从小鼠肺中分离仙台病毒和检出仙台病毒抗原的研究

我们用鸡胚，鸡胚细胞和猴肾细胞成功地从自然和人工感染仙台病毒的小鼠肺中分离出仙台病毒。其中分离率以鸡胚尿囊腔接种法最高，猴肾细胞次之．鸡胚细胞较低。比较了病毒分离法．免疫酶法及间接免疫荧光法共检查了自然和人工感染仙台病毒的小鼠肺标本45份．检出率依次为37．78％，33．33％和26.67％，各方法间的符合率均达到80％以上。仙台病毒抗原检出方法简单，快速，可供实际应用。     

小鼠仙台病毒ELISA抗体检测规范化试剂盒的研制与应用

目的按照实验动物国家标准和农业部对于兽医诊断制品的要求研制小鼠仙台病毒抗体检测试剂盒,并在临床检测中分析其适用性。方法建立仙台病毒的种子批和BHK-21细胞的细胞库;标化仙台病毒生产工艺、抗原蛋白纯化工艺;优化ELISA反应板体系;标化质控血清。使用规范化的ELISA试剂盒对我单位672份送检血清样品进行检测,使用IFA和Western blot方法进行复检。结果病毒的种子批检验表明在-80℃保存半年以上毒力稳定;病毒生产和抗原纯化工艺的标准化提高了抗原生产的稳定性;对照体系的设定降低了环境等变量对于结果判定的影响。在对临床样本的检测过程中发现3种方法的灵敏度ELISA高于Western blot高于IFA。结论规范化的小鼠仙台病毒ELISA抗体检测试剂盒能对小鼠仙台病毒感染状况作出准确判断,具有一定的稳定性和结果可重复性。     

超声波对免疫组化抗原修复的作用

免疫组化是用已知抗体或抗原检测组织细胞中相应抗原或抗体的一门技术 ,广泛应用于病理诊断 ,对耳鼻咽喉科鼻咽癌的早期诊断和最后确诊有着重要作用。由于标本常规用福尔马林固定和石蜡包埋过程中造成的抗原封闭与结构改变 ,限制了一些抗体的使用或表达反应微弱。随着新的抗体不断产生 ,对抗原的修复的要求愈来愈高。目前抗原修复的方法很多 ,如高压锅加压煮沸、微波炉辐射、蛋白酶消化等 ,我科自 1998年 9月至 2 0 0 1年 9月使用病理样品快速超声处理仪利用其超声温控功能对组织抗原进行修复 ,并与微波方法对照 ,现将体会总结如下。1　材料…     

仙台病毒感染对BALB／c小鼠药物代谢的影响

用仙台病毒通过滴口鼻和腹腔注射感染８～１０周龄的清洁级ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，１周后腹腔注射戊巴比妥钠６０ｍｇ／ｋｇ，测得仙台病毒感染组的睡眠时间为２８．２±１１．５ｍｉｎ，对照组为４１．６±９．３ｍｉｎ，２组的睡眠时间有显著差异（Ｐ＜０．０１）；另取４～７日龄清洁级ＢＡＬＢ／ｃ小鼠的肝脏进行肝细胞培养，设仙台病毒感染肝细胞组和正常肝细胞组，分别加入等浓度的心得安（３００μｇ／Ｌ），经高压液相色谱技术检测，仙台病毒感染肝细胞对心得安的代谢比正常肝细胞慢，２组间差异非常显著（Ｐ＜０．００１）。     

仙台病毒载体对未成熟树突状细胞蛋白表达的影响

目的:研究仙台病毒载体对未成熟树突状细胞(DC)蛋白质表达的影响. 方法:提取转染仙台病毒载体的树突状细胞和对照细胞的总蛋白,定量. 双向凝胶电泳分离蛋白质组分,胶体银染显色,PDQuest进行图像分析后选取差异点,胶内酶解后MALDI-TOF MS进行肽指纹图谱鉴定. 结果:图像分析结果显示,处理组2-DE图缺少了40个以上的蛋白点,对其中明显没有表达的5个蛋白点进行了鉴定. 结论:仙台病毒载体感染未成熟树突状细胞可引起蛋白表达的减少.     

大鼠仙台病毒ELISA、间接免疫荧光和免疫印迹三种检测方法的比较

目的比较ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)、IFA(immuno-fluorescence assay)和WB(Western blot)三种方法在大鼠仙台病毒血清学检测中的差异。方法仙台病毒蛋白抗原经凝胶电泳分离转移后用于血清学检测的WB方法;使用IFA、ELISA方法对20份无菌大鼠、227份SPF大鼠以及63份清洁级大鼠送检血清样品进行检测,阳性及可疑样品用WB方法进行了验证。结果 20份无菌大鼠血清样品被3种方法检测为仙台病毒抗体阴性;SPF级大鼠样品被IFA方法判定为阴性,1.32%(3/227)被ELISA方法判定为阳性,其中有2/3被WB确认为阳性;ELISA、IFA和WB在清洁级大鼠样品中检出仙台病毒的阳性率分别为为18.12%、11.34%和15.87%。结论三种检测方法灵敏度从高到低依次为ELISA、WB和IFA。WB方法可作为IFA和ELISA难以确定结果的替代方法。     

仙台病毒复制序列对未成熟树突状细胞蛋白表达的影响

目的 研究仙台病毒载体复制序列对未成熟树突状细胞(dendritic cells,DC)蛋白质表达的影响,为联合运用二者进行基因治疗提供依据.方法 提取去除仙台病毒复制序列载体(Sev/△F)、完全序列载体(SeV)转染未成熟DC的总蛋白,定量.双向凝胶电泳分离蛋白质组分,胶体银染显色,PDQuest进行图像分析后选取差异点,胶内酶解后MALDI-TOF MS进行肽指纹图谱鉴定.结果 图像分析结果显示,Sev/△F感染后的DC明显比SeV感染后的DC表达蛋白点多,其中有不少蛋白表达量也明显上调.结论 仙台病毒载体感染未成熟DC后引起蛋白表达的减少,这与SeV的复制序列有关.     

超声波对小鼠胚胎表达整合素及其着床能力的影响

目的：研究超声波照射对小胎胚表达整合素α1、α5、β1、β3的影响充及与其着床能力的关系。方法：取小鼠二细胞胚经超声波照射后体外培养至囊胚期,用免疫组化法检测其整合素α1、α5、β1、β3的表达及其着床能力的改变,并与未经照射的正常胚胎比较,结果：1、超声波照射组胚贴附率,滋养细胞外延生长率均显著低于正常胚胎。2、正常胚胎桑椹胚期即有α5、β1、β3整合素表达,而无α1表达：囊胚期α5、β1、β3表达增强,仍无α1表达：α1只出现在外延生长的滋养细胞。3、超声波照射组胚胎β3整合素的表达明显弱于正常组。且未见α1表达,而α5、β1的表达两组间无差异。结论：超声波照射使胚胎着床能力明显降低。可能与其影响胚胎细胞α1、3整合素的正常表达有关。     

超声波作用下提取茜草色素及稳定性实验

目的探讨超声波法作用下提取茜草中色素的影响因素,确定超声波法提取茜草色素的最佳条件;研究茜草色素稳定性条件。方法以超声波的功率、超声的时间、温度、料液比为4因素,进行3水平的单因素试验和正交试验,探讨外部条件更改时的稳定性。结果结果表明,提取的最佳工艺条件为超生辅助功率70 W,浸提时间40 min,浸提温度40℃,蒸馏水为浸提剂,液固比为50∶1(ml/g)。结论茜草色素对光的稳定性较好;在室温下亦很稳定,温度升高其降解速度加快;对酸稳定性较好,对碱和热稳定性较差;食品添加剂蔗糖和柠檬酸对其稳定性影响较小;耐氧化性较好,耐还原性稍差;Na+、和Ca2+等离子对色素基本无影响,Fe2+、Cu2+和等对其稳定性有一定的影响。     

仙台病毒黑龙江省地方株的分离与鉴定

目的自本省普通级实验动物中分离并鉴定出仙台病毒地方毒株,为建立仙台病毒血清抗体检测方法奠定基础。方法通过鸡胚尿囊腔传代自普通级小鼠肺脏分离病毒,经血凝实验、血凝阻断实验和结构基因序列测定对分离得到的病毒进行鉴定;大量繁殖病毒并通过蔗糖密度梯度离心纯化,免疫动物制备阳性血清,用标准试剂盒检测阳性血清效价。结果自150份小鼠肺脏分离到2株有血凝性的病毒,经形态学、血清学和结构基因序列测定鉴定为仙台病毒,命名为SV-HLJ。SV-HLJ与标准毒株Fushimi核蛋白基因(N)的核苷酸、氨基酸同源性分别为99·6%和99·0%。结论分离并鉴定出了仙台病毒黑龙江省地方毒株,为检测试剂盒的研制奠定了基础。     

仙台病毒核酸测序检测方法的建立

目的 建立仙台病毒(SeV)的核酸测序检测方法.方法 根据SeV序列设计覆盖不同毒株的通用引物,然后优化成测序引物并摸索建库条件,进行核酸测序和结果分析.结果 获得1对特异性强的通用引物,序列为:上游引物5’-GCTGCAAAACGCTGTGGG-3’,下游引物5’-TGGRACYTCAGAAAGAATRGG-3’;建库条件优化为:第一轮以cDNA为模板用通用引物扩增,第二轮以第一轮产物为模板用测序引物扩增.测序分析可以有效地将SeV与其他微生物区分开,并且精确到TianJin亚株.结论 建立了SeV核酸测序检测方法,为后续SeV感染实验动物的检验检疫提供依据.     

仙台病毒抗肿瘤的研究进展

仙台病毒是实验大、小鼠的常见病原之一.大、小鼠感染仙台病毒后,可通过诱生Ⅰ型干扰素、调节免疫应答和致肿瘤细胞凋亡等干预肿瘤生长,该病毒已逐渐被开发为一种新型、高效的抗肿瘤制剂.本文综述了仙台病毒抗肿瘤、对科学研究的干扰作用等方面进展.     

Inactivated Sendai Virus Induces Apoptosis Mediated by Reactive Oxygen Species in Murine Melanoma Cells

Objective This paper aims to investigate the apoptotic effect of inactivated Sendai virus (hemagglutinating virus of Japan-enveloped, HVJ-E) on murine melanoma cells (B16F10) and the possible mechanisms involved in the putative apoptotic reactions. Methods B16F10 cells were treated with HVJ-E at various multiplicities of infection (MOI), and the reactive oxygen species (ROS), cell viability, and apoptosis were measured. Next, the roles of ROS in the regulation of Bcl-2/Bax and the activation of mitogen-activated protein kinase (MAPK) pathways in HVJ-E-treated B16F10 cells were analyzed. To further evaluate the cytotoxic effect of HVJ-E-generated ROS on B16F10 cells, HVJ-E was intratumorally injected, both with and without N-acetyl-L-cysteine (NAC), into melanoma tumors on BALB/c mice. Tumor volume was then monitored for 3 weeks, and the tumor proteins were separated for immunoblot assay. Results Treatment of B16F10 cells with HVJ-E resulted in a dose-dependent inhibition of cell-viability and an induction of apoptosis. The latter effect was associated with the generation of ROS. Inhibition of ROS generation by NAC resulted in a significant reduction of HVJ-E-induced Erk1/2, JNK, and p38 MAPK activation. Additionally, ROS inhibition caused a decrease in the Bcl-2/Bax ratio as well as promoting activation of apoptosis both in vitro and in vivo. Conclusion These results suggest that HVJ-E possesses potential anticancer activity in B16F10 cells through ROS-mediated mitochondrial dysfunction involving the MAPK pathway.     

Inactivated Sendai Virus Induces ROS-dependent Apoptosis and Autophagy in Human Prostate Cancer Cells

Objective

The current study aims to investigate the effect of Hemagglutinating virus of Japan envelope (HVJ-E) on induction of apoptosis and autophagy in human prostate cancer PC3 cells, and the underlying mechanisms.

Induction of Apoptosis in Hormone-resistant Human Prostate Cancer PC3 Cells by Inactivated Sendai Virus

Objective Inactivated Sendai virus particle[hemagglutinating virus of Japan envelope(HVJ-E)]has a potential oncolytic effect due to its ability to induce apoptosis in tumor cells.However,the molecular mechanism of apoptosis induction in cancer cells mediated by HVJ-E has not been fully elucidated.This paper aims to investigate the underlying mechanism of apoptosis induction by HVJ-E in prostate cancer cells(PC3).Methods PC3 cells were treated with HVJ-E at various MOI,and then interferon-6(IFN-S) production,and the cell viability and apoptosis were detected by ELISA,MTT-based assay and flow cytometry,respectively.Next,the roles of Jak-Stat,MAPK and Akt pathways played in HVJ-E-induced apoptosis in PC3 cells were analyzed by immunoblot assay.To further evaluate the cytotoxic effect of HVJ-E on PC3 cells,HVJ-E was intratumorally injected into prostate cancers on BALB/c-nude mice,and the tumor volume was monitored for 36 days.Results HVJ-E induced IFN-β production and activated Jak-Stat signaling pathway,which resulted in the activation of caspase-8,caspase-3,and PARP in PC3 prostate cancer cells post HVJ-E treatment.Furthermore,we observed for the first time that p38 and Jnk MAPKs in PC3 cells contributed to HVJ-E-induced apoptosis.In addition,intratumoral HVJ-E treatment displayed a direct inhibitory effect in an in vivo BALB/c nude mouse prostate cancer model.Conclusion Our findings have provided novel insights into the underlying mechanisms by which HVJ-E induces apoptosis in tumor cells.     

小鼠肝炎病毒抗体检测试剂盒的标准化研究

目的筛选适合制备检测试剂盒的抗原组合。方法用 ＥＬＩＳＡ方法，将５株小鼠肝炎病毒（ＭＨＶ）抗原分别组合作为包被抗原，研究ＭＨＶ抗原不同组合与标准毒株抗体的反应性，分析ＭＨＶ各毒株间的差别，进一步比较不同组台抗原的灵敏性、特异性。结果通过对１９９７～１９９９年送检２３８只普通级实验小鼠检测，结果表明，ＭＨＶ的感染率虽有下降趋势，但感染率仍然很高（５９％～８７％）。结论我国分离的ＭＨＶ－ＨＵ７９株，在本次研究中表明能够用于ＭＨＶ抗体检测试剂盒。