依那普利干预后TGF-β、p27在大鼠肾间质纤维化中的表达

目的:研究单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠血管紧张素转化酶抑制剂依那普利干预后肾组织中TGF-β和p27表达的变化, 并探讨干预后两者之间的关系, 以进一步阐述其抗纤维化机制.方法:30只SD大鼠随机分成假手术组(sham-operated rates, SOR)、 UUO模型组、依那普利治疗组(UUO+ Enalaparil treated group , T-UUO).于术后第14天分别处死各组大鼠10只.用HE染色动态观察梗阻肾脏病理变化, 免疫组织化学法测定TGF-β、 p27, RT-PCR法测定TGF-β、 p27mRNA的水平.结果:T-UUO组的肾间质损伤指数明显降低;T-UUO组与UUO组比较TGF-β的表达减弱( P <0.05), p27的表达增强( P <0.01), T-UUO组TGF-β与p27成负相关.结论:依那普利能减轻UUO大鼠肾间质纤维化程度;UUO大鼠肾间质纤维化模型中, 依那普利抗间质纤维化机制可能与下调了肾组织中TGF-β的表达, 继而使p27的表达上调有关.     

肾间质纤维化中MicroRNA表达研究进展

MicroRNA (miRNA)是一种高度保守、内源性的非编码小分子RNA,主要参与生物体中转录后水平基因表达的调控.miRNAs在各种肾脏疾病的发病机制中起重要作用.肾间质纤维化是各种慢性肾脏病进展至终末期,最终导致器官功能丢失的共同的病理过程和特征.转化生长因子β(TGF-β)在肾纤维化过程中是公认的一个重要的介质,它能刺激细胞外基质(ECM)的积聚并损害肾功能.近年研究发现,在肾脏组织中存在的一些miRNAs对肾脏纤维化的发生与发展有着重要的作用,深入地了解它们之间的关系可以为临床肾脏纤维化的治疗提供新的治疗靶点.     

川芎嗪对肾间质纤维化中TGF-β1/miR-29表达的影响

目的:观察川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对单侧输尿管结扎(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠模型肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)、间质损伤及TGF-β1/miR-29表达的影响.方法:50只雄性Wistar大鼠随机分为5组:正常对照组(Ctrl组)、假手术组(Sham组)、模型组(UUO组)、缬沙坦组(VAN组)和TMP组各10只.经相应处理后,通过HE,Masson染色观察肾组织的病理学表现;同时采用SP免疫组织化学法检测各组病变组织中TGF-β1的表达情况;最后采用RT-PCR技术比较各组TGF-β1,miR-29基因的表达.结果:HE染色结果显示Ctrl组、Sham组、UUO组、VAN组及TMP组的肾间质损伤评分分别为0.27±0.10,0.30±0.12,8.79±1.03,6.23±0.81及4.57±0.74.Masson染色胶原半定量分析结果显示Ctrl组、Sham组、UUO组、VAN组及TMP组的评分分别为0.21±0.03,0.23±0.06,2.49±0.33,1.63±0.07及1.32±0.04.SP免疫组织化学染色显示模型组TGF-β1的蛋白表达高于对照组;而缬沙坦和TMP可部分逆转TGF-β1蛋白的表达,且TMP的效果优于缬沙坦.RT-PCR结果显示模型组的TGF-β1 mRNA表达增高、miR-29 mRNA表达降低.TMP组和缬沙坦组TGF-β1 mRNA表达明显低于模型组,而miR-29 mRNA表达则明显高于模型组;且TMP 组TGF-β1 mRNA表达高于缬沙坦组.结论:缬沙坦和TMP可明显减轻UUO致RIF中肾组织学损伤,且TMP的疗效优于缬沙坦.此外TMP还可抑制TGF-β1而促进miR-29的表达.     

EMMPRIN在大鼠肾间质纤维化过程中的表达变化

目的 检测细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)在大鼠肾间质纤维化模型中的表达变化.方法 64只Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组(Sham组)和模型组(UUO组),每组16只.假手术组,仅游离输尿管不结扎,模型组,行单侧输尿管结扎术,分别于术后3、7、14 d处死大鼠并留取肾脏组织.肾脏标本行HE、Masson染色方法检测间质纤维化损伤的程度.应用免疫组织化学方法检测肾组织中EMMPRIN,α-SMA,E-cadherin的表达.结果 HE染色显示:UUO术后肾间质肾小管萎缩、扩张,胞外基质沉积,炎细胞浸润增加.Masson染色显示:UUO术后大鼠肾组织胶原纤维组织增生,出现明显的间质纤维化改变.免疫组织化学结果显示:与假手术组相比,UUO模型3d组的EMMPRIN表达显著增高,同时有α-SMA表达升高和E-cadherin表达显著下降(P＜0.05);随着梗阻时间的延长,模型7d组EMMPRIN的表达逐渐减弱(P＜0.05).结论 EMMPRIN可能参与了UUO大鼠肾间质纤维化的早期上皮间质转分化过程,而随着纤维化程度加重,后期表达逐渐减少.     

单侧输尿管结扎对大鼠肾间质PI3K/AKT表达的影响

目的探讨PI3K/AKT信号通路是否参与肾间质纤维化的发病过程。方法将30只SD大鼠随机分为假手术组、UUO模型组,模型组行左侧输尿管结扎术。术后5、10和15 d分别处死各组中的5只大鼠,取左肾行HE和Masson染色,并用免疫组化方法检测肾小管-间质中TGF-β1、AKT1、磷酸化AKT1的表达。结果模型组大鼠肾小管-间质细胞增多,肾小管基底膜增厚皱缩,纤维化明显,随时间进展而加重。不同时间的UUO模型组肾组织AKT1、磷酸化AKT1、TGF-β1表达显著高于假手术组(P<0.01);于第10天模型组AKT1表达达高峰,于第15天磷酸化AKT1、TGF-β1表达达高峰;UUO大鼠肾组织第5天和第15天TGF-β1的表达与AKT1活性呈正相关,第10天和第15天梗阻肾的AKT1活性与肾小管-间质纤维化指数呈正相关(均P<0.05)。结论AKT1、磷酸化AKT1在大鼠梗阻性肾病模型肾小管-间质中表达及AKT1活性明显增加,提示PI3K/AKT信号通路可能参与肾小管-间质纤维化的过程。     

纤维连接蛋白在肾间质纤维化大鼠肾组织中的表达

背景：纤维连接蛋白表达增加在肾间质纤维化疾病进展过程中发挥着的重要作用。 目的：观察纤维连接蛋白在肾间质纤维化大鼠肾组织中的表达。 方法：72只大鼠随机等分为对照组、假手术组和模型组。模型组建立单侧输尿管梗阻模型;假手术组仅开腹游离左侧输尿管;对照组不做任何处理。 结果与结论：与对照组及假手术组比较,模型组大鼠梗阻时间越长,肾小管间质损害程度越重,纤维化越明显,肾组织中纤维连接蛋白、基质金属蛋白酶9和转化生长因子β1表达即明显增多,且随着梗阻时间延长,肾组织中纤维连接蛋白、基质金属蛋白酶9和转化生长因子β1表达呈持续增加趋势,至造模后第14天达到高峰,与同期对照组、假手术组相比差异有显著性意义(P < 0.01),说明在大鼠肾纤维化形成过程中,纤维连接蛋白的蛋白表达在肾损伤早期即显著增加,并随肾间质纤维化程度加重而逐步升高,从而促进肾纤维化的发生。而基质金属蛋白酶9的高表达可能是加重肾间质损害的因素之一。     

TGF-β1介导的Smad和ERK信号通路在肾纤维化中的研究进展

肾纤维化的发生发展受到生长因子、细胞因子、趋化因子等多种因素的调控。TGF-β1是目前已知的最重要的致纤维化因子。TGF-β1/Smad和TGF-β1/ERK信号通路是传导TGF-β1的主要信号通路,在肾纤维化中发挥着重要作用。因此,本文结合最新研究成果就TGF-β1/Smad和TGF-β1/ERK信号通路在肾纤维化中的作用及其二者之间的相互关系进行综述。     

核心蛋白聚糖在肾间质纤维化中作用的研究进展

核心蛋白聚糖 (DCN)是蛋白聚糖家族中的一员 ,其生物活性十分活跃。DCN能中和、灭活TGF β等多种细胞因子 ,具有调节基质重构、抗凋亡、抗炎及抗粘附等作用 ,是一种抗纤维化的蛋白质。本文主要综述DCN与肾间质纤维化的关系。     

促红细胞生成素对大鼠肾间质纤维化发动蛋白-1表达影响

目的探讨促红细胞生成素（EPO）对大鼠肾间质纤维化发动蛋白．1（Drp-1）表达的影响。方法81只sD大鼠,分为假手术组、对照组和EPO组,每组各27只。EPO组、对照组采用单侧输尿管结扎并剪断建立肾间质纤维化模型,假手术组仅游离输尿管而不结扎和剪断;EPO组予EPO皮下注射;假手术组和对照组给予等量生理盐水皮下注射。各组于术后7、14和21d取动脉血分离血清检测血肌酐和尿素氮水平。取梗阻侧肾组织行苏木精．伊红和Masson染色,观察肾脏病理学变化。用免疫组化方法检测肾组织Drp一1的表达。结果@EPO组各时点血清肌酐和尿素氮水平显著低于对照组（P〈0．01）,但高于假手术组（P〈0．05）。②EPO组各时点肾组织病理改变较对照组明显减轻,肾小管间质损伤评分和肾间质纤维化相对面积均低于对照组（P均〈0．05）,但高于假手术组（P〈0．05）。③EPO组肾组织的Drp．1表达显著低于对照组（P〈0．05）,但高于假手术组（P〈0．05）。结论Drp-1在大鼠肾间质纤维化肾组织中表达增加,参与。肾脏纤维化过程;EPO可以通过抑制Drp一1表达,从而延缓肾间质纤维化的进展。     

圣草酚通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路改善糖尿病肾病大鼠肾纤维化

目的：探讨圣草酚对糖尿病肾病（DN）肾纤维化的影响及其作用机制。方法：采用多次小剂量注射链脲佐菌素建立DN大鼠模型,将建模成功的大鼠随机分为模型组、阳性药物组（二甲双胍,0.5 g/kg）及圣草酚低、中、高剂量组（5、10、20 mg/kg）,另设置对照组,每组12只。各给药组给予相应药物灌胃干预,对照组和模型组灌胃等体积生理盐水,1次/d,连续12周。收集24 h尿液,检测24 h尿蛋白含量;腹主动脉取血,测定空腹血糖（FBG）、血肌酐（Scr）和血尿素氮（BUN）含量;HE染色观察肾脏组织病理学变化;Masson染色观察肾脏组织纤维化程度;qRT-PCR检测肾组织中TGF-β1、CollagenⅠ和CollagenⅢmRNA表达水平;Western blot检测肾脏组织中TGF-β1、p-Smad3、Smad3、α-SMA蛋白表达水平。结果：与对照组相比,模型组大鼠肾脏出现明显损伤及纤维化,FBG、BUN、Scr和24 h尿蛋白含量均显著升高（P<0.05）,肾脏组织中TGF-β1、CollagenⅠ、CollagenⅢ等mRNA表达水平及TGF-β1、p-Smad3和α-S...     

帕立骨化醇抑制糖尿病肾病大鼠肾小管间质纤维化

目的:探讨帕立骨化醇(paricalcitol,P)对糖尿病肾病(DN)肾小管间质纤维化的干预作用及可能机制。方法:大鼠禁食后,采用单次无菌腹腔注射链脲佐菌素建立DN模型。将DN大鼠随机分为:(1)帕立骨化醇干预组(P组):帕立骨化醇溶于丙二醇中,于造模成功后第2天以0.4μg/kg的剂量腹腔注射,每周3次;(2)糖尿病肾病组(D组):给予等体积的丙二醇腹腔注射。设置正常对照组(C组)。帕立骨化醇连续干预12周后,测血、尿生化指标;进行肾脏病理学检查;利用免疫组化及Western blotting检测肾组织TGF-β1、Wnt-4、β-catenin及Klotho蛋白的表达;并进行指标间的相关分析。结果:(1)与C组比较,D组大鼠SCr、BUN及24 h尿蛋白水平均升高,而P组均较D组降低(P0.05)。(2)与C组比较,D组大鼠肾小管间质纤维化面积增加,而P组较D组减小(P0.05)。(3)D组大鼠肾组织Klotho蛋白表达低于C组,而P组高于D组(P0.05);与C组比较,D组大鼠肾组织TGF-β1、Wnt-4及β-catenin蛋白表达增加,而P组表达均较D组减少(P0.05)。(4)Klotho与纤维化面积、TGF-β1、Wnt-4及β-catenin均呈负相关(P0.05)。结论:帕立骨化醇可抑制DN大鼠肾小管间质纤维化,其作用可能与增加肾组织Klotho表达,抑制Wnt/β-catenin信号通路激活,同时减少TGF-β1合成相关。     

IL-17在肾间质纤维化中的作用初探

探讨白细胞介素17(IL-17)在肾间质纤维化发生发展中的作用。采用的体内实验为,以单侧输尿管梗阻(unilateral ureteric obstruction,UUO)启动纤维化病理过程。将C57BL/6小鼠分为假手术组(Sham)和单侧输尿管梗阻(unilateral ureteric obstruction,UUO)组,分别于术后第1、3、7天处死,留取手术侧肾组织。采用HE、PAS、PASM、Masson染色评价肾间质组织病理变化。以免疫组化、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL-17在肾组织中的表达情况。体外实验为,分离培养C57BL/6小鼠肾成纤维细胞,转化生长因子β1(TGF-β1)刺激使其转化为肌成纤维细胞,继而用蛋白免疫印迹法(western blotting)检测IL-17的刺激下α-SMA表达水平。结果显示,组织病理学检查显示随着梗阻时间延长,炎性细胞浸润明显,肾小管萎缩,间质面积增大,Ⅰ型胶原和α-SMA增多。PCR检测显示α-SMA mRNA表达增多。但ELISA结果显示肾组织中IL-17含量呈下降趋势。Western blot结果表明肌成纤维细胞在IL-17的刺激下,α-SMA蛋白水平显著下降。实验说明,单侧输尿管梗阻手术可导致相应侧肾组织发生纤维化病变,但肾组织中IL-17含量与纤维化病变并不一致,在体外实验中IL-17可下调肌成纤维细胞表达的α-SMA。     

肺纤维化大鼠中基质金属蛋白酶-2的表达

目的：研究基质金属蛋白酶－2（MMP2）在肺纤维化中的作用。方法：（1）用免疫组织化学方法（ABC法）观察博莱霉素所诱导的实验性大鼠纤维化肺组织内MMP2表达的动态变化;（2）用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）观察博莱霉素所诱导的肺纤维化不同时期间质成纤维细胞MMP2 mRNA的动态变化。（3）用Northern印迹杂交和免疫细胞化学方法观察转化生长因子β1（TGFβ1）对体外培养的大鼠肺成纤维细胞MMP2mRNA和蛋白表达的影响。结果：（1）诱导纤维化组1－7d,病灶内浸润的单核巨噬细胞及肺泡间质细胞数量增多,MMP2免疫组织化学染色阳性,14d以后,阳性单核巨噬细胞减少,用博莱霉素28d时,阳性间质细胞亦减少。（2）博莱霉素作用后1d,肺成纤维细胞MMP2基因转录即明显增强,为对照组的2．05倍,28d时下降。（3）TGFβ1作用后,大鼠肺成纤维细胞MMP2mRNA及其蛋白表达增强。结论：肺组织内MMP2的过度表达,可能是肺纤维化启动的重要原因。     

Amitriptyline aggravates the fibrosis process in a rat model of infravesical obstruction

Infravesical obstruction (IVO) secondary to benign prostatic hypertrophy can affect up to 50% of men over 50 years old and may cause serious and irreversible alterations throughout the urinary tract, especially in the bladder. Therapeutic approaches are currently limited. Amitriptyline has recently been described as an analgesic, anti-inflammatory and myorelaxant in some experimental models. The objective of this study was to investigate the effects of amitriptyline hydrochloride on the process of fibrosis in a bladder outlet obstruction model in rats. Male Wistar rats were subjected to IVO and studied at intervals of 1 and 14 days postprocedure. The rats were randomly divided into five groups: sham, IVO1-T, IVO1-NT, IVO14-T and IVO14-NT. Bladder tissue was processed for histopathology, immunohistochemistry and RT-PCR. The IVO14 groups presented bladder fibrosis, smooth muscle cell hypertrophy and bladder wall thickening. The IVO14-T group demonstrated a higher intensity of fibrosis, higher macrophage infiltration rate and higher gene expression of Transforming growth factor (TGF) Tgf-β1. Thus this data shows that in this experimental mode amitriptyline had an amplifying effect on the process of fibrosis as a whole.     

结缔组织生长因子在肾间质纤维化中的表达及其调控

CTGF, a member of the CCN family of immediate early genes, is a recently discovered profibrotic growth factor, which is involved in many pathophysiologic procedures. CTGF acts as a downstreame ffector of TGF-β acting on interstitial ceils to enhance the progression of fibrotic renal diseases. It has been shown that CTGF gene expression can be induced or blocked by some kinds of cytokine and drugs. It is an interesting candidate target for future intervention strategies of renal interstitial fibrosis.     

Contraction of tubulointerstitial fibrosis tissue in diabetic nephropathy,as demonstrated in an in vitro fibrosis model

Tubulointerstitial fibrosis in diabetic nephropathy (DN) was investigated using an in vitro tissue model of remodeling, to determine the pathogenic mechanism of fibrosis that leads to renal atrophy, i.e., renal failure. The remodeling model consisted of a renal fibroblast-populated collagen lattice (FPCL). The overexpression of transforming growth factor (TGF)-β1 in the diabetic kidney gave rise to FPCL contraction. FPCL relaxation was induced by the subsequent addition of cytochalasin D. The FPCL failed to contract when exposed to TGF-β1 plus Y27632, a Rho kinase inhibitor. TGF-β1 induced the phosphorylation of myosin light chains, and Y27632 blocked this activity. TGF-β1-induced FPCL contraction was suppressed by the addition of 2,3-butanedione monoxime, a myosin ATPase inhibitor. As shown in the video, the contraction rate of the projections of the cells in the FPCL was significantly greater in the TGF-β1 group than in the control group. Collectively, these results indicate that TGF-β1-induced FPCL contraction is attributable to actin–myosin interactions in the fibroblasts through the activation of Rho kinase, the phosphorylation of myosin light chains, and the subsequent activation of myosin ATPase. We propose that via these mechanisms, tubulointerstitial fibrosis generates tissue contraction that leads to renal atrophy and renal failure in DN.     

miR-207在大鼠纤维化肾组织及尿液中表达上调

目的研究miR-207在大鼠肾脏纤维化(RF)模型中的差异表达,并对其功能进行研究。方法实验组大鼠(UUO)分离并结扎右侧输尿管,假手术组只分离右侧输尿管,不结扎。Real-time PCR定量分析大鼠肾脏纤维化模型肾脏和尿液中miR-207的表达,以及瞬时转染miR-207 mimics和inhibitors的大鼠肾小管上皮(NRK-52E)细胞中纤维化相关基因的表达。结果大鼠肾脏纤维化模型尿液和肾脏组织中miR-207表达上调(P<0.05),miR-207能上调大鼠肾小管上皮NRK-52E细胞中纤维化相关基因的表达。结论 miR-207可能在肾脏纤维化中发挥重要的作用,为肾脏纤维化诊断靶点提供新的可能。     

TGF-βRⅡ/Fc融合蛋白的纯化及其生物学活性鉴定

目的 :用重组Bac TRⅡ杆状病毒表达系统大量表达融合蛋白TGF βRⅡ /Fc,并对其进行纯化及鉴定 ;验证该融合蛋白是否能够阻断细胞因子TGF β1的生物学作用。 方法 :采用病毒空斑形成试验测定病毒滴度 ,并对其进行扩增。采用Pro teinG柱和快速蛋白质液相层析法 (FPLC)纯化目的蛋白。采用SDS PAGE分析纯化后的目的蛋白 ,并将蛋白电泳条带进行灰度扫描 ,计算目的蛋白的含量。采用Westernblot和夹心ELISA法 ,鉴定目的蛋白是否表达。采用MTT比色法 ,验证融合蛋白TGF βRⅡ /Fc能否阻断TGF β1对小鼠肺成纤维细胞 (L92 9)生长的作用。采用Westernblot技术 ,验证融合蛋白能否阻断TGF β1对L92 9细胞纤维黏连蛋白 (FN)生成的促进作用。结果 :本实验室构建并保存的重组Bac TRⅡ杆状病毒原液内病毒的滴度为 2× 10 12 pfu/L。蛋白电泳后灰度扫描结果表明 ,目的蛋白约占总蛋白的 10 %。夹心ELISA法和Westernblot分析证明目的蛋白已表达。融合蛋白TGF βRⅡ /Fc能够阻断TGF β1对L92 9细胞生长的抑制作用 ,以及对该细胞FN生成的促进作用。结论 :本室构建的重组Bac TRⅡ杆状病毒表达系统 ,能够表达融合蛋白TGF βRⅡ /Fc ,表达水平为 9mg/L。纯化得到的目的蛋白具有一定的生物学活性 ,可阻断TGF β1对L92 9细胞生长的     

Transforming Growth Factor‐β Suppressed Id‐1 Expression in a smad3‐Dependent Manner in LoVo Cells

TGF‐β plays an important role in regulating cell differentiation and proliferation in human cancers such as colorectal cancer. Id‐1 has been identified as a marker in colorectal cancer progression. The aim of this study was to investigate the role of TGF‐β in regulating Id‐1 in LoVo cells. siRNA was used to silence smad2, smad3, and p38 MAPK gene expression in Lovo cells. Interference efficiency and the role of TGF‐β on Id‐1 expression were analyzed using a luciferase reporter assay, RT‐PCR, and Western blotting. Cell viability was determined using the MTT assay. In this study, we demonstrated that TGF‐β1 downregulated Id‐1 protein expression in LoVo cells. Smad2 and smad3 siRNA inhibited TGF‐β1‐induced 4×SBE luciferase reporter activity. p38 MAPK siRNA inhibited TGF‐β1‐induced 3×AP‐1 luciferase reporter activity. However, the suppression of Id‐1 by TGF‐β1 was recovered by smad3 siRNA but not smad2 or p38 MAPK siRNA. Moreover, TGF‐β1 stimulated cellular proliferation and p21^Waf1 protein expression, which might be mediated by suppressing Id‐1 expression. In conclusion, this study demonstrated that TGF‐β1 suppressed Id‐1 expression in a smad3‐dependent manner in LoVo cells using RNAi technology. These results provide new insight into the mechanisms of TGF‐β function in colorectal cancer cells. Anat Rec, 2010. © 2009 Wiley‐Liss, Inc.