肝细胞生长因子对大鼠减体积肝移植术后肝再生的作用

目的观察肝细胞生长因子(HGF)对大鼠减体积肝移植术后再生的影响。方法建立大鼠减体积(60%)肝移植模型,将大鼠随机分为生理盐水对照组(A组)和肝细胞生长因子治疗组(B组),每组动物60只。受体于术后皮下注射给药(HGF,100mg/kg)每天一次,直至处死。观察术后1、2、3、5、7天受体残肝重/减体积前全肝重,肝细胞有丝分裂指数(MI)、增殖细胞核抗原标记指数(PCNA LI)和溴脱氧核苷尿嘧啶的掺入指数(BrdU LI)以及术后血清丙氨酸氨基转移酶(ATL)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平。结果HGF能显著提高受体肝细胞MI、PCNA LI、BrdU LI及残肝重/减体积前全肝重(P<0.05,P<0.01),两组血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平无显著差异(P>0.05)。结论肝细胞生长因子能显著促进大鼠减体积肝移植术后肝组织的再生,而对术后肝脏功能无明显损害作用。     

nodosin促进大鼠部分肝移植肝细胞再生的实验研究

目的  探讨溪黄草有效成分nodosin对大鼠减体积肝移植术后肝细胞再生的影响。方法  以Wistar大鼠作为供体, SD大鼠作为受体, 采用改良的二袖套法建立大鼠部分肝移植模型, 将24只受体大鼠随机分为nodosin组和对照组。nodosin组于肝移植术后经尾静脉注射nodosin 100μg/ml。在术后3 d和7 d分别处死大鼠取外周血浆及肝脏组织标本。分光光度法检测外周血浆中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和白蛋白(ALB)含量; 光学显微镜下观察肝组织形态学改变; 采用免疫组织化学法检测肝组织增殖细胞核抗原(PCNA)抗体的表达水平; 采用蛋白印迹法(Western blot)检测肝组织中磷酸化蛋白激酶(p-AKT)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、细胞周期素D1(cyclin D1)、血红素加氧酶(HO)-1蛋白的表达水平; 采用磷脂酰丝氨酸外翻分析(Annexin V法)和dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测肝细胞的凋亡情况。结果  术后3 d和7 d, 与对照组比较, nodosin组大鼠血清中ALT、AST含量较低, ALB含量较高(均为P < 0.05), 同时nodosin能够减轻大鼠肝移植术后肝组织病理损伤。nodosin组的PCNA阳性表达细胞数明显多于对照组(P < 0.05)。nodosin组增殖相关蛋白p-AKT、p-mTOR、cyclin D1和HO-1蛋白表达水平均明显高于对照组(均为P < 0.05)。nodosin组发生凋亡的肝细胞数量和比例明显低于对照组(P < 0.05)。结论  大鼠肝移植术后应用nodosin具有减少肝细胞凋亡数量, 促进肝细胞增殖的作用。     

肝素结合的类表皮生长因子促进大鼠减体积肝移植术后移植肝细胞的再生

目的 探讨肝素结合的类表皮生长因子（heparin binding epidermal growth factor—like growth factor，HB-EGF）对大鼠减体积肝移植术后肝细胞再生的促进作用。方法 采用改良“二袖套法”建立大鼠原位减体积肝移植模型，分为实验组和对照组，术后即刻经尾静脉分别给予HB-EGF（500μg／kg）和相同体积的生理盐水，2次／d。2组分别在术后第6h、2d、4d及7d随机挑取5只大鼠处死，称取移植物湿重，采血检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）及白蛋白（Alb），流式细胞仪检测移植肝细胞的增殖活性，免疫组织化学法检测移植肝Ki-67的表达情况。结果术后第6h、2d和4d，实验组移植物湿重较对照组相应时相明显增加（P〈0．05）；术后第6h、2d、4d和7d，实验组血清ALT水平较对照组相应时相明显降低（P〈0．05），而第4和7d时Alb水平较对照组相应时相明显增高（P〈0．05）；术后第2和4d时，实验组的移植肝细胞增殖指数和Ki-67表达较对照组高（2d：P〈0．01；4d：P〈0．05）。结论 大鼠原位减体积肝移植术后使用HB-EGF能够明显促进移植肝细胞的再生。     

大鼠小体积肝移植后肝细胞再生的研究

目的 探讨小体积肝移植术后肝再生的情况。方法 建立大鼠30％原位肝移植模型,实验分为肝切除（PH）组、全肝移植（0LT）组和30％小体积肝移植（30％POLT）组,观察1w生存率,并于术后1、2、3、7d检测肝细胞增殖活性、肝功能和肝组织学变化。结果 各组1w生存率均为100％;30％POLT组术后2d达到增殖高峰,峰值与PH组无差异（P〉0．05）;其肝功能酶学指标在术后1、3d明显升高,组织学见肝细胞核分裂极其活跃。结论 冷缺血1h的30％供肝和肝切除后肝脏具有同样的增殖活性,仅增殖高峰稍晚;较短的冷缺血时间以及熟练的手术技术可能对小体积供肝的再生起重要作用。     

冷保存对大鼠部分移植肝再生的影响

目的探讨冷保存对大鼠部分肝移植术后肝再生的影响。方法健康SD大鼠分为Ⅰ组（肝切除组）、Ⅱ组（冷保存1h部分肝移植组）和Ⅲ组（冷保存8h部分肝移植组）。观察各实验组生存率，比较各组术后1、6、12、24、48、72、168h肝质量／体质量比率、肝再生率、有丝分裂指数及增殖细胞核抗原表达。结果Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组7d存活率分别为100％、90％、40％；Ⅲ组术后2～3d大鼠肝质量／体质量比率、肝再生率、有丝分裂指数较Ⅰ、Ⅱ组明显偏低（P〈0．05）；Ⅲ组术后12h内增殖细胞核抗原表达较其余两组明显偏低（P〈0．05），48h才达高峰，至第7天阳性表达仍处高水平。结论长时间冷保存降低了部分肝移植术后的肝再生能力和大鼠术后生存率。     

肝细胞生长因子／分散因子与肝再生和癌肿转移（综合报道）

肝细胞生长因子（ＨＧＦ）是肝细胞生长和ＤＮＡ合成的最强大刺激剂，已知与分散因子为同一的分子。ＨＧＦ由多种组织包括肿瘤在内所生成，通过旁分泌和自分泌机制增加癌肿细胞的移动。本文总结了ＨＧＦ在肝再生、癌肿侵犯和转移中的作用。     

表达HGF的骨髓间充质干细胞促进小移植肝早期肝再生

目的 建立大鼠小体积肝移植模型,输注表达人肝细胞生长因子(human hepatocyte growth factor,hHGF)的骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs),研究其在移植早期对小移植肝促再生作用.方法 将已建立的表达hHGF和绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)的MSCs,分别命名为HGF/MSCs,GFP/Mscs.建立大鼠30%肝移植模型.受体分为4组,实验组输注5×106HGF/MSCs;对照组则分别输注相同体积的生理盐水(PS),5×106 GFP/MSCs或1.0×109 pfu含hHGF的重组腺病毒液(Ad-HGF).分别于术后1,3,5,7 d各组随机抽取5只大鼠处死.取血检测血清ALT和hHGF.记录移植物湿重.取肝组织检测hHGF、c-met表达,以及肝细胞凋亡和增殖活性.另每组15只,分组同上,用于观察生存期.结果 PS组大鼠7 d生存率33.3%;组织学及血清学检查示术后肝脏损伤重,汇管区单核细胞浸润多;而实验组大鼠7 d生存率为73.3%.肝脏损伤轻,炎性细胞浸润少;实验组移植肝再生较PS组明显增加.结论 大鼠部分肝移植后,输注HGF/MSCs能够保护小体积移植肝,促进小移植肝再生,提高7 d生存率.     

急性肝衰竭大鼠载肝细胞生长因子纳米粒子肝细胞移植后有丝分裂指数和Ki-67表达变化及意义

目的 探讨急性肝衰竭(ALF)大鼠载肝细胞生长因子(HGF)的聚乳酸-氧-羧甲基壳聚糖(PLA-O-CMC)纳米粒子肝细胞移植后有丝分裂指数和Ki-67抗原的表达变化及意义.方法 D-氨基半乳糖腹腔内注射制作大鼠ALF模型,48 h后分别将Ⅰ型胶原(Ⅰ组)、PLA-O-CMC纳米粒子(Ⅱ、Ⅳ组)、载HGF的PLA-O-CMC纳米粒子(Ⅲ组)培养的大鼠肝细胞(均为5×107个,5 ml)移植到ALF大鼠腹腔内.以每日静脉注射HGF 10μg/kg×7 d(Ⅳ组)、5 Ml RPMI 1640腹腔内注射(Ⅴ组)作为对照.观察其14 d存活率、血清及肝组织HGF浓度、肝组织病理及有丝分裂指数(MI)、Ki-67变化.结果移植后14 d Ⅰ～Ⅴ组ALF大鼠的存活率分别为50.00％、68.75％、81.25％、75.00％、18.75％.各纳米移植组高于V组.Ⅲ组3 d时肝组织HGF浓度最高,平均为5882.91 μG／L.Ⅲ组肝组织结构恢复更快,5 d时平均MI 10.20％0、7 d时平均MI 10.20‰、7 d时Ki-67平均标记指数16.8‰,均高于Ⅴ组.结论 应用载HGF的PLA-O-CMC纳米粒子培养的大鼠肝细胞腹腔内移植治疗ALF大鼠能促进肝再生相关抗原表达.

Abstract：

Objective To evaluate the change and significance of Ki-67 antigen expression follow ing hepatocyte transplantation using hepatocyte growth factor (HGF) loaded polylactic acid-O-carboxymethylchitosan (PLA-O-CMC) nanoparticles in rats with acute liver failure (ALF). Methods ALF models of rats were established by D-galactosamine intraperitoneal injection. Rat hepatocytes type Ⅰ collagen suspension (group Ⅰ ),rat hepatocytes co-cultured with PLA-O-CMC nanoparticles ( groups Ⅱ ,Ⅳ ) and rat hepatocytes co-cultured with HGF loaded PLA-O-CMC nanoparticles ( group Ⅱ ) (5 × 107 cells each group,5 ml) were transplanted into the abdominal cavity of SD rats at 48 h after D-Gal injection. Intravenous injection of HGF ( 10 μg/kg for 7 days) ( group Ⅳ ) and RPMI 1640 injection (group Ⅴ ) were used as the negative groups. The 14th-day survival rate of rats,pathological change and mitotic index of liver,Ki-67 antigen labeling index of ALF rat livers were observed. Results The 14th-day survival rate in groups Ⅰ -Ⅴ was 50.00％,68. 75％,81.25％,75.00％,18.75％,and that in nano-transplanted groups was higher than in group Ⅴ. At the 3rd day,the concentration of HGF in liver tissue of group Ⅲ,average 5882. 91 μg/L was the highest. The hepatic lobules structure in group Ⅲ recovered faster. The average mitotic index in group Ⅱ at the 5th day was 10. 20‰ and the average Ki-67 labeling index at the 7th day was 16. 8‰,which were all higher than in group Ⅴ. Conclusion Intraperitoneal transplantation of HGF loaded PLA-O-CMC nanoparticle-attached hepatocytes for treatment of ALF can promote the liver regenerationassociated antigen expression.     

肝再生刺激因子、表皮生长因子对肝细胞的作用

目的：观察肝再生刺激因子(HSS）及表皮生长因子（EGF)对肝细胞增殖再生作用合适剂量及其联合效应，并推测HSS作用时相。方法：以~3HTdR掺入法检测细胞DNA增殖；体外原代大鼠肝细胞培养不同时间加入HSS,MTT法检测细胞生长状况。结果与结论：1.HSS（≤100μg／ml)和EGF（≤100ng／ml）对肝衍生细胞均有显著刺激作用（P＜0.01）,并存在剂量关系，但剂量过大，刺激作用反而下降。2.HSS、EGF存在协同作用，原代肝细胞、肝癌细胞株（SMMC-7721、BEL-7402）体外培养48h后，经(~3H）TdR掺入法检测cpm值分别为各自对照组的5.94、2.98和3.36倍。3.体外培养原代大鼠肝细胞，于贴壁后Oh.20h加入HSS其刺激作用较40h组显著.提示HSS可能主要作用于肝细胞再生G1/S期。     

劈离式肝移植术后移植肝再生的研究

目的研究劈离式肝移植术后移植肝组织的再生规律。方法通过CT检查计算劈离式肝移植术后4例受体在不同时间点的肝体积变化,并检查患者移植术后肝功能。结果受体1术后4个月、1年时肝体积分别是标准体积的114%、97%,肝体积再生率为-11·0%、-24·3%;受体2术后4个月、1年肝体积分别是标准体积的96%、100%,肝体积再生率为24·4%、30·0%。受体3术后2个月肝体积是标准体积的86%,肝体积再生率为12·0%;受体4术后2个月肝体积是标准体积的90%,肝体积再生率为20·0%。4例受体术后肝功能均恢复正常。结论劈离式肝移植供肝有较强的再生能力,能满足受体的代谢需要。     

大鼠肝移植后肝切除-肝再生功能的探讨

目的 探讨肝移植后肝细胞的再生功能。方法 从肝左静脉根部到肝脏面的肝右叶和肝中叶交叉点进行肝切除。肝切除后定时屠杀,标本行苏木素-伊红(HE)、增殖细胞核抗原(PC-NA)染色检查。血液行动脉血酮体比(AKBR)测定、血清白蛋白测定。结果 术后第3天对照组的再生肝对残肝重量比为(2.19±0.18)倍,3、6、12个月实验组分别为(1.66±1.11、1.66±0.17、1.17±0.31)倍,与对照组相比差异有显著性(P<0.05)。对照组术后 1 d的 PCNA染色阳性细胞总数达最高值(459.2±21.5)个,7 d为(35.7±7.2)个。3、6、12个月实验组术后7 d分别为(356.2±40.8)个、(341.2±17.6)个、(359.7±23.0)个,与对照组相比差异有显著性(P<0.001)。实验组第3、7天的血清白蛋白值比对照组降低。对照组术后 1、3 d的 AKBR值分别是 0.56±0.26和0.79±0.12,全部实验组的 NBR值术后显低值,3、6、12个月实验组术后 1 d的 AKBR值分别为0.33±0.12、0.31±0.12、0.30±0.05,3 d分别为 0.29±0.09、0.28±0.09、0.26±0.15,与对照组相比差异均有非常显著性(P<0.01)。结论 移植肝脏肝切除后的再生功能,比正常肝组织缓慢。肝移植后肝脏的预备能减弱,再生延缓。     

肝再生增强因子对大鼠腹腔移植的肝细胞的影响

目的 探讨肝再生增强因子(ALR)对急性肝功能衰竭大鼠腹腔移植的肝细胞的影响.方法 采用D-氨基半乳糖诱导SD大鼠急性肝功能衰竭(AHF),然后将其随机分为空白对照组(仅接受生理盐水腹腔注射)、移植对照组(腹腔移植SD大鼠的肝细胞2×107个)、环孢素A组(CsA组,接受肝细胞移植后腹腔注射CsA 6 d)、ALR组(接受肝细胞移植后腹腔注射ALR 6 d)和ALR对照组(仅腹腔注射ALR 6 d).实验期为14 d,观察受者的存活情况及移植肝细胞存活情况,检测腹腔内细胞CD4、CD8及CD68的表达情况,测定血清及腹腔冲洗液中自细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子a(TNF-a)的水平.结果 空白对照组、移植对照组、CsA组、ALR组及ALR对照组的受者2周存活率分别为0、46.7%、20%、66.7%和14.3%,ALR组显著高于空白对照组(P=0.001).移植后1～2 d,ALR组血清TNF-a和IL-1β明显低于空白对照组和移植对照组(P<0.01);移植对照组腹腔冲洗液中TNF-a和IL-1β水平明显高于其它各组(P<0.05,P<0.01).至移植后14 d,各组存活大鼠的血清TNF-a和IL-1β水平接近正常水平.移植后1～2 d,ALR组移植物内CD68表达水平为(0.5±0.3)%,明显低于移植对照组和CsA组(P<0.01);ALR组腹腔内细胞CD68、CD4及CD8表达水平分别为(1.3±1.2)%、(0.1±0.3)%和(0.2±0.1)%,均明显低于移植对照组(P<0.01,P<0.01,P<0.05).移植后1～3 d,接受肝细胞移植的大鼠腹腔内可见聚集成团的肝细胞结节,ALR组存活的肝细胞数明显多于移植对照组和CsA组,且炎症细胞浸润较少,至移植后14 d,仅ALR组可见少量形态正常的肝细胞.结论 腹腔内肝细胞移植联合ALR腹腔注射能提高AHF大鼠的存活率;ALR能短期改善移植肝细胞的存活状况.