白藜芦醇诱导食管癌细胞凋亡及其相关基因表达的研究

目的研究白藜芦醇诱导人食管癌Eca109细胞凋亡的作用并探讨其对凋亡相关基因survivin、bax和bcl-2表达的影响。方法不同浓度白藜芦醇作用于Eca109细胞后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞周期分布及survivin、bax和bcl-2蛋白的表达。结果白藜芦醇能诱导食管癌Eca109细胞凋亡,使其细胞周期阻滞在GO／G1期;白藜芦醇可以上调bax蛋白的表达,下调survivin蛋白并协同抑制bcl-2蛋白的表达。结论白藜芦醇能明显诱导Eca109细胞凋亡,其机制可能与促进bax表达、抑制survivin和bcl-2表达有关。     

白藜芦醇诱导食管癌细胞凋亡及其相关基因表达的研究

目的研究白藜芦醇诱导人食管癌Eca109细胞凋亡的作用并探讨其对凋亡相关基因survivin、bax和bcl-2表达的影响。方法不同浓度白藜芦醇作用于Eca109细胞后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞周期分布及survivin、bax和bcl-2蛋白的表达。结果白藜芦醇能诱导食管癌Eca109细胞凋亡,使其细胞周期阻滞在G0/G1期;白藜芦醇可以上调bax蛋白的表达,下调survivin蛋白并协同抑制bcl-2蛋白的表达。结论白藜芦醇能明显诱导Eca109细胞凋亡,其机制可能与促进bax表达、抑制survivin和bcl-2表达有关。     

肿瘤坏死因子α诱导蜕膜细胞凋亡模型建立及黄芩苷对蜕膜细胞凋亡的影响

目的:探索建立肿瘤坏死因子诱导蜕膜细胞凋亡模型,观察黄芩苷对早孕蜕膜细胞凋亡的影响,初步分析黄芩清热安胎作用机制。方法:实验于2006-04/09在湖南中医药大学国家重点二级实验室病理生理实验室完成。取湖南中医药大学第一附属医院门诊人流手术室正常妊娠40d健康孕妇人流组织,患者知情同意。体外常规进行蜕膜细胞培养,选取经鉴定的4、5代细胞蜕膜细胞,用不同浓度(0.5,2.0,10.0,50.0μg/L,共设4组,并设空白对照组)的肿瘤坏死因子α作用于蜕膜细胞,四甲基偶氮唑盐比色实验分析肿瘤坏死因子α对蜕膜细胞活力的影响,荧光细胞染色观察确定蜕膜细胞凋亡模型的建立。选取适宜浓度的黄芩苷作用于正常蜕膜细胞及肿瘤坏死因子α诱导的凋亡蜕膜细胞(设肿瘤坏死因子α模型组,黄芩苷组,肿瘤坏死因子α加黄芩苷组,并设空白对照组),培养24h后,四甲基偶氮唑盐比色实验分析黄芩苷对蜕膜细胞活力的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:实验成功获取足够量的细胞,经泌乳素免疫组化鉴定为较高纯度的蜕膜细胞。①肿瘤坏死因子α作用后的蜕膜细胞活性均低于空白对照组,并且随着肿瘤坏死因子α浓度越大,活力越小。10.0,50.0μg/L肿瘤坏死因子α作用后蜕膜细胞活性与空白对照组比较,差异有显著性意义[(0.196±0.040),(0.106±0.020),(0.317±0.020),P<0.05]。但50.0μg/L时经形态学观察有部分细胞漂浮、死亡。②肿瘤坏死因子α模型组蜕膜细胞活性低于黄芩苷组和肿瘤坏死因子α加黄芩苷组,差异具有显著性意义[(0.27±0.03),(0.49±0.01),(0.38±0.02),P<0.05]。③流式细胞术示空白对照组蜕膜细胞凋亡率低于其他各组,差异均有显著性意义[(1.48±0.45)%,(16.40±0.82)%,(9.78±0.26)%,(10.96±0.92)%,P<0.05]。在荧光显微镜下,肿瘤坏死因子α作用后凋亡的蜕膜细胞细胞核变小皱缩,可见致密强荧光。结论:肿瘤坏死因子α能明显抑制人蜕膜细胞增殖分裂的过程,诱导该细胞凋亡,可用于人蜕膜细胞凋亡模型的建立。而黄芩苷对肿瘤坏死因子α诱导的蜕膜细胞凋亡具有一定对抗抑制作用。     

中药诱导白血病细胞凋亡的研究近况

<正>细胞凋亡又称细胞程序性死亡(Apoptosis APO),是1972年首先由英国学者Kerr等提出,用以描述一种在细胞形态学上有别于细胞坏死(Necrosis)的细胞死亡过程(Progammed cell death,PCD),是在某些生理或病理条件下,细胞接到某种信号的触发后主动参与并遵循一定程序的较慢的死亡过程,不仅在细胞的发育、分化、成熟、死亡中起着重要的作用,而且在抗肿瘤药物治疗以及白血病治疗中生长     

流式细胞术在细胞凋亡研究中的应用

细胞凋亡的探索已是当前肿瘤治疗研究中的热点，流式细胞术做为一种简捷的研究手段已得到广泛的应用。本文主要对流式细胞术目前在凋亡的确认、鉴别及有关性质方面的研究中的应用做一介绍。     

流式细胞术在细胞凋亡研究中的应用

细胞凋亡的探索已是当前肿瘤治疗研究中的热点，流式细胞术做为一种简捷的研究手段已得到广泛的应用。本文主要对流式细胞术目前在凋亡的确认、鉴别及有关性质方面的研究中的应用做一介绍。     

中药诱导胃癌细胞凋亡的研究进展

细胞凋亡是指在细胞外或细胞内的信号诱导下,细胞发生的主动自杀死亡过程。通过凋亡可使体内失去生命力的细胞或生理上不需要的细胞被有序地清除,从而维持组织中细胞形成与破坏之间的平衡。如果细胞凋亡受抑制,则细胞的生长期延长,死亡率下降,细胞数目增加,表现出生长优势;应该凋亡的细胞若不发生凋亡而继续存活,则可能转化成肿瘤细胞,而促进肿瘤细胞的凋亡可以促使肿瘤的消退。自上世纪90年代开始分子生物学研究以来,人们对细胞凋亡调控基因的认识越来越深入。     

垫状卷柏提取物对人白血病细胞K562诱导凋亡的研究

目的 研究垫状卷柏提取物(Selaginelpulvinate extracts,SP)对人白血病细胞诱导凋亡的机制.方法 采用浸提+超声的方法提取制备SP,采用流式细胞术检测法检测12.5μg/mL至100μg/mL生药浓度范围的SP其对K562肿瘤细胞凋亡的影响.结果 与PBS空白对照组相比较,50μg/mL和10...     

中药及提取物抗溃疡性结肠炎肠上皮细胞凋亡作用机制研究进展

<正>溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis, UC)是一种全球性、难治性炎症性肠道疾病。UC的确切病因尚不明确,但随着研究的深入,人们已经充分认识到其发病是由异常免疫反应介导,其特征是免疫细胞的强大激活、炎症级联和黏附分子的产生,造成肠道上皮受损及功能紊乱^[1]。近来众多研究表明,肠道上皮细胞(Intestinal Epithelial Cells, IEC)的异常凋亡在UC发病中有着重要作用。IEC过度凋亡使肠上皮通透性增高、黏膜屏障损伤,     

TRAIL诱导白血病细胞凋亡的分子机制研究

目的　检测TRAIL引起的T淋巴白血病细胞凋亡及与之相关的蛋白和信号通路 ,为探索T淋巴细胞凋亡分子机制打下基础 ,为相关肿瘤的治疗提供依据。方法　用TRAIL( 1μg/ml)刺激Jurkat细胞 3 6h以诱导细胞发生凋亡 ,用流式细胞术和MTS比色法检测细胞存活率 ,计算细胞凋亡率 ;用免疫印迹 (Westernblot)检测NF κB的表达和胱天肽酶 (caspase) 3、cas pase 8的变化。 结果　TRAIL能诱导Jurkat细胞凋亡并伴随NF κB表达增加及caspase 3和caspase 8的活化。 结论　TRAIL诱导的T淋巴白血病细胞凋亡的分子机制涉及NF κB及caspase 3、caspase 8,为TRAIL用于治疗白血病提供实验基础。     

三种抗癌剂诱导肿瘤细胞凋亡与活性氧产生关系的研究

目的 探讨抗癌剂、活性氧、凋亡三者之间的关系,从而进一步探讨抗癌剂的作用及肿瘤细胞耐药机制以及活性氧在肿瘤发生上的意义。方法 用足叶乙甙（Vp16）、阿霉素（ADR）、顺铂（DDP0作用于K562细胞,用流式细胞仪检测三种抗癌剂在不同浓度、作用24h对K562细胞活性氧产生的影响及对凋亡的影响。同时用形态学方法观察凋亡细胞的形态改变。结果 ①Vp16、ADR、DDP三种抗癌剂均可通过激发K562细胞产生活性氧来诱导该细胞发生凋亡;②每种抗癌剂激发K562细胞产生活性氧及诱发该细胞凋亡各有其最适浓度(Vp16为5μg/ml,ADR为3μg/ml,DDP为μg/ml）及最佳作用时间（24h）。结论 流式细胞仪（FCM）测定细胞内活性氧产生状态及细胞凋亡情况,方法具有敏感、快速、简便、只需微量血、可除去坏死细胞碎片等优点。可用于抗癌剂的筛选,指导临床用药及选择敏感抗癌剂的有效剂量及最佳时间,并为探索治疗肿瘤新方法提供一个思路。     

用血清药理学方法观察中药复方制剂诱导人胃癌细胞凋亡的研究

采用血清药理学方法，流式细胞仪、琼脂糖凝胶电泳和透射电镜分析技术对中药复方制剂诱导人胃癌细胞凋亡情况进行检测和观察。结果可见；中药复方1号诱发肿瘤细胞，DNA裂解成典型的梯状电泳图谱，胞核团结，核染色质看边并裂解为碎块；G0／G1期细胞减少，产生典型凋亡峰。提示复方1号对胃癌是一种有潜力的治疗药物。     

细胞因子诱导的杀伤细胞可诱导bcr-abl阳性的K562细胞凋亡

表达bcr-abl的K562细胞能抵抗不同化疗药和诱导的细胞凋亡，为了观察细胞因子诱导的杀伤（CIK）细胞能否诱导表达bcr-abl的K562细胞凋亡，应用流式细胞术DNA亚G1期分析法比较CIK和化疗药物（喜树碱和VP－16）诱导K562及CEM细胞发生凋亡的情况，结果表明，RT－PCR检测显示K562细胞表达bcr-abl融合基因mRNA，单独K562细胞对照组，K562／喜树碱组及K562／VP－16组均未见亚G1期峰，K562／CIK组亚G1期峰值为38．1％，单儿CEM细胞对照组未见亚G1期峰，CEM／喜树碱组亚G1期峰值为23．5％，CEM／VP－16组亚G1期峰值为32．3％，CEM／CIK组亚G1期峰值为45．4％。结论：喜树碱和VP－16不能诱导表达bcr-abl的K562细胞凋亡，而CIK细胞能诱导K562细胞凋亡，提示过继细胞免疫治疗可能在CML病人异基因髓移植及移植后淋巴细胞输注中起重要作用。     

9-顺维甲酸诱导肺癌细胞凋亡的流式细胞术检测

Rb基因是一种抑癌基因 ,cyclinD刺激CDK4介导Rb的磷酸化作用而导致细胞转化。维甲酸类化疗药物作为分化诱导剂可诱导调控细胞凋亡 ,而 9 顺维甲酸 (9 cisRA)的生物学活性强于其他维甲酸类化合物[1 2 ] 。本实验运用流式细胞技术检测细胞内cyclinD1及Rb的表达率 ,并通过细胞周期倍体分析 ,观察其凋亡的发生率 ,探讨 9 cisRA诱导肺癌细胞株凋亡与cyclinD1和Rb表达的相关关系 ,为 9 cisRA临床治疗肺癌提供实验依据。1　材料与方法1.1　主要试剂　 9 cisRA由Sigma公司提供 ;FITC标记cyclinD1单抗、Rb单抗及破膜剂均由PharMingen公司…     

流式细胞仪对凋亡细胞作用的研究

流式细胞术可用于检测细胞凋亡和测量细胞凋亡过程中细胞内发生的变化。本综述介绍调亡细胞的几种荧光染色和细胞凋亡分析的方法。同时 ,从肿瘤细胞凋亡、抗凋亡蛋白及肿瘤患者淋巴细胞凋亡的研究中探讨了细胞凋亡的临床应用     

凋亡和坏死细胞的DNA含量分析和链缺口标记检测法

目的 以流式细胞术法简便、有效地检测凋亡和坏死细胞。方法 将热处理、喜树碱诱导和紫外线诱导的急性早幼粒白血病细胞株（ＨＬ－６０）细胞分别用碘化丙锭（ＰＩ）摄入试验、亚ＧＩ峰法和ＤＮＡ链缺口标记法（ＴｄＴ）进行检测,并与对照组细胞进行比较,观察三种方法在凋亡和坏死细胞检测中的应用情况。结果 ＰＩ摄入试验显示,死细胞可大量摄取染料,ＤＮＡ含量直方图上其相对荧光强度明显较活细胞高;凋亡细胞在经磷酸－柠檬     

不同运动训练量与骨骼肌细胞凋亡的实验研究

目的：建立一套肌肉细胞凋亡的检测方法,探讨不同的运动量与骨骼肌细胞凋亡的关系。方法：采用流式细胞术检测肌肉细胞内的[Ca]^2 浓度、线粒体膜电位、DNA周期分析及原位末端标记技术（TUNEL）。结果：大鼠运动训练后各组肌细胞内[Ca]^2 明显高于对照组（P＜0．01）,运动后1周增高最显著,第2周后开始降低,2周、3周与运动后1周比较仍有显著性差异（P＜0．05）;线粒体膜电位在运动训练后1周降低,第2周开始明显增高,与对照组相比有显著性差异（P＜0．01）。第3周下降,第2周,3周与第1周比仍有显著性差异。运动后各组的DNA周期分析均出现一亚“G1”峰即凋亡峰,TUNEL显示运动后1周凋亡比例最高,2周、3周后比例降低,但运动组与对照组比较都有显著性差异（P＜0．01）。结论：不同的运动量可引起不同程度的细胞凋亡。本检测方法较为系统、全面、特异性强、灵敏度高。     

肿瘤坏死因子凋亡诱导配体诱导白血病细胞凋亡中抵抗机制的初步探讨

目的初步探讨肿瘤坏死因子凋亡诱导配体(TRAIL)诱导白血病细胞发生凋亡过程中可能存在的抵抗机制。方法用流式细胞仪检测经 TRAIL 处理后,白血病细胞系 K562、CEM 凋亡情况及线粒体跨膜电位的改变;采用 Western blot 检测 TRAIL 处理后细胞凋亡相关蛋白 Bcl-xL、Bax 及内源性半胱天冬酶(caspase)-8表达情况;并用 ELISA 法检测核转录因子(NF)-kB 活性变化。结果经TRAIL 处理后,K562、CEM 细胞出现不同程度的凋亡,其凋亡指数分别为29.98%、14.1%,后者显著低于前者(P<0.001);线粒体跨膜电位下降,分别为73.25%、25.4%(P<0.01);CEM 细胞中内源性caspase-8的表达水平低于 K562细胞,并且两者均表现出 Bcl-xL 表达上升、Bax 表达下降,在 CEM 细胞中 Bcl-xL/Bax 比例为18.8,显著高于 K562细胞 Bcl-xL/Bax 的比值(5.1);并且在 TRAIL 处理 CEM细胞后早期(2 h)即表现出 NF-kB 活性增加(0.48 μmol·L~(-1)·mg~(-1)蛋白),高于 K562细胞(0.326μmol·L~(-1)·mg~(-1)蛋白(P<0.001)。结论 TRAIL 诱导白血病细胞凋亡过程中,CEM 细胞对药物抵抗原因可能与 CEM 细胞内源性 caspase-8表达水平较低、线粒体内膜敏感程度降低、NF-kB 活性早期增加以及 Bcl-2家族蛋白的表达变化有关。     

乌索酸诱导Jurkat细胞凋亡及其机制的初步研究

本研究旨在探讨乌索酸(ursolic acid,UA)对Jurkat细胞的诱导凋亡作用及其分子机制,为UA应用于血液系统恶性肿瘤治疗提供理论依据。培养Jurkat细胞,用Water Solubility Tetrazolium-8(WST-8)法检测不同浓度UA对Jurkat细胞的细胞毒作用,观察caspase-9抑制剂对UA细胞毒作用的抑制情况;分别收集20、40μmol/L UA处理2小时和4小时的Jurkat细胞,用Annexin/PI双染色、流式细胞仪检测细胞凋亡率;收集不同浓度UA作用不同时间的Jurkat对数生长期细胞,提取蛋白,用Western blot分析caspase-9和-3及细胞色素C活化、Akt磷酸化情况。结果表明:UA能明显降低Jurkat细胞的生存率,能够诱导Jurkat细胞凋亡,caspase-9抑制剂能够抑制UA的细胞毒作用。在UA诱导Jurkat细胞凋亡过程中,caspase-9、caspase-3和细胞色素C被活化,Akt磷酸化受到抑制。结论:UA对Jurkat细胞具有明显的细胞毒作用,并能诱导其凋亡;UA诱导Jurkat细胞凋亡是通过线粒体途径实现的,其机制可能与抑制细胞生存因子Akt磷酸化过程相关。