局灶性脑梗死大鼠半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3和9的表达：空间分布特征及时间演变规律

目的：观察大鼠局灶性脑梗死后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3和9表达的时间和空间分布的动态演变。方法：实验于2004-03／06在山东省泰山医学院微循环重点实验室完成。选择Wistar大鼠84只，随机分为正常组6只、假手术组6只、局灶性脑梗死组72只，局灶性脑梗死组根据光照后时间分为30min，3，6，9，12，24，36，48h，3，4，5，6d共12组，每组6只。采用光化学方法制作大鼠局灶性脑梗死模型。动物处死前1h注射10g／L伊文思兰1mL。正常组不作任何处理，假手术组仅暴露完整的颅骨，按要求时间点麻醉处死大鼠取脑组织，观测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3和9的表达采用免疫组织化学分析。结果：参加实验的84只大鼠全部进入结果分析。①脑梗死后30min即有半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3和9阳性细胞出现，呈半球状向四周放射样扩展，随脑梗死时间的延长逐渐增多，二者均在48h表达至高峰，但前者表达更显著(P&;lt;0．05)，阳性细胞局限于脑梗死区周围。②正常对照组、假手术组均未发现半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3和9的阳性表达。结论：①局灶性脑梗死后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3和9表达部位一致，以坏死区为中心呈放射状空间分布特征。②二者均在30min开始表达，48h时半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3较半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9表达增多，这种时间变化规律说明细胞凋亡的级联反应最终通路有放大作用。     

大鼠局灶性脑梗死后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3,9的表达及白花丹参叶的干预效应

目的:观察大鼠局灶性脑梗死后促进细胞凋亡的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3,9表达的变化规律及白花丹参叶的保护作用。方法:实验于2004-03/06在山东省泰山医学院微循环重点实验室完成。取50只Wistar大鼠,随机分为局灶性脑梗死组和白花丹参叶预处理组两组各25只,每组又按光照后时间分为30min,12,24,48,72h等5个亚组,每亚组5只。造模前,白花丹参叶预处理组大鼠给予20g/kg白花丹参叶水提物灌服,1次/d,连续7d,然后两组同时采用光化学法制作大鼠局灶性脑梗死的模型。利用免疫组化染色技术观察局灶性脑梗死后不同时间点大鼠脑半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3,9表达的变化,并观察大鼠一般情况。结果:50只大鼠全部进入结果分析。①局灶性脑梗死组大鼠梗死后30min即有半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3,9阳性细胞出现,呈半球状向四周放射样扩展,随梗死时间的延长逐渐增多,二者均在48h表达至高峰,但半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达更显著(P<0.05)。阳性细胞局限于梗死区周围。②预防性应用白花丹参叶水提物后,大鼠出现明显的嗜睡现象,受损皮质表面积红染区、蓝染区明显减小。各时点半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3,9的阳性反应均明显减少,较单纯梗死组有显著性差异(P<0.05)。结论:局灶性脑梗死后可诱导半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3,9的表达,白花丹参对脑梗死具有保护作用,其分子机制可能为抑制了半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3,9的表达。     

大鼠局灶性脑梗死后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3,9的表达及白花丹参叶的干预效应

目的：观察大鼠局灶性脑梗死后促进细胞凋亡的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3,9表达的变化规律及白花丹参叶的保护作用方法：实验于2004—03／06在山东省泰山医学院微循环重点实验室完成。取50只Wistar大鼠，随机分为局灶性脑梗死组和白花丹参叶预处理组两组符25只，每组义按光照后时间分为30min．12，24，48，72h等5个亚组，每亚组5只。造模前，白花丹参叶预处理组大鼠给予20g／kg白花丹参叶水提物灌服，1次／d，连续7d，然后两组同时采用光化学法制作大鼠局灶性脑梗死的模型。利用免疫组化染色技术观察局灶性脑梗死后不同时间点大鼠脑半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3,9表达的变化，并观察大鼠一般情况。结果：50只大鼠全部进入结果分析。①局灶性脑梗死组大鼠梗死后30min即有半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3，9阳性细胞出现，呈半球状向四周放射样扩展，随梗死时间的延长逐渐增多，二者行均在48h表达至高峰，但半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达更显著（P〈0．05），阳性细胞局限于梗死区周围。②预防性应用白花丹叶水提物后，大鼠出现明显的嗜睡现象，受损皮质表面积红染区、蓝染区明显减小，各时点半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3,9的阳性反应均明显减少，较单钝梗死组有显性差异（P〈0．05）。结论：局灶性脑梗死后可诱导仁胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3,9的表达，白花丹参对脑梗死具有保护作用，其分子机制可能为抑制了半胱氨酸天冬氧酸蛋白酶3,9的表达。     

大鼠中等程度创伤性脑损伤后神经细胞凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达与活性的时效关系

目的:观察大鼠中等程度创伤性颅脑损伤后神经细胞凋亡及凋亡执行因子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达和活性的时间动态演变,并探讨三者之间的时效关系。方法:实验于2004-04/10在解放军第三军医大学创伤、烧伤、复合伤国家重点实验室完成。选择健康SD大鼠48只,随机分为假致伤组8只和损伤组40只,损伤组根据处死时间分为2,12,24,48,72h共5个时相点,每个时相点8只大鼠。损伤组制备中等程度创伤性脑损伤模型,假致伤组仅作颅骨钻孔而不致伤,术后24h处死。观察中度脑损伤后2h～3d伤侧大脑皮质、海马神经细胞凋亡情况采用原位末端标记技术;观察半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达和活性的变化采用免疫组织化学及免疫荧光技术。结果:48只大鼠全部进入结果分析。①各组大鼠中度脑损伤后不同时间点大脑皮质、海马神经细胞凋亡情况:创伤性脑损伤后2h在伤侧皮质和海马区即可见有少量凋亡细胞,并呈逐渐增多趋势,主要分布在伤侧皮质、皮质下白质、海马等区域,12～24h凋亡细胞增多,48～72h达到凋亡高峰,明显高于假致伤组。②各组大鼠中度脑损伤后不同时间点半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达:脑损伤后2h在损伤灶及其周围皮质即有少量的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞,脑损伤后24～48h阳性细胞数量明显增加。脑挫伤后72h半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞数有所下降。假致伤组脑组织偶见半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞。③各组大鼠中度脑损伤后不同时间点半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性变化:脑损伤后损伤灶及附近皮质神经细胞内半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性2h开始升高,伤后48h达高峰,损伤侧海马区域神经细胞内半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性2h开始升高,24h达高峰,而后开始下降。结论:大鼠创伤性脑损伤后损伤区周围皮质和损伤侧海马神经细胞凋亡数量的变化与伤后时程有关。伤后细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性增加可能是导致细胞凋亡的因素。     

电针对急性脊髓损伤后Fas和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的影响

目的:观察电针治疗对大鼠脊髓损伤后神经细胞再生修复过程中Fas和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的影响,并与甲基强的松龙进行阳性对照。方法:实验于2003-04/2004-06在佳木斯医学院中心实验室进行。①将健康成年Wistar大鼠64只单纯随机分为模型组、电针组、甲基强的松龙组及假手术组4组(n=16),除假手术组外,其他3组大鼠采用改良的Allen’s捶击法(50g·cm)制成大鼠T10脊髓损伤模型,假手术组仅切除椎板,不损伤脊髓。②电针组在损伤后即刻取督脉上的大椎和命门两(进行治疗,电针频率2Hz,疏密波形,强度2.5mA,以针刺处肌肉轻微抖动为宜,持续30min。甲基强的松龙组在损伤后即刻尾静脉内注射30mg/kg甲基强的松龙。模型组和假手术组不做治疗。③各组分别于术后6,24h各处死8只。应用免疫组织化学方法及图像定量分析法观察各组脊髓损伤早期Fas和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达。结果:经补充后61只大鼠进入结果分析。①脊髓损伤后6h:电针及甲基强的松龙组Fas及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞数少于假手术组(P<0.05),灰度值高于假手术和模型组相(P<0.05,0.01)。②脊髓损伤后24h:电针及甲基强的松龙组Fas及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞数少于假手术组和模型组(P<0.05),灰度值高于假手术和模型组(P<0.05,0.01);但电针与甲基强的松龙组组间差异不显著(P>0.05)。结论:电针可使Fas及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达下调,从而抑制细胞凋亡,保护神经细胞,对损伤脊髓的修复有积极的治疗作用,其效果与甲基强的松龙相似。     

大鼠中等程度创伤性脑损伤后神经细胞凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达与活性的时效关系

目的：观察大鼠中等程度创伤性颅脑损伤后神经细胞凋亡及凋亡执行因子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达和活性的时间动态演变，并探讨三者之间的时效关系。方法：实验于2004-04／10在解放军第三军医大学创伤、烧伤、复合伤国家重点实验室完成。选择健康SD大鼠48只，随机分为假致伤组8只和损伤组40只，损伤组根据处死时间分为2，12，24，48，72h共5个时相点，每个时相点8只大鼠。损伤组制备中等程度创伤性脑损伤模型，假致伤组仅作颅骨钻孔而不致伤，术后24h处死。观察中度脑损伤后2h-3d伤侧大脑皮质、海马神经细胞凋亡情况采用原位末端标记技术；观察半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达和活性的变化采用免疫组织化学及免疫荧光技术。结果：48只大鼠全部进入结果分析。①各组大鼠中度脑损伤后不同时间点大脑皮质、海马神经细胞凋亡情况：创伤性脑损伤后2h在伤侧皮质和海马区即可见有少量凋亡细胞，并呈逐渐增多趋势，主要分布在伤侧皮质、皮质下白质、海马等区域，12-24h凋亡细胞增多，48-72h达到凋亡高峰，明显高于假致伤组。②各组大鼠中度脑损伤后不同时间点半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达：脑损伤后2h在损伤灶及其周围皮质即有少量的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞，脑损伤后24-48h阳性细胞数量明显增加。脑挫伤后72h半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞数有所下降。假致伤组脑组织偶见半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞。③各组大鼠中度脑损伤后不同时间点半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性变化：脑损伤后损伤灶及附近皮质神经细胞内半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性2h开始升高，伤后48h达高峰，损伤侧海马区域神经细胞内半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性2h开始升高，24h达高峰，而后开始下降。结论：大鼠创伤性脑损伤后损伤区周围皮质和损伤侧海马神经细胞凋亡数量的变化与伤后时程有关。伤后细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性增加可能是导致细胞凋亡的因素。     

大鼠脊髓损伤后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达及意义继发性脊髓损伤适宜干预时间窗的选择

背景半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶家族被认为是细胞凋亡的执行因子,脊髓损伤后可发生神经细胞凋亡.目的观察大鼠脊髓损伤后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达变化,探讨其与神经细胞凋亡发生的关系,为判定减轻继发性脊髓损伤的适宜干预时间窗提供依据.设计自身对照、相互对照动物实验.单位华中科技大学同济医学院附属同济医院创伤外科、骨科.材料实验于2001-09/12在华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科实验室完成.54只SD大鼠,雌雄不限,体质量220～250g,由华中科技大学同济医学院动物实验中心提供.方法①动物模型建立及分组将大鼠分为对照组和损伤组,对照组仅做Ts,T9椎板切除术,损伤组于4、8 h和1,2,3,7,14和21 d取材共9组,每组6只.以30 g/L戊巴比妥钠腹腔麻醉后,按Nystrom法暴露T8,T9节段胸髓,将50 g重物通过2.2 mm×5.0 mm弧型光滑金属垫片压迫该段脊髓后正中部5 min,损伤后每天1000,1600和2200 3次人工膀胱排尿,直至建立反射性膀胱排空.②取材及切片准备在脊髓损伤后各时间点完整取出脊髓全长,将每组4只损伤段脊髓组织块,长约8 mm,石蜡包埋,连续切片,分别行苏木素伊红染色、免疫组化及原位末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记法(TdT-mediated dUTP-biotin nick endlabeling,TUNEL)标记;每组2只在冰上处死,将损伤脊髓中心组织置入液氮罐中保存备用.③检测指标以免疫组化法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达,以逆转录-聚合酶链反应半定量测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 mRNA的表达变化,以TUNEL法检测神经细胞的凋亡水平,并以直线相关分析半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达和神经细胞凋亡的相关性.主要观察指标①光镜下各组大鼠脊髓损伤观察.②免疫组化结果.③各组大鼠脊髓损伤后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达变化.④各组大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡情况及与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达的相关性.结果纳入结果分析的各组动物数均为6只.①光镜下各组大鼠脊髓损伤观察结果损伤段1 h有广泛出血;4～8 h脊髓结构开始破坏,大量的神经元死亡;24 h脊髓破坏严重;7～21 d损伤范围确定,脊髓内有空洞形成.②免疫组化检测的各组大鼠半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的结果正常大鼠脊髓神经细胞中很少有半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达(2.1±0.5);脊髓损伤后8 h,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达阳性的神经细胞明显增加(89.2±10.5),3 d达到高峰(189.6±12.7);半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的阳性细胞与凋亡细胞出现的时限相似,呈正相关(r=0.941).③逆转录-聚合酶链反应检测的各组大鼠半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的结果半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 mRNA 4 h开始增高(0.442±0.024),48 h达到高峰(0.634±0.028),7 d后恢复正常(0.351±0.013),早于凋亡出现的时期,与神经细胞凋亡水平呈正相关(~0.622).4④rUNEL标记及计数的各组大鼠半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的结果对照组及4 h组仅见偶染细胞,8 h后开始出现阳性细胞,主要位于灰质中;此后阳性细胞逐渐增多,3 d达到高峰,7 d灰质中凋亡染色的阳性细胞逐渐减少,主要在周围白质中,14和21 d可见少量的阳性细胞.结论在正常的脊髓组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3是以活性很低的酶原形式存在;大鼠脊髓损伤后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达增强,8 h开始大量表达,24～48 h达到高峰,与TUNEL所检测的阳性凋亡细胞在时间上相重叠,从半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞先后出现的区域上看,与脊髓损伤阳性凋亡细胞一致,可见半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3参与了脊髓损伤细胞凋亡的调节.从本实验可以看出,从脊髓损伤后到半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活化这段时间是脊髓损伤干预细胞凋亡、减轻继发性脊髓损伤治疗时间窗,应用基因干预或特异性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶抑制剂宜在48 h内应用.     

海马局部脑组织血流量和神经元特征性变化与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8介导癫痫大鼠的关系

目的：检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8在癫痫大鼠海马神经元的表达及其与癫痫发作大鼠局部脑血流量和神经元变化的关系。方法：实验于2002—05／2003-10在复旦大学神经病研究所完成。选择清洁级SD雄性大鼠60只，随机分为①正常对照组6只：杏仁核注射磷酸盐缓冲液。②空白对照组6只：磷酸盐缓冲液(脑室) 磷酸盐缓冲液(杏仁核内)。③单纯癫痫组36只：杏仁核内注射红藻氨酸诱发癫痫发作，发作1h后经股静脉注射安定(30mg／kg)终止发作，根据处死大鼠的时间点分0，2，4，8，24，72h6组，每组6只大鼠。⑧试验给药组6只：半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8抑制剂z-IETD-fmk(脑室，0．3μg于红藻氨酸注射前20min，5min及红藻氨酸注射后1h分3次给药) 红藻氨酸(杏仁核内)。⑤实验对照组6只：磷酸盐缓冲液(脑室) 红藻氨酸(杏仁核内)；均于安定注射终止发作后24h处死大鼠。结果评估：①激光多普勒血流测定仪记录局部脑血流。②用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记染色和cresvl violet染色观察海马神经元凋亡和存活的变化及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8抑制剂z—IETD—fmk对海马CA3区的脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记阳性细胞和存活细胞的影响。③用免疫荧光和蛋白印迹检测海马半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8的表达。结果：造模过程中有2只大鼠死亡，补充2只，进入结果分析大鼠保持为60只。①红藻氨酸注射后10～20min内脑灌注率显示轻微升高趋势，随后于20～60min内逐渐下降，60min后脑灌注率基本保持稳定，发作前后脑灌注率无明显变化。②发作终止即刻半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8出现裂解片断，8h时出现脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记阳性细胞，24h时达高峰，存活神经元减少。脑室内注射半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8抑制剂z-IETD-fmk可减少脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记阳性细胞，增加存活神经元。③用免疫荧光和蛋白印迹检测结果：发作后在红藻氨酸注射同侧海马的CA3区神经元半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8免疫反应性增强。结论：半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8的激活参与了癫痫发作诱导海马CA3区神经元的损伤，且与局部脑血流量变化无关.     

海马局部脑组织血流量和神经元特征性变化与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8介导癫痫大鼠的关系

目的:检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8在癫痫大鼠海马神经元的表达及其与癫痫发作大鼠局部脑血流量和神经元变化的关系。方法:实验于2002-05/2003-10在复旦大学神经病研究所完成。选择清洁级SD雄性大鼠60只,随机分为①正常对照组6只:杏仁核注射磷酸盐缓冲液。②空白对照组6只:磷酸盐缓冲液(脑室)+磷酸盐缓冲液(杏仁核内)。③单纯癫痫组36只:杏仁核内注射红藻氨酸诱发癫痫发作,发作1h后经股静脉注射安定(30mg/kg)终止发作,根据处死大鼠的时间点分0,2,4,8,24,72h6组,每组6只大鼠。④试验给药组6只:半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8抑制剂z-IETD-fmk(脑室,0.3μg于红藻氨酸注射前20min,5min及红藻氨酸注射后1h分3次给药)+红藻氨酸(杏仁核内)。⑤实验对照组6只:磷酸盐缓冲液(脑室)+红藻氨酸(杏仁核内);均于安定注射终止发作后24h处死大鼠。结果评估:①激光多普勒血流测定仪记录局部脑血流。②用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记染色和cresylviolet染色观察海马神经元凋亡和存活的变化及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8抑制剂z-IETD-fmk对海马CA3区的脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记阳性细胞和存活细胞的影响。③用免疫荧光和蛋白印迹检测海马半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8的表达。结果:造模过程中有2只大鼠死亡,     

电针对急性脊髓损伤后Fas和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的影响

目的：观察电针治疗对大鼠脊髓损伤后神经细胞再生修复过程中Fas和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的影响．并与甲基强的松龙进行阳性对照。 方法：实验于2003-04／2004-06在佳木斯医学院中心实验室进行。①将健康成年Wistar大鼠64只单纯随机分为模型组、电针组、甲基强的松龙组及假手术组4组（n=16），除假手术组外。其他3组大鼠采用改良的Allen’s捶击法（50g&;#183;cm）制成大鼠T10脊髓损伤模型，假手术组仅切除椎板。不损伤脊髓。②电针组在损伤后即刻取督脉上的大椎和命门两穴进行治疗，电针频率2Hz,疏密波形,强度2．5mA，以针刺处肌肉轻微抖动为宜，持续30min。甲基强的松龙组在损伤后即刻尾静脉内注射30mg／kg甲基强的松龙。模型组和假手术组不做治疗。③各组分别于术后6,24h各处死8只。应用免疫组织化学方法及图像定量分析法观察各组脊髓损伤早期Fas和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达。 结果：经补充后61只大鼠进入结果分析。①脊髓损伤后6h：电针及甲基强的松龙组Fas及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞数少于假手术组（P〈0．05）。灰度值高于假手术和模型组相（P〈0．05,0．01）。②脊髓损伤后24h：电针及甲基强的松龙组Fas及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞数少于假手术组和模型组（P〈0．05），灰度值高于假手术和模型组（P〈0．05，0．01）；但电针与甲基强的松龙组组问差异不显著（P〉0．05）。 结论：电针可使Fas及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达下调，从而抑制细胞凋亡，保护神经细胞，对损伤脊髓的修复有积极的治疗作用，其效果与甲基强的松龙相似。     

超声对软骨细胞凋亡、caspase-8和caspase-3表达的影响

背景：超声治疗能够缓解疼痛,改善膝骨关节炎患者的运动功能,但目前关于超声治疗的文献缺乏一致性。目的：进一步验证超声治疗的膝骨关节炎有效性。方法：24只兔子随机分为3组,正常组不干预;模型组兔行前交叉韧带离断诱导膝骨关节炎,不接受任何治疗;超声组兔建模后接受超声波治疗10min／次,1次／d,0．3W／cm2,1MHz,共治疗10次。采用苏木精一伊红染色进行兔关节软骨组织学观察,运用免疫印迹和RT-PCR技术检测兔软骨中的caspases3和caspases8的表达,TUNEL技术检测兔膝骨关节软骨细胞凋亡率。结果与结论：正常兔软骨组织软骨细胞呈柱状整齐的排列,模型中软骨层变薄,软骨细胞排列无序而少。超声治疗后软骨细胞重新排列,趋于整齐,细胞数增加。模型组为膝骨关节炎模型;与正常组比较,模型组和超声组改良Mankin评分较高,模型组和超声组软骨细胞凋亡指数更高,模型组高于超声组。与正常组比较,模型组和超声组caspase．3和caspase．8表达较高,超声治疗后两项指标表达下降。结果表明,超声可以改善软骨组织结构、降低caspase．3、caspase．8的表达,降低软骨细胞凋亡。提示超声治疗膝骨关节炎是有效的。     

Sequential activation of caspase-1 and caspase-3-like proteases during apoptosis in myelodysplastic syndromes

Myelodysplastic syndromes (MDS) are a group of hematopoietic disorders characterized by the concomitant presence of peripheral cytopenias and normocellular to hypercellular BM. This paradox has been proposed to be due to the presence of excessive proliferation matched by excessive intramedullary apoptosis of hematopoietic cells. When cultured in vitro MDS BM mononuclear cells (BMMC) undergo apoptosis within 4 h. We measured caspase-1-like and caspase-3-like activity in 22 MDS and 4 normal BM immediately following cell separation or after 4 h culture. When cultured in vitro, MDS BMMC demonstrated an increased apoptotic index within 4 h as measured by in situ end-labeling of fragmented DNA that was matched by a concurrent increase in caspase-3-like specific activity, and the two were significantly correlated. During the 4 h culture, a sequential activation of caspase-1-like and caspase-3-like activities was detected. Caspase-1-like specific activity was detected early and transiently at approximately 15 min, followed by a gradual increase in caspase-3-like-specific activity peaking at 2 h. When the broad-spectrum caspase inhibitor, Z-VAD.FMK, was included in the MDS BM aspirate 4 h culture, apoptosis was attenuated. We conclude that sequential activation of caspase-1-like and caspase-3-like activities may form the central biochemical pathway of apoptosis in BMMC from some MDS patients, and prevention of this process by caspase inhibitors may be of significant therapeutic value for these patients, in whom supportive care continues to be the mainstay of therapy.     

p38-MAPK signals survival by phosphorylation of caspase-8 and caspase-3 in human neutrophils

Neutrophil apoptosis occurs both in the bloodstream and in the tissue and is considered essential for the resolution of an inflammatory process. Here, we show that p38-mitogen-activated protein kinase (MAPK) associates to caspase-8 and caspase-3 during neutrophil apoptosis and that p38-MAPK activity, previously shown to be a survival signal in these primary cells, correlates with the levels of caspase-8 and caspase-3 phosphorylation. In in vitro experiments, immunoprecipitated active p38-MAPK phosphorylated and inhibited the activity of the active p20 subunits of caspase-8 and caspase-3. Phosphopeptide mapping revealed that these phosphorylations occurred on serine-364 and serine-150, respectively. Introduction of mutated (S150A), but not wild-type, TAT-tagged caspase-3 into primary neutrophils made the Fas-induced apoptotic response insensitive to p38-MAPK inhibition. Consequently, p38-MAPK can directly phosphorylate and inhibit the activities of caspase-8 and caspase-3 and thereby hinder neutrophil apoptosis, and, in so doing, regulate the inflammatory response.     

慢性高原病患者骨髓造血细胞凋亡及caspase-8和caspase-9表达研究

目的 探讨慢性高原病( CMS)患者骨髓造血细胞凋亡指数及caspase-8和caspase-9mRNA表达变化的意义.方法 选取18例CMS患者,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口标记(TUNEL)技术定量研究骨髓单个核细胞(BMMNC)凋亡指数,同时采用RT-PCR半定量方法检测BMMNC caspase-8和caspase-9 mRNA的表达.以16例骨科单纯骨折患者为对照.结果 ①CMS患者BMMNC凋亡指数[(8.51±3.35)％]明显低于对照组[(16.00±4.28)％](P＜0.01).②CMS患者caspase-8和caspase-9 mRNA的相对表达水平分别为0.28 ±0.07和0.23±0.08,对照组分别为0.45±0.09和0.41±0.09,CMS组均明显低于对照组(P值均＜0.01).③CMS患者caspase-8和caspase-9mRNA表达水平与血红蛋白浓度呈负相关(r值分别为-0.520及-0.610,P值均＜0.05),与凋亡指数均未发现明显相关性(P值均＞0.05),CMS患者凋亡指数与血红蛋白浓度呈负相关(r=-0.890,P＜0.01).结论 CMS患者BMMNC凋亡指数及caspase-8和caspase-9表达水平均降低,提示CMS患者骨髓造血细胞凋亡减少,caspase-8和caspase-9均参与CMS骨髓造血细胞凋亡异常机制.     

新辅助化疗中凋亡效应因子caspase-7、caspase-3及凋亡抑制因子survivin关系初探

目的探讨凋亡效应因子caspase-7、caspase-3及凋亡抑制因子survivin之同的相互关系。方法免疫组织化学法检测17例乳腺癌新辅助化疗标本中caspase-7、caspase-3、sunrivin的表达，统计分析采用Fisher确切概率法、Spearman检验。结果化疗前后三者阳性率比较，仅caspase-7差异有统计学意义（P=0．038）；caspase-3、survivin差异无统计学意义（均P〉0．05）。化疗前三者表达强度未见相关性（均P〉0．05）。化疗后表达强度caspase-3与caspase-7、survivin相关，P值分别为0．009、0．000；suvivin与caspasc-7无相关性。化疗前后三者表达强度变化比较，仅caspase-7与caspase-3相关（P=0．035）；余未见相关性。结论caspase-7、caspsse-3表达相关，但caspase-7可能不依赖caspase-3而表达，survivin与caspase-7、caspase-3之间无相关性，也不能抑制后两者的表达，三者关系尚需进一步研究。     

Src inhibition enhances paclitaxel cytotoxicity in ovarian cancer cells by caspase-9-independent activation of caspase-3

Src tyrosine kinase has been found to be overexpressed and activated in a high proportion of ovarian cancers and ovarian cancer cell lines. Furthermore, Src activation is associated with activation of growth and survival signaling pathways. The present study was conducted in order to determine the effects of Src inhibition on ovarian cancer cell survival in response to chemotherapeutic agents. Inhibition of Src, either pharmacologically or through expression of a Src dominant-negative fusion construct, enhanced the cytotoxicity of two different classes of chemotherapeutics: paclitaxel and cisplatinum, in both mouse and human ovarian cancer cells. Interestingly, Src inhibition also restored sensitivity to drug-resistant ovarian cancer cells. The increased cytotoxicity in response to Src inhibition was associated with a large increase in processing and activation of caspase-3. The activation of caspase-3 seems to be independent of cytochrome c release and caspase-9 activation. The present study indicates that Src tyrosine kinase may provide an important target for small molecule inhibition in ovarian cancer.     

补肾健脾方干预去势大鼠骨骼肌caspase-3和caspase-8的表达

背景:骨骼肌与骨质疏松症关系密切,导致其衰退的主要原因是细胞的凋亡,这种凋亡可能是Caspase 家族蛋白所介导的.目的:探讨补肾健脾方对去势大鼠骨骼肌caspase-3 和 caspase-8 调控作用.方法:SD 大鼠48 只等随机分为对照组、模型组、中药组、西药组,后3 组大鼠摘除双侧卵巢建立骨质疏松模型,对照组仅切除周围少量脂肪组织.造模2 周后,中药组给予补肾健脾方(2.979 g/kg)灌胃,西药组给予戊酸雌二醇片(0.104 mg/kg)灌胃,模型组和对照组给予蒸馏水灌胃,1 次/d.结果与结论:①干预12 周后,双能X 线骨密度仪测量发现,相比于对照组,模型组大鼠左侧股骨的骨密度值和骨矿含量均明显降低(P < 0.01);而中药组和西药组的骨密度值均高于模型组(P < 0.05),且2 组骨密度值和骨矿含量接近(P > 0.05).②酶标免疫分析显示,与对照组相比,模型组骨骼肌中Caspase-3 和 Caspase-8 表达水平明显上升(P < 0.05).中药能显著降低大鼠骨骼肌中Caspase-3 的表达水平(P < 0.05),而西药能显著减低Caspase-8 表达水平(P < 0.05).③说明补肾健脾方对卵巢切除所致的骨质疏松症有明显的治疗作用,能明显提高骨密度,而且能显著减低Caspase-3 的水平,但不能显著减低Caspase-8 水平,显示补肾健脾方不是通过死亡受体途径去抑制细胞凋亡的.     

补肾健脾方干预去势大鼠骨骼肌caspase-3和caspase-8的表达

背景：骨骼肌与骨质疏松症关系密切,导致其衰退的主要原因是细胞的凋亡,这种凋亡可能是Caspase家族蛋白所介导的。目的：探讨补肾健脾方对去势大鼠骨骼肌caspase-3和caspase-8调控作用。方法：SD大鼠48只等随机分为对照组、模型组、中药组、西药组,后3组大鼠摘除双侧卵巢建立骨质疏松模型,对照组仅切除周围少量脂肪组织。造模2周后,中药组给予补肾健脾方（2.979g/kg）灌胃,西药组给予戊酸雌二醇片（0.104mg/kg）灌胃,模型组和对照组给予蒸馏水灌胃,1次/d。结果与结论：①干预12周后,双能X线骨密度仪测量发现,相比于对照组,模型组大鼠左侧股骨的骨密度值和骨矿含量均明显降低（P〈0.01）;而中药组和西药组的骨密度值均高于模型组（P〈0.05）,且2组骨密度值和骨矿含量接近（P〉0.05）。②酶标免疫分析显示,与对照组相比,模型组骨骼肌中Caspase-3和Caspase-8表达水平明显上升（P〈0.05）。中药能显著降低大鼠骨骼肌中Caspase-3的表达水平（P〈0.05）,而西药能显著减低Caspase-8表达水平（P〈0.05）。③说明补肾健脾方对卵巢切除所致的骨质疏松症有明显的治疗作用,能明显提高骨密度,而且能显著减低Caspase-3的水平,但不能显著减低Caspase-8水平,显示补肾健脾方不是通过死亡受体途径去抑制细胞凋亡的。     

Unshackling caspase-7 for cancer therapy

Numerous solid tumors and hematologic malignancies acquire resistance to apoptosis-inducing chemotherapeutic drugs by downregulating the key effector caspase-3. These cells rely on caspase-7 to execute the apoptotic program, yet binding with XIAP constitutively inhibits active caspase-7 (p19/p12-CASP7). In this issue, Lin et al. describe how a newly synthesized drug is able to disrupt the XIAP:p19/p12-CASP7 complex and induce apoptosis in caspase-3–deficient cancer cells in vitro and in vivo. As this compound appears to exhibit minimal toxicity on normal tissues, it may represent a promising therapeutic agent to help treat caspase-3–deficient tumors.     

不同宫颈组织中caspase-3基因的表达及其临床意义

本研究采用免疫组化方法 (SP法 )对不同宫颈组织中cas pase -3基因的表达进行检测 ,并分析其相关的临床指标 ,探讨caspase -3在不同宫颈组织中表达的规律及其临床意义。1　材料和方法1 1　一般资料 :本研究全部病例均为武汉协和医院妇产科自 1996年 1月至 2 0 0 1年 12月住院患