核因子—κB在内毒素刺激大鼠肺泡巨噬细胞中的动态变化及其在肿瘤坏死因子—α表达中的作用

目的 观察内毒素(LPS)刺激对大鼠肺泡巨噬细胞(alveolar macrophages，AM)中核因子—κB(NF—κB)活性的影响，探讨NF—κB在LPS刺激大鼠AM表达肿瘤坏死因子—α(刀NF—α)中的作用。方法体外观察LPS刺激大鼠AM中NF—κB活性的动态变化，应用圈套策略观察NF—κB在LPS刺激大鼠AM表达刀NF—α中的作用。结果LPS刺激可使大鼠AM内NF—κB明显活化，并与LPS剂量正相关；抗体超迁移率实验结果显示p50、p65参与了NF—κB的活化；NF—κB的圈套硫代寡核苷酸(S—ODN)能明显抑制LPS刺激大鼠AM表达TNF—α，但不能完全阻断LPS诱导的TNF—α表达。结论 NF—κB(p50／p65)在LPS介导的炎症反应中发挥重要作用，LPS刺激大鼠AM表达TNF—α受NF—κB调控，但其他核转录因子可能也在TNF—α的表达中发挥重要作用。     

AP—2在内毒素刺激大鼠肺泡巨噬细胞中的动态变化及其在TNF—α表达中的调控作用

为观察内毒素刺激对大鼠肺泡巨噬细胞（AM）中转录因子AP－1活性的影响，探讨AP－1在LPS刺激大鼠肺泡巨噬细胞表达TNF－α的基因调控作用，应用凝胶迁移阻滞技术（EMSA）检测LPS（E coli 026:B6)刺激大鼠AM核蛋白中AP－1的DNA结合活性的动态变化，在LPS刺激前12h，应用转基因技术将AP－1的硫代寡核苷酸圈套（S－ODN decoy)转入大鼠AM，应用ELISA法观察AP－1硫代寡核苷酸圈套对LPS刺激大鼠AM表达TNF－α的影响，结果发现，应用100ng/ml LPS刺激大鼠AM 0．5h，AP－1即迅速出现活化并达到峰值，在1h活性略有下降，3h活性又逐渐回升，5h,8h又迅速回落，AP－1的活化状态至少可以持续8h，且与LPS刺激呈明显的量效关系；AP－1的S－ODN圈套能明显抑制但不能完全阻断LPS诱导的TNF－α表达，说明LPS刺激可使大鼠AM内AP－1活化，其在LPS介导的炎症反应中可能发挥重要作用，AP－1在LPS诱导的大鼠AM表达TNF－α中可能起重要的调控作用，但TNF－α表达可能还与其他核转录因子有关。     

AP-1在内毒素刺激大鼠肺泡巨噬细胞中的动态变化及其在TNF-α表达中的调控作用

为观察内毒素刺激对大鼠肺泡巨噬细胞(AM)中核转录因子AP-1活性的影响,探讨AP-1在LPS刺激大鼠肺泡巨噬细胞表达TNF-α中的基因调控作用,应用凝胶迁移阻滞技术(EMSA)检测LPS(E coli 026:B6)刺激大鼠AM核蛋白中AP-1的DNA结合活性的动态变化;在LPS刺激前12h,应用转基因技术将AP-1的硫代寡核苷酸圈套(S-ODN decoy)转入大鼠AM,应用ELISA法观察AP-1硫代寡核苷酸圈套对LPS刺激大鼠AM表达TNF-α的影响.结果发现,应用100ng/ml LPS刺激大鼠AM 0.5h,AP-1即迅速出现活化并达到峰值,在1h活性略有下降,3h活性又逐渐回升,5h、8h又迅速回落,AP-1的活化状态至少可以持续8h,且与LPS刺激呈明显的量效关系;AP-1的S-ODN圈套能明显抑制但不能完全阻断LPS诱导的TNF-α表达.说明LPS刺激可使大鼠AM内AP-1活化,其在LPS介导的炎症反应中可能发挥重要作用;AP-1在LPS诱导的大鼠AM表达TNF-α中可能起重要的调控作用,但TNF-α表达可能还与其他核转录因子有关.     

核因子-κB圈套寡核苷酸对核因子-κB活性及创伤炎症反应大鼠肝脏功能损害的影响

目的 探讨核因子(NF)-κB圈套寡核苷酸(ODN)对NF—κB活性及创伤炎症反应大鼠肝脏功能损害的影响。方法 利用电泳迁移率改变实验(EMSA)，测定合成的环状哑铃形圈套ODN对NF—κB的DNA结合能力的竞争抑制作用；利用NF—κB反应性报告细胞株HEK-不稳定增强型绿色荧光蛋白(d2EGFP)，观察圈套ODN瞬时转染对报告基因表达的影响。Wistar大鼠96只，随机分为对照组、创伤性炎症组、圈套ODN组和无关ODN组。利用EMSA检测各组肝脏组织NF—κB的DNA结合活性，用逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)检测大鼠肝脏组织TNF—α、白细胞介素-6(IL-6)mRNA水平，酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测大鼠肝脏组织肿瘤坏死因子-α(TNF—α)、IL-6的蛋白水平。结果 设计的环状哑铃形圈套ODN对NF—κB的DNA结合能力具有竞争抑制作用，1μg／ml和2μg／ml圈套ODN瞬时转染HEK—d2EGFP，可明显抑制p65蛋白诱导的d2EGFP表达。大鼠创伤性炎症后3h，肝脏NF—κB活性开始升高，伤后12h达高峰。肝脏组织TNF—α、IL-6mRNA水平和蛋白水平也明显上升，与NF—κB的活性改变一致。圈套ODN治疗后，大鼠肝脏组织TNF—α、IL-6的表达明显下降，肝脏功能明显好转，而无关ODN则没有治疗效果。结论 设计的靶向NF—κB的环状哑铃形圈套ODN可通过特异性抑制NF-κB活性，有效阻止创伤性炎症大鼠肝脏炎症介质TNF—α、IL-6的释放，从而改善肝脏功能。     

圈套寡核苷酸影响腹腔巨噬细胞炎症介质表达的实验研究

目的 设计合成靶向核因子—κB(NF—κB)的哑铃形圈套寡核苷酸(0DNs)，并检测其抗炎效应。方法 提取大鼠腹腔巨噬细胞(pMφ)，随机分为正常对照组、单纯内毒素(LPS)组、圈套0DNs处理组、无关圈套0DNs处理组和脂质体处理组。收集正常对照组和单纯LPS组LPS刺激后1，2，6，12，18，24k上清及细胞；采用阳离子脂质体按质量比为4：1的比例分别介导2，4，8mg/L圈套0DNs转染大鼠pMφ细胞，6k后用LPS刺激，收集转染后8，12，18k上清及细胞。细胞免疫组化法分析LPS刺激前后p65表达与分布变化，用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清中肿瘤坏死因子—α(TNF—α)、白细胞介素—6(IL—6)蛋白表达，逆转录—聚合酶链反应(RT—PCR)法检测TNF—α、IL—6和IL—10mRNA转录。结果 4，8mg/L剂量哑铃形圈套0DNs可明显抑制LPS诱导的大鼠pMφTNF—α、IL—6转录和表达。结论 靶向NF—κB的哑铃形圈套0DNs具有拮抗炎症介质转录和表达的功能。     

LPS的直接诱导对肺微血管内皮细胞内NF-κB的影响

目的：探讨LPS的直接诱导作用对肺微血管内皮细胞(PMVEC)核因子κB(NF—κB)的影响。方法：100ng/ml LPS刺激PMVEC 0h、0．5h、1h、2h、4h、6h、8h或10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml LPS刺激1h，凝胶电泳迁移率试验检测NF—κB的活化，免疫细胞化学观察其亚基p50、p65的核转位。并通过加入活化阻断剂TPCK观察对诱导的NF—κB活化的最响。结果：LPS的刺激迅速诱导p50、p65亚基核转位，活化NF—κB，1h达到简蜂，且呈剂量依赖关系，后逐渐下降。PDIC能显著抑制其活化，P＜0．01。结论：LPS的直接刺激诱导NF—κB的活化，这可能是LPS诱导炎症反应的一个重要环节。     

内毒素诱导肺泡巨噬细胞NF-κB信号通路的变化

目的　观察内毒素(LPS)体外刺激诱发肺泡巨噬细胞(PAM)中NF κB信号通路的变化 ,探讨急性肺损伤 (ALI)的分子病理机制。方法　用原位杂交、EMSA及ELISA方法 ,检测LPS刺激后 0、1/ 4、1/ 2、1、2、4h各时相点PAM中Iκ B激酶 (IKK β)mRNA表达、NF κB核移位以及IκB α降解和TNF α分泌的变化。结果　IKK βmRNA表达在LPS刺激后 1/ 4h开始升高 ,1/ 2h达高峰 ,1h后逐渐下降 ;IκB α水平恰好与IKK βmRNA对应点变化幅度相反 ;NF κB的活性于 1/ 4h开始升高 ,1h达峰值 ,2h后逐渐下降 ;TNF α的含量 1/ 2h开始升高 ,1h达峰值 ,2～ 4h逐渐恢复至刺激前水平。结论　IKK β激活 /IκB α降解 /NF κB活化 /TNF α合成的转导通路在LPS介导ALI的病理机制中发挥了重要作用     

内毒素对心肌组织核因子-κB活化的影响及其意义

目的 通过观察内毒素(LPS)攻击大鼠心肌组织核因子-κB(NF-κB)的活化情况,探讨心肌损伤的可能信号机制.方法 大鼠腹腔注射5mg/kg LPS制作脓毒症模型,采用凝胶阻滞迁移分析法(EMSA)检测心肌组织NF-κB活化情况,RT-PCR法检测TNF-α基因表达情况.结果 LPS攻击后1h,NF-κB活化及TNF-α基因表达开始升高,2h达高峰,6h后逐渐下降.相关分析表明,心肌组织NF-κB活化与TNF-α基因表达呈显著正相关(r=0.992 2,P＜0.05).结论 LPS可增强心肌组织NF-κB的活化并诱导TNF-α基因表达.NF-κB活化导致的TNF-α合成增加在LPS介导心肌损害的分子机制中可能具有重要作用.     

失血性休克缺血-再灌注损伤家兔肺泡巨噬细胞中IκK-β／NF—κB改变的实验研究

目的观察失血性休克缺血-再灌注（I／R）损伤时兔肺泡巨噬细胞（AM）中I-κB激酶-β／核因子-κB（IκK-βNF—κB）信号通路的改变，探讨肺部炎症损伤的细胞分子基础。方法建立失血性休克I／R家兔模型，分离、培养AM，用原位杂交方法检测AM中IκK—β的mRNA表达，用凝胶电泳迁移率改变分析法（EMSA）和酶联免疫吸附（ELISA）法分别检测AM中NF—κB的活性和AM培养上清液中TNF—α、IL-6的含量。病理学光镜观察肺组织的炎症损害。结果模型组IκK—β、NF—κB、TNF—α、IL-6指标较对照组显著升高（P〈0.01）；I／R损伤动物肺组织呈现明显炎症病理改变。结论AM是I／R损伤炎症信号通路的重要细胞基础；细胞内IκK—β激活／NF—κB核移位／细胞因子产生是I／R肺组织炎症病理损伤的重要分子机制。     

髓样分化蛋白-2在内毒素激活内皮细胞核因子-кB中的作用

目的　探讨髓样分化蛋白 - 2 (myeloiddifferentiationprotein - 2 ,MD - 2 )在内毒素(LPS)对内皮细胞核因子 -кB(NF -кB)激活中的作用。　方法　以ECV30 4细胞为模型 ,逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)方法检测内皮细胞MD - 2mRNA的表达 ;转染MD - 2功能突变体 ,观察MD - 2在内毒素对内皮细胞NF -кB激活和内皮细胞分泌IL - 8中的作用。　结果　内皮细胞有MD - 2mRNA的表达 ,转染MD - 2的突变体能明显抑制内毒素对内皮细胞NF -кB的激活和内皮细胞IL - 8的分泌。　结论　MD - 2在内毒素对内皮细胞NF -κB激活中发挥着不可缺少的作用 ,且在内毒素对内皮细胞激活 /损伤效应中占有重要的地位。     

核因子-κB在大鼠肺型氧中毒发病中的作用

目的 探讨核因子(NF)-κB在大鼠肺型氧中毒发病中的作用.方法 32只SD大鼠随机分为正常对照组及230 kPa高压氧暴露2、6、10 h组.观察肺组织病理变化以及NF-κB和肿瘤坏死因子a(TNF-α)在肺组织中含量的变化.结果 (1)病理检查发现肺组织在高压氧暴露6 h组出现炎症改变,10 h组肺损伤加重.(2)肺组织细胞核中NF-κB P65含量在高压氧暴露2 h组中明显增高,6 h组中达高峰,10 h组中下降但仍高于正常对照组.(3)肺组织TNF-α mRNA表达及肺匀浆中TNF-α浓度在高压氧暴露6 h组中明显增高,10 h组中继续增高.结论 高压氧可以通过活化NF-κB诱导TNF-α高表达从而介导氧中毒的肺损伤.     

β-七叶皂甙对脑损伤大鼠脑组织核因子-κB活性与肿瘤坏死因子-α蛋白表达的影响

目的　研究β-七叶皂甙(β-aescin)对大鼠急性脑损伤后脑组织核因子-κB(NF-κB)活性和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达的影响。　方法　62只SD大鼠采用自由落体致伤法制作脑外伤模型,随机分成四组: (1)假手术对照组(A); (2)创伤组(B); (3)β-七叶皂甙治疗组(C); (4)吡咯烷二硫基甲酸酯(PDTC)治疗组(D)。每组分别在术后6, 24h和3d三个时相点收取脑组织标本,采用凝胶电泳迁移率分析(EMSA)测定脑组织NF-κB活性;放射免疫法测定脑组织TNF-α蛋白水平,并测定脑组织含水量及进行病理形态学观察。　结果　与假手术对照组比较,大鼠脑损伤后脑组织NF-κB活性和TNF-α蛋白水平以及脑组织含水量显著增高(P<0. 01);与创伤组比较,β-七叶皂甙和PDTC治疗组脑组织NF-κB活性(P<0. 01 )、脑组织TNF-α蛋白水平(P<0. 01)及脑组织含水量(P<0. 05)均显著降低。　结论　β-七叶皂甙可以抑制NF-κB活化,下调TNF-α蛋白表达,从而减轻脑水肿。这可能是β-七叶皂甙治疗创伤性脑水肿的分子生物学作用机制之一。     

肝缺血再灌注损伤中重组人促红细胞生成素对核因子-κB活化的影响

目的探讨重组人促红细胞生成素(rhEPO)对核因子(NF)-κB活化的影响在肝缺血再灌注(I/R)损伤中的作用。方法制作大鼠部分肝I/R模型,分为:假手术组(A组),肝缺血90 min组(B组),肝缺血90 min,再灌注120 min组(C组),肝缺血90 min,再灌注120min,加重组人促红细胞生成素(建模前1、3 d及5 d给予rhEPO100 U/kg)组(D组)。光镜观察肝脏组织学改变,测定血清肝酶学水平,用Western blot技术检测肝组织中核转录因子-κB(NF-κB)p65表达,用双抗体夹心酶联免疫吸附法测定血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平。结果A组肝细胞索排列有序,肝细胞形态正常;B组肝小叶结构紊乱,肝血窦和中央静脉有轻度淤血,内皮细胞和肝细胞水肿变性;C组肝细胞坏死较明显,D组上述改变明显减轻。和C组相比,D组血清肝酶学指标、NF-κB p65和TNF-α的表达水平明显下降,且差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 重组人促红细胞生成素能抑制肝脏NF-κB的活化,对肝脏缺血再灌注损伤具有保护作用。     

黄体酮对鼠脑外伤后脑组织炎性信号因子表达的干预作用

目的观察黄体酮对脑外伤后脑组织内炎症反应信号转导因子核因子-κB（NF-κB）、炎症细胞因子子如瘤坏死因子（TNF-α）和白介素-1β（IL—1β）水平的影响，探讨其对创伤性脑外伤（TBI）继发性脑损伤的保护作用及可能的作用机制。方法采用Freeney法造成大鼠脑挫裂伤模型，在伤后1、3、5、7天不同时相点用ELISA法、免疫组化法分别检测4组大鼠脑组织中NF-κB、TNF-α、IL-1β水平的变化。结果伤后注射黄体酮治疗组脑组织NF—κB、TNF—α、IL-1β3种炎性因子水平均比脑创伤组低（P〈0.05）。结论注射黄体酮能降低脑外伤后炎性信号因子表达，减轻脑外伤后脑组织的炎症反应，对脑组织起一定的保护作用。     

泛素-蛋白酶体途径在烧伤脓毒症大鼠肝脏NF-κB活化中的作用研究

目的　研究泛素 蛋白酶体途径对烧伤脓毒症大鼠肝脏NF κB的活性和IκB α含量以及肝脏TNF α表达的影响。方法　采用 30 %TBSAⅢ度烫伤加内毒素攻击大鼠为模型模拟临床烧伤脓毒症 ,6 0只Wistar大鼠随机分为正常对照组、烧伤脓毒症组、烧伤脓毒症 蛋白酶体抑制剂ALLN处理组、烧伤脓毒症 NF κB抑制剂PDTC处理组 ,采用凝胶电泳迁移率改变分析法 (EMSA)分析肝脏NF κB活性 ,采用免疫印迹方法检测肝脏IκB α表达 ,采用酶联免疫吸附试验检测肝脏TNF α的变化。结果　NF κB于伤后 1h明显活化并达到高峰 (P <0 0 5 ) ,IκB α表达先减少后逐渐恢复 ,应用泛素系统抑制剂可以抑制IκB α在肝脏中的降解 ,而采用蛋白酶体抑制剂和NF κB抑制剂均可降低肝脏NF κB的活性和减少TNF α的释放。结论　表明烫伤脓毒症大鼠肝脏NF κB活性明显增强 ,而干预泛素 蛋白酶体途径可通过抑制IκB α降解实现对肝脏中NF κB活性的调控。     

核因子-κB在兔急性肺损伤中的作用

 目的 探讨核因子-κB(NF-κB)在失血性休克复合内毒素打击致急性肺损伤(ALI)兔发病中的作用.方法 失血性休克复合内毒素打击法复制ALI兔模型.制模成功后1 h、4 h、8 h、24 h、48 h检测动脉血氧分压(PaO2)、肺干重/湿重比值(D/W),双抗体夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度,免疫组织化学的方法结合图像分析观察肺组织内NF-κB的变化情况,行肺组织病理学检查.结果 与对照组相比,失血性休克复合内毒素打击使动物PaO2及D/W值进行性下降,于48 h降至最低(P<0.01);血清TNF-α含量及肺组织NF-κBp65的含量升高,并均于4 h达到最高峰(P<0.01);相关分析显示1 h、4 h、8 h、24 h、48 h NF-κB活性与TNF-α含量之间的变化存在显著相关性(P<0.01).肺组织病理显示肺泡壁增厚、炎性细胞浸润、局灶出血、部分肺泡萎陷.结论 NF-κB的活化,介导TNF-α等炎症介质的大量表达,在失血性休克复合内毒素打击导致ALI的病理机制中发挥重要作用.     

靶向NF-κB的圈套ODNs拮抗pMφTNFα表达的实验研究

目的　本实验设计合成靶向NF κB的哑铃形圈套ODNs,并验证其抗TNFα生成效应。方法　以阳离子脂质体为载体 ,将圈套ODNs转染大鼠pM细胞 6小时后用LPS(脂多糖 ) 10 μg ml刺激 ,用ELISA法及RT PCR法测圈套ODNs对TNFα蛋白及mRNA水平的影响。结果　哑铃形圈套ODNs可明显降低TNFα在mRNA及蛋白水平的表达。结论　靶向NF κB的哑铃形圈套ODNs具有下调炎性介质TNFα的表达。     

NF-κB在烧伤脓毒症大鼠肝损伤中的作用

目的　研究NF κB在烧伤脓毒症大鼠急性肝损害中的作用。方法　采用 30 %Ⅲ度烫伤加内毒素攻击大鼠模型模拟临床烧伤脓毒症 ,6 3只Wistar大鼠随机分为正常对照组、烧伤脓毒症组、烧伤脓毒症 +NF κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷 (PDTC)组、单纯PDTC处理组 ,采用凝胶电泳迁移率改变分析法(EMSA)分析肝脏NF κB活性 ,免疫印迹 (Westernblotting)法检测肝脏IκB α表达 ,酶联免疫吸附试验检测肝脏TNF α含量的变化。结果　NF κB于伤后 1h明显活化并达到高峰 (P <0 0 5 ) ;IκB α表达先减少 (P <0 0 5 )后逐渐恢复 ;NF κB抑制剂PDTC可以降低NF κB的活性和减少TNF α的释放 ,同时明显降低血清ALT、AST含量。结论　抑制NF κB活性有助于减轻烧伤脓毒症时肝脏的急性损害。     

核因子-κB与腹部开放伤合并海水浸泡大鼠全身炎症反应综合征的关系

目的探讨腹部开放伤合并海水浸泡大鼠全身炎症反应综合征（SIRS）发生时核因子-κB（NF-κB）的活性与SIRS的关系。方法采用腹部开放伤合并海水浸泡大鼠致伤模型并诱发SIRS。酶联免疫吸附（ELISA）法检测血肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）水平,免疫组化技术检测NF—κB在外周血淋巴细胞（PBL）和小肠组织中的活性。结果腹部开放伤后海水浸泡1小时,大鼠出现SIRS;血TNF—α、IL-6水平升高;免疫组化显示大鼠PBL和小肠组织中NF-κB表达的阳性率显著升高,与对照组比较有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。结论腹部开放伤合并海水浸泡可致大鼠SIRS,NF-κB和细胞因子参与了SIRS的发生、发展。NF-κB的激活介导了TNF—α、IL-6等细胞因子的释放,在SIRS中可能处于中心环节。     

低剂量电离辐射诱导转录因子NF-κB活化及其信号通路的实验研究

目的 研究低剂量电离辐射对转录因子NF—κB DNA结合活性的影响，探讨NF—κB结合活性信号传导通路的机理。方法 采用凝胶电泳移动变化分析及免疫组织化学的方法检测了X射线照射后FL-4细胞NF—κB DNA结合活性的时程变化及p65核转位、IκBα水平的变化，同时用脂质体介导的瞬时转染法将空质粒和NF-κB-荧光素酶表达质粒转染到NIH3T3细胞内，并用PKC信号通路阻断剂Calphostin C处理，检测受照后其荧光素酶的表达变化。结果 0．075Gy X射线照射可诱导NF—κB、p50／p65和p50／p50活性增强，而前者活性增强更明显。这种转录激活能力的增强，涉及到辐射诱导的p65核转位和IκBα水平的变化，表现为受照后p65亚基核阳性率明显升高，而IκBα水平的变化正相反，在照后4h分别达到峰值和低谷。而且PCK信号通路阻断剂Calphostinc可降低0．075Gy照射对NF—κB的活化效应。结论 低水平照射诱导NF-κB的迅速活化，而且可能通过PKC通路，进而调节细胞因子等特异基因的表达，促使免疫功能增强，这可能是低剂量辐射兴奋效应的机理之一。