濒危紫皮石斛叶绿体基因组结构及系统发育分析

目的 解析紫皮石斛Dendrobium devonianum叶绿体基因组特征，并探讨石斛属系统发育关系。方法 采用Illumina技术对紫皮石斛进行测序，对其叶绿体基因组进行组装、注释和分析，并基于共有编码基因序列构建系统发育树。结果 紫皮石斛叶绿体基因大小为146 493 bp，总GC含量为37.4%；其大单拷贝区、小单拷贝区长度分别为84 932、13 036 bp，反向互补重复区为24 263 bp；共编码118个基因，包括72个蛋白质编码基因，38个tRNA基因和8个rRNA基因。密码子偏好分析表明，亮氨酸是紫皮石斛叶绿体基因组中使用频次最高的氨基酸。系统发育分析表明，紫皮石斛未形成单系，与兜唇石斛D.aphyllum构成姊妹关系；瘦轴组的重唇石斛D.hercoglossum和钩状石斛D.aduncum与石斛组其他物种聚为一支。结论 紫皮石斛叶绿体基因组呈典型四分体结构，其与兜唇石斛亲缘关系最近；瘦轴组的重唇石斛和钩状石斛与石斛组亲缘关系更近，并入石斛组更合理。     

兜唇石斛多糖提取及脱蛋白工艺研究

目的 研究兜唇石斛多糖提取及脱蛋白的制备工艺.方法 采用正交实验设计制备不同提取条件多糖溶液,苯酚-硫酸法测定溶液中多糖含量,光密度差值法测定蛋白含量.结果 兜唇石斛多糖提取的最佳条件,提取温度100℃,提取时间2 h,加水量200 ml,醇析浓度为80%,醇析时间30 h,多糖脱蛋白的最佳条件,样品/萃取剂(V/V)为4∶1,氯仿/正丁醇(V/V)为4∶1,萃取时间30 min.结论 不同提取及萃取条件下,兜唇石斛多糖提取及脱蛋白测定结果存在明显差异.     

兜唇石斛的化学成分研究

目的：研究兰科石斛属植物兜唇石斛Dendrobium aphyllum全草的化学成分。方法：应用多种柱色谱及重结晶方法进行分离纯化，根据理化性质和波谱数据鉴定化合物结构。结果：分离并鉴定了8个化合物,其中黄酮类化合物3个，分别为4′-甲氧基苜蓿素(1)，苜蓿素(2)，7,3′,5′-tri-O-methyltricetin(3)；酚类化合物丁香酸(4)；木脂素类化合物丁香脂素(5)；其余化合物为阿洛醇(6)，蔗糖(7)和icariside D₂(8)。结论：化合物1～3，6～8为首次从该属植物中分离得到,其他化合物均为首次从该植物中分离得到。     

不同真菌对2种药用石斛种子共生萌发的效应

兰科石斛属植物兜唇石斛Dendrobium aphyllum和齿瓣石斛D.devonianum均为传统中药材,有着极高的药用价值。研究利用3种从不同兰科植物中分离得到的内生真菌在不同光照条件下与这2种石斛植物种子在树叶、松树皮和椰糠混合基质上进行共生萌发试验。研究结果表明,胶膜菌属Tulasnella FDaI7菌株及瘤菌根菌属Epulorhiza FDd1菌株分别能有效地促进兜唇石斛和齿瓣石斛种子的萌发及幼苗建成,石斛与真菌存在共生专一性。共生培养60 d,接菌FDaI7的兜唇石斛种子,原球茎或幼苗形成率分别为14.46%,12.07%;接菌FDd1的齿瓣石斛种子,二者形成率分别为44.36%,42.91%。在2种光照条件下,已形成的原球茎均能够进一步发育为幼苗,而持续黑暗条件会导致幼苗白化或畸形。研究结果为2种石斛的野外回归奠定了理论基础,也为这2种药用石斛人工仿生态栽培的种苗扩繁提供了新的方法。     

兜唇石斛化学成分的研究

目的 研究兜唇石斛Dendrobium aphyllum(Roxb.) C. E. C. Fisch.的化学成分。方法 兜唇石斛水提取物采用硅胶、ODS、MCI、Sephadex LH-20、制备TLC、制备HPLC进行分离纯化，根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。结果 从中分离得到17个化合物，分别鉴定为芦荟大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷(1)、大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷(2)、大黄酚-1-O-β-D-葡萄糖苷(3)、咖啡因(4)、大黄酚(5)、大黄素甲醚(6)、大黄素(7)、胸腺嘧啶脱氧核苷(8)、2-苯乙醇-β-D-葡萄糖苷(9)、对羟基苯甲酸(10)、原儿茶酸(11)、对羟基桂皮酸(12)、香草酸(13)、对羟基苯甲醛(14)、丁香醛(15)、松柏醛(16)、间苯三酚三甲醚(17)。结论 化合物1～2、4、9为首次从石斛属中分离得到。     

束花石斛及其相似种的DNA分子鉴别

目的 :探讨束花石斛与同属相似种 :玫瑰石斛、喇叭唇石斛、报春石斛、兜唇石斛等植物及药材鉴别的DNA分子标记。方法 :对束花石斛及其相似种进行rDNAITS区序列比较研究。结果 :尽管束花石斛及其相似种的外部形态差异较小 ,但在rDNAITS序列上却存在着显著而稳定的差异。在rDNAITS区域中 ,作者共挑选了15个碱基位点用作鉴别束花石斛及其相似种的DNA标记。结论 :根据rDNAITS区碱基序列差异 ,能准确鉴别束花石斛及其相似种植物及药材。     

兜唇石斛酚类化学成分研究

目的：对兰科石斛属植物兜唇石斛Dendrobium aphyllum的酚类化学成分进行研究。方法：采用硅胶、凝胶及反相柱色谱和重结晶等技术进行分离纯化，并根据理化性质和波谱数据并参考文献鉴定化合物结构。结果：分离并鉴定了11个芳香族类成分，其中9个为类化合物：4，4′-二羟基-3，3′，5-二甲氧基联苄(1)，3′，4-二羟基-3，5′-二甲氧基联苄(2)，3，3′-二羟基-5-甲氧基联苄(3)，3，4，5-三羟基-3-甲氧基联苄(4)，3，5，4′-三羟基联苄(5)，3，5-二甲氧基-4，4′-二羟基-联苄(6)，2，5-二羟基-4-甲氧基菲(7)，2，4，7-三羟基-9，10-二氢菲(8)和2，5-二羟基-4-甲氧基-9，10-二氢菲(hircinol，9)和2个苯乙烷类衍生物：对羟基苯乙醇葡萄糖苷(10)和对羟基苯乙酸(11)。结论：以上化合物均为首次从该种植物中分离得到，化合物10，11为首次从石斛属分离得到。     

叠鞘石斛中联苄类成分的定性定量分析

 目的建立叠鞘石斛中联苄类成分的定性、定量分析方法。方法运用薄层色谱法对叠鞘石斛中联苄类成分石斛酚(gigantol)和杓唇石斛素(moscatilin)进行定性分析,采用高效液相色谱法测定石斛酚的含量,以Shim-pack CLC-ODS柱为固定相,流动相乙腈-0.2%甲酸(35∶65),检测波长280 nm,柱温25℃。结果石斛酚在0.196～12.54μg内峰面积与进样量呈良好的线性,r=0.999 9;平均回收率100.6%;RSD3.01%。结论通过10批不同来源的叠鞘石斛的鉴别和含量测定,证明方法灵敏,准确可靠,重复性好。在不同采收期的叠鞘石斛中,石斛酚的含量在春季4,5月份和秋季10,11月份相对高于其他月份。     

尖刀唇石斛和翅梗石斛叶绿体全基因组分析

目的 测定尖刀唇石斛Dendrobium heterocarpum和翅梗石斛D. trigonopus叶绿体基因组,分析其序列特征并鉴定石斛属Dendrobium植物物种间亲缘关系。方法 利用Illumina Hisep 2 500测序平台对尖刀唇石斛和翅梗石斛进行二代测序,经组装、注释后得到2条完整的叶绿体全基因组序列,采用生物信息学方法分析其序列结构及石斛属的系统发育关系。结果尖刀唇石斛的叶绿体全基因组总长为159 786 bp,总GC含量为37.2%,共注释得到131个基因,包括88个蛋白编码基因、37个t RNA基因和6个rRNA基因;翅梗石斛的叶绿体全基因组总长为159652bp,总GC含量为37.1%,共注释得到131个基因,包括88个蛋白编码基因、37个tRNA基因和6个rRNA基因。尖刀唇石斛和翅梗石斛分别检测到112和127个简单重复序列（SSR）,二者编码亮氨酸的密码子数量最多,编码色氨酸的密码子数量最少。系统发育树显示,尖刀唇石斛、反瓣石斛D. ellipsophyllum、翅梗石斛、梳唇石斛D. strongylanthum和长距石斛D. longicornu聚...     

兜唇石斛的酚类化学成分研究

目的研究石斛属植物兜唇石斛Dendrobium aphyllum茎的化学成分。方法采用硅胶、凝胶、MCI、中压制备色谱(MPLC)和高效液相半制备色谱(semi-HPLC)等方法进行分离纯化,根据理化性质、核磁共振谱及质谱等方法鉴定化合物结构。结果从兜唇石斛的90%乙醇提取物中分离得到10个化合物,分别鉴定为4,7-二羟基-2-甲氧基-9,10-二氢菲(1)、2,4-二羟基-7-甲氧基-9,10-二氢菲(2)、2,5,7,9-四羟基-4-甲氧基-9,10-二氢菲(3)、4,7,9-三羟基-5-甲氧基-9,10-二氢菲(4)、松脂醇(5)、丁香酚-β-D-葡萄糖苷(6)、反式阿魏酸(7)、正十二烷醇(8)、β-谷甾醇(9)、β-胡萝卜苷(10)。结论化合物1~2、5~8为首次从该属植物中分离得到,化合物1~10均为首次在该植物中分离得到。     

鲜铁皮石斛HPLC特征图谱研究

目的研究不同产地鲜铁皮石斛HPLC特征图谱。方法采用Zorbax SB C18色谱柱;流动相为乙腈-0.2%的甲酸溶液梯度洗脱;检测波长为270 nm;柱温为35℃;体积流量为1.0 mL/min。结果鲜铁皮石斛标示出35个特征共有峰,10批样品的相似度为0.900～0.956。主要特征峰紫外光谱可分成四类,第Ⅰ类在202、265 nm附近有最大吸收;第Ⅱ类在207、270 nm附近有最大吸收;第Ⅲ类在200、220及280 nm附近有最大吸收;第Ⅳ类在220、270及340 nm附近有最大吸收,为黄酮类成分。结论方法准确可靠,重复性好。     

铁皮石斛叶中黄酮碳苷类成分的高效液相指纹图谱及指标成分的含量测定

 目的 建立铁皮石斛叶中黄酮碳苷类成分HPLC指纹图谱,并同时测定主要成分芹菜素-6-C-α-L-阿拉伯糖-8-C-β-D-木糖苷的含量,为科学评价和有效控制其质量提供依据。方法 采用XB C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,甲醇-0.4%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长335 nm。收集了14批铁皮石斛叶和3批同属不同种石斛叶进行测定,用国家药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价软件2004AB”对其质量进行评价,同时对黄酮碳苷类成分进行主成分分析。结果 建立了铁皮石斛叶黄酮碳苷类成分HPLC指纹图谱,标定了9个共有色谱峰,并采用对照品指认了8个色谱峰。3批同属不同种石斛叶与铁皮石斛叶对照图谱明显不同。主成分分析结果表明,黄酮二碳糖苷类成分中芹菜素-6-C-α-L-阿拉伯糖-8-C-β-D-木糖苷对其质量影响最为显著。结论 所建立的铁皮石斛叶黄酮碳苷类成分指纹图谱特征性强,方法简便,结合主要成分含量测定可更好地控制其质量,对铁皮石斛叶的鉴定及质量控制具有指导意义和参考价值。     

密花石斛的HPLC/UV/MS指纹图谱研究

目的 采用HPLC／UV／MS法对密花石斛进行指纹图谱研究。方法 采用Agilent Zorbax SB—C18柱；甲醇和水为流动相进行梯度洗脱；流速为1．0mL／min。结果 得到分离度较好的密花石斛HPLC／UV指纹图谱，标示了9个共有峰，并用HPLC／MS对其部分色谱峰进行了初步定性。结论 该方法可用于密花石斛指纹图谱的测定，并为其全面质量控制提供参考。     

HPLC法测定流苏石斛精制饮片中石斛酚的含量

目的：建立流苏石斛精制饮片中的石斛酚的含量测定方法。方法：采用Hypersil–C18（200mm×4.6mm,5μm）为色谱柱,流动相为乙腈-0.05%三氟乙酸（梯度洗脱）,流速为1.0m L/min,检测波长为230nm。结果：石斛酚进样量在0.4~4.0μg范围内有良好的线性关系,r=0.9994,平均回收率99.65%,RSD为1.87%。结论：所建立方法操作简便、准确、可靠、重复性好,可用于流苏石斛精制饮片中石斛酚的含量测定。     

RP—HPLC法测定铁皮枫斗颗粒中柚皮素含量

目的：建立一种高效液相色谱法测定铁皮枫斗颗粒中柚皮素含量的方法。方法：色谱柱UltimateXB—C18（250mm×4．6mm,5μm）;流动相为0．2％H3PO4的水溶液与甲醇采用梯度洗脱;流速为1．0mL·min^-1;检测波长为280nm;柱温30℃。结果：柚皮素的回归方程为Y=3227．6X-1．7272（r=1．000）,线性范围：0．005～0．075μg,加样回收率：100．82％（RSD=1．06％,n=6）。结论：该法准确,阴性制剂无干扰,精密度高,重复性好。可用于铁皮枫斗颗粒中柚皮素的含量测定,并为其它铁皮枫斗相关制剂质量检测提供参考。     

石斛及石斛合剂对糖尿病模型大鼠糖脂代谢的调整作用

为研究石斛及石斛合剂治疗糖尿病的机理，Wistar大鼠按体重分层随机法分为正常组和造模组，造模组按体重顺序编号，奇数鼠采用高脂高糖饲养1个月后腹腔注射低剂量的STZ造模，分别以优降糖、降糖灵治疗；偶数鼠用高脂高糖饲养1个月，先予石斛，石斛合剂低、中、高剂量分别灌胃2d后。以上法造模，再予石斛、石斛合剂治疗。1个月后测定各组动物糖脂代谢指标并行胰腺组织病理检查。结果：石斛及石斛合剂具有显著降低造模大鼠的血糖、三酰甘油、胆固醇、糖化血红蛋白，综合作用优于两西药对照组；低、中剂量石斛合剂提高胰岛素含量；石斛、高剂量石斛合剂增加外周组织胰岛素敏感性；石斛合剂各组可显著改善造模大鼠胰岛组织结构。结论：保护和修复胰岛组织结构，促进胰岛素分泌，增加外周组织对胰岛素的敏感性，可能是石斛及其制列治疗糖尿病的机理之一。     

金钗石斛及其提取物的红外光谱整体解析

[目的]采用红外光谱技术对金钗石斛原药材及两种提取物所含化学成分的红外谱图进行整体分析。[方法]采用傅里叶红外光谱法对金钗石斛原药材、水提醇沉提取物、无水乙醇提取物进行结构分析及鉴别。[结果]金钗石斛原药材一维红外光谱图反映出2 923 cm~(-1)、2 855 cm~(-1)、1 738 cm~(-1)、1 155 cm~(-1)、1 081 cm~(-1)、1 019 cm~(-1)等特征峰,推测金钗石斛中含有脂类、芳香类和淀粉类成分。原药材二阶导数谱分析进一步验证了以上结果,同时出现了1 318 cm~(-1)附近以及783 cm~(-1)附近的草酸钙吸收峰。金钗石斛水提醇沉提取物和无水乙醇提取物的红外谱图中均出现了脂类、芳香类和糖类的特征峰,且与原药材相比峰数、峰强都有改变。金钗石斛水提醇沉物一维和二阶导数谱中均出现了较强的淀粉特征峰,说明水提物中主要是水溶性多糖,且多糖主要以淀粉形式存在。而无水乙醇提取物谱图更清楚的出现了脂类和芳香类的相关特征峰,且峰数与峰形和油类标准品比对,重叠性高。[结论]金钗石斛中主要含有多糖类以及脂肪类物质,多糖主要是以淀粉存在,且金钗石斛中的脂肪类含量较高。不同的提取溶剂所出现的谱图存在很大的差异性,完美诠释了"相似相溶"原则。红外光谱适合于金钗石斛的快速鉴别及质量评价与控制。     

金钗石斛化学成分的研究

 目的　对金钗石斛 (Dendrobium nobile Lindl)茎的化学成分进行研究。方法　使用硅胶柱色谱进行分离纯化,理化性质和光谱分析鉴定结构。结果　分离并鉴定了5个单体化合物及2个系列混合物。分别为海松二烯,3-甲氧基-4-羟基反式肉桂酸二十二烷酯,3-甲氧基-4-羟基反式肉桂酸二十四烷酯,豆甾醇,对羟基顺式肉桂酸三十烷酯,对羟基反式肉桂酸直链烷酯的4个系列化合物的混合物,直链烷醇的5个系列化合物的混合物。结论　以上成分均为首次从该种植物中分得,其中海松二烯为首次从该属植物中分得。