抗人膀胱癌/抗血管内皮生长因子双功能基因抗体对膀胱癌的生长抑制作用

目的　对抗人膀胱癌 /抗血管内皮生长因子 (VEGF)双功能基因抗体进行免疫定位研究并观察其对人膀胱癌生长的抑制作用。　方法　采用免疫组化和免疫电镜前染色法对 6 0例膀胱癌患者的手术切除标本进行免疫定位研究 ;构建人膀胱癌裸鼠皮下移植瘤模型并注射双功能抗体 ,观察肿瘤生长情况 ,同时检测肿瘤微血管密度 (MVD)值及肿瘤细胞凋亡指数 (AI)。　结果　 6 0例膀胱癌标本 ,抗原检测阳性 5 3例 ( 88.3% ) ;对照组 2 0例 ,抗原检测阳性 1例 ( 5 .0 % )。治疗后第 2周 ,实验组小鼠皮下种植肿瘤大小 ( 2 1.4 7± 6 .5 7)mm2 ,对照组 ( 5 9.85± 15 .4 3)mm2 ;实验组MVD 2 14 8± 10 9,对照组为 4 0 5 6± 36 7;实验组肿瘤细胞AI为 17.2 6 ,对照组为 7.0 9。组间比较 ,差异均有显著性意义。　结论　抗人膀胱癌 /抗VEGF双功能基因抗体对人膀胱癌有较好的靶向性 ,能够通过抑制肿瘤微血管形成和加速肿瘤细胞凋亡而抑制实验性人膀胱癌的生长     

抗人IgG抗体与丝裂霉素联合应用治疗膀胱癌的实验研究

目的 探讨抗人IgG抗体和丝裂霉素(MMC)联合应用对人膀胱癌细胞株的抑制作用及机制.方法 抗人IgG抗体和MMC单独或联合作用于人膀胱癌T24细胞,噻唑盐(MTT)法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测T24细胞的凋亡率,蛋白质印迹法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)和PARP的表达.采用T24细胞裸鼠移植瘤模型进行抗人IgG抗体和MMC的体内抗瘤实验.结果 单独应用抗人IgG抗体和MMC对T24细胞生长抑制率分别为(25.02±6.71)%和(32.31±6.46)%,而二者联用的抑制率达(73.66±5.81)%.PBS、25mg/L羊IgG、25mg/L羊抗人IgG抗体、2mg/L MMC、2mg/L MMCIk 25mg/L羊IgG和2mg/L MMC加25mg/L羊抗人IgG抗体处理T24细胞72 h后细胞凋亡率分别为1.7%、2.3%、20.7%、22.4%、28.3%和53.8%.羊抗人IgG抗体、MMC、MMC加羊IgG和MMC加羊抗人IgG抗体处理T24细胞72 h后出现17 000的Caspase-3和85 000的PARP剪切片断.体内实验显示羊IgG组、羊抗人IgG抗体组、MMC组、MMC加羊抗人IgG抗体组抑瘤率分别为2.31%、12.73%,36.81%和50.51%.HE切片观察见生理盐水组和羊IgG组移植瘤细胞基本无凋亡和坏死,羊抗人IgG抗体组肿瘤细胞凋亡和坏死增多,MMC组和MMC加羊抗人IgG抗体组则见大量肿瘤细胞凋亡和坏死.结论 抗人IgG抗体和MMC联合应用对膀胱癌具有体内外双重抗瘤作用,其抗瘤机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡有关.     

抗人膀胱癌抗独特型抗体的制备和鉴定

目的：制备抗人膀胱癌抗独特型抗体并进行体外实验鉴定。方法：提取膀胱癌抗原（Ag)。应用膀胱癌抗原通过杂交瘤技术制备抗人膀胱癌单克隆抗体（Ab1),Ab1经胃蛋白酶水解制备Ab1的F（ab)2片段，以F（ab)2片段免疫新西兰白兔，其血清经凝胶纯化后获抗人膀胱癌抗独特型抗体（Ab2)。再应用ELISA等方法进行鉴别。结果：Ab2与Ab1呈阳性反应，与BALB/C小鼠r球蛋白呈阴性反应；Ab2与Ag竞争结合Ab1；Ab2抑制Ab1与Ag的结合。结论：Ab1是针对膀胱移行细胞癌的单克隆抗体，Ab2是具有膀胱癌抗原内影像的抗独特型抗体。     

抗人膀胱癌抗独特型抗体佐剂疫苗的动物实验

目的：研究抗独特型抗体佐剂疫苗（Ab2 SAF)对膀胱癌的免疫治疗作用。为临床实验提供动物实验依据，方法：用抗人膀胱癌Ab SAF免疫BALB／C小鼠为实验组；对照组用生理盐水，免疫3次后，于未次免疫后1周，将新鲜人膀胱移行细胞癌组织移植于小鼠肾包膜下，分别于移植后第2，4，6，8和10天处死小鼠，取血清进行抗抗独特型抗体（Ab3)分析，移植瘤行组织学检查，观察宿主淋巴细胞浸润情况及瘤细胞可见了率，结果：实验组小鼠肾包膜下人膀胱癌细胞很快受到排斥，在移植后第6天，淋巴细胞浸润即达高峰，而对照组在第10天才达高峰，瘤细胞可见率，在移植后第6天即明显降低，而对照组呈逐渐下降，实验组Ab3为阳性，而对照组为假阳性或阴性，结论：Ab2作为抗原免疫小鼠后，能够排斥瘤细胞的生长。     

转染XIAP基因对丝裂霉素诱导膀胱癌细胞凋亡的影响

目的：探讨XIAP基因对低剂量丝裂霉素C(MMC)诱导膀胱癌细胞凋亡的影响。方法：脂质体介导XIAP基因转染膀胱癌T24细胞3天后．用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测XIAP基因的表达．用低剂量MMC诱导细胞凋亡启动,用MTT比色法分析检测癌细胞生长活性．用3末端脱氧核苷酰转移酶介导生物素标记法检测细胞凋亡率。结果：各组癌细胞在低剂量MMC的诱导下发生凋亡、与单用MMC组比较．转染XIAP基因的癌细胞组的凋亡率显著降低。结论：XIAP基因在癌细胞中的过度表达可以明显降低化疗药物诱导的膀胱癌细胞凋亡,其可能在膀胱癌多药耐药中起一定作用。     

靶向沉默Notch1基因对人膀胱癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨沉默Notch1基因对人膀胱癌细胞生物学行为的影响. 方法 将靶向Notch1的siRNA真核表达载体psiRNA Notch1-1转染膀胱癌细胞株T24和BIU-87,噻唑盐法、流式细胞术检测沉默Notch1后膀胱癌细胞生长、细胞周期和凋亡情况.RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染前后Notch1基因mRNA和蛋白表达的变化. 结果 转染后72 h,T24和BIU-87细胞G0/G1期细胞比例明显增加,分别为(80.13±2.69)%和(69.44±2.41)%,与T24对照组(23.89±1.32)%和BIU-87对照组(24.63±1.68)%比较差异有统计学意义(P值均<0.05).转染后72 h,T24和BIU-87细胞凋亡率分别为(13.75±1.23)%和(8.72±1.01)%,与T24对照组(1.28±0.14)%和BIU-87对照组(1.01±0.27)%比较差异均有统计学意义(P值均<0.05).转染后24 h细胞生长明显受到抑制,该抑制作用持续到转染后96 h.转染后72 h,T24和BIU-87细胞中Notch1基因mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.05). 结论 Notch1在膀胱癌细胞株中可能起致癌作用.沉默Notch1基因能够抑制膀胱癌细胞的增殖.     

RNAi技术沉默Bcl-2基因对人膀胱癌细胞株T24增殖影响的研究

目的探讨RNA干扰(RNAi)技术沉默Bcl-2基因表达对人膀胱癌细胞株T24增殖的影响。方法针对Bcl-2 mRNA序列设计合成3对编码小干扰RNA(siRNA)的DNA模板,构建pGenesil-1-Bcl-2 siRNA重组质粒,转染T24细胞。采用Western blot检测重组质粒对Bcl-2蛋白表达的影响,MTT法观察重组质粒对T24细胞体外生长的抑制作用,Annexin-V-PI双染法流式细胞术(FCM)检测转染重组质粒后细胞的凋亡状况。结果成功构建了pGenesil-1-Bcl-2 siRNA重组质粒,并成功转染T24细胞。重组质粒抑制Bcl-2基因的表达接近70%;转染重组质粒后,T24细胞的活力降低为(66.9±5.6)%;重组质粒组的T24细胞凋亡率为34.55%～45.39%。结论pGenesil-1-Bcl-2 siRNA重组质粒明显下调Bcl-2在膀胱癌细胞中的表达,并抑制肿瘤细胞生长,促进其凋亡。     

抗人膀胱癌单链抗体的构建及表达的研究

目的 为膀胱癌的导向诊断和治疗提供免疫原性更低的单链抗体。方法 从1株分泌鼠抗人膀胱癌单克隆抗体的杂交瘤细胞株BDI-1中分离出总RNA。     

胃液对膀胱癌细胞系细胞凋亡的影响

关于胃代膀脱术对膀优肿瘤复发的影响，国内外报道不多。我们跟踪随访胃代膀脱术患者近20年，发现胃代膀优术后膀脱肿瘤的复发呈逐渐减少的趋势，复发后肿瘤的病理学级别降低、癌巢萎缩。为了探讨胃代膀跳术抑制膀味肿瘤复发的机制，我们用胃液模拟胃代膀跳的环境，观察了胃液对膀眈移行细胞癌细胞系BIU．87细胞调亡的影响，报道如下。一、材料与方法将BIU－87细胞系置于37℃体积分数为5％COZ、体积分数为10％股牛血清的RPMI1640培养基中培养，实验各组分别加胃液（终浓度76mmol／L）、稀盐酸（终浓度7．6mmol／L）、阿霉素（终浓度2m…     

抗人膀胱癌基因工程单链抗体的制备研究

应用ＰＣＲ方法，从分泌鼠抗人膀胱癌抗体的杂交瘤细胞中扩增抗体重、轻链可变区基因，经ＤＮＡ接头连接后与噬菌粒ｐＣＡＮＴＡＢ５重组，转化大肠杆菌后，通过亲和筛选、再转染、克隆及鉴定，以此获得抗人膀胱癌噬菌体单链抗体。     

抗人膀胱癌单克隆抗体BDI-1的扩增和鉴定

目的 制备纯化的抗人膀胱癌单克隆抗体BDI-1。方法 给BALB／C小鼠腹腔注射BDI-1杂交瘤细胞，收集的腹水过Protein G-agaros亲和层析柱即得到人膀胱癌BDI-1单克隆抗体。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法、间接免疫荧光法、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法和点印迹法鉴定单克隆抗体。结果 腹水可以得到1．0～1．5g／L的高效价（10^6）的纯化抗体。结论 该方法可以扩增高效价的单克隆抗体。     

Construction and expression of single-chain Fv antibody against human bladder carcinoma

We designed two sets of oligonucleotide primers to amplify the immunoglobulin heavy- and light-chain variable-region genes from genomic DNA by polymerase chain reaction (PCR). The genomic DNA was extracted from hybridoma BDI-1 cells, which secreted a monoclonal antibody (mAb) against human bladder carcinoma. The primers contained special restriction sites that allowed the variable-region genes to be easily cloned for sequencing and expression. The recombinants were sequenced by Sanger's method. It was proved that the full lengths of the V _H and V _K genes were 366 and 324 bp, respectively. Compared with other published sequences, the V _H gene was a member of mouse heavy-chain V _H subgroup II and originated from the rearrangement of V _H, Dsp2.2 and J _H4. The V _K gene was V _K subgroup IV and from V _K and J _K4. The V _H and V _K genes was inserted expression vector pWAI80. By inducement, the ScFv antibodies were expressed and secreted from Escherichia coli. Binding activities against the bladder carcinoma cells were detected. We suggest that ScFv antibody recognized the antigen specifically.     

端粒酶抑制剂与阿霉素联合应用治疗小鼠膀胱癌

目的 观察端粒酶抑制剂与化疗药物阿霉素联用抑制小鼠膀胱癌的协同作用.方法 AZT(端粒酶抑制剂齐夫多啶)4.5 mg、阿霉素0.1 mg、AZT 4.5 mg+阿霉素0.1 mg分组治疗T24膀胱癌荷瘤小鼠,观察肿瘤生长、细胞凋亡情况.结果 治疗后15 d,AZT、阿霉素、AZT+阿霉素各治疗组抑瘤率分别为35.6%、18.5%和43.2%.TUNEL法检测各组肿瘤细胞凋亡指数为(18.16±0.78)、(9.23±0.22)和(25.15±1.65).肿瘤端粒酶活性检测示各组端粒酶阳性率分别为24.5%、47.2%和12.3%,AZT、阿霉素均有减少肿瘤端粒酶活性的作用,且联用效果明显优于两者单独应用(P＜0.05).结论 AZT及阿霉素均能抑制小鼠膀胱癌T24细胞的生长及降低其端粒酶活性、诱导细胞凋亡,两者联用有相加作用.     

膀胱癌组织血小板衍生生长因子受体表达研究

为研究血小板衍生生长因子受体（ＰＤＧＦＲ）表达与膀胱移行上皮细胞癌的关系，采用免疫组织化学ＳＰ法观察４３例膀胱癌、１１例正常膀胱、１４例癌旁正常膀胱组织ＰＤＧＦＲ表达。结果发现ＰＤＧＦＲ阳性染色分布于癌细胞、间质、血管及炎症细胞的胞浆、胞膜及核膜。膀胱部组织ＰＤＧＦＲ阳性率为８１．４％，明显高于正常及癌旁膀胱组织，统计学上有极显著性差异（Ｐ〈０．０１）。研究表明ＰＤＧＦＲ表达与正常组织生长有关，过     

Fas抗体对小鼠膀胱癌的体内免疫治疗作用

目的 :研究Fas抗体对小鼠膀胱癌的体内免疫治疗作用。方法 :采用仓鼠抗小鼠Fas单克隆抗体RK8对小鼠可移植性膀胱移行细胞癌模型BST73 9进行体内免疫治疗。结果 :免疫组织化学方法证明小鼠可移植性膀胱移行细胞癌模型BST73 9表达Fas;将仓鼠抗小鼠Fas单克隆抗体RK82 5 μg直接注射于 1只荷瘤小鼠尾静脉内 ,导致小鼠在 13～ 15h内死亡 ,DNAladder方法证明小鼠肝脏具有明显的凋亡性特征 ;对 6只荷瘤小鼠肿瘤局部多点分别注入仓鼠抗小鼠Fas单克隆抗体RK82 0 μg后 ,荷瘤小鼠平均生存时间为 12d ,明显长于对照组的6 .33d(P <0 .0 5 )。结论 :直接局部注射Fas单克隆抗体对表达Fas的小鼠膀胱实体肿瘤具有治疗作用 ,可明显延长荷瘤小鼠的存活期 ,且无明显的全身毒副作用。     

Smac基因促丝裂霉素诱导膀胱癌细胞凋亡的研究

目的 探讨Smac基因的表达对于丝裂霉素(MMC)诱导膀胱癌细胞凋亡的影响。方法 脂质体介导Smac基因转染膀胱癌T24细胞3d后，用低剂量丝裂霉素诱导凋亡启动，噻唑蓝(MTT)比色分析检测癌细胞生长活性，吖啶橙-溴化乙锭荧光染色法及流式细胞术法检测细胞凋亡；免疫组织化学法和逆转录聚合酶链反应检测Smac基因的表达。结果 T24细胞在低剂量丝裂霉素的诱导下发生凋亡，两种方法检测细胞凋亡率，用0．05g／L丝裂霉素处理的T24细胞凋亡率分别为20，50％和18．84％，而经过转染Smac后用0，05g／L丝裂霉素处理的T24细胞凋亡率分别为36，40％和33．52％，差异有统计学意义(P＜0．05)。结论 促凋亡基因Smac在膀胱癌细胞中的活化表达可以明显增强细胞在刺激信号下的凋亡。