用CHITOSAN固定化青霉素酰化酶

本文报道以Chitosan为载体制备固定化青霉素酰化酶的研究结果。1.4％ Chitosan醋酸溶液先用12.5％戊二醛交联,洗涤,研磨,得颗粒。再用1.5％pH5.5和1.5％pH8.5多聚磷酸处理,得机械强度良好的载体。此载体先后经0.5％戊二醛和对甲苯磺酰氯双活化后,再与青霉素酰化酶偶联。所得固定化酶的活力达20.8u/g。固定化青霉素酰化酶的反应最适温度略高于游离酶,最适pH略低于游离酶;其Km值基本接近游离酶。固定化酶经反复使用,活力基本不变。     

几丁质脱乙酰酶(CDA)的研究进展

从多种真菌可分离纯化得到几丁质脱乙酰酶(CDA),CDA催化水解几丁质分子中的乙酰基生成壳聚糖,CDA与传统的浓碱热化学法生产壳聚糖相比,酶法催化提供了一种脱乙酰位点可控的、几丁质主链不被降解的和对环境友好的反应过程,从而得到优质的壳聚糖或壳寡糖。CDA具有重要的生物物理功能和广阔的潜在应用价值,该综述着重介绍了真菌CDA的研究进展,包括CDA的来源、CDA的生理生化性质、底物特异性、生物学功能和潜在应用价值。     

青霉素酰化酶电极

用海藻酸钠-氯化钙包埋法制备青霉素酰化酶电极,电极涂液中海藻酸钠浓度为1％,酶量大于15U/100mg较好。经聚乙烯亚胺处理的电极的抗磷酸盐性能良好,测试在pH 7.05缓冲液中进行,加样搅拌平衡后,取停止搅拌5min后的pH读数,△pH-青霉素G浓度的线性范围为0～1.88mg/ml。温度和pH对pH响应值均有影响。     

固定化青霉素酰化酶反应器研究进展

介绍固定化青霉素酰化酶反应器的研究现状，将这类反应器分为搅拌釜反应器、柱式填充床反应器、中空纤维膜反应器以及电渗析耦合反应器，从工程角度分析了各类反应器的优缺点，并展望其今后的发展趋势。     

利用无机载体固定化青霉素酰化酶的研究

以无机材料６２０１型担体作载体,进行青霉素酰化酶固定化的研究。考察了ＡＰＴＳ和戊二醛浓度、给酶量以ｐＨ等因素对固定化酶酶活的影响。结果表明,以６２０１型担体为载体制备得到的固定化酶具有较高的酶活回收,达４２．８％;操作稳定性良好;用其连续水解３０批青霉素Ｇ的钾盐溶液,酶活未见明显下降;该固定化酶与游离酶相比,可在较宽的ｐＨ范围保持高酶活。     

青霉素酰化酶研究进展

青霉素酰化酶除了在医药工业上用于大规模生产β－内酰胺类抗生素中间体和半合成β－内酰胺类抗生素之外,还有其它的一些潜在应用;对青霉素酰化酶的研究一直吸引着各国科研人员的兴趣,近年来,用一些经典的和现代的技术手段,对青霉素酰化酶产生菌进行改良,通过理化诱变,使酶活力提高;通过定点突和化学修饰,将酶活性中心的丝氨酸变成半胱氨酸或含硒原子的半胱氨酸,使酶的合成活力相对于水解活力大幅提高,通过基因工程技术提高酶的表达水平,促进分泌或改进生产菌的缺陷,出现了介孔分子筛,二甘醇二甲基酯丙烯酸酯接枝尼龙共聚物等新的;固定化材料及酶膜反应器,多室固定化酶反应器,有望用于工业化生产。ββ     

青霉素酰化酶:固定化及其应用

青霉素酰化酶广泛应用于β-内酰胺类抗生素中间体和半合成β-内酰胺类抗生素的合成。虽然游离酶具有极高的催化活性,但其对温度、pH值、溶剂极性等的耐受范围极窄,极易失活,而且在有机溶剂中发生的失活是不可逆的。为了提高其各方面稳定性,不断有新的固定化方法提出。本文综述了青霉素酰化酶的固定化方法及其应用。     

青霉素酰化酶提取及其与固定化酶的动力学参数测定和比较

采用冻融-溶媒法从大肠杆菌中提取青霉素酰化酶(经硫酸铵沉淀、透析、冷冻干燥),制得酶粉,活力为1100.37u/g,经六批提取试验,平均提取收率47.93％。分别测定游离酶及其固定化酶米氏常数Km值。游离酶的Km值为2.39mM,固定化酶按其颗粒大小不同,Km值分别为5.62、8.46、8.42mM。 在对pH稳定性测定中,游离酶最适pH为7～8,而固定化后在pH5～9之间都较稳定。对温度的稳定性测定中,游离酶与固定化酶在40℃以下都较稳定,但在45℃保温一小时后,游离酶只存留活力39.51％,而固定化酶却存留活力86.92％,二者有显著差异、温度再高相差更大。因此酶经固定化后,对pH和温度的稳定性都有明显提高。金属离子对青霉素酰化酶的活力有所影响。特别是铁离子和铜离子影响较大,故酶反应容器不能采用铁和铜的材料。     

固定化青霉素G酰化酶的初步研究

本文研究固定化青霉素G酰化酶的不同制备方法,比较了各种固定化青霉素G酰化酶的载体。实验表明:聚丙烯腈纤维和无机载体制成的固定化酶具有较高的酶比活力,而且表面积大,易于装柱,抗污染能力大,又能裂解高浓度青霉素 G 溶液生成6-APA。     

青霉素酰化酶溶液浓度对活力测定的影响

青霉素酰化酶是经巨大芽孢杆菌发酵产生于发酵液中,经离心除菌丝,再用硅藻土或氧化铝吸附后,硫酸铵洗,铵洗脱,超滤浓缩至发酵液浓度的80至100倍以上。得到可用     

游离态和固定态青霉素酰化酶对环境的敏感性

在优化的固定化条件下，通过戊二醛交联直接将青霉素酰化酶固定化。比较了环境因素对游离酶和两种化酶活性的影响，结果表明青霉固定化后，抗环境变化的能力明显提高。现任中固定化酶活化的比较说明由游离酶直接交联得到的固定化酶更适合工业应用。     

工程菌Ec108（pPAHD1）青霉素酰化酶表达水平的研究

用2 L 全自动发酵罐观察 Ec 108(pPAHD 1)青霉素酰化酶基因的表达,发现对数前期生物量扩增时,溶解氧以相对饱和度≥80%为宜,而产酶阶段则要求相对饱和度约为5%。应根据溶氧曲线变化特征指导诱导剂苯乙酸的补加时机和剂量,以每次补加0.03～0.05%为佳。在罐压29 kPa、通气比1:0.5的恒温条件下,借助上述手段,可使最高酶活水平达342u/100 ml(NIPAB 法),比摇瓶发酵提高1.8倍。     

用双水相体系萃取青霉素酰化酶的研究

本文首先研究了大肠杆菌青霉素酰化酶生产菌AS1.76的细胞破碎过程,用冻融法通过四次处理,青霉素酰化酶的释放率可达77％,通过实验重新确定了NIPAB法中Na_2CO_3的用量。 本文研究了用PEG4000/磷酸盐体系提取细胞破碎液中的青霉素酰化酶,通过实验确定了最佳体系:PEG4000浓度16％(w/w),磷酸盐浓度14％(w/w),一步萃取收率在90％以上,纯化因子311,为工业上采用双水相萃取青霉素酰化酶提供了一条新途径。     

头孢G酸酶裂解制备7-ADCA的研究

目的：用头孢Ｇ酸在固定化青霉素经酶催化下裂解制备７－ＡＤＣＡ。方法：在硼酸缓冲溶液中,以固定化青霉素酰化酶催化裂解头孢Ｇ酸制备７－ＡＤＣＡ。结果：最优反应条件为温度２８－３０℃,ｐＨ７．８－８．０;ＩＰＡ－７５０用量每１０ｇ头孢Ｇ酸１１．６－１２ｇ。结论：ＩＰＡ－７５０虽裂解时间较长,但价格低,用以替代ＰＧＡ－４５０在经济上是合算的。产品怍率达９３％。     

基因工程菌株产生的青霉素酰化酶的纯化及其性质

以构建的青霉素酰化酶基因工程菌(E.Coli 108/PPAHD 1)为材料,经硫酸铵沉淀、离子交换和制备电泳等手段将青霉素酰化酶的纯度提高了155倍,比活达17 u/mg,其凝胶电泳呈现单带。该酶有两个亚基,分子量分别为62300 d 和14900 d。并测定了该酶对温度及 pH 稳定范围、米氏常数等电点。     

基因工程菌A56（pPA22）生物合成青霉素酰化酶的发酵工艺研究

青霉素酰化酶基因工程菌E.coli A_(56)(pPA_(22))中试研究,在500升发酵罐考察该菌株生物合成青霉素酰化酶的工艺条件,发酵温度22.5℃,通气比1∶0.4,搅拌转速70转/分。同时还考察了不同浓度苯乙酸和苯乙酸加入时间。试验证明低浓度的溶解氧对酰化酶合成有利。发酵过程pH控制范围:生长期7.2～7.5,酶合成期7.5～8.0,发酵末期8.2～8.5。500升发酵罐最高酶产量达215.9u/100ml。