联合应用全反式维甲酸与单纯疱疹病毒腺苷激酶基因对髓母细胞瘤的协同杀伤作用研究

目的 评估全反式维甲酸(ATRA)联合单纯疱疹病毒腺苷激酶(HSV-tk)基因对髓母细胞瘤细胞系Daoy的杀伤作用.方法 观察不同浓度ATRA对Daoy细胞生长的抑制作用;HSV-tk基因稳定转染人的髓母细胞瘤细胞系Daoy,获得Daoy-tk细胞;Daoy-tk细胞与Daoy细胞按不同比例混合,给予不同浓度的更昔洛韦(GCV)和一定浓度的ATRA,7d后应用噻唑蓝(MTT)法测定细胞生存率.结果 ATRA在0.5～1 μmol/L时即可对Daoy细胞生长产生抑制作用;Daoy-tk与Daoy细胞比例达到1:4时仍有明显的抗肿瘤作用,联合应用1 μmol/L的ATRA后能显著提高HSV-tk基因对Daoy细胞的杀伤率.结论 ATRA与HSV-tk/GCV系统联合应用,能增强对人的髓母细胞瘤的杀伤作用.     

蒿甲醚对胰腺肿瘤细胞的抑制作用

目的 观察蒿甲醚(ART)在体外对人胰腺癌SW-1990细胞的杀伤作用和对细胞增殖和凋亡的影响,以及在体内对荷瘤裸鼠移植瘤的抑制作用.方法 采用MTT法检测ART对SW-1990细胞的杀伤作用;采用流式细胞仪检测ART对SW-1990细胞周期和凋亡的影响.建立人胰腺癌裸鼠移植瘤模型,通过测量裸鼠体质量、移植瘤瘤径和瘤质量,计算肿瘤体积和抑瘤率,观察ART在体内的抗肿瘤活性.结果 MTT结果显示,ART对SW-1990细胞的杀伤作用与时间-剂量呈正相关 (P《0.05);流式细胞仪检测显示,ART使SW-1990细胞阻滞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡;荷瘤裸鼠体内实验显示,中、高剂量的ART(4、8 mg)对裸鼠移植瘤的生长抑制效果显著(P《0.05),抑瘤率分别为48.10%和53.51%.结论 ART在体外及荷瘤裸鼠体内对SW-1990细胞有明显的抑制作用;其抑制作用与阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡有关.     

苦参碱对卵巢癌细胞生长及其尿型纤溶酶原激活因子和抑制因子表达的影响

目的:探讨苦参碱对卵巢癌细胞生长及其尿型纤溶酶原激活因子(uPA)和1型抑制因子(PAI-1)表达的影响.方法:采用四唑盐(MTT)比色法测定不同浓度苦参碱对卵巢上皮癌SKOV3细胞的抑制作用,采用HE染色法及免疫细胞化学法观察在不同浓度苦参碱作用前后SKOV3细胞形态学改变及其uPA、PAI-1的表达情况.采用细胞计数法观察在不同浓度苦参碱作用下SKOV3细胞的生长曲线变化,采用软琼脂集落观察在不同浓度苦参碱作用下对SKOV3细胞集落形成的影响.结果:①苦参碱对卵巢癌SKOV3细胞有明显的抑制作用.随苦参碱浓度升高,其抑制作用增强,两者呈正相关关系(r=0.965,P＜0.05);②苦参碱对SKOV3细胞的uPA、PAI-1表达有下调作用;③苦参碱对卵巢癌SKOV3细胞的生长曲线及集落形成均有明显的抑制作用.结论:苦参碱对体外培养的卵巢癌SKOV3细胞具有较强抑制作用并具有杀伤肿瘤干细胞的能力,苦参碱的抗肿瘤机制可能通过细胞毒作用、诱导细胞凋亡等多种机制参与,并可能与下调uPA、PAI-1蛋白的表达有关.     

双融膜嗜肿瘤病毒对肺腺癌细胞的杀伤效果研究

目的:构建双融膜嗜肿瘤病毒,并观察其杀伤肺癌细胞的效果.方法:将长臂猿白血病病毒融膜糖蛋白基因(Fusogenic glycoprotein gene of gibbon ape leukemia virus,GALV.fus)构建入嗜肿瘤Ⅰ型单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus 1,HSV-1)中,使其成为具有双重融细胞膜作用的嗜肿瘤病毒(Doubly fusogenic oncolytic herpes simplex virus,Synco-2D).与单一的重组嗜肿瘤病毒HSV-1比较,在显微镜下观察两种嗜肿瘤病毒融细胞现象,并观察其体外杀伤肺腺癌细胞A549的效率及体内对肿瘤生长的抑制作用.结果:显微镜下发现,双融膜病毒融细胞作用更明显,大量多核巨细胞形成,细胞结构模糊,细胞溶解.体外实验显示,两种病毒都有明显的杀死肿瘤细胞效果,双融膜嗜肿瘤病毒杀伤肿瘤细胞率较单一的HSV-1明显增强.体内动物实验显示双融膜嗜肿瘤病毒对肿瘤组织的生长有显著的抑制作用.结论:将融膜糖蛋白基因GALV.fus构建入嗜肿瘤Ⅰ型单纯疱疹病毒中,可以显著增强病毒杀伤肺腺癌细胞效力.     

蒿甲醚对胃癌细胞和胰腺癌细胞的体外杀伤作用

目的 观察蒿甲醚(ART)在体外对胃癌细胞株和胰腺癌细胞株的杀伤作用以及对细胞增殖和细胞凋亡的影响.方法 选择人胃癌细胞株SGC-7901和MKN-45及胰腺癌细胞株SW-1990和BXPC-3,采用MTT法检测不同浓度ART对不同肿瘤细胞的抑制作用;应用流式细胞仪检测ART对肿瘤细胞细胞周期和细胞凋亡的影响.结果 MTT结果显示ART对各株肿瘤细胞均具有显著的杀伤作用(P<0.05),且其细胞毒作用与时间-剂量呈正相关(P<0.05);流式细胞仪检测显示,ART使各株肿瘤细胞阻滞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡.结论 ART在体外对SGC-7901、MKN-45、SW-1990、BXPC-3细胞株有明显的细胞毒作用,且具有时间-剂量效应关系;其抑制作用与阻滞细胞周期和诱导肿瘤细胞凋亡有关.     

黄芪总提取物促进PBMC对肝癌细胞的体外杀伤作用

目的 观察黄芪总提取物(TAE)与人外周血单个核细胞(PBMC)联用对肝癌细胞株BEl-7402的体外杀伤作用.方法 MTT法及流式细胞术分别检测TAE与PBMC在单独、联合应用情况下对BEL-7402细胞的杀伤活性,Burgi修正公式评价药物联合应用对细胞杀伤效果是否具有协同作用,ELISA法检测TAE对PBMC分泌IFN-γ、TNF-α 细胞因子的影响.结果 TAE与PBMC联用对肝癌细胞BEl-7402具有协同杀伤作用.TAE预先与PBMC孵育后两者协同杀伤作用明显增强.TAE可以刺激PBMC分泌IFN-γ、TNF-α细胞因子.结论 TAE可以促进PBMC对肝癌细胞的体外杀伤能力,二者联用具有协同杀伤作用,其作用机制可能是TAE刺激PBMC分泌IFN-γ和TNF-α以增强免疫杀伤能力.     

红景天酪醇对人宫颈癌细胞增殖的抑制作用

目的 研究红景天酪醇对体外培养的人宫颈癌Hela细胞的抑制作用.方法 采用集落形成实验和MTT实验研究红景天酪醇对体外培养Hela细胞的杀伤作用.结果 红景天酪醇明显影响Hela细胞的集落形成,抑制Hela细胞的活性和功能状态.结论 红景天酪醇对Hela细胞的增殖具有明显的抑制作用,提示红景天酪醇可能对宫颈癌具有一定的防治作用.     

固本活血解毒法治疗原发性肝癌的实验研究

目的:探讨固本活血解毒法组方的纯中药制剂木回春片治疗原发性肝癌的作用机制.方法:动物实验观察木回春片对肝癌Hep-A-22荷瘤小鼠的抑瘤作用、对肿瘤细胞株细胞杀伤作用、对QGY-7703人肝癌细胞DNA合成的抑制作用及促进小鼠ConA反应及产生IL-2样物质的实验观察.结果:该制剂对延长患者生存期有积极影响,对患者生活质量及症状有显著改善.该药对实验小鼠Hep-A-22肝癌有明显的生长抑制作用(P＜0.01);对人肝癌细胞株QGY-7703细胞和人肺癌细胞株SPC-A-1细胞有明显生长抑制作用,且与药剂量呈正相关;对QGY-7703细胞DNA合成抑制作用显著(P＜0.01);其促进小鼠脾细胞对ConA的反应,并促进脾细胞产生IL-2样物质.结论:木回春片具有固本、活血、解毒作用,可以提高机体免疫功能,抑制肿瘤细胞生长,杀伤癌瘤细胞,从而提高患者生存质量,延长存活期.     

可溶性HLA-G1抑制人自然杀伤细胞NK92 对猪内皮细胞PED的黏附

目的 研究可溶性HLA-G1(HLA-G5)对人自然杀伤细胞(NK细胞)黏附到猪血管内皮细胞(PED)的抑制作用,从而降低人NK细胞对猪血管内皮细胞杀伤杀伤活性.方法 利用核转染技术将pcDNA3-HLA-G5转入LCL721.221细胞株.以RT-PCR、Dot-ELISA技术分别在基因水平和蛋白水平检测HLA-G5的表达;以人类NK细胞系(NK92)效应细胞,猪内皮细胞系(PED)为靶细胞,检测NK92在静止和流动状态下对PED的黏附作用;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测HLA-G5抑制NK细胞的杀伤活性.结果 与未加入HLA-G5的对照组相比,NK92在静止和流动状态下对PED的黏附功能明显降低(P＜0.01),且对HLA-G5组PED的杀伤效率均有明显下降(P＜0.01).结论 HLA-G5可以通过抑制NK92对PED的黏附功能,来减轻NK92对PED的杀伤作用.     

Screening of granulocytes with cancer killing activity and their in vitro anti-tumor effects

目的 探索具有肿瘤杀伤活性(CKA)粒细胞的筛选方法,并对其体外抑瘤效应进行初步研究.方法 (1)收集健康志愿者外周抗凝全血21份,分离粒细胞,与人肺癌A549细胞共培养,通过检测肿瘤细胞增殖活性筛选出CKA粒细胞.(2)将筛选得到的CKA粒细胞作用于不同种类的肿瘤细胞,采用CCK-8法检测肿瘤细胞活性,双染法检测肿瘤细胞凋亡发生情况.(3)分别采用直接接触、Transwell共培养、条件培养液等共培养细胞方式,观察不同处理方式对CKA粒细胞抑制肿瘤细胞活性的影响.结果 (1)有6株粒细胞克隆对A549细胞活性具有明显的抑制作用,将其中作用最显著的克隆3标记为CKA粒细胞.(2)CKA粒细胞不仅对人肺腺癌细胞A549、人肝癌细胞HepG2和人宫颈癌细胞HeLa生长活性有明显抑制作用,且能促进这3种细胞的凋亡.(3)3种处理方式的抑制效率比较;直接接触＞Transwell＞条件培养.结论 CKA粒细胞对某些类型的肿瘤细胞活性具有明显的抑制作用;CKA粒细胞对肿瘤的杀伤作用可能与其与肿瘤的接触方式有关.     

Experimental studies on the antitumor activity of glioma-infiltrating lymphocytes against autologous glioma]

In the present study, antitumor activity of glioma-infiltrating lymphocytes (GILs) was compared to that of lymphokine-activated killer (LAK) cells. Results suggested that killing activity of GILs against autologous glioma cells was significantly higher than that of LAK cells (P less than 0.05), but their activity against allogeneic glioma cells was not different from that of LAK cells (P greater than 0.05). Analysis of cell surface phenotypes showed that CD4+ cells were a main portion of LAK cells, and CD8+ were predominant in the GILs. In the beginning, growth of GILs was slower than that of LAK cells. As time went on, generation of GILs was faster than that of LAK cells. The results suggested that GILs were superior to LAK cells for adoptive immunotherapy in patients with brain glioma.     

肿瘤化疗药物对人LAK细胞活性的影响

用四氮唑（ＭＴＴ）法分别检测顺氨氯铂（ＰＤＤ），丝裂霉素－Ｃ（ＭＭＣ）、阿霉素（ＡＭＤ）、氟尿嘧啶（５－Ｆｕ），阿糖胞苷（Ａｒａ－ｃ），长春新碱（ＶＣＲ）对ＩＬ－２诱导人外周血ＬＡＫ细胞活性的影响，及其与ＬＡＫ细胞对胃癌细胞的相加杀伤作用。①ＭＭＣ、ＡＤＭ、５－Ｆｕ、ＶＣＲ对ＩＬ－２诱导ＬＡＫ细胞活性稍有下降，Ａｒａ－Ｃ能抑制ＩＬ－２诱导ＬＡＫ细胞活性，ＰＤＤ对ＩＬ－２诱导ＬＡＫ细胞活性明显提高。     

Th－LAK细胞与rIL－2联合治疗恶性骨肿瘤

应用胎儿胸腺淋巴细胞诱导制备Ｔｈ－ＬＡＫ细胞，与ｒＩＬ－２联合治疗中晚期恶性骨肿瘤７例。治疗前后动态检测外周血淋巴细胞、Ｔ淋巴细胞亚群、ＮＫ细胞活性。结果，患者的一般症状和免疫状态明显改善，化疗药物的毒副作用降低，病情缓解，无明显毒副反应。     

不同胎龄胎儿的LAK活性

目前,LAK疗法作为一种新的抗肿瘤方法受到广泛关注。但是,现行LAK疗法的LAK前体细胞来自病人自体外周血,不仅给病人带来很大负担,而且导致一些副作用,所以病人常常难以承受。这促使我们寻找一条省时、方便、经济而且安全的途径。现已证     

抗肿瘤多价转移因子对肿瘤患者NK及LAK活性的影响

目的：制备并观察抗肿瘤多价转移因子（M－TF）对肿瘤患者NK及LAK活性的影响。方法：分别用肝癌细胞悬液,胃癌细胞悬液免疫山羊,取其淋巴组织均匀浆透析法制备肝癌特异性转移因子（HCC－STF）和胃癌特异性转移因子（GC－STF）,用肝癌,胃癌及大肠癌混合细胞悬液免疫山羊,制备M－TF。比较其理化性质及对肿瘤患者NK及LAK活性的影响。结果：三种转移因子理化性质十分相似,肽类,核苷酸类物质及氨基酸俯含量相近。HCC－STF能明显增加肝癌患者NK,LAK活性及LAK细胞对肝癌7721细胞的特异细胞毒作用,GC－STF能明显增加胃癌和大肠癌患者NK,LAK活性及LAK细胞对胃癌7901细胞的特异细胞毒作用,M－TF能显著增加肝癌,胃癌及大肠癌的NK,LAK活性及LAK细胞对7721和7901细胞的细胞毒作用,其增加效果与HCC－STF及GC－STF比无明显差异。结论：M－TF具有免疫调节性强,抗肿瘤谱广的特性,值得推广应用。     

LAK细胞与rIL-2腹腔内联合应用治疗晚期卵巢癌癌性腹水

应用LAK细胞治疗肿瘤患者国外多采用自身外周血淋巴细胞作为LAK效应细胞的前体细胞。为获得大量LAK前体细胞,必须对患者进行反复全血白细胞分离。这既加重患者负担,又常引起许多副作用。虽然TIL可作为LAK样前体细胞应用于临床治疗,但从实体瘤分离TIL操作复杂,又消耗多种酶制剂。我们曾报道,从癌性腹水中分离淋巴细胞不但方法简便,且体外可以扩增并诱导出具有杀伤     

AML骨髓LAK细胞抗肿瘤活性的体外研究

采用体外半固体培养技术,研究了10例急性髓细胞白血病(AML)患者和其中5例缓解期患者经IL-2体外诱导激活的骨髓LAK细胞对K_(562)白血病细胞系集落形成的抑制作用,以及对正常骨髓粒单系造血祖细胞集落(CFu-GM)的效应。结果显示:AML初诊及缓解期骨髓LAK细胞对K_(562)肿瘤细胞均有杀伤活性,缓解期骨髓LAK活性明显高于急性期,而对正常CFu-GM集落产率无明显抑制作用。为临床使用,尤其是ABMT的骨髓净化提供了实验依据。     

恶性肿瘤患者自体CIK细胞的实验研究

目的通过比较CIK细胞和LAK细胞的增殖、表型和抗瘤效应,为临床应用CIK细胞过继免疫治疗提供资料。方法取12例恶性肿瘤患者外周血,常规分离成单个核细胞,用不同细胞因子培养诱导出LAK细胞和CIK细胞,观察两种细胞的增殖、表型和抗瘤效应。结果培养后12天,CIK细胞数量达原来的11.5倍,而LAK细胞数量只有原来的5.2倍;比较培养前后CIK细胞的表型,可发现CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+CD56+、CD25+在培养后均有明显增高(P<0.05或0.001)。CIK细胞杀伤K562细胞和Raji细胞的能力均明显优于LAK细胞(P<0.05或0.001)。结论CIK细胞不仅具有强大的增殖功能,并且对不同的肿瘤细胞系显示出较LAK细胞更强的杀伤活性。因此,它是一种新型的过继免疫治疗方法。     

Determination of IL-2 and cytotoxicity of killer cells in MTT colorimetry

Summary The activity of interleukine 2 (IL-2) in culture supernatants of lymphokine-activated killer (LAK) cells and tumor infiltrating lymphocytes (TIL) as well as cytotoxicity of LAK cells on cultured leukemic cells were determined by MTT colorimetry. The results showed that higher activity of IL-2 in culture supernatant of LAK and TIL cells was found it could be used to support the culture of IL-2 dependent cell lines. The significant cytotoxicity of LAK cells on leukemic cell lines could be found in vitro, and it was consistent with the ratio of effector cells to target cells. The number of living leukemic cells is consistently related with the concentration of formazan metabolite of MTT. It suggested that the numbers of living cells and cytotoxicity of LAK cells could be estimated by determination of formazan metabolite OD value.     

LAK细胞对肿瘤细胞杀伤作用的形态学研究

本文报道了用人胚胎中期脾脏和胸腺细胞经人重组ＩＬ－２激活而成的ＬＡＫ细胞与正常人淋巴细胞在形态、活性上的区别。并观察了在体外培养条件下ＬＡＫ细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。