脑胶质瘤表皮生长因子受体表达及其意义

脑胶质瘤表皮生长因子受体表达及其意义袁志忠叶挺军陈泳莲近十年来，国外的研究已证实，胶质瘤常有表皮生长因子受体（ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＥＧＦＲ）基因扩增、重排及蛋白产物的过度表达和结构异常，且与肿瘤的发生和发展有关...     

稳定表达EGFRvⅢex的NIH3T3细胞株的建立及其免疫原性分析

目的:建立表皮生长因子突变体Ⅲ胞外区(EGFRvⅡ-Iex)的NIH3T3稳定细胞系并分析其免疫原性。方法:将编码EGFRvⅢex基因的表达质粒pLNCX2-EGFRvⅢex转染NIH3T3细胞后,用G418筛选阳性克隆,得到多个细胞克隆。采用免疫组化和Western blot法鉴定这些细胞克隆。选取高表达EG-FRvⅢex的细胞株(命名为3T3-vⅢex)免疫BALB/c小鼠,制备抗血清。用ELISA、Western blot和免疫荧光分别检测抗血清的效价和特异性。结果:成功地构建了真核表达载体pLNCX2-EGFRvⅢex并获得了稳定高表达EGFRvⅢex的NIH3T3细胞系3T3-vⅢex。用3T3-vⅢex免疫小鼠所获得的抗血清效价为10-5。Western blot和免疫荧光鉴定证明抗血清可以与EGFR-vⅢex特异结合。结论:人EGFRvⅢex可在NIH3T3细胞内获得稳定表达,以其免疫小鼠可以获得高效价、高特异性的抗血清。     

p16 mRNA及其蛋白、EGFR在脑胶质瘤中的表达

目的：通过观察脑胶质瘤中ｐ１６ ｍＲＮＡ及其蛋白、ＥＧＦＲ的表达,探讨其在脑胶质瘤发生、发展中的作用。方法：应用原位杂交技术和免疫组织化学方法在３８例人脑胶质瘤中检测ｐ１６ ｍＲＮＡ及其蛋白、ＥＧＦＲ的表达。以７例正常组织为对照。结果：ｐ１６ｍＲＮＡ和ｐ１６蛋白在Ⅲ～Ⅳ级、Ⅰ～Ⅱ级胶质瘤、正常组织中的阳性表达率分别为８．３％,１６．７％;５３．７％,５７．７％;７１．４％,８５．７％。ＥＧＦＲ在Ⅲ     

白藜芦醇联合顺铂对神经胶质瘤细胞的作用

目的： 探讨白藜芦醇联合顺铂对神经胶质瘤细胞C6 的作用。方法：不同浓度的白藜芦醇与顺铂单独联合 作用于神经胶质瘤细胞C6,24、48 h 和72 h 后,CCK8法检测增殖,并选出合适浓度进行后续试验;不同浓度的 药物作用于细胞24 h 后,吖啶橙法观察细胞形态变化、流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞周期和免疫印迹检测蛋白 Bax、Bcl-2 和p-Erk1/2 变化。结果：白藜芦醇与顺铂能协同抑制神经胶质瘤细胞C6 的增殖。联合用药后细胞周 期抑制在S 期。免疫印迹结果显示凋亡蛋白Bax 的表达量增加,而凋亡抑制蛋白Bcl-2 的表达量减少,细胞外调 节蛋白激酶p-Erk1/2 的表达量减少。结论：白藜芦醇与顺铂联合对神经胶质瘤细胞具有相互增敏作用,能够协同 抑制细胞增殖,并通过Ras-Raf-MEK-Erk 信号通路促进其凋亡。     

表皮生长因子受体与胶质瘤

研究证明胶质瘤存在表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）基因扩增、重排、过度表达和受体结构异常，许多学者观察到ＥＧＦＲ基因及其表达与胶质瘤病理学分级和预后有关。ＥＧＦＲ可作为单克隆抗体和化学药物作用的靶子用于胶质瘤治疗。     

大肠癌不同部位粘膜细胞EGFR的表达

１　材料和方法收集活检并病理证实正常直肠粘膜１０例。根治手术切除的大肠癌３０例，取癌远旁（标本近端切缘，距肿瘤边缘５～１０ｃｍ）、癌近旁（距肿瘤边缘２ｃｍ，并经病理证实无癌浸润）和癌粘膜各１块。标本处理：标本用１０％中性福尔马林固定、石蜡包埋，６μｍ厚连续切片，分别做ＨＥ和ＥＧＦＲ染色。试剂：ＥＧＦＲ多克隆抗体为美国ＳａｎｔａＣｒｕｚ公司产品，ＳＰ即用型试剂盒和ＤＡＢ显色试剂盒均为美国Ｚｙｍｅｄ公司产品。染色方法：过氧化酶标记的链霉卵白素染色（ＳＰ法），用ＰＢＳ代替一抗做阴性对照。结果判定：…     

表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(EGFRvⅢ)单链抗体亲和力检测的间接ELISA的建立及优化

目的建立检测表皮生长因子受体变体Ⅲ(EGFRvⅢ)单链抗体PD0721亲和力检测的ELISA,并且对实验条件进行优化。方法利用本课题组制备的单链抗体PD0721,建立检测PD0721单链抗体亲和力的间接ELISA,并采用棋盘滴定法对实验条件中的抗体抗原浓度、二抗浓度、包被条件等方面进行优化,对本方法的灵敏度及精密度进行考察。结果使用PBS稀释抗原至1.25 mg/L于4℃包被12 h,加入120 ng/mL PD0721单链抗体以及1∶8000的酶标抗体为最佳检测结果。优化后的结果,在PD0721单链抗体浓度为15 ng/mL~480 ng/mL范围内回归模型拟合效果良好,最低检测限为7.5 ng/mL。组内差异系数为0.11%~0.99%,组间差异系数为0.68%~3.15%。结论建立了能准确、稳定检测PD0721单链抗体亲和力的间接ELISA。     

胶质瘤中EGFR基因异常及其靶向性治疗研究进展

胶质瘤的形成与发展是一个复杂的过程。其中癌基因EGFR的激活、过表达或扩增、重排，为形成恶性胶质瘤的重要分子途径之一。开展对EGFR的信号转导干预治疗的研究，包括反义核酸、酪氨酸激酶抑制剂、特异性抗EGFR单克隆抗体及RNA干涉等，对恶性胶质瘤的治疗具有重要意义。     

表皮生长因子受体沉默联合尼美舒利对胶质瘤细胞U251作用及机制

目的:研究尼美舒利(NIM)与表皮生长因子(EGF)受体沉默联合应用对胶质瘤U251细胞作用及机制.方法:不同浓度的尼美舒利(0、25、50、100、200、400μmol/L)与靶向EGF受体的小分子RNA(siRNA-EGFR)联合应用培养U251胶质瘤细胞,ELISA试剂盒检测培养上清中血管内皮生长因子(VEGF)水平,MTT法检测细胞的增殖并计算抑制率,免疫印迹检测细胞增殖、凋亡和血管形成调控相关蛋白,流式细胞仪测定细胞周期和凋亡.结果:siRNA-EGFR浓度小于2μg/ml联合NIM(25～400 μmol/L)处理U251细胞,其生长抑制率与NIM的浓度依赖性增高,流式检测阻滞U251细胞于G2/M期及诱导细胞凋亡,蛋白分析表明,当沉默U251细胞EGF受体时,Bax蛋白表达随尼美舒利浓度增加表达上调,而bcl-2、细胞增殖核抗原(PCNA)和促血管生成素-2(ANG-2)蛋白表达明显下调,促血管生成素-1(ANG1)表达变化不明显;siRNA-EGFR与25 μumol/L的尼美舒利处理U251胶质瘤细胞12 h后,流式细胞仪检测出现典型的凋亡亚二倍体峰,并且随尼美舒利处理时间的延长,凋亡峰增加,随处理尼美舒利剂量的增加而呈现增加趋势,各组间差异具有统计学意义.结论:当siRNA-EGFR浓度为2μg/ml以下和作用时间在48 h之前,EGF受体沉默联合尼美舒利能发挥协同作用,其机制可能与Bax蛋白表达上调和bcl-2、PCNA、VEGF、ANG-2蛋白表达明显下调有关.     

以EGFR及其突变体为靶的肿瘤治疗

表皮生长因子受体 (EGFR)在许多肿瘤细胞中扩增、缺失和 /或突变。迄今为止 ,已发现三种不同的EGFR胞外区缺失突变体 ,即EGFRⅥ ,EGFRⅦ及EGFRⅧ型。EGFR及其突变体借助于信号传导使细胞生长失控和恶性化。因此 ,以其为靶的肿瘤治疗引起人们关注 ,并取得了一些令人瞩目的进展。如针对EGFR的特异性抗体、通过反义核苷酸阻断EGFRmRNA翻译、用酪氨酸激酶抑制子阻断EGFR酪氨酸激酶的活性 ,有效地阻断了癌变的演进。     

人表皮生长因子受体显性负性突变体诱导胃癌细胞发生G0/G1期阻滞

 目的：探讨人表皮生长因子受体显性负性突变体（dominant negative epidermal growth factor receptor,DNEGFR）对胃癌细胞细胞周期的影响及其分子机制。方法：选用2株人胃癌细胞,分为如下6组：SGC-7901细胞未转染组（US组）、SGC-7901细胞pEGFP-N1质粒转染组(ES组)、SGC-7901细胞pEGFPN1-DNEGFR质粒转染组(DS组)、NCI-N87细胞未转染组（UN组)、NCI-N87细胞pEGFP-N1质粒转染组(EN组)和NCI-N87细胞pEGFPN1-DNEGFR质粒转染组(DN组)。采用流式细胞术检测细胞周期,Western blotting检测细胞周期素依赖性蛋白激酶2（CDK2）、cyclin D1、Ser9位点磷酸化糖原合成酶激酶3β［p-GSK-3β(Ser9)］、p21和p27蛋白水平。结果：转染pEGFPN1-DNEGFR质粒的人胃癌细胞株出现G0/G1期阻滞,CDK2、cyclin D1和p-GSK-3β（Ser9）蛋白水平降低,p21和p27蛋白水平则升高。结论：DNEGFR通过激活GSK-3β使cyclin D1蛋白水平降低,并降低CDK2蛋白水平,上调p21和p27蛋白水平,最终导致胃癌细胞发生G0/G1期阻滞。这一结果将为胃癌生物治疗研究提供新思路。     

非小细胞肺癌EGFR突变检测技术的研究进展

针对表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)突变基因的检测是肺癌靶向治疗的重要基石.目前临床中主要针对肺癌组织、脱落细胞以及液态活检标本开展检测工作,此外尿液标本近期也展现出良好的检测效率.针对上述标本,临床中开展多种检测技术,如以特定靶点为目的的技术,包括数字PCR、楔形探针扩增阻滞突变系统等;以筛查为目的的检测技术,包括二代测序(next generation sequencing,NGS)、Sanger测序等,这些技术在特定的标本类型和检测目的中具有独特的优势.一些新兴的技术,如拉曼光谱,也在临床检测中展现出良好的应用前景.     

siRNA对卵巢癌细胞周期及EGFR表达的影响

目的体外构建编码人类表皮生长因子受体（EGFR）的小干扰RNA（siRNA）的质粒表达载体,观察其对卵巢癌Skov-3细胞EGFR的特异性抑制作用及对细胞凋亡和周期的影响。方法构建pSilencer-EGFR siRNA真核基因表达载体,采用脂质体介导的方法将其转染到卵巢癌细胞株Skov-3,实验分为以下3组：空白对照组（未经转染的人卵巢癌Skov一3细胞）、非特异性转染组（转染非特异性质粒载体）及特异性转染组。用RT-PCR的方法检测mRNA水平的变化,用免疫荧光法检测EGFR蛋白水平的变化,流式细胞仪检测其对卵巢癌细胞周期及凋亡的影响。结果成功构建pSilencer—EGFR siRNA真核基因表达载体。psiRNA—EGFR质粒明显下调Skov-3细胞中EGFR的表达,阻断细胞周期在G1期,促进细胞凋亡。结论重组质粒psiRNA—EGFR能有效地抑制Skov-3细胞内EGFR的表达、抑制细胞增殖,其抑制机制可能与引起细胞周期再分布、降低S期细胞比例和促进细胞凋亡有关。     

胸腺瘤中EGFR和IGF-1R的表达及其意义

目的探讨胸腺瘤组织中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)和胰岛素样生长因子-1受体(insulin-like growth factor-1 receptor,IGF-1R)的表达及其临床意义。方法应用免疫组化En Vision两步法检测63例胸腺瘤和15例胸腺滤泡性增生组织中EGFR和IGF-1R的表达。结果 EGFR和IGF-1R在胸腺瘤中的阳性率分别为50.8%(32/63)和55.6%(35/63),在胸腺滤泡性增生组织中的阳性率为0(0/15)和20%(3/15)。胸腺瘤组与胸腺滤泡性增生组相比,EGFR和IGF-1R蛋白表达差异均有统计学意义(P0.01,P0.03),EGFR和IGF-1R高表达与胸腺瘤患者年龄、性别、肿瘤大小、是否合并重症肌无力、WHO分型均无关,但与Masaoka分期有关(P0.01)。EGFR和IGF-1R在胸腺瘤中表达呈正相关(r=0.270,P=0.032)。结论 EGFR和IGF-1R高表达可能与胸腺瘤的发生、发展及侵袭有较密切的关系。联合检测EGFR和IGF-1R表达有助于更好地评估胸腺瘤的临床分期,为临床制定合理的治疗方案、改善患者预后提供帮助。     

EGFR与c-Kit蛋白的表达与鼻咽癌原发瘤的进展相关

目的: 研究表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)与 c-Kit蛋白2种受体酪氨酸激酶在非角化性鼻咽癌中的表达及其与临床病理的联系。方法: 采用中山大学肿瘤防治中心病理科临床II期和III期非角化性鼻咽癌活检标本95例,复查临床病理资料,重新切片染色,包括HE以及EGFR、c-Kit、潜伏膜蛋白1(LMP1)和Ki-67免疫组化染色。结果: EGFR 与 c-Kit蛋白的阳性表达率分别为70.53%(67/95)和63.16% (60/95)。EGFR与c-Kit蛋白的表达呈正相关,有统计学意义(P<0.05)。两者在原发瘤(T)肿瘤分期中的差异均显示有统计学意义(EGFR, P<0.05;c-Kit,P<0.01)。EGFR及c-Kit蛋白的表达强度也与T分期相关(EGFR,P<0.05;c-Kit,P<0.01)。结论: 非角化性鼻咽癌细胞常常表达EGFR与c-Kit蛋白。这2种受体酪氨酸激酶的表达呈正相关,且分别与鼻咽癌患者原发瘤的进展有相关性。EGFR与c-Kit蛋白可为是否需要进一步做靶向性治疗的基因分析提供理论依据。     

人脑胶质瘤血管内皮细胞生长因子受体表达的研究

目的　研究人脑胶质瘤血管内皮细胞生长因子受体 (Vascularendothelialgrowthfactorreceptors,VEGFR)的表达及意义 .方法　应用免疫组织化学技术 ,检测 5 2例手术切除的脑胶质细胞瘤组织中两种VEGFR(flt- 1和flk - 1)的表达 .结果　①胶质细胞瘤组织中有flt- 1和flk- 1的表达 ,主要表达于肿瘤血管内皮细胞 ,同时巨噬细胞的胞浆中也有表达 ;② 3组胶质细胞瘤中 ,VEGFR的表达率分别为 16 .0 %、5 8.8%、90 .0 % ,3组间有差异 (p <0 .0 5 ) ;③脑胶质细胞瘤中 ,flt- 1的表达与flk - 1的表达相关 (R =0 .993,p<0 .0 1) .结论　正常脑组织中无VEGFR表达 ,脑胶质细胞瘤中有VEGFR表达 ,主要表达于血管内皮细胞中 ,VEGF通过旁分泌途径刺激脑胶质细胞瘤的血管发生 ;VEGF的促血管发生作用既可通过血管内皮细胞的VEGFR直接产生 ,又可通过促进巨噬细胞的局灶浸润间接产生 ;VEGFR表达与脑胶质瘤恶性程度呈正相关     

酒精中毒对小鼠胃黏膜EGFR的影响

目的研究酒精中毒对小鼠胃黏膜EGFR蛋白表达的影响。方法选取健康成年昆明鼠,随机分为对照组及实验组,实验组以市售白酒灌胃,对照组以生理盐水灌胃,在喂养2周、4周、6周及8周取胃黏膜,免疫组化法检测胃黏膜中EGFR表达。结果实验组小鼠胃黏膜有不同程度的上皮和腺体的损伤及炎细胞的浸润,与正常对照组相比,酒精中毒小鼠胃黏膜EGFR表达减少。结论酒精中毒小鼠胃黏膜EGFR表达减少,提示胃黏膜损伤可能与EGFR的表达减少有关。     

EGFR的表达在门脉高压性胃病愈合过程中的作用

目的 EGFR的表达在保护胃黏膜损伤中有重要作用,而在门脉高压性胃病(portal hypertensive gastropathy,PHG)中的作用研究较少.本实验的拟探讨EGFR表达在PHG患者胃黏膜愈合过程中的变化及作用.方法 以10例正常成年人作为对照,根据胃镜检查结果将41例肝硬化门脉高压症患者分成3组,即无PHG患者组8例,轻度PHG患者组18例,重度PHG患者组15例.33例PHG患者给予普萘洛尔治疗,观察愈合情况.研究对象取胃粘膜组织活检,采用酶联免疫法(ELISA)测定胃黏膜EGFR含量.结果 EGFR在轻度PHG胃黏膜表达与正常对照组、无胃病组无显著差异(P ＞0.05),而重度PHG胃黏膜表达正常对照组、无PHG组、轻度PHG组显著降低(P ＜0.01),而在PHG胃黏膜病变好转组中的表达较正常对照组、无PHG组、轻度PHG组、重度PHG显著增多.结论 EGFR在HPG胃黏膜中表达与病变程度相关,并可能在PHG胃黏膜的愈合过程中发挥重要作用.     

胶质瘤细胞血小板源生长因子B链的纯合二聚体与其受体基因？…

目的 探讨胶质瘤细胞血小板源生长因子Ｂ链的纯合二聚合（ＰＤＧＦＢＢ）及其受体（ＤＧＦＲ）基因表达和ＰＤＧＦＲ活化汪洋在胶质瘤发生、发展听作用。方法 用原位杂交和免疫组化染色观察了７３例不同级别的人胶质瘤组织标本。结果 ６２例（８４．９％）的肿瘤细胞表达ＰＤＧＦＢｍＲＮＡ,基阳性率和阳性肿瘤细胞含量均随肿瘤恶性程度升高而递增。ＰＤＧＦＲα、ＰＤＧＦＲβ和这两种受体及其信号传递通路活化标记物酪氨酸磷酸