格尔德霉素衍生物17-AAG对缺氧宫颈癌细胞凋亡的影响

目的：观察格尔德霉素衍生物17-AAG对氯化钴化学缺氧诱导的宫颈癌细胞凋亡的影响,并简单探讨可能的机制。方法：用含200μmol/LCoCl2的无血清RPMI 1640培养基模拟宫颈癌细胞缺氧微环境,West-ern Blot法检测缺氧诱导因子HIF-1α及其下游靶分子VEGF蛋白的表达,DAPI染色检测细胞的凋亡情况。结果：缺氧可诱导HIF-1α、VEGF蛋白的表达上调;但这种上调可被17-AAG所逆转,从而使宫颈癌细胞对缺氧的耐受能力明显降低,凋亡增加。结论：17-AAG通过对HIF-1α信号的干扰而具有一定的抗瘤活性。     

人嗜铬细胞瘤组织中转化生长因子a、肿瘤坏死因子a和血管内皮生长因子的表达

目的 观察人嗜铬细胞瘤(PHEO)组织和正常肾上腺髓质中转化生长因子a(TGFa)、肿瘤坏死因子a(TNFa)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的差异。方法 RT-PCR法比较22例经手术及病理证实的PHEO组织及18例意外死亡者(符合医学伦理学要求)的正常肾上腺髓质中TGFa、TNFa和VEGFmRNA表达的差异；免疫组化法比较石蜡包埋的27例PHEO和14例正常肾上腺髓质中TGFa、TNFa和VEGF蛋白表达的差异，并分析其与肿瘤的性质、部位、大小、重量的关系。结果 PHEO中TGFa、TNFa mRNA和蛋白表达均高于正常肾上腺髓质。PHEO中VEGF145剪接体的mRNA表达高于正常肾上腺髓质；VEGF121和VEGF165剪接体的mRNA在PHEO和正常肾上腺髓质中的表达差异无显著性。PHEO的内皮细胞和肿瘤细胞VEGF的染色阳性率高于正常肾上腺髓质。肾上腺外PHEO中TGFa、TNFa和VEGF蛋白表达高于肾上腺PHEO。恶性和多发PHEO的TNFa蛋白表达高于良性和单发PHEO。结论 PHEO中TGFa、TNFa和VEGF的mRNA和蛋白表达高于正常肾上腺髓质，TGFa、TNFa和VEGF在不同特点的PHEO中的表达不同。     

17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素诱导鼻咽癌细胞凋亡的实验研究

目的:研究17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-allylamino-17-demethoxygeldanamycin,17-AAG)对人鼻咽癌细胞株(Human nasopharyngeal carcinoma cell line,HNE1)增殖抑制和诱导凋亡的作用,探讨17-AAG在鼻咽癌临床治疗中的意义。方法:采用噻唑蓝(Thiazolyl blue,MTT)检测17-AAG对HNE1细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化,Hoechst33528染色观察细胞的凋亡形态学变化并进行核碎片计数。结果:17-AAG抑制HNE1的增殖,诱导了细胞的凋亡,抑制作用具有浓度和时间依赖性。结论:17-AAG可诱导HNE1的凋亡,研究结果对药物治疗鼻咽癌有一定的临床指导意义。     

17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素对乳腺癌细胞的杀伤作用

目的:对一种热休克蛋白90抑制剂即17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG)对人乳腺癌细胞生长的影响及相关机制进行初步探讨。方法:MTT法检测药物对人乳腺癌细胞SKB r3的生长抑制作用;流式细胞术分析细胞凋亡及细胞周期变化;免疫组化法检测药物处理前后SKB r3细胞中HER2的表达变化情况。结果:17-AAG对人乳腺癌细胞株SKB r3生长有抑制作用,随着用药浓度的增加,抑制作用明显增强,呈明显的剂量依赖性,其IC50浓度为3.09μg/m l。SKB r3细胞经17-AAG处理48 h后,流式细胞仪分析可见在0、0.625、1.250、2.500、5.000和10.000μg/m l浓度下,SKB r3细胞的凋亡率分别为(1.03±0.08)%、(3.68±0.67)%、(7.06±1.12)%、(11.23±1.36)%、(20.32±1.98)%和(31.65±2.96)%;G0/Gl期细胞分别为58.61%、54.34%、49.55%、43.73%、35.52%和27.46%;S期细胞分别为:29.57%、25.21%、19.65%、22.98%、19.71%和15.46%;G2/M期细胞分别为11.82%、20.45%、30.18%、33.29%、44.77%和57.08%;同时17-AAG处理后的SKB r3细胞人类表皮生长因子受体2(HER2)表达明显减少。结论:17-AAG能够抑制人乳腺癌细胞SKB r3的生长并促进其凋亡,提示17-AAG是一种很有前景的抗肿瘤药物。     

人嗜铬细胞瘤组织中转化生长因子α、肿瘤坏死因子α和血管内皮生长因子的表达

目的观察人嗜铬细胞瘤(PHEO)组织和正常肾上腺髓质中转化生长因子α(TGFα)、肿瘤坏死因子α(TNFα)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的差异.方法RT-PCR法比较22例经手术及病理证实的PHEO组织及18例意外死亡者(符合医学伦理学要求)的正常肾上腺髓质中TGFα、TNFα和VEGF mRNA表达的差异;免疫组化法比较石蜡包埋的27例PHEO和14例正常肾上腺髓质中TGFα、TNFα和VEGF蛋白表达的差异,并分析其与肿瘤的性质、部位、大小、重量的关系.结果PHEO中TGFα、TNFα mRNA和蛋白表达均高于正常肾上腺髓质.PHEO中VEGF145剪接体的mRNA表达高于正常肾上腺髓质;VEGF121和VEGF165剪接体的mRNA在PHEO和正常肾上腺髓质中的表达差异无显著性.PHEO的内皮细胞和肿瘤细胞VEGF的染色阳性率高于正常肾上腺髓质.肾上腺外PHEO中TGFα、TNFα和VEGF蛋白表达高于肾上腺PHEO.恶性和多发PHEO的TNFα蛋白表达高于良性和单发PHEO.结论PHEO中TGFα、TNFα和VEGF的mRNA和蛋白表达高于正常肾上腺髓质,TGFα、TNFα和VEGF在不同特点的PHEO中的表达不同.     

新型格尔德霉素葡萄糖苷的制备及其诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的作用

目的对非苯醌格尔德霉素进行酶法糖基化修饰,并探讨其糖基化产物对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响。方法利用体外酶法糖基化反应制备新型非苯醌格尔德霉素糖基化产物,并经质谱和核磁共振解析鉴定其结构。采用孔雀绿-钼酸铵显色反应、MTT法、PI单染/流式细胞术检测化合物的体外抗肿瘤活性。免疫印迹法检测化合物对Akt、Bcl-2及热休克蛋白90（Hsp90）表达的影响。结果新型非苯醌格尔德霉素糖基化产物鉴别为17-demethoxy-reblastatin-18-O-β-D-glucopyranoside（1）。化合物1具有显著抑制Hsp90 ATPase活性,其IC₅₀值为8.98 μmol/L。化合物1对人乳腺癌MCF-7细胞表现出一定的抑制增殖、诱导凋亡的作用,且呈现浓度依赖性。免疫印迹法结果显示,随着化合物1浓度的增加,诱导Akt和Bcl-2蛋白的降解越明显,而对Hsp90蛋白的表达没有影响。结论新型Hsp90抑制剂化合物1具有抑制MCF-7细胞增殖、诱导凋亡能力,其机制可能是通过抑制Hsp90 ATPase活性以及诱导降解Hsp90顾客蛋白Akt和Bcl-2有关。     

131I标记热休克蛋白90抑制剂17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素的方法学研究

目的:建立131I标记热休克蛋白90抑制剂17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG)的方法,探讨其标记条件.方法:采用放射性碘标记氯胺-T法标记17-AAG,并研究其在ICR正常小鼠体内的生物分布.结果:131I氯胺-T法标记17-AAG 的最佳条件为:17-AAG乙醇溶液40μl(含17-AAG 5μg),0.5mol·L-1磷酸盐缓冲液50μl(pH 7.5),Na 131I溶液20μl,氯胺-T 30μg·(15μl)-1(用pH 7.5的0.05mol·L-1 PB溶解),25℃反应50s,偏重亚硫酸钠40μg·(20μl)-1(用pH 7.5的0.05mol·L-1 PB溶解)中止反应.标记率约为53.1%,经乙酸乙酯纯化后所得标记物的放射化学纯度>90%;其生理盐水溶液4℃放置5d,放射化学纯度大于90%.小鼠尾静脉注射131I-17-AAG后0.5h 131I-17-AAG在胆囊达到高峰(369.44±147.81) %ID·g-1,肝脏中仅有(2.23±0.50)%ID·g-1,说明对肝脏毒性小.结论:热休克蛋白90抑制剂17-AAG的标记方法操作简便,反应时间短.     

血管内皮生长因子对脊髓损伤细胞凋亡的影响

目的：探讨血管内皮生长因子（VEGF）对脊髓损伤细胞凋亡的影响及保护机制.方法：采用Allen的Weight dropping法挫伤大鼠T10节段脊髓,于术后2、4、8 h,1、3、7 d经蛛网膜下隙导管各注入VEGF溶液（5μl/100 g）,并与生理盐水组和正常组作对照.采用原位末端标记法标记脱氧核糖核酸片段,检测脊髓损伤前后发生凋亡的脊髓细胞.结果：正常对照组大鼠脊髓中未见凋亡细胞.生理盐水组于伤后4 h始出现凋亡细胞.VEGF组与生理盐水组相比较,凋亡细胞明显减少（P＜0.01）.结论：VEGF可抑制脊髓损伤后细胞的凋亡,从而保护损伤的脊髓组织.     

17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素对鼻咽癌细胞VEGF和Survivin表达的影响

目的探讨17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素（17-AAG）对人鼻咽癌细胞（HNE1）的影响。方法采用流式细胞技术检测不同浓度（17-AAG）、不同时间处理后HNE1细胞凋亡情况,组织免疫细胞技术检测药物处理后对VEGF、Survivin蛋白表达的影响。结果 17-AAG可以诱导人鼻咽癌细胞的凋亡,且这种作用具有时间和计量依赖性,且可抑制细胞中VEGF、Survivin蛋白的表达。结论热休克蛋白抑制剂17-AAG具有诱导鼻咽癌细胞凋亡的作用,对鼻咽癌的临床治疗具有一定的指导意义。     

红参对糖尿病大鼠视网膜血管内皮细胞生长因子表达及神经节细胞凋亡的影响

目的:通过观察糖尿病(DM)大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)凋亡及血管内皮细胞生长因子(VEGF)在视网膜表达的变化.探讨红参对RGCs凋亡及VEGF表达的影响以及后两者之间的关系.方法:链脲佐菌素诱导实验性DM大鼠模型.造模成功的DM大鼠随机分为模型组(n=10)和治疗组(n=10),并与末造模的正常组大鼠进行比较.治疗组以红参粉末灌胃给药,1次/d.TUNEL法检测RGCs凋亡并计数RGCs凋亡数量.LSAB法检测VEGF在视网膜的表达.图像分析仪检测免疫组化的显色强度,定量分析.结果:与正常组相比,DM大鼠RGCs凋亡数量显著增加(P<0.01);与模型组相比,治疗组RGCs凋亡数量显著减少(P<0.05).与正常组相比,DM大鼠视网膜VEGF的表达增强:与模型组相比,LSAB法标记染色的VEGF在治疗组表达减弱.结论:红参能抑制DM大鼠视网膜VEGF的表达,减少DM大鼠RGCs的凋亡,DM大鼠RGCs凋亡数量与VEGF在视网膜表达呈正相关.     

血管内皮生长因子对缺氧诱导内皮细胞凋亡的影响

目的 探讨缺氧对培养人静脉内皮细胞凋亡的影响及血管内皮生长因子的干预性影响。方法 （1）人脐静脉内皮细胞的培养及鉴定。（2）建立人脐静脉内皮细胞缺氧模型,TUNEL法观测不同缺氧时间（0、12、24、48h）对内皮细胞凋亡的影响及血管内皮生长因子的干预作用。结果 随缺氧时间延长,NUVECs凋亡率显著升高,血管内皮生长因子抑制缺氧导致的内皮细胞凋亡。结论 内皮细胞的过渡凋亡是引起内皮功能障碍的一个重要因素,血管内皮生长因子通过抑制内皮细胞凋亡,而具有内皮细胞保护作用。     

VEGF-C表达对胰腺癌细胞凋亡的影响

目的 研究VEGF-C反义寡核苷酸对胰腺癌原位种植瘤模型中PANC-1细胞凋亡的影响.方法 建立人胰腺癌细胞株PANC-1裸鼠原位种植瘤自发性淋巴结转移模型,分离、原代培养原位灶和淋巴结转移灶中的胰腺癌细胞,并应用real time定量PCR、流式细胞术检测VEGF-C反义寡核苷酸转染对其凋亡能力的影响.结果 VEGF-C反义寡核苷酸抑制胰腺癌细胞VEGF-C的表达后,淋巴结转移灶组PANC-1细胞凋亡率为(15.2±2.7)%,显著高于空白组、SODN组(P＜0.05);原发灶组PANC-1细胞凋亡率为(5.5±2.7)%,与空白组、SODN组的差异无统计学意义(P＞0.05);并且淋巴结转移灶组PANC-1细胞的凋亡率高于原发灶组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 VEGF-C表达下调能显著诱导淋巴结转移灶中胰腺癌细胞的凋亡.     

辛伐他汀对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子表达影响的初步研究

目的:观察辛伐他汀对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体表达的影响.方法:将人脐静脉内皮细胞分为辛伐他汀组、TNF-α组、辛伐他汀+TNF-α组、IL-1β组、辛伐他汀+IL-1β组和空白对照组.采用免疫细胞化学方法,观察TNF-α和IL-1β对细胞中VEGF及其受体表达的影响,并观察辛伐他汀的干预作用.结果:TNF-α组和IL-1β组的VEGF及其受体表达明显高于空白对照组(P＜0.05),辛伐他汀十TNF-α组和辛伐他汀+IL-1β组表达分别明显低于TNF-α组和IL-1β组(P＜0.05).结论:辛伐他汀可以抑制炎性刺激导致的人脐静脉内皮细胞VEGF及其受体的表达.     

人参三七组方对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子分泌及其受体2表达的影响

目的：探讨益气活血中药人参三七组方对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）及其受体2（vascular endothelialgrowth factor receptor-2,VEGFR-2）表达的影响。方法：体外培养HUVEC,分为高剂量人参三七组方（0.4 mg/mL）组、中剂量人参三七组方（0.2 mg/mL）组、低剂量人参三七组方（0.1 mg/mL）组,另设碱性成纤维细胞生长因子（bovine basic fibroblast growth factor,bFGF,320 U/mL）阳性对照组和只加培养液的空白对照组。酶联免疫吸附测定法检测细胞上清液中的VEGF含量,免疫细胞化学法检测VEGFR-2阳性细胞数及其光密度值,蛋白印迹法检测VEGFR-2蛋白的表达。结果：与空白对照组比较,高剂量人参三七组方组和bFGF组细胞上清液中VEGF含量增加（P〈0.05）,VEGFR-2阳性细胞数及光密度值增加,细胞中VEGFR-2蛋白表达增强。结论：促进HUVEC分泌VEGF和表达VEGFR-2可能是人参三七组方促血管生成的基础。     

腺病毒载体介导的VEGF基因转染对C17.2神经干细胞凋亡的影响

目的探讨重组腺病毒介导血管内皮生长因子(VEGF)165基因治疗对缺氧状态下对神经干细胞凋亡的作用。方法体外培养C17.2神经干细胞,建立神经干细胞缺氧模型。将携带人类VEGF基因的重组腺病毒感染C17.2神经干细胞,Western-blotting分析VEGF蛋白的表达,并用流式细胞术测定细胞凋亡率的变化。Hoechst33342染色荧光显微镜观察凋亡小体。结果转染pAdCMVVEGF165的C17.2神经干细胞成功表达VEGF蛋白;缺氧后神经干细胞凋亡率为(19.98±0.55)%,而转染pAdCMVVEGF165后的细胞凋亡率为(10.38±0.48)%(P<0.01),转染pAdCMVVEGF165 VEGF反义寡核脱氧核酸经干细胞凋亡率为(19.07±0.64)%,与对照组无显著差异(P>0.05)。结论腺病毒介导的VEGF165基因能高效表达VEGF;外源性VEGF对C17.2神经干细胞具有抗凋亡作用,能够提高C17.2神经干细胞对缺氧的耐受性,有利于神经干细胞的生存。     

杏丁注射液对血管内皮细胞HSP 72表达的影响

目的:观察杏丁注射液对紫外线照射后血管内皮细胞热休克蛋白72(heat shock protein 72,HSP 72)表达的影响.方法:采用体外培养的猪主动脉血管内皮细胞,以含浓度分别为0.1、0.5、1.0、5.0、10 mg/ml的杏丁注射液的培养基培养72 h后,用紫外线分别照射细胞30 min,以Western-blot方法检测内皮细胞中的HSP 72表达.结果:正常情况下检测不到HSP 72表达,紫外线照射后血管内皮细胞HSP 72有较强表达,杏丁注射液在0.1 mg/ml浓度即有很明显的促进HSP 72表达的作用,1.0 mg/ml浓度时其作用达到高峰,再增加浓度并不能增加HSP 72表达.结论:杏丁注射液能通过促进HSP 72表达而保护血管内皮细胞在应激状态下免受损伤,这可能是其防治心脑血管疾病的重要机制之一.     

肾毒血清对骨髓内皮祖细胞增生及血管内皮生长因子表达的影响

目的 研究肾毒血清对骨髓内皮祖细胞(EPCS)增生及血管内皮生长因子表达的影响.方法 分离SD大鼠骨髓内皮祖细胞,将其分为对照组和肾毒血清组[后者按所含肾毒血清的不同体积浓度(1.25%、2.5%、5.0%)分3个亚组,肾毒血清取自成模12周后的5/6肾切除模型大鼠];利用MTT检测EPCs的增生率,ELISA检测培养上清VEGF的浓度,RT-PCR检测VEGF mRNA的表达.结果 不同浓度的肾毒血清在不同时间点对培养EPCs均有不同程度的增生抑制作用(除1.25%的肾毒血清在12 h时外,其他均P＜0.01);同一浓度的肾毒血清对EPCs的增生抑制作用随着刺激时间的延长而增加,24 h的增生率显著低于12h(均P＜0.01),48 h的增生率显著低于24 h(均P＜0.01);12 h时,各肾毒血清组EPCs分泌的VEGF均显著高于对照组(均P＜0.01),24 h时,5.0%肾毒血清组EPCs分泌的VEGF则显著低于对照组(P＜0.01);48 h时,各肾毒血清组EPCs分泌的VEGF均低于对照组.对照组12 h、24 h和48 h时VEGF mRNA表达分别为(0.55±0.03)、(0.53±0.02)和(0.49±0.04),2.5%肾毒血清组12 h、24 h和48 h时VEGF mRNA表达分别为(0.50±0.02)、(0.34±0.02)和(0.15±0.01),2.5%肾毒血清组各时间点之间的VEGF差异有显著性(均P＜O.05).结论 肾毒血清能抑制EPCs的增生可能是通过抑制EPCs的VEGF mRNA表达、进而减少VEGF分泌而实现的.