ淋巴细胞,获得的Ｂ淋巴细胞纯度为９０％以上。特异性免疫…     

免疫磁珠法在肾移植HLA快速分型中的应用

临床为了尽快选配供受者，常常需要快速分离纯化T、B淋巴细胞，进行HLA快速分型。应用免疫磁珠法与传统方法从等待肾移植的肾脏病患者和供体捐献者的静脉或腹腔血中分离T、B淋巴细胞，进行HLA—Ⅰ、Ⅱ类抗原组织配型。结果显示，在HLA组织分型中免疫磁珠法操作简单快速，分离的淋巴细胞纯度高、活力强、实验结果准确、分型抗原易于指定，有利于临床快速选配供受体等特点。在肾移植组织配型中可取代传统的方法。     

低温对人脐血淋巴细胞免疫活性的影响

本实验通过超低温冷冻的方法来研究冻存对脐血淋巴细胞功能的影响,同时观察了脐血与成人外周血淋巴细胞免疫活性的差异。 材料与方法 标本采集 脐带血20份,分别取自正常分娩的足月儿脐带血。成人外周血17份,分别取自正常成人静脉血。 单个核细胞悬液的制备 脐血和外周血分别用淋巴细胞分层液分出单个核细胞,取少量合20％人AB型血清的RPMI 1640培养液,配制出5ml细胞浓度为1×10~6/ml的细胞悬液,放置操作台内作为新鲜待测标本,余量送低温冻存。     

311份脐血样本HLA基因型无法判读原因探讨

本研究探讨影响脐血样本HLA分型结果的因素。采用序列特异性引物PCR反应（sequence—specific priming,SSP）对3II份经过PCR—SS0和PCR—SSP方法仍无法判读HLA型别的脐血进行HLA低分辨重新分型,并对其中7份仍然无法确定HLA型别的脐血样本进行直接测序（sequence—based typing,SBT）,分析无法判读的原因。结果显示：311份脐血样本中99．4％样本不能判定是因为当时HLA分型方法本身的限制性所造成的,0．6％样本不能判定的原因怀疑是脐血中存在母血污染所致。结论：HLA基因分型方法中序列特异性寡核苷酸探针杂交法（sequence—specifi coligonucleotide probe hybridization,SSO）探针设计不足及PCR—SSP等位基因特异性引物的缺乏是影响HLA分型结果无法判读的主要因素。     

HLA-B40交叉反应组血清学与高分辨度DNA分型的比较研究

目的 比较研究中国汉族人群ＨＬＡＢ４０ 交叉反应组血清学分型与高分辨度ＤＮＡ 分型结果。方法研究样本１９９ 份,包括血清学分型Ｂ４０ 组阳性样本１７７ 份、可疑阳性１２ 份和阴性对照１０ 份。同时对血清学分型和高分辨度顺序特异引物聚合酶链反应（ＰＣＲＳＳＰ） ＤＮＡ 分型进行比较。结果 ＤＮＡ分型成功率９９ ．５ ％ ,总耗时５ 小时,特异性和敏感性好,可准确分辨出Ｂ４０ 组１０ 个等位基因。血清学分型成功率９９ ．４ ％ ,总耗时２ 小时,总误差２０ 个,误差率１１ ．２ ％ 。检出中国汉族人群Ｂ４０ 组各等位基因所占比例：Ｂ６０ 为６７ ．４ ％ 、Ｂ６１ 为２０ ．８ ％ 、Ｂ４８０１ 为９ ．６ ％ 、Ｂ４００５ 为２ ．２ ％ 。结论 高分辨度ＰＣＲＳＳＰ 方法用于ＨＬＡＢ４０ 组分型比血清学分型更加精确,适合于临床应用。     

微量聚合酶链反应对人类白细胞抗原的基因分型

目的 探讨应用于移植的人类白细胞抗原（ＨＬＡ）二类基因（ＤＲＢ／ＤＱＢ）快速分型新技术。方法 采用快速ＤＮＡ抽提技术,建立了ＨＬＡ＿ＤＲＢ／ＤＱＢ微量序列特异性引物聚合酶链反应基因分型方法,对１４２份供受者ＤＮＡ进行ＨＬＡ－ＤＲＢ／ＤＱＢ基因分型,并与单克隆抗体一叔法ＨＬＡ血清学分型技术进行对比研究。结果 应用微量ＰＣＲ－ＳＳＰ方法共检出１３种ＤＲＢ１等位基因和 ＤＱＢ１等位基因,与血清学分型结果     

婴儿ABO血型的鉴定及应用于临床输血

为了研究6个月内婴儿ABO血型正确定型方法及影响因素，采用常规血清学法、凝胶柱法及PCR-SSP3种方法对6个月以内的婴儿进行血型鉴定。结果表明：在使用不同方法检测婴儿ABO血型结果不符的33例中，常规血清学方法32例红细胞定型与血清定型不符，1例是由细菌感染产生类B抗原所致的假相合。凝胶柱法可正确定型27例，正确率84.4%。PCR-SSP法可对所有标本做出正确定型。凝胶柱法与PCR-SSP法有显性差异。结论：对6个月以内的婴儿进行ABO血型鉴定，推荐采用凝胶柱技术。凝胶柱法红细胞定型与血清定型相符的婴儿输血采用同型输注，但若婴儿患有感染性疾病时，应考虑到类B抗原引起的假相合。凝胶柱法红细胞定型与血清定型不符的婴儿输血时使用O型洗涤红细胞等成分血，待PCR-SSP法分型结果做出后，改为同型输血。     

HLA-B27 PCR-SSP基因分型及血清学结果比较

采用ＰＣＲ－ＳＳＰ技术检测３９份样本的ＨＬＡ－Ｂ２７基因并研究甘油在Ｂ２７基因扩增中的作用，同时与血清学结果比较。７份样本血清学难以判定结果或与ＰＣＲ结果不一致。ＰＣＲ技术与血清学方法比较有快速、简便、准确性高等优点。     

新生儿脐血AB0血型鉴定结果质量控制方法探讨

本研究探讨一种新生儿脐带血ABO血型鉴定的质量控制方法。采用血型血清学试验对脐血标本作ABO血型鉴定,对不能定出结果的疑难血型采用聚合酶链反应-序列特异性引物（Sequence Specific Primer PCR,PCR—SSP）作进一步确认。结果表明：在76120例脐血AB0血型正定型鉴定中,检出78例ABO血型弱抗原反应和难以判定血型结果的疑难标本（1％。）,经复查排除了弱凝集反应30例。检测260例脐血ABO血型反定型,相符血型148例（56．92％）,不相符血型112例（43．08％）。PCR—SSP基因分型检测58例中45例血清学表型结果与基因分型结果一致,3例表型结果与基因定型结果不相符,10例正反定型不相符标本,基因分型结果与正定型完全一致。结论：采用红细胞抗原（正定型）方法结合DNA基因分型技术检测新生儿脐带血抗原反应弱、抗体效价低的ABO血型质控效果好,是一种高效、灵敏的质量控制方法,适用于新生儿脐血AB0疑难血型的鉴定。     

HLA—DQB1基因分型技术

报告了简便、快速的ＨＬＡ－ＤＱＢ１聚合酶链反应一序列特异性引物（ＰＣＲ－ＳＳＰ）基因分型技术。比较了基因分型与血清学分型技术的结果，其中３３份标本中６份血清型结果（１８．２％）与基因型不吻合。还讨论了基因分型的意义     

应用反向斑点杂交技术进行脐血HLA-DRB基因分型方法的建立

HLA分子的多态性对于移植有十分重要的意义。常用的HLA基因分型方法中SSOP基因分型方法有较高分辨率，但操作过程复杂，仅适于大样本的HLA分型。PCR－SSP基因分型方法分辨率较低，但操作过程简单，适于临床要求。有必要建立一种简便、快速、价廉、高分辨率的基因分型方法。本研究取63份已知HLA－DRB型的脐血标本，经盐酸胍方法提取DNA用于反向斑点杂交（RDB）基因分型，同时采用SSOP和PCR－SSP方法进行比较。结果表明，所有样本用RDB方法基因分型均获得成功，可准确地分辨60个HLA－DRB等位基因，且结果与用SSOP和PCR－SSP方法的结果完全一致。结论提示，RDB方法可准确地分辨HLA－DRB等位基因，分辨率高，操作简单，适用于各种情况的HLA分型。