IFN-γ对球后成纤维细胞增殖的影响

目的:研究IFN-γ对体外培养的球后成纤维细胞增殖的影响。方法:用MTT法测定rhIFN-γ对体外培养的正常人和甲状腺相关眼病(TAO)患者球后成纤维细胞增殖的影响。结果:经0.05,0.1,0.2,0.4,1.0MU/L的rhIFN-γ作用48h后,正常人球后成纤维细胞的A值分别为0.221±0.013,0.260±0.016,0.274±0.022,0.299±0.016,0.288±0.012与对照组0.181±0.010相比,差异有统计学意义(P<0.05);经0.05,0.1,0.2,0.4,1.0MU/L的rhIFN-γ作用48h后,TAO患者球后成纤维细胞的A值分别为0.231±0.017,0.269±0.010,0.291±0.020,0.318±0.019,0.303±0.016与对照组0.189±0.012相比,差异有统计学意义(P<0.05);在一定范围内有浓度依赖性,并且以0.4MU/L的浓度刺激球后成纤维细胞的作用最强。结论:rhIFN-γ有促进正常人和TAO患者球后成纤维细胞增殖的作用。     

吲哚美辛体外对球后成纤维细胞增殖的影响

目的:研究吲哚美辛对体外培养的球后成纤维细胞增殖的影响。方法:用MTT法测定吲哚美辛对体外培养的正常人和甲状腺相关眼病(TAO)患者球后成纤维细胞增殖的影响。结果:经100,200,400,800μmol/L吲哚美辛作用24h后,正常人球后成纤维细胞的A值分别为0.219±0.015,0.201±0.026,0.129±0.013,0.112±0.012与对照组0.252±0.017相比,差异有统计学意义(P<0.01);经100,200,400,800μmol/L吲哚美辛作用24h后,TAO患者球后成纤维细胞的A值分别为0.225±0.022,0.197±0.011,0.138±0.019,0.121±0.023与对照组0.267±0.031相比,差异有统计学意义(P<0.01);在一定范围内有浓度依赖性,并且以800μmol/L的浓度抑制球后成纤维细胞的作用最强。结论:吲哚美辛有抑制正常人和TAO患者球后成纤维细胞增殖的作用,以800μmol/L抑制作用最强,在一定范围内有浓度依赖性。     

环孢霉素A对球后成纤维细胞体外增殖的影响

目的:研究环孢霉素A(CsA)对体外培养的球后成纤维细胞增殖的影响.方法:用MTT法测定CsA对体外培养的正常人和甲状腺相关眼病(TAO)患者球后成纤维细胞增殖的影响.结果:经1,10,100,500,1 000μg/L CsA作用48h后,正常人球后成纤维细胞的A值分别为0.253±0.018,0.210±0.016,0.173±0.032,0.134±0.013,0.119±0.022与对照组0.278±0.019相比,差异有统计学意义(P＜0.05);经1,10,100,500,1 000μg/L CsA作用48h后,TAO患者球后成纤维细胞的A值分别为0.221±0.025,0.191±0.036,0.150±0.017,0.118±0.039,0.110±0.011与对照组0.249±0.028相比,差异有统计学意义(P＜0.05);随着浓度的增加,抑制作用增强.结论:CsA呈浓度依赖性抑制正常人和TAO患者球后成纤维细胞增殖.     

AdPLA基因在Ⅲ级静止期甲状腺相关眼病眼眶脂肪内高表达研究

目的 检测甲状腺相关眼病(thyroid associated ophthalmopathy,TAO)患者和正常人眼眶脂肪组织中脂肪特异性磷脂酶A2(adipose-specific phospholipase A2,AdPLA) mRNA的表达水平.方法 2015年8月至2016年10月16例静止期Ⅲ级TAO患者(TAO组)在深圳市眼科医院接受眼眶减压术,同期29位正常人(正常对照组)行眼部整形手术.术中取患者和正常对照一眼的眼眶脂肪;记录每位受试者的年龄、性别、身高、体质量,计算体质量指数(body mass index,BMI),测量取脂肪一侧眼的眼球突出度和眼眶脂肪体积;用实时定量多聚酶链式反应定量检测眼眶脂肪组织中AdPLA mRNA的表达水平.结果 TAO组与正常对照组年龄、性别和BMI相比差异均无统计学意义(均为P＞0.05),TAO组的眼球突出度(20.406±1.369)mm明显多于正常对照组(14.207±1.146) mm,TAO组的眼眶内脂肪量(32.162 ±1.923) mL明显多于正常对照组(24.279±1.070) mL.TAO组眼眶脂肪中AdPLA mRNA的表达量为0.039 42±0.009 85,正常对照组眼眶脂肪中AdPLA mRNA的表达量为0.004 42±0.001 36,两组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 静止期Ⅲ级TAO患者的眼球突出度和眼眶内脂肪量明显多于正常人,眼眶脂肪组织中AdPLA mRNA的表达量明显高于正常人.AdPLA的高表达可能使TAO眼眶脂肪水解减少,造成眼眶脂肪堆积,加重了眼球突出.     

雷公藤甲素对IFN-γ刺激后人眼球后成纤维细胞的影响

目的 观察中药雷公藤提取物雷公藤甲素(triptolide,TL)对干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)刺激后人眼球后成纤维细胞(retroocularfibroblasts,RF)表达CD40、合成透明质酸(hyaluronic acid,HA)和Ⅰ型胶原蛋白的变化以及时细胞增生的影响.方法 体外培养的正常人RF分别与IFN-γ(100 U·L-1)、TL孵育后,MTT比色法检测TL对RF增生的影响,放射免疫法检测HA和Ⅰ型胶原蛋白的合成情况,流式细胞仪检测CI40的表达情况.结果 TL能明显抑制RF的增生,当剂量达1.00μg·L-1时抑制率为63.38%;当剂量达γ0.00μg·L-1时,抑制率达79.74%;当剂量达100.00 μg·L-1时,RF增生完全被抑制.IFN-γ能刺激HA和Ⅰ型胶原蛋白的合成(p均<0.05)以及CD40的表达(P<0.01),HA和Ⅰ型胶原蛋白合成量及CD40阳性细胞百分率分别是对照组的1.64、1.72和13.27倍.而TL能明显抑制IFN-γ对RF的刺激作用,且随着剂量的增加,抑制作用更加明显.结论 细胞因子IFN-γ能够增加HA和Ⅰ型胶原蛋白的分泌,刺激免疫调控分子CI40的过度表达,TL能够抑制RF的增生,抑制IFN-γ刺激后HA和Ⅰ型胶原蛋白的合成以及CI40的过度表达.     

甲状腺相关眼病患者眼眶成纤维细胞超微结构及细胞因子分泌功能研究

目的 比较培养的甲状腺相关眼病(TAO)患者、正常人及经活动期TAO患者血清处理后的眼眶成纤维细胞(OFs)在超微结构与分泌细胞因子功能方面的差异。方法 取5例TAO患者与4例正常对照者的眼眶结缔组织和眼外肌进行OFs原代培养,传代后,部分OFs加入活动期TAO患者的血清后再培养。应用透射电镜观察两组OFs的超微结构,应用酶联免疫吸附分析法检测两组培养上清液中的白细胞介素1(IL-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)。结果 TAO患者与正常人OFs的超微结构未见明显差异;加入血清培养后的OFs的核仁增大、边移,内质网增多,微绒毛增多、变长。TAO患者与正常人培养的OFs上清液中仅检测到IL-1,其量前者明显高于后者;经活动期TAO患者血清处理后的OFs上清液中可检测到IL-1、TNF-α及IFN-γ。结论 TAO患者与正常人的OFs超微结构基本相同。经活动期TAO患者血清处理后的OFs有增殖现象,其分泌细胞因子功能明显增强。     

IFN-γ、IL-6对眼眶成纤维细胞ICAM-1表达的影响

目的探讨IFN-γ和IL-6对甲状腺相关眼病（TAO）眼眶成纤维细胞ICAM-1表达的影响。方法体外培养TAO患者和正常人眼眶成纤维细胞，在培养基中分别加入不同浓度的IFN-γ和IL-6，用流式细胞仪检测眼眶成纤维细胞ICAM-1的表达水平。结果培养的TAO患者和正常对照眼眶成纤维细胞均表达ICAM-1，患者的表达量高于正常对照者，具有显著统计学差异（P〈0．05）。IFN-γ以剂量依赖方式上调ICAM-1的表达水平，对患者的上调作用更强；IL-6对眼眶成纤维细胞表达ICAM-1没有明显影响。结论IFN-γ通过诱导眼眶成纤维细胞ICAM-1的表达在TAO的病理发生中起重要作用。     

胰岛素样生长因子-1对甲状腺相关眼病眼眶成纤维细胞的促生长作用

背景 甲状腺相关眼病(TAO)是一种自身免疫性疾病,目前对其发病机制的研究主要集中在共同抗原上.胰岛素样生长因子-1(IGF-1)功能的发挥需要IGF-1受体(IGF-1R)的参与,IGF-1在促甲状腺激素受体(TSHR)的信号传导通路中也起着重要作用. 目的 探讨IGF-1对TAO患者眼眶成纤维细胞(OFs)增生及IGF-1R、TSHR表达的影响,探讨IGF-1在TAO发病机制中的作用. 方法 收集2016年3-6月于四川大学华西医院行TAO眼眶脂肪切除术取得的眶组织标本17例17份及正常人美容手术取得的眼眶组织4人4份,采用含体积分数5％胎牛血清的DMEM/F12培养液培养OFs.分别于培养液中加入不同质量浓度(0、50、100、125 μg/L)的IGF-1,采用MTS比色法绘制OFs生长曲线,评估IGF-1对TAO和正常来源OFs增生的影响;采用流式细胞术测定不同质量浓度IGF-1对TAO和正常来源OFs中IGF-1R、TSHR表达水平的影响.结果 TAO患者与正常人来源的OFs均生长良好,呈梭形,细胞质丰富,TAO患者与正常人来源的OFs形态学特点一致.培养的OFs波形蛋白呈阳性反应,结蛋白、S-100、肌红蛋白和角蛋白均呈阴性反应.不同质量浓度IGF-1作用后TAO组和正常组OFs增生均呈逐渐上升趋势,总体比较差异有统计学意义(F分组=219.639,P＜0.001;F质量浓度=17.752,P＜0.001),以100 μg/L IGF-1的促进作用最强.0、50、100、125 μg/L IGF-1作用后TAO组OFs中IGF-1R表达量分别为(0.009 1 ±0.008 7)％、(0.095 3±0.023 3)％、(0.083 7±0.0227)％和(0.070 9±0.024 1)％,正常组OFs中IGF-1R表达量分别为(0.002 3±0.000 6)％、(0.009 3±0.001 2)％、(0.0073±0.001 5)％和(0.008 3±0.001 2)％,其中50、100和125 μg/L IGF-1作用后各组OFs中IGF-1R表达量均高于无添加IGF-1者,TAO组OFs细胞中IGF-1R的表达量均明显高于正常组,差异均有统计学意义(均P＜0.05);0、50、100和125 μg/L IGF-1作用后TAO组和正常组OFs中TSHR表达量的总体比较差异均无统计学意义(F分组=0.133,P＞0.05;F质量浓度=0.004,P＞0.05). 结论 IGF-1对TAO患者和正常人OFs的生长均有促进作用并能上调OFs中IGF-1R的表达,但其对OFs中TSHR的表达变化无明显影响.     

脂多糖诱导炎症反应对甲状腺相关眼病眼眶前脂肪细胞分化的影响

目的 观察脂多糖诱导炎症反应对甲状腺相关眼病( TAO)眼眶前脂肪细胞分化的影响,探讨TAO眼眶脂肪增殖的发病机制。方法 实验研究。眼眶组织取TAO行开眶减压术的患者。将体外培养的TAO眼眶成纤维细胞,分为A组与B组,A组采用1 mg/L的脂多糖作用8h,然后常规用诱导分化液Ⅰ和Ⅱ诱导直至分化结束,B组仅用诱导分化液Ⅰ和Ⅱ诱导至分化结束。采用油红O染色法测定分化后脂肪细胞相对含量,逆转录聚合酶链反应法与Western blot法检测环氧化酶2( COX2)与过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ) mRNA与蛋白的表达,酶联免疫吸附实验检测上清液中前列腺素E2( PG E2)的表达。两样本均数比较采用t检验,多样本比较采用单因素方差分析,两两比较采用SNK检验。结果 分化后油红O染色显示两组细胞形态上无明显差异。A组细胞吸光度(A)值(1.02±0.08)较B组(0.74±0.06)明显升高,差异具有统计学意义(t=8.502,P=0.000)。A组细胞分化后PPARγ mRNA( 1.74±0.19)与蛋白(0.47 ±0.04)的表达分别较分化前PPARγ mRNA(0.30±0.07)与蛋白(0.08±0.02)的表达明显增强(P＜0.05);B组细胞分化后PPARγ mRNA(1.15 ±0.18)与蛋白(0.35±0.03)的表达分别较分化前PPARγ mRNA(0.13 ±0.04)与蛋白(0.03 ±0.01)的表达明显增强(P＜0.05);A组细胞分化后COX2 mRNA (0.28±0.07)与蛋白(0.24±0.03)的表达分别较分化前COX2 mRNA( 1.54 ±0.10)与蛋白(0.49±0.03)的表达明显减弱(P＜0.05);B组细胞分化后COX2 mRNA的表达（0.08±0.03）较分化前(0.19±0.07)明显减弱(P＜0.05),而COX2蛋白的表达(0.01±0.01)与分化前(0.03±0.01)比较差异无统计学意义(P＞0.05)。分化后A组细胞上清液中PGE2分泌水平(208.43±15.06)ng/L较分化前(898.75±21.09)ng/L显著降低(P＜0.05);分化后B组细胞上清液中PGE2分泌水平(30.61±5.75) ng/L与分化前（35.75±4.09）ng/L比较,差异无统计学意义(P＞0.05)。诱导分化前A组细胞COX2 mRNA与蛋白的表达及PGE2的分泌较B组明显增强(P＜0.05),而PPARγ mRNA与蛋白的表达亦强于B组(P＜0.05),分化后A组细胞COX2及PPARγmRNA与蛋白的表达、PGE2的分泌均强于B组(P＜0.05)。结论 脂多糖可诱导TAO眼眶前脂肪细胞产生炎症反应,使其炎症标志物COX2及其控制合成的PGE2表达增强,并使脂肪生成关键转录因子PPARγ表达上调,分化后PPARγ表达显著增强,而COX2与PGE2的表达明显降低。     

夏枯草、浙贝提取物对体外培养TAO眼眶成纤维细胞的影响

目的探讨夏枯草、浙贝治疗甲状腺相关眼病（TAO）的机制。方法采用体外培养的正常人和TAO患者的眼眶成纤维细胞,将夏枯草、浙贝提取物、刺激药物干扰素-γ和阳性对照药物地塞米松分成不同质量浓度组,以MTT法、磁性均相化学发光免疫分析法、流式细胞仪检测其对细胞的增生、透明质酸（HA）的分泌以及黏附分子（ICAM-1）表达的影响。结果夏枯草、浙贝提取物具有与地塞米松相似的抑制作用,对于TAO患者HA的分泌,133mg／mL的夏枯草质量浓度组与10ug／mL地塞米松组比较差异无统计学意义（P〉0．05）,但浙贝各质量浓度组较夏枯草和地塞米松弱（P〈0．01）;对于ICAM—1的表达,夏枯草组的抑制作用较地塞米松组弱（P〈0．01）,但较浙贝组强（P〈0．01）。结论夏枯草、浙贝对TAO的治疗作用可能是通过抑制眼眶成纤维细胞的增生、在IFN-γ刺激下HA的分泌和ICAM-1的表达而实现的,且夏枯草作用强于浙贝。