金欣口服液含药血清抗呼吸道合胞病毒间接抑制作用实验研究

目的:研究金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的人喉癌上皮细胞(Hep-2)细胞的间接抑制作用。方法:含药血清先作用细胞一段时间再感染RSV。用MTT法测病变抑制率及测上清滴度观察金欣口服液含药血清对RSV的间接抑制作用。结果:MTT法测定病毒抑制率均大于50%,含药血清组上清滴度与空白血清组和病毒对照组比较有显著差异,滴度低于后两组。结论:金欣口服液含药血清可能有抑制RSV胞膜上的吸附蛋白与细胞表面受体结合的作用。     

金欣口服液含药血清对呼吸道合胞病毒感染细胞早期凋亡的影响

目的:探讨金欣口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染细胞早期不同时点凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响。方法:采用细胞培养、血清药理学、流式细胞术等实验技术检测金欣口服液含药血清抗RSV,影响细胞早期凋亡作用途径的影响。结果:RSV感染人胚肺成纤维细胞(HELF)细胞12、24h后凋亡率均低于细胞对照组(P<0.05),Bcl-2/Bax比例逐步上调,金欣口服液作用后,凋亡率明显高于病毒组(P<0.05),Bcl-2/Bax比值明显低于病毒组(P<0.05)。结论:金欣口服液在RSV感染早期,可能通过调控凋亡相关基因拮抗其抑制细胞凋亡的作用,从而影响进入细胞内的病毒复制增殖的过程,阻止病毒的扩散。     

金欣口服液对RSV感染RAW264.7细胞及BALB/c小鼠TNF-α表达的调控作用

目的:通过研究不同时间点金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染模型肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响,进一步阐明金欣口服液治疗RSV肺炎的作用机制。方法:体外实验:RSV感染体外培养的RAW264.7细胞,金欣口服液合药血清进行干预,24h后收集细胞上清,ELISA法检测各组TNF-α含量;体内实验:RSV滴鼻感染BALB/c小鼠,金欣口服液不同剂量及给药方式进行干预,并于首次滴鼻后24、72、144h取各组小鼠支气管肺泡灌洗液,ELISA法检测TNF-α表达及金欣口服液的干预效果。结果:RSV感染RAW264.7细胞及BALB/c小鼠后24h,TNF-α表达明显升高(P<0.01),而金欣口服液组较RSV感染组TNF-α表达明显下调(P<0.01);72h后,RSV感染小鼠体内TNF-α表达虽较正常组高(P<0.05),但较24h组明显下降(P<0.01),而金欣口服液等效剂量预防及治疗组TNF-α表达较RSV感染组均明显升高(P<0.01);144h后,RSV感染小鼠体内TNF-α表达较正常组无差异(P>0.05),而金欣口服液高剂量及等效剂量治疗组TNF-α表达均较RSV感染组明显升高(P<0.05)。结论:金欣口服液能显著下调RSV感染初期TNF-α的高表达,且随着感染时间的延长,可适当上调TNF-α的表达,表明金欣口服液对RSV感染后体内TNF-α的表达具有一定的双向调节趋势,这可能是其治疗RSV肺炎的作用机制之一。     

桑菊饮含药血清对小鼠巨噬细胞Toll样受体表达的影响

目的: 研究桑菊饮对小鼠肺巨噬细胞株RAW264.7表达Toll样受体(TLR)的影响。 方法: 用桑菊饮含药血清作用于正常RAW264.7细胞,24 h后以荧光定量PCR方法测定TLR-1~TLR-9 mRNA的表达,探讨桑菊饮对Toll样受体表达的影响。结果:桑菊饮含药血清在一定剂量(7.7 g·kg^-1·U^-1)时,可以促进TLR-4和TLR-7的表达,而对TLR-1,TLR-2,TLR-3,TLR-5,TLR-6,TLR-8和TLR-9的表达没有明显影响。 结论: 桑菊饮的药效学作用可能与促进Toll样受体某些亚型表达有关。     

呼吸道合胞病毒感染细胞超微结构的改变及清肺口服液含药血清对其作用的研究

目的:观察呼吸道合胞病毒(RSV)感染细胞超微结构改变及清肺口服液舍药血清对其的影响.方法:细胞分为正常细胞组、病毒攻击组、空白血清组、感染后和感染时含药血清组,病毒攻击后3～5h,利用电镜观察各组人胚肺成纤维细胞超微结构的变化.结果:病毒感染组,细胞核增大,核质比增加,核仁凝聚,核膜凹陷成夹层,包涵体形成,线粒体凝聚,粗面内质网扩张,溶酶体增多,核染色质浓缩,细胞外可见病毒颗粒.含药血清感染时给药组,细胞核大小基本正常,有的轻度增大,无核仁凝聚,无包涵体形成,粗面内质网形态正常,线粒体基本正常,偶有凝聚现象,细胞间很少找到病毒颗粒.含药血清组感染后给药组,细胞核增大,核仁凝聚,粗面内质网扩张,线粒体凝聚,但程度较轻.结论:RSV感染人胚肺成纤维细胞后,细胞可出现超微结构的改变,清肺口服液含药血清可以减轻这种改变,感染时给药比感染后给药作用更明显.     

基于RSV对细胞的感染周期研究金欣口服液的干预作用

目的基于呼吸道合胞病毒(RSV)的感染周期观察金欣口服液含药血清对RSV感染细胞的干预作用。方法分别在RSV感染Hep-2细胞前后用含药血清干预,观察细胞病变效应、检测细胞存活率和病毒滴度,以及RSV的F融合蛋白表达,判断药物对RSV感染的预防及治疗作用。结果在RSV感染前或感染早期干预,金欣口服液对细胞病变抑制率均超过50%,与病毒对照组比较,细胞存活率显著增高,上清病毒滴度显著降低,后期干预只能延缓病变。金欣含药血清作用后F蛋白表达显著降低、融合病变较少。结论金欣口服液含药血清在RSV感染早期干预效果更显著,其抗病毒作用靶点可能与F融合蛋白或该蛋白在细胞上的相应受体有关。     

金欣口服液对RSV感染BALB/c小鼠TLR3信号转导通路负调控因子SOCS1表达的调控作用

目的研究金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的BALB/c小鼠肺组织中TLR3信号转导通路负调控因子SOCS1不同时间点的表达趋势的调控作用。方法 75只BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、利巴韦林组、金欣高剂量组和金欣等效剂量组,每组15只。每组分干预方式Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ,每种干预方式5只小鼠。RSV滴鼻感染BALB/c小鼠制备动物模型,予相应干预方式处理后处死取肺组织。Real time PCR分别检测RSV-M、SOCS1和IFN-β在mRNA水平的表达情况,并采用Western blotting检测SOCS1在蛋白水平上的表达情况。结果与正常组比较,模型组干预方式Ⅰ、ⅡSOCS1、IFN-βmRNA表达及SOCS1蛋白表达升高(P<0.01),干预方式Ⅲ时IFN-βmRNA表达降低(P<0.01)。与模型组比较,金欣高、等效剂量组3种干预方式RSV-M mRNA表达均降低(均P<0.01),金欣高剂量组干预方式Ⅰ、Ⅲ及金欣等效剂量3种干预方式SOCS1 mRNA表达降低(P<0.01);金欣高剂量组干预方式Ⅰ、Ⅱ及金欣等效剂量组干预方式ⅠIFN-βmRNA的表达降低(P<0.01),而金欣高剂量组和等效剂量组干预方式ⅢIFN-βmRNA的表达升高(P<0.01);金欣高剂量组干预方式Ⅰ及金欣等效剂量组的3种干预方式SOCS1蛋白表达明显降低,金欣高剂量组干预方式ⅢSOCS1蛋白表达升高。与金欣高剂量组比较,金欣等效剂量组干预方式Ⅰ、ⅡRSVM mRNA表达降低(P<0.01);金欣等效剂量组干预方式ⅠSOCS1 mRNA表达降低(P<0.01);金欣等效剂量组干预方式ⅠIFN-βmRNA的表达降低(P<0.01),但干预方式Ⅱ、ⅢIFN-βmRNA的表达升高(均P<0.01);金欣等效剂量组3种干预方式SOCS1蛋白表达降低。结论金欣口服液等效剂量组在不同时间点均能抑制RSV感染BALB/c小鼠肺组织中SOCS1的表达,该调控作用可能与促进Ⅰ型干扰素表达从而发挥抗RSV作用有一定关系。     

金欣口服液对呼吸道合胞病毒感染大鼠Ⅰ型干扰素表达的影响

目的:探讨金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染大鼠Ⅰ型干扰素(IFN)-α/β表达的影响。方法:采用细胞培养、动物实验、ELISA(酶标记免疫吸附测定)法检测大鼠体内IFN-I表达量的变化。结果:金欣口服液预防组和中剂量组IFN-α表达量高于模型组(P<0.05);金欣口服液高、中剂量组IFN-β表达量高于模型组(P<0.05)。结论:金欣口服液抗RSV的机制可能与其通过上调RSV感染宿主体内Ⅰ型干扰素的表达,从而发挥Ⅰ型干扰素的抗病毒效应有关。     

黄连解毒汤含药血清对Toll样受体34、型及其下游信号转导通路的影响

目的：研究黄连解毒汤含药血清对细菌脂多糖和双链RNA病毒核酸类似物聚肌胞刺激的小鼠巨噬细胞株RAW264.7 Toll样受体（TLR）及其下游主要信号转导通路的影响。方法：用脂多糖、聚肌胞分别刺激RAW264.7细胞,同时给予黄连解毒汤含药血清进行干预,24 h后,取细胞培养上清液,ELISA法测定炎症因子TNF-α和IFN-β的含量,荧光定量PCR方法测定TLR3、TLR4和下游信号转导通路髓样分化因子88（MyD88）,肿瘤坏死因子受体相关因子-6（TRAF-6）,TOLL样受体相关分子（TRAM）和TOLL样受体相关的干扰素活化子（TRIF）mRNA的表达,Western blotting法分析TLR3、TLR4蛋白的表达,同时用细胞免疫荧光法分析MyD88,TRAF-6蛋白表达的强弱,在mRNA水平和蛋白水平探讨黄连解毒汤对Toll样受体的作用机理。结果：黄连解毒汤含药血清显著降低LPS诱导的TLR4、MyD88、TRAF-6、TRAM和TRlF的高表达（与单纯LPS刺激组比较,P〈0.05或P〈0.01）;Poly（I：C）刺激后,黄连解毒汤含药血清仅对TRAM利TRIF的表达有明显的降低作用（P〈0.01）。结论：黄连解毒汤能阻断TLR4高表达,阻断TLR4胞内信号转导的MyD88依赖和非依赖两条途径（以阻断非依赖途径为主）,抑制相关基因表达产物TNF-α、IFN-β过度分泌,具有TLR4拮抗剂样作用。黄连解毒汤也可直接作用于接头蛋白TRAM和TRIF,影响TLR3信号转录的MyD88非依赖性途径,抑制IFN-β的过度分泌。     

清肺口服液拮抗呼吸道合胞病毒感染的血清药理学研究

目的 评价清肺口服液抗呼吸道合胞病毒(RSV)的活性.方法 采用MTT法,以利巴韦林为对照组,观察清肺口服液及不同给药方式对RSV的拮抗作用.结果 清肺口服液具有明显抗RSV的作用,与利巴韦林比较差异无统计学意义;清肺口服液的作用机制可能为抑制病毒吸附或增殖.结论 清肺口服液可以通过不同环节拮抗RSV病毒,是治疗RSV感染的有效复方制剂.     

基于GC-MS的金欣口服液对RSV肺炎小鼠脾脏代谢物的调控作用

目的通过气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术分析呼吸道合胞病毒(RSV)感染小鼠脾脏组织中内源性代谢物的变化,探讨金欣口服液治疗RSV肺炎可能的作用机制。方法 RSV滴鼻感染BALB/c小鼠建立RSV肺炎模型,给予金欣口服液(27.6 g/kg)干预治疗,连续治疗7 d后处死小鼠,取脾脏组织,经甲醇提取后,先后予甲氧胺吡啶和BSTFA以肟化和衍生化,然后运用GC-MS检测脾脏中所含有的代谢物及其相对量的变化。结果 RSV肺炎小鼠的脾脏中共鉴定出35种代谢产物,其中L-脯氨酸、L-谷氨酸、缬氨酸、尿素、次黄嘌呤、葡萄糖为具有显著性差异的代谢物(P0.05),与之相关的代谢通路为D-谷氨酰胺和谷氨酸代谢,缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸代谢,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,精氨酸和脯氨酸代谢。结论金欣口服液可以调节RSV肺炎小鼠脾脏的免疫功能,可能与氨基酸代谢有关。     

金欣口服液对RSV感染大鼠I型干扰素及SOCS1/3表达的影响

目的：通过研究金欣口服液对呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus,RSV）感染大鼠肺组织细胞因子信号抑制因子1/3（suppressor of cytokine signaling1/3,SOCS1/3）蛋白的干预作用,探讨其抗RSV感染的可能机制。方法：SD大鼠70只,随机分为正常组,感染模型组,金欣口服液低、中、高剂量组（3.3,9.9,29.7g·kg^-1）,预防组（提前2dig金欣口服液中剂量）,利巴韦林组（24.5g·kg^-1）,每组10只,除正常组外,滴鼻感染24h造模,给药组每天给药2次,连续给药3d。采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测RSV感染大鼠体内I型干扰素IFN-α和IFN-β含量,逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测RSV感染大鼠肺组织SOCS1,SOCS3mRNA表达量的变化,苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠肺组织病理学变化。结果：与正常组比较,模型组RSV感染大鼠体内IFN-α和IFN-β含量明显升高,大鼠肺组织SOCS1,SOCS3mRNA表达量明显升高（P<0.05,P<0.01）,模型组大鼠肺组织病变较为明显;预防组和金欣口服液中剂量组IFN-α的表达量高于模型组（P<0.05）,预防组、金欣口服液中剂量组、利巴韦林组IFN-β的表达量高于模型组（P<0.01）,金欣口服液高剂量组IFN-β的表达量高于模型组（P<0.05）,金欣口服液中、高剂量组SOCS1表达量低于模型组（P<0.05）,金欣口服液高剂量组和利巴韦林组SOCS3表达量高于模型组（P<0.05）,金欣口服液中剂量组SOCS3表达量高于模型组（P<0.01）。结论：金欣口服液可上调RSV感染大鼠体内I型干扰素的表达,并通过抑制SOCS1/3的表达,发挥抗病毒作用,推测其为金欣口服液抗RSV感染的机制之一。     

金欣口服液对感染RSV大鼠血清IL-6、IL-8的影响

目的：观察金欣口服液对感染呼吸道合胞病毒（RSV）大鼠血清中IL-6、IL-8的影响。方法：将56只SD大鼠随机分为7组,分别为正常组,模型组,金欣高、中、低剂量治疗组,预先给药组,利巴韦林治疗组。用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定各组SD大鼠血清中IL-6、IL-8的水平。结果：大鼠感染RSV后血清中IL-6、IL-8水平均高于正常组（P〈0．05）,金欣治疗组及利巴韦林组干预后IL-6、IL-8水平显著降低（P〈0．01）;与利巴韦林组相比,金欣高剂量组、预先给药组的IL-6的水平明显降低（P〈0．01）;预先给药组中,血清IL-6的水平低于中、低剂量组（P〈0．01）,而IL-8水平比高、中、低剂量组均显著降低（P〈0．01）。结论：金欣口服液能降低两者的水平,且以预先给药方式更为有效,推测可以预防和治疗感染RSV的大鼠。     

清肺口服液对人喉癌细胞感染呼吸道合胞病毒后ICAM-1表达水平的影响

目的探讨清肺口服液对人喉癌细胞（Hep-2）感染呼吸道合胞病毒（RSV）后细胞间黏附分子-1（I-CAM-1）表达水平的影响。方法分时段以清肺口服液含药血清,利巴韦林含药血清及空白血清干预RSV感染的体外培养的Hep-2细胞,48h时及72h后收集各组细胞上清,采用酶联免疫吸附试验法（ELISA法）测定各组人喉癌细胞ICAM-1表达变化。结果 48h时及72h后病毒模型组ICAM-1的表达明显高于清肺口服液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组及利巴韦林Ⅱ、Ⅲ组;空白血清组与病毒模型组无显著差异。清肺口服液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组与利巴韦林Ⅱ、Ⅲ组比较,无显著差异。清肺口服液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组之间比较,无显著差异。72h后各组ICAM-1的表达与48h相比,无显著差异。结论清肺口服液可降低Hep-2感染RSV后ICAM-1的过度表达,减轻炎症反应,提前给药更可获得良好的效果,这可能是清肺口服液抗病毒的机制之一。     

参苏饮含药血清对小鼠巨噬细胞Toll样受体及其下游信号转导通路的影响

目的：研究参苏饮含药血清对脂多糖(LPS)和聚肌胞(POLY I∶C)刺激的小鼠巨噬细胞株RAW 264.7表达Toll样受体3(TLR3),Toll样受体4(TLR4)及其下游信号转导通路髓样分化蛋白(MyD88),肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF-6),Toll样受体相关分子(TRAM)和Toll样受体相关的干扰素活化子(TRIF) mRNA的影响。方法：用LPS(5 μg·mL^-1),POLY I∶C(50 μg·mL^-1)分别刺激RAW 264.7细胞株,同时给予参苏饮含药血清(11.2,6.7,4.0,2.4,1.5 g·kg-1·U^-1)进行干预,ELISA法测定细胞培养上清液中炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-β (IFN-β)的含量。先计算参苏饮IC₅₀,然后再以IC₅₀(11,5,2.5,4.9 g·kg^-1·U^-1)做为药物剂量进行干预,荧光定量PCR方法测定TLR3,TLR4和下游通路相关指标mRNA的表达,分析评价参苏饮含药血清清热解毒药效学作用的现代药理学基础。结果：参苏饮含药血清对POLY I∶C刺激的TLR3及其下游通路的MyD88和TRAM有抑制作用,对LPS刺激的TLR4的病理性升高无抑制作用,但对TLR4下游通路TRAM和TRIF mRNA的表达有明显的抑制作用。以上综合作用引起炎症因子TNF-α和IFN-β的降低。结论：参苏饮清热解毒的药效学作用可能与抑制TLR3,MyD88,TRAM和TRIF等细胞因子的表达有关。     

复方芩兰口服液对呼吸道病毒感染的药效作用

目的：考察复方芩兰口服液对甲型流感病毒肺炎、呼吸道合胞病毒肺炎、腺病毒咽炎的药效作用。方法：采用甲型流感病毒（A/FM/1/47(H1N1)）感染ICR小鼠肺炎模型,考察复方芩兰口服液对模型小鼠的死亡率、死亡抑制率、平均存活天数及生命延长率的影响,对肺组织及支气管病变的影响,以及对血清免疫因子的影响;采用腺病毒感染ICR小鼠咽炎模型,考察复方芩兰口服液对模型小鼠咽喉部黏膜组织病变的影响;采用呼吸道合胞病毒感染ICR小鼠肺炎模型,考察复方芩兰口服液对模型小鼠肺指数、肺组织及支气管病变、血清免疫因子及肺组织免疫因子的影响。结果：复方芩兰口服液对甲型流感病毒感染有一定的死亡保护作用,治疗给药可以改善肺组织及肺支气管病变、降低血清免疫因子水平;复方芩兰口服液对呼吸道合胞病毒感染有良好的预防作用,治疗给药可以改善肺组织及肺支气管病变、降低血清及肺组织免疫因子水平;复方芩兰口服液对腺病毒引起的咽炎有良好的治疗作用,可以改善咽部病变。结论：复方芩兰口服液对甲型流感病毒肺炎、呼吸道合胞病毒肺炎、腺病毒咽炎均有良好的疗效。