血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1在人脐静脉内皮细胞表达CD40中的作用

目的研究氧化低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞表达CD40中血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1的作用。方法在氧化低密度脂蛋白作用人脐静脉内皮细胞前预先用血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1阻断剂角叉(菜)胶(κ-carrageenan)和多聚肌苷酸(PIA)作用1h,应用亲合组织化学技术检测血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1的表达,流式细胞技术检测细胞表面CD40的表达。结果预先加入血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1阻断剂PIA和角叉(菜)胶的CD40的表达低于氧化低密度脂蛋白组(P<0.05)。结论在人脐静脉内皮细胞的炎症反应中,氧化低密度脂蛋白通过血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1途径激活了CD40的表达。     

瘦素对人脐静脉内皮细胞表达CD40和NF-κB的影响

目的:探讨瘦素对人脐静脉内皮细胞(ECV-304)表达CD40和NF-κB的影响.方法:人脐静脉内皮细胞培养及分组(6 h作用组和24 h作用组),用10 μg/L、30 μg/L、50 μg/L的瘦素及50 μg/L瘦素加上NF-κB阻断剂PDTC处理;免疫组织化学方法检测CD40和NF-κB的表达.结果:CD40为棕黄色颗粒,主要分布于细胞膜和细胞质;在10 μg/L的瘦素处理后,随着时间的延长,CD40表达水平不变,在30 μg/L、50 μg/L的瘦素处理后,随着时间的延长,CD40表达水平升高,在相同的作用时间下,随着浓度的增高,CD40表达水平升高,差异有统计学意义.NF-κB(P65)为棕黄色颗粒,主要表达于细胞质,在10 μg/L的瘦素处理后,随着时间的延长,NF-κB(P65)表达水平不变,在30 μg/L、50 μg/L的瘦素处理后,随着时间的延长,NF-κB(P65)表达水平升高;在相同的作用时间下,随着浓度的增高,NF-κB(P65)表达水平升高,差异有统计学意义;按20 μl/105细胞加入CD40单克隆抗体处理6 h后,NF-κB(P65)表达水平下降,经统计学检验,CD40和NF-κB(P65)的表达有相关性.结论:高浓度瘦素可以诱导脐静脉内皮细胞同时表达CD40和NF-κB(P65),同时, CD40表达被阻止后,NF-κB(P65)表达水平降低,说明二者的表达有相关性, CD40和NF-κB(P65)可能共同参与了高瘦素血症引发的动脉粥样硬化的发生和发展.     

氨氯地平经核因子κB下调氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞血小板源生长因子B的表达

目的 观察氨氯地平对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC-12)中血小板源生长因子B(PDGF-B)和核因子κB (NF-κB)表达的影响,通过氨氯地平对ox-LDL/NF-κB/PDGF-B的影响,进一步探讨氨氯地平相关的作用机制.方法 不同浓度氨氯地平(0、0.1、1.0、10.0μmol/L)预先处理细胞0.5h后加入50mg/L ox-LDL共同孵育24 h,RT-PCR和Western Blot检测细胞内PDGF-B的表达及NF-κB的蛋白表达；进一步通过NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)的加入,RT-PCR和Western blot观察其对PDGF-B及NF-κB表达的影响.结果 随着氨氯地平处理浓度的增加,HUVEC-12中PDGF-B的mRNA和蛋白表达,以及NF-κB的蛋白表达均明显下调,NF-κB抑制剂PDTC既可降低NF-κB的蛋白表达,也可下调PDGF-B的表达,作用与10.0 μmol/L氨氯地平组的结果相近.结论 氨氯地平可通过NF-κB下调ox-LDL诱导的HUVEC-12中PDGF-B的表达.     

核转录因子介导不对称二甲基精氨酸上调人脐静脉LOX-1的表达

培养人脐静脉内皮细胞株HUVEC,随机分为对照组和不对称二甲基精氨酸(ADMA)组,采用Western blot法测定核转录因子(NF-κB)的表达,逆转录聚合酶链反应分析血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)mRNA的表达.发现ADMA明显上调NF-κB、LOX-1 mRNA的表达,且随其浓度的升高呈剂量依赖性.吡咯烷二硫氨基甲酸酯(PDTC)显著抑制ADMA诱导的NF-κB、LOX-1 mRNA的表达,而且高浓度组较低浓度组的抑制作用更明显.认为NF-κB的特异抑制剂PDTC可抑制NF-κB介导ADMA上调人脐静脉内皮细胞LOX-1的表达.     

替米沙坦对同型半胱氨酸诱导的人脐静脉内皮细胞血管细胞黏附分子1、核因子κB表达及细胞黏附的影响

目的观察替米沙坦对同型半胱氨酸诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞血管细胞黏附分子1(VCAM-1)、核因子κB(NF-κB)表达及与单核细胞黏附的影响。方法胶原酶消化法获取人脐静脉内皮细胞;RT-PCR检测VCAM-1 mRMA的表达;Western blot检测VCAM-1、NF-κB蛋白的表达;ROSE BENGAL染色法检测单核细胞-血管内皮细胞黏附功能。结果与空白对照组相比,同型半胱氨酸增强了人脐静脉内皮细胞VCAM-1 mRMA、VCAM-1蛋白、NF-κB p65蛋白的表达水平及与单核细胞黏附能力。替米沙坦(1000 nmol/L组)明显降低了同型半胱氨酸诱导的人脐静脉内皮细胞VCAM-1 mRMA、VCAM-1蛋白、NF-κB p65蛋白及与单核细胞的黏附水平(P<0.01)。与同型半胱氨酸组比,PDTC(NF-κB抑制剂)组NF-κB p65蛋白、VCAM-1 mRMA、VCAM-1蛋白表达水平均明显降低,内皮细胞与单核细胞的黏附水平也明显降低(P<0.01)。结论替米沙坦抑制了VCAM-1 mRMA和蛋白的表达及内皮与单核细胞的黏附水平,其机制可能是通过抑制NF-κB而抑制炎症反应及内皮损伤。     

PCKS9通过TLR4/NF-κB/COX-2途径调节单核-内皮细胞黏附性

目的探讨前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)是否通过人脐静脉内皮细胞(HUVECs)Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)/环氧合酶2(COX-2)途径调节单核-内皮细胞黏附性。方法氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)处理HUVECs,real-time PCR与Western blot法检测PCSK9、TLR4、NF-κB p65、COX-2 mRNA和蛋白表达;ox-LDL处理后,用人重组PCSK9蛋白孵育或PCSK9 siRNA转染HUVECs,检测TLR4、NF-κB p65、COX-2 mRNA和蛋白表达;ox-LDL处理后,用人重组PCSK9蛋白与TLR4抑制剂瑞沙托维(TAK-242)或NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸(PDTC)共同孵育HUVECs,检测NF-κB p65与COX-2的mRNA和蛋白表达;COX-2抑制剂(NS398)与人重组PCSK9蛋白先后处理HUVECs后,加入THP-1单核细胞检测单核-内皮细胞黏附性。结果 ox-LDL上调HUVECs的PCSK9、TLR4、NF-κB p65、COX-2 mRNA和蛋白表达(P均0.05);人重组PCSK9蛋白在ox-LDL基础上上调TLR4、NF-κB p65、COX-2 mRNA和蛋白表达(P均0.05);PCSK9 siRNA转染可抑制ox-LDL对TLR4、NF-κB p65、COX-2 mRNA和蛋白表达的上调作用(P均0.05);TAK-242抑制人重组PCSK9蛋白对TLR4、NF-κB p65 mRNA和蛋白表达的上调作用(P均0.05);PDTC抑制人重组PCSK9蛋白对NF-κB p65、COX-2 mRNA和蛋白表达的上调作用(P均0.05);NS398可抑制人重组PCSK9蛋白的促单核-内皮细胞黏附作用(P均0.05)。结论 PCSK9可通过TLR4/NF-κB/COX-2途径调节单核-内皮细胞黏附性。     

四氢吡咯二硫代氨基甲酯对人脐静脉内皮细胞模拟缺血再灌注后趋化因子CXCL16表达的影响

目的:通过四氢吡咯二硫代氨基甲酯(PDTC)研究核因子-κB(NF-κB)对人脐静脉内皮细胞模拟缺血再灌注后趋化因子CXCL16表达的影响。方法:分为5组对人脐静脉内皮细胞进行培养,即对照组(正常培养基培养)、缺血再灌注组(模拟缺血培养液培养30min后换正常培养液再培养4h)、缺血再灌注+0.1mmol/L PDTC组、缺血再灌注+0.25mmol/L PDTC组和缺血再灌注+0.5mmol/L PDTC组。后3组均于模拟缺血再灌注培养前1h在培养液中添加相应浓度PDTC。观察各组NF-κB p65及CXCL16mRNA表达水平,通过ELISA检测CXCL16蛋白表达水平以及细胞存活情况。结果:缺血再灌注组显著刺激CXCL16的mRNA和蛋白表达水平(均P0.05)。0.1mmol/L、0.25mmol/L和0.5mmol/L PDTC均显著降低NF-κB mRNA和CXCL16mRNA(均P0.05)。0.5mmol/L PDTC显著降低上清培养液CXCL16蛋白表达水平(P0.05)。0.1mmol/L、0.25mmol/L和0.5mmol/L PDTC均促进细胞存活(均P0.05)。结论:PDTC抑制模拟缺血再灌注所诱导的CXCL16表达,有利于细胞生存。     

NF-κB在TNF-α致人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用

目的研究核转录因子-κB（nuc lear factor-κB,NF-κB）在TNF-α诱导培养的人脐静脉内皮细胞凋亡过程中的作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,并用10 ng/m l的TNF-α进行诱导,不同时间段观察NF-κB活性、NF-κB抑制物IκBα表达以及细胞凋亡的情况,EMSA测定NF-κB活性,W estern-b lot检测IκBα的表达情况;Tunel法检测细胞凋亡;并用NF-κB的抑制剂PDTC预处理细胞后来观察TNF-α诱导细胞凋亡的情况。结果TNF-α以时间依赖性诱导人脐静脉内皮细胞凋亡,NF-κB的活性在处理后10 m in开始增强,2 h后恢复正常,IκBα的表达在10m in开始下降,2 h恢复正常;PDTC能抑制TNF-α诱导的凋亡。结论TNF-α在诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞时,IκBα降解,NF-κB激活,从而引起细胞的凋亡。     

CD4+CD25+ Foxp3+调节性T细胞对ox-LDL诱导内皮细胞炎性因子表达的影响

目的:探讨CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)炎性因子表达的影响.方法:磁性细胞分离器(MACS)分离CD4+CD25+T细胞及CD4+CD25-T细胞.在ox-LDL作用下,将HUVECs分别与anti-CD3 mAb 激活的CD4+CD25+T细胞、CD4+CD25-T细胞共培养24 h.分别应用流式细胞术、ELISA、real-time PCR测定Tregs对ox-LDL诱导损伤HUVECs炎性因子VCAM-1、MCP-1、IL-6表达的影响.应用凝胶电泳迁移率实验(EMSA)方法观察Tregs对ox-LDL诱导损伤HUVECs NF-κB激活的影响.结果:与对照组比较,Tregs细胞可显著抑制ox-LDL诱导损伤HUVECs炎性因子(VCAM-1、MCP-1、IL-6)及NF-κB的结合活性.结论:Tregs细胞可显著抑制ox-LDL诱导损伤HUVECs炎性因子的表达,其作用机制可能为下调了NF-κB的结合活性.     

卡托普利晚期预处理对人内皮细胞缺氧复氧损伤时内皮素1和一氧化氮合酶表达的影响

观察缺氧复氧损伤时内皮细胞表达内皮素、一氧化氮合酶和一氧化氮的变化 ,并探讨卡托普利晚期预处理对内皮细胞在缺氧复氧损伤时三者的影响及机制。选用体外培养的第 3代人脐静脉内皮细胞 ,设正常对照组、单纯缺氧组、缺氧复氧组、卡托普利预处理组、卡托普利 +缓激肽B2 受体阻断剂组、卡托普利 +蛋白激酶C阻断剂组和卡托普利 +核因子κB阻断剂组 ,然后提取总RNA ,运用半定量逆转录—聚合酶链反应检测内皮素、一氧化氮合酶的mRNA表达。并利用分光光度计检测总一氧化氮合酶和一氧化氮蛋白的表达。结果发现 ,内皮素的灰度值在单纯缺氧组、缺氧复氧组均升高 ,在卡托普利组降低 ,而在三种阻断剂组均升高 ;诱导型一氧化氮合酶和内皮型一氧化氮合酶灰度值的变化规律与内皮素相反 ,其中诱导型一氧化氮合酶的变化较为轻微。与对照组相比 ,单纯缺氧组和缺氧复氧组一氧化氮合酶和一氧化氮有不同程度的降低 (P <0 .0 1) ;与单纯缺氧组和缺氧复氧组相比 ,卡托普利组一氧化氮合酶和一氧化氮均明显升高 (P <0 .0 1) ;与卡托普利组相比 ,3种阻断剂均可使一氧化氮合酶和一氧化氮的表达下降 (P <0 .0 1) ,而与缺氧复氧组相比表达升高 (P <0 .0 1)。结果提示 ,缺氧复氧可以使内皮细胞表达的内皮素增加 ,一氧化氮合酶降低 ,     

前列腺素E1对人脐静脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

目的 探讨前列腺素E1(PGE1)对人脐静脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattactant protein-1,MCP-1)表达的影响及可能机制.方法 用培养的人脐静脉内皮细胞观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对MCP-1、核因子(NF)-κB表达的影响及PGE1的干预作用.采用ELISA检测上清液MCP-1浓度,原位杂交检测MCP-1 mRNA的表达,免疫印迹检测NF-κB蛋白表达.结果 (1)PGE1(0.001、0.010、0.100 mol/L)组与ox-LDL(100 μg/ml)组比较,MCP-1蛋白表达为(0.327±0.051)、(0.214±0.213)、(0.247±0.228)pg/ml对(0.655±0.013)pg/ml,MCP-1mRNA表达为(0.061±0.008)、(0.033±0.006)、(0.026±0.004)吸光度(A)/μm2对(0.220±0.032)A/μm2,PGE1显著抑制了ox-LDL所诱导的MCP-1改变.(2)Western blot结果显示,PGE1呈浓度依赖性抑制ox-LDL所诱导的NF-κB P65蛋白表达.结论 PGE1可抑制ox-LDL诱导的内皮细胞MCP-1及NF-κB表达上调,这可能与PGE1介导的血管内皮保护作用有关.     

Let-7f靶向抑制A20表达在血管内皮细胞炎症反应中的作用研究

目的观察let-7f在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导血管内皮细胞炎症反应过程中的变化规律,探讨let-7f参与动脉粥样硬化起始发病过程的分子机制。方法采用双抗体夹心ELISA方法观察不同剂量ox-LDL处理血管内皮细胞时细胞间粘附分子1(ICAM-1)的表达变化情况,RT-qPCR检测不同剂量ox-LDL处理血管内皮细胞时let-7f的表达变化规律,Western blot法分析不同剂量ox-LDL处理血管内皮细胞时核因子κB(NF-κB)的核移位情况和ox-LDL对人脐静脉内皮细胞A20表达及NF-κB通路活化的影响,双荧光素酶报告实验检测let-7f与A20基因的3’-UTR靶向结合,Western blot法检测let-7f对A20表达的调控。结果 20μg/ml ox-LDL可导致血管内皮细胞培养液中ICAM-1的含量明显升高,血管内皮细胞let-7f的表达明显上调(均为P0.05),且随着ox-LDL作用剂量的增加,ICAM-1与let-7f的表达变化均呈现明显的剂量效应关系。此外,20μg/ml ox-LDL可导致血管内皮细胞NF-κB向核内移位,随着ox-LDL作用剂量的增加核内NF-κB明显增多(P0.05)。100μg/ml ox-LDL作用于血管内皮细胞,可引起A20下调,IKK被磷酸化,并进一步导致NF-κB磷酸化增多,而let-7f能够与A20基因的3’-UTR靶向结合并明显抑制其表达。结论 Let-7f可能通过调控NF-κB信号传导通路的活化参与血管内皮细胞的炎症反应过程,提示let-7f可能成为动脉粥样硬化早期预防和治疗的新靶点。     

Ghrelin通过NF-κB抑制尼古丁诱导的人脐静脉内皮细胞VCAM-1的表达

将用于实验的人脐静脉内皮细胞随机分成4组:空白对照组(无血清DMEM培养基),尼古丁组(100nmol/L尼古丁,24 h),Ghrelin组(10 ng/ml Ghrelin 1 h后,加入100 nmol/L尼古丁),PlYTC组(100 ìmol/L PDTC和100 nmol/L尼古丁).Western blot法检测人脐静脉内皮细胞VCAM-1的表达;TransAM NF-êB p50试剂盒检测人脐静脉内皮细胞NF-êB的活化.发现尼古丁可明显诱导人脐静脉内皮细胞VCAM-1的表达,这一作用可被NF-êB抑制剂PDTC阻断.Ghrelin可显著抑制尼古丁对VCAM-1的诱导作用;Ghrelin亦可抑制尼古丁诱导的NF-êB的活化.认为Ghrelin可通过抑制尼古丁诱导的NF-êB活化,抑制尼古丁引起的内皮功能紊乱,从而改善内皮细胞功能.     

普罗布考抑制氧化低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞Fractalkine的表达

目的:探讨氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)产生趋化因子Fractalkine及普罗布考的抑制作用.方法:用不同浓度的ox-LDL刺激HUVEC及用不同浓度普罗布考和PDTC预处理细胞后再用ox-LDL刺激,半定量RT-PCR方法检测Fractalkine和NF-κB p65的mRNA的表达.结果:未用ox-LDL刺激的HUVEC不表达Fractalkine,分别用25、50、100 mg/L浓度的ox-LDL刺激后,Fractalkine mRNA的表达呈浓度依赖性增加,与空白对照组比较分别增加384.58%(P＜0.01)、484.09%(P＜0.01)、558.26%(P＜0.01),同时NF-κB p65 mRNA的表达分别增加15.71%(P＞0.05),41.73%(P＜0.01),66.72%(P＜0.01).40 μmol/L PDTC预处理后,再用50 mg/L ox-LDL刺激HUVEC,NF-κB p65 mRNA的表达下降25.61%(P＜0.01),分别用20、40、80 μmol/L的普罗布考干预后,NF-κB p65 mRNA的表达分别下调15.52%(P＜0.05)、24.92%(P＜0.01)、34.93%(P＜0.01);同时,Fractalkine mRNA的表达则分别下调32.22%(P＜0.01)、10.07%(P＞0.05)、20.59%(P＜0.01)、33.60%(P＜0.01).结论:ox-LDL可以通过NF-κB p65诱导HUVEC表达Fractalkine,而普罗布考则可以抑制Fractalkine的表达,这种作用可能与抑制NF-κB p65有关.     

核转录因子-κB-基质金属蛋白酶-9信号通路在糖尿病大鼠认知功能障碍中的作用

目的探讨核转录因子-κB(NF-κB)-基质金属蛋白酶-9(MMP-9)通路在糖尿病(DM)大鼠认知功能障碍中的作用。方法采用55 mg/kg链脲激酶(STZ)单次腹腔注射诱导DM大鼠模型,随机分为3组(每组10只):对照组、DM组和DM吡咯烷二硫氨基甲酸酯(PDTC)治疗组(DM+PDTC组)。DM+PDTC组予以PDTC[150 mg/(kg·d)]持续灌胃6周。6周后采用Morris水迷宫检测学习记忆功能,选取上述同样处理的3组(每组6只)用于检测海马MMP-9及NF-κB的蛋白表达。结果 DM组的潜伏期在训练的第3、4、5天较对照组明显延长(P<0.05),而PDTC治疗可明显改善DM引起的潜伏期延长(P<0.05)。在空间探索试验中,目标象限的停留时间百分比比较,DM组较对照组明显下降(P<0.05),而DM+PDTC组较DM组明显增加(P<0.05)。DM组海马MMP-9和NF-κB的表达较对照组显著升高(P<0.05),而DM+PDTC组NF-κB的表达与对照组比较无显著性差异(P>0.05)。DM+PDTC组的MMP-9的表达较DM组显著降低(P<0.05),但较对照组仍显著升高(P<0.05)。结论DM可能通过激活NF-κB信号通路,从而部分上调MMP-9的表达,从而导致认知功能障碍的发生。     

淫羊藿苷经NF-κB信号通路干预大鼠免疫衰老的作用及机制

目的探讨中药延缓免疫衰老的作用和机制。方法清洁级健康雄性SD大鼠50只,分为4月龄(4 mon)、24月龄(24 mon)、24月龄加PDTC处理(24 mon+PDTC)、24月龄加Ica(icariin,Ica)干预(24 m+Ica)和24月龄加Ica干预再加PDTC处理(24 mon+Ica+PDTC)五组,每组10只。自21月龄满开始,24 mon+Ica组和24 mon+Ica+PDTC组大鼠予Ica灌胃,24 mon组和24 mon+PDTC组给予等量蒸馏水灌胃,均连续3个月。24 mon+PDTC组和24 mon+Ica+PDTC组大鼠在灌胃结束前1 w每2 d腹腔注射PDTC,按200 mg/kg体重分2次注射。处死大鼠分别提取大鼠脾CD4+T淋巴细胞,用流式细胞仪检测细胞凋亡率,电泳迁移率(EMSA)检测细胞NF-κB的活性,Western印迹法检测细胞P65蛋白表达水平。结果 24 mon组大鼠脾CD4+T淋巴细胞凋亡率明显高于4 mon组和24 mon+PDTC组(P0.05),而24 mon+Ica组细胞凋亡率显著降低(P0.05);与24 mon+PDTC组比较,24 mon+Ica+PDTC组脾CD4+T淋巴细胞凋亡率明显降低(P0.05)。与4 mon组大鼠相比,24 mon组大鼠脾CD4+T淋巴细胞中p65蛋白表达显著下调(P0.01);与24 mon组比较,24 mon+Ica组p65蛋白表达明显上调(P0.01),24 mon+PDTC组则显著下调(P0.05)。与24 mon+PDTC组比较,24 mon+Ica+PDTC组p65蛋白表达明显增强(P0.05)。24 mon组大鼠脾CD4+T淋巴细胞NF-κB的活性明显低于4 mon组(P0.01);与24 mon组比较,24 mon+Ica组NF-κB的活性增强(P0.01),24 mon+PDTC组NF-κB活性则降低(P0.01)。相关分析表明,CD4+T淋巴细胞NF-κB活性与细胞凋亡率呈负相关(r=-0.75,P0.01)。结论 NF-κB通过抑制淋巴细胞凋亡参与免疫衰老的调控;Ica可能通过提高NF-κB的活性和诱导P65高表达来抑制淋巴细胞过度凋亡从而延缓免疫衰老。     

瑞舒伐他汀对ox-LDL诱导的内皮细胞损伤中Sphk1/S1P/NF-κB信号通路的影响

目的探讨经氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激后,人脐静脉内皮细胞鞘氨醇激酶(Sphk)1、1-磷酸鞘氨醇(S1P)、基质金属蛋白酶(MMP)-3、核转录因子(NF)-κB p65表达的变化及瑞舒伐他汀(Rt)对ox-LDL诱导的内皮细胞损伤中Sphk1-S1P信号通路的影响。方法实验分为空白对照组,ox-LDL(50μg/ml)处理组,Rt(0.1、1、10μg/ml)干预组,RT-PCR检测细胞Sphk1、S1P、MMP-3因子水平;Western印迹检测细胞NF-κB p65蛋白表达;观察药物干预后细胞Sphk1、S1P、MMP-3、NF-κB p65因子的变化。MTT检测细胞增殖活性。结果 ox-LDL处理组细胞Sphk1、S1P、NF-κB p65、MMP-3的表达均显著高于空白对照组(P<0.05),Rt各干预组较ox-LDL处理组降低(P<0.05)。ox-LDL处理组细胞增殖明显受抑制,Rt各干预组细胞增殖率均较ox-LDL处理组显著上升(P<0.001)。结论 Sphk1-S1P信号传导通路的激活,导致下游炎症因子NF-κB p65、MMP-3的高表达,参与ox-LDL诱导的内皮细胞损伤过程,Rt可能通过抑制Sphk1/S1P信号传导通路介导的与炎症有关的血管损伤,延缓动脉粥样硬化的进程。     

Ox-LDL诱导血管平滑肌细胞胸腺基质淋巴细胞生成素表达

目的:观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)是否可以诱导血管平滑肌细胞(VSMCs)表达胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP),并探讨核因子-κB(NF-κB)信号通路在其中的作用。方法:原代培养VSMCs,分别用ox-LDL及ox-LDL联合NF-κB特异性抑制剂——吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)干预。采用免疫组织化学染色检测胞质中TSLP的表达,用ELISA法检测细胞培养上清液中TSLP的浓度,用电泳迁移率实验检测NF-κB的结合活性。结果:正常未经ox-LDL刺激的VSMCs几乎不表达TSLP,经ox-LDL刺激后胞质及上清液中的TSLP表达明显增加,并有浓度和时间依赖性。Ox-LDL刺激VSMCs表达TSLP的同时NF-κB信号通路激活,经PDTC预处理后TSLP表达量显著减少。结论:Ox-LDL能够诱导VSMCs表达TSLP,其作用机制可能为上调NF-κB的结合活性。     

Protective effect of osteoprotegerin in vascular endothelial cells cultured with high glucose and its possible mechanism

目的 探讨护骨素对高糖诱导的血管内皮细胞保护作用及机制.方法 人脐静脉内皮细胞分别在正糖(5 mmol/L葡萄糖)、高糖(25 mmol/L葡萄糖)、高糖+护骨素(25 mmol/L葡萄糖+2 μg/ml护骨素)、高渗(5mmol/L葡萄糖+20 mmol/L甘露醇)环境下培养72小时.以流式细胞术测定各组细胞的凋亡;Western blot法分析各组细胞磷酸化核转录因子(NF-κB)抑制蛋白激酶β (p-IκKβ)、NF-κB抑制蛋白激酶β(IκKβ)、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)、bcl-2及bax表达水平.结果 (1)与正糖组相比,高糖组内皮细胞凋亡率显著增加(P＜0.01);高糖+护骨素组细胞凋亡明显低于高糖组,而又高于正糖组(P＜0.05);(2)与正糖组相比,高糖组p-IκKβ表达显著增高(P＜0.01),IκBo和bcl-2表达显著降低(P＜0.01);高糖+护骨素组p-IκKβ明显低于高糖组,而又高于正糖组(P＜0.05),IκBα和Bcl-2表达水平明显高于高糖组,而又低于正糖组(P＜0.05).结论 高糖通过激活IκKβ/NF-κB信号通路引起血管内皮细胞凋亡;护骨素具有抗高糖诱导的IκKβ/NF-κB活性作用,从而降低内皮细胞凋亡,保护内皮细胞.     

胰岛素、血管紧张素Ⅱ对人血管内皮细胞NF-κB的激活和血脂康干预的影响

目的观察胰岛素、血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)对体外培养的人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelialcells,HUVECs)NF-κB的激活及血脂康干预后的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞株(ECV-304),2~3代用于实验。细胞用0.5%胎牛血清培养液培养24小时后分成七组;正常对照组、胰岛素组(100uI/ml)、Ang Ⅱ组(5×10-8mol/ml)、胰岛素+Ang Ⅱ组、胰岛素+血脂康组(150ug/ml)、Ang Ⅱ+血脂康组、胰岛素+Ang Ⅱ+血脂康组。加血脂康的各组,血脂康预先孵育2h,再加胰岛素或/和Ang Ⅱ共同孵育。在4h时间点上,分别用免疫细胞化学方法测各组内皮细胞NF-κBp65的核易位阳性率,用免疫荧光和流式细胞仪检测其活性。结果①胰岛素、Ang Ⅱ、胰岛素+Ang Ⅱ刺激4h后,内皮细胞NF-κBp65的核易位阳性率(%)分别为95.5±3、96.6±3、96.4±4,显著高于对照组(4.5±2)(P<0.05),血脂康几乎完全抑制胰岛素、Ang Ⅱ、胰岛素+Ang Ⅱ所致的NF-κBp65核易位阳性率的增加(7.3±3、6.9±46、.3±2)(P<0.05)。②胰岛素、Ang Ⅱ、胰岛素+Ang Ⅱ刺激4h后,内皮细胞NF-κB活性分别为6.55±0.53、7.23±0.36、10.29±0.69,显著高于对照组(3.26±0.37)(P<0.05);与单用胰岛素或Ang Ⅱ比,胰岛素+Ang II使NF-κB活性增加更明显(P<0.05);血脂康能明显抑制NF-κB的活性(4.44±0.49、3.98±0.24、5.02±0.39)(P<0.05)。结论胰岛素、Ang Ⅱ均能激活内皮细胞NF-κB,促进NF-κBp65的核易位,有致动脉粥样硬化(AS)作用。血脂康能抑制内皮细胞NF-κB的激活,具有调脂外的抗AS作用。