电针对大鼠脑缺血区和血清IL-6表达的调节

目的:观察脑缺血后不同时间段IL-6在脑缺血区和血清的表达及电针对其表达的调节。方法:通过大脑中动脉线栓法建立SD大鼠局灶性脑缺血模型,于造模成功后电针相应组大鼠,再利用免疫组化SP法、放射免疫分析技术,检测脑缺血及电针对IL-6表达的影响。结果:脑缺血后IL-6免疫阳性细胞在脑缺血区表达增加,3d达高峰,平均细胞数为(28.15±6.08)个/0.375mm2;血清IL-6水平也升高,1d达高峰,浓度为(103.79±13.65)pg/ml。电针可明显提高IL-6的表达。缺血 电针组与缺血组比较,缺血 电针1、3d组的IL-6阳性细胞数增加(P<0.05),缺血 电针3、7d组的血清IL-6水平升高(P<0.05)。结论:电针上调IL-6的表达,可能是电针治疗缺血性脑损伤的机制之一。     

Neurogenin2基因调控许旺细胞转分化为神经元

背景：Neurogenin2(Ngn2)基因调控星形胶质细胞分化为神经元已被实验证实,这提示许旺细胞也可能通过基因调控分化为神经元。 目的：研究Neurogenin2基因调控大鼠许旺细胞向神经元分化的可行性。 方法：体外培养、纯化及鉴定大鼠许旺细胞,然后用含绿色荧光蛋白基因的慢病毒载体系统将Neurogenin2基因转染导入许旺细胞中,最后用含碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子和脑源性细胞生长因子的无血清DMEM诱导培养许旺细胞2周。显微镜观察细胞形态,免疫细胞化学检测髓磷脂碱性蛋白及神经元特异性烯醇化酶。 结果与结论：许旺细胞转染导入Neurogenin2基因并诱导分化后,免疫荧光检测发现12.56%的细胞表达神经元标志性蛋白神经元特异性烯醇化酶,而对照组均未发现表达神经元标志性蛋白神经元特异性烯醇化酶。Neurogenin2基因植入可使大鼠许旺细胞表达神经元标志性蛋白神经元特异性烯醇化酶,提示该基因可调控许旺细胞转分化为神经元。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

宫内暴露尼古丁对生后小鼠大脑皮层凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的影响

目的研究宫内暴露尼古丁对生后小鼠大脑皮层神经细胞凋亡相关基因表达的影响。方法建立妊娠期宫内暴露尼古丁小鼠动物模型,免疫组织化学方法和W estern b lot方法检测宫内暴露尼古丁模型大脑皮层Bc l-2和Bax的表达。结果免疫组织化学法检测到大脑皮层的Bc l-2表达的平均光密度值和W estern b lot检测的平均灰度比值(Bc l-2/GAPDH)在正常对照组高于尼古丁组(P<0.05),而Bax表达的平均光密度值和平均灰度比值(Bax/GAPDH)在尼古丁组高于对照组(P<0.05)。结论孕期宫内暴露尼古丁激活小鼠大脑皮层促凋亡基因Bax表达,参与大脑皮层神经细胞凋亡。     

电针对脊髓损伤后神经生长抑制因子Sema3A表达的影响

目的:观察电针对脊髓损伤后神经生长抑制因子Sema3A表达的影响,探讨电针对脊髓损伤修复的可能作用机制.方法:将成年雌性SD大鼠分为正常对照组、模型组和电针组,模型和电针组各分7、14、28d3个时间点,建立成年大鼠第9～10胸椎段脊髓全横断损伤模型.电针组于术后当天进行电针治疗,3个组均分别于术后7、14、28d取材,用免疫组织化学ABC法和图像分析技术检测脊髓内Sema3A的表达.结果:术后7、14d时,与正常对照组相比,模型组脊髓损伤处邻近组织内Sema3A表达增强;与模型组相比,电针组脊髓损伤邻近组织内Sema3A表达显著增加;而28d时,电针组、模型组、对照组的Sema3A表达基本一致.结论:电针早期能促进脊髓损伤后Sema3A的表达,从而增强Sema3A对迷乱性出芽的抑制作用,有利于正确的轴突出芽,这可能是其促进脊髓损伤修复的可能机制之一.     

颅脑伤时生长抑素mRNA表达及电针对其影响

目的：探讨电针对颅脑伤的作用机理。方法：采用原位杂交组织化学技术，观察了实验性颅脑伤大鼠脑内生长抑素(SS)变化，并观察了电针治疗颅脑伤时对SS mRNA表达的作用。结果：电针可增加下丘脑室周核SS mRNA表达，而在海马则降低SS mRNA表达。结论：颅脑伤时，电针与SS可能在缓解疼痛方面起协同效应，并且电针可能对海马神经元起保护作用。     

红藤方对内异位症小鼠MMP-2表达的影响

目的 探讨红藤方对小鼠子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)的治疗作用及其机制.方法 采用手术移植法造成小鼠子宫内膜异位模型,随机分为模型组和实验组,实验组口服绐药红藤方,21 d后,分别取出子宫异位内膜组织,通过异位内膜组织苏木精-伊红(HE)染色方法,观察组织形态学变化及采用免疫组织化学方法检测基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinases,MMPs)的表达.结果 光镜下观察发现用药后异位组织周围血管丰富,异位内膜减少,异位腺上皮变矮,腺细胞核固缩.用药组异位组织生长状况没有模型组好,基本无明显的腺体;MMP-2表达减少.结论 红藤方能抑制异位内膜增生,促进炎症包块消退,对子宫内膜异位症具有一定的治疗作用,其治疗机制可能与抑制MMP-2的表达有关系.     

电针结合康复训练对脑缺血小鼠的运动功能改善作用和分子机制研究

目的 探讨电针结合康复训练对脑缺血小鼠的运动功能改善作用和分子机制.方法 以C57BL/6J小鼠为研究对象,随机分为对照组、假手术组,模型组以及电针结合康复训练组(治疗组),每组各10只小鼠,首先分别观察各组小鼠治疗前,治疗后1d、7d、14d的神经功能缺损评分和运动行为学评分,通过qPCR、Western blot检...     

电针对家兔坐骨神经损伤修复中NGF-mRNA表达的影响

目的:探讨电针治疗坐骨神经损伤的机理。方法:将24只健康成年雄性家兔随机分为空白对照组、模型对照组和电针治疗组三个组,每组8只。采用外科方法运用螺旋测微仪对模型对照组和电针治疗组家兔的坐骨神经进行挤压造模,空白对照组不作任何处理,模型对照组不进行电针治疗。电针治疗组造模后治疗四个疗程,疗程结束后采用原位杂交技术检测上述三组家兔坐骨神经对应脊髓段的神经生长因子-信使核糖核酸(NGF-mRNA)水平。结果:电针治疗组NGF-mRNA表达水平明显强于模型对照组(P<0.05)。结论:电针治疗可明显增强坐骨神经损伤后NGF mRNA的表达,促进坐骨神经损伤后的修复与再生,使肢体功能得以恢复。     

单侧输尿管梗阻后小鼠肾脏环氧化酶-2的表达及其意义

目的：观察环氧化酶-2（COX－2）在单侧输尿管梗阻小鼠梗阻肾脏内的表达情况,探讨COX-2在炎性肾脏疾病中清理生理作用。方法：利用阿-PCR检测了COX－2在小鼠单侧输尿管梗阻后4h、24h、72h、sd和7d的表达变化并采用PAS染色观察上述各时间点的肾组织病理改变。结果：单侧输尿管梗阻术后4h肾皮质中的COX－2的表达开始增高,72h达到高峰。术后第一天肾间质中可见少量炎细胞浸润,第3d明显增多,第7d达到高峰。结论：本研究提示COX－2的过度表达很可能是单侧输尿管便用后肾内炎细胞浸润和积聚的起站或促进因素之一。     

吗啡和电针对术后淋巴细胞增殖反应和T细胞亚群的影响

为了观察硬膜外吗啡和电针对术后病人免疫功能的影响，对１８例单纯胆囊切除术病人分别于术前和术后第１、３、７天检测淋巴细胞增殖反应和Ｔ细胞亚群的变化。结果表明硬膜外注入吗啡１ｍｇ在有效镇痛的同时却抑制了淋巴细胞增殖反应直至术后第７天，出现Ｔ细胞亚群中ＣＤ＾３＋，ＣＤ＾＋４表达下降。     

胆碱能抗炎通路在电针预处理调控脑缺血再灌注大鼠小胶质细胞活化状态中的作用

目的:观察电针预处理对大鼠脑缺血再灌注后小胶质细胞活化状态的影响并探讨其机制。方法:成年雄性SD大鼠随机分为7组,分别为假手术组(Sham),脑缺血再灌注组(MCAO),电针(EA)+MCAO组,烟碱型乙酰胆碱受体α7亚单位(α7nAChR)PHA-543,613+MCAO组,溶剂(Vehicle)+MCAO组,α7nAChR抑制剂α-BGT+EA+MCAO组,溶剂+EA+MCAO组。脑缺血再灌注后3 d取材,运用Western Blot技术以及免疫荧光技术检测脑缺血半暗带小胶质细胞经典激活状态(M1型)及选择性激活状态(M2型)特异性标志分子的表达水平。结果:(1)与MCAO组比较,电针预处理组(EA+MCAO)M1型小胶质细胞标志分子iNOS表达下调(P0.05),M2型小胶质细胞标志分子Arginase表达上调(P0.05);(2)α7nAChR激动剂PHA-543,613可模拟电针预处理的作用,使小胶质细胞由M1型向M2型转化;α7nAChR抑制剂α-BGT逆转了电针促进小胶质细胞由M1型向M2型转化的作用。结论:电针预处理可以使脑缺血再灌注后小胶质细胞由M1型向M2型转化,α7nAChR参与了电针预处理对小胶质细胞活化状态改变的过程。     

电针血清对体外培养小胶质细胞活性的影响

目的:观察电针血清对体外培养的小胶质细胞活性和一氧化氮释放量的影响,探讨电针治疗帕金森病的机制。方法:采用高频电针针刺正常大鼠,2周后制备电针血清;体外培养的小胶质细胞分别加入正常血清(正常组)、正常血清加入LPS(对照组)和电针血清加入LPS(电针组)培养;通过免疫组化、MTT和Griess法分别观测8～48h不同时间小胶质细胞形态、活性及NO释放量。结果:1μg/ml LPS可激活小胶质细胞,表现为细胞体积增大,OX-42表达上调,电针组12h小胶质细胞的活性低于对照组,并且12～48 h NO释放量均显著低于对照组,增加电针血清浓度可显著减少NO的释放量。结论:电针血清可能通过抑制激活的小胶质细胞释放NO,从而保护多巴胺神经元。     

蛋白酶体活性对小鼠神经干细胞活性氧水平的影响

目的:探讨蛋白酶体活性对小鼠神经干细胞(NSCs)活性氧(ROS)水平和增殖能力的影响,寻求维持NSCs活力的有效方法。方法:分离培养新生(P0)和成年(P90)小鼠室管膜下区(SVZ)神经干细胞。比较P0和P90 NSCs成球数量和增殖能力,荧光酶标仪检测蛋白酶体活性,DCFH-DA法测定ROS水平。应用蛋白酶体抑制剂MG132和激活剂18α-GA分别作用于P0和P90 NSCs,CCK-8法、DCFH-DA法和JC-1染色检测蛋白酶体活性改变对NSCs增殖能力、ROS水平和线粒体膜电位的影响。结果:P90 NSCs神经球直径和数量较P0明显减少,增殖活性较P0 NSCs明显下降(P0.001)。此外,P90 NSCs蛋白酶体活性较P0 NSCs降低0.55±0.03(P0.05),但ROS水平却较P0 NSCs升高13.25±0.12倍(P0.001)。MG132作用后P0 NSCs ROS水平呈浓度依赖性升高,其中10μmol/L组较对照组显著升高131%±8.4%(P0.001),增殖活性却降低54.4%±7.8%(P0.001);MG132组NSCs线粒体膜电位较对照组下降。相反,18α-GA作用后P90 NSCs ROS水平呈浓度依赖性降低,其中6和8μg/ml组分别下降2.77±0.20和2.78±0.32(P0.01),增殖活性却是对照组的3.76和5倍(P0.001);18α-GA组NSCs线粒体膜电位较对照组升高。结论:蛋白酶体活性与NSCs ROS水平密切相关,激活蛋白酶体活性可减少ROS对成年NSCs线粒体功能的影响,提高NSCs增殖活力。     

MyD88抑制肽对小鼠脑缺血后小胶质细胞极化的影响

目的:研究髓样分化因子88抑制肽(MIP)对小鼠脑缺血后小胶质细胞极化的影响。方法:将30只雄性C57BL/6小鼠分为假手术组(sham)、局灶性脑缺血组(FCI)和给药组(MIP)。用光化学法建立小鼠FCI模型,给药组于造模后第3 d开始给予腹腔注射MIP,每次10 mg/kg,每日一次,连续3 d。采用real time RT-PCR检测损伤区白细胞介素(IL)-1β、IL-4、IL-10、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、CD86和CD206 mRNA的表达,用Western Blot检测损伤区局部Toll样受体2(TLR2)、TLR4、髓样分化因子88(MyD88)、诱导型一氧化氮合酶(i NOS)和精氨酸酶-1(Arg-1)蛋白的表达水平,用免疫荧光染色观察损伤区i NOS和Arg-1与F4/80或Iba-1的共标情况。结果:与假手术组相比,FCI组小鼠损伤区MyD88、TLR2和TLR4蛋白的表达水平明显升高。与FCI组相比,MIP给药组小鼠损伤区IL-1β、TNF-ɑ和CD86 mRNA,以及iNOS蛋白的表达量明显下降,而IL-4、IL-10和CD206 mRNA,以及Ar...     

电针对局灶脑缺血再灌注大鼠大脑皮质eNOS mRNA及蛋白、MMP-9蛋白表达的影响

 摘要:目的 探讨电针对局灶脑缺血/再灌注大鼠脑内缺血皮质区eNOS mRNA及蛋白、MMP-9蛋白表达的影响。方法 采用线栓法制备SD大鼠局灶脑缺血/再灌注模型。将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组。缺血2h后把模型组和电针组分为再灌注1、3和7d 3个时间点。取双侧“合谷”穴（LI 4）为电针刺激穴位。免疫组化法检测eNOS蛋白的表达;逆转录聚合酶链法检测eNOS mRNA的表达;Western blot法检测eNOS 、MMP-9蛋白的表达。结果 与假手术组比较,模型组、电针组各时间点大鼠缺血大脑皮质区eNOS蛋白及mRNA表达增加显著（P<0.01）;与模型组比较,电针组各时间点eNOS 蛋白及mRNA增加明显（P<0.01）。eNOS蛋白表达于再灌注3d达高峰,假手术组表达为 (0.4291±0.0173),模型组再灌注3d表达为 (0.7374±0.0252),电针组表达为 (0.8536±0.0212),各组比较差异显著（P<0.01）。与假手术组比较,模型组、电针组各时间点大鼠缺血大脑皮质区MMP-9蛋白的表达增加显著（P<0.01）;与模型组比较,电针组MMP-9蛋白的表达于再灌注1d低于模型组（P<0.01）,再灌注3、7 d电针组MMP-9蛋白的表达明显高于模型组（P<0.01）。 结论 电针可上调局灶脑缺血/再灌注大鼠缺血皮质区eNOS蛋白及mRNA、MMP-9蛋白的表达。     

电针预处理对肢体缺血再灌注大鼠生存、脑损伤及认知功能的影响

 目的：观察电针（EA）预处理对肢体缺血再灌注（LI/R）大鼠生存情况、脑损伤及认知功能的影响,探讨相关机制。方法：清洁级、健康成年雄性SD大鼠132 只,体重255～300 g,采用随机数字表法,将其随机分为3 组：假手术(sham)组、LI/R组和LI/R+EA预处理 (LI/R+EA) 组。LI/R组采用动脉夹夹闭双后肢股动脉3 h,建立LI/R模型;sham组只暴露股动脉,不夹闭;LI/R+EA组于模型制备前14 d行电针治疗,针刺穴位为“百会”、“足三里”及“血海”。观察各组大鼠7 d生存率;于再灌注48 h,用Morris水迷宫方法测试大鼠认知功能的变化;其余大鼠于再灌注48 h后处死取材,用干湿重法测定脑含水量;免疫组织化学法测定小胶质细胞标志物Iba1;采用Western blotting检测cleaved caspase-3的表达水平;原位末端标记(TUNEL)法检测神经细胞凋亡并计算凋亡指数;光镜下观察海马病理结构变化;化学法测定活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）含量及髓过氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果：与sham组比较,LI/R组及LI/R+EA组大鼠7 d生存率下降,潜伏期和游泳距离增加,穿越平台次数减少,海马Iba1阳性细胞数增加,cleaved caspase-3蛋白表达量增加,凋亡指数明显增加,神经元减少,ROS、MDA含量及MPO活性增加,SOD活性降低(P<0.05或P<0.01);与LI/R组相比,LI/R+EA组上述指标得到明显改善(P<0.05或P<0.01)。结论：电针预处理能提高LI/R大鼠生存率,减轻脑损伤及改善大鼠认知功能障碍,其机制可能与抑制小胶质细胞激活、减轻氧化应激损伤有关。     

电针对脊髓损伤后少突胶质细胞再髓鞘化的影响

目的：观察电针治疗对脊髓损伤后少突胶质细胞增生及新生轴突髓鞘再形成的影响。方法：选用成年大鼠,制作中度脊髓损伤模型,应用督脉电针治疗。电镜观察各组髓鞘和少突胶质细胞的超微结构变化;原位杂交显示髓磷脂碱性蛋白（myelin basic protein,MBP）的基因表达。结果：脊髓损伤后髓鞘明显肿胀,部分崩解;少突胶质细胞坏死溶解。1～2周后出现少量增生少突胶质细胞和厚薄不等的髓鞘。电针组髓鞘肿胀较轻,少突胶质细胞坏死少。1周后可见较多增生的少突胶质细胞和完整髓鞘。原位杂交显示电针组MBP基因表达明显高于损伤组,3d组最低,1周达高峰,此后逐渐下降。结论：脊髓损伤后电针治疗可有效防止神经纤维的溃变,促进少突胶质细胞增生和再生神经纤维髓鞘再形成。