恶性胶质瘤细胞死亡诱导信号复合体表达与TRAIL诱导凋亡的关系

目的：通过研究恶性胶质瘤细胞中死亡诱导信号复合体(DISC)与肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）诱导凋亡的关系,初步探讨TRAIL诱导凋亡抵抗的机制。方法：分离恶性胶质瘤组织,获得和培养原代胶质瘤细胞,用100 μg/L TRAIL作用后采用酸性磷酸酶法检测细胞凋亡水平;Western blotting 法检测细胞表达死亡诱导信号复合体的水平。结果：获得3株（GC417、GC321、GC125）原代恶性胶质瘤细胞;3株细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感程度不同［GC321（0.12±0.01 vs 0.51±0.02）和GC125（0.22±0.01 vs 0.36±0.01）］,对TRAIL诱导凋亡作用敏感,与对照组比较差异有统计学意义（P<0.01）;而GC417（0.24±0.01 vs 0.23±0.02）对TRAIL诱导凋亡不敏感。Western blotting法检测结果显示,死亡诱导信号复合体表达不同,GC321和GC125表达增高,GC417表达减少。结论：不同来源的原代培养恶性胶质瘤细胞对TRAIL诱导凋亡的反应不同,死亡诱导信号复合体表达也不同,死亡诱导信号复合体表达的减少可能与凋亡抵抗的发生密切相关。     

膜型凋亡诱导配体脱落可能参与肺腺癌对TRAIL耐受

TRAIL可选择性、高效地诱导肿瘤细胞凋亡,虽然肺腺癌等部分肿瘤对TRAIL耐受,但其高效、低毒的优势吸引人们不断探索增敏策略.TRAIL与功能性受体DR4、DR5在细胞膜脂筏内组装为死亡诱导信号复合物(DISC);而诱骗受体DcR1和DcR2通过竞争结合TRAIL阻断凋亡.肺腺癌A549对TRAIL高度耐受,除DcR1外,MMP-2可能通过酶切跨膜型TRAIL的脱落而降低DISC组装,从而参与其耐药.阐明膜结合型TRAIL脱落机制可能为提高肺腺癌对TRAIL的敏感性提供新策略.     

TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡及其与FHIT基因突变关系的初步研究

目的:分析原核重组表达的人可溶性TRAIL分子诱导多种肿瘤细胞的凋亡,并观察凋亡作用与FHIT基因突变的关系.方法:观察人可溶性TRAIL对28株不同来源的肿瘤细胞和正常细胞的直接细胞毒作用,RT-PCR法分析部分细胞的FHIT基因缺失突变情况.结果:1～100 mg/L的重组人可溶性T RAIL蛋白即可诱导19株细胞(包括人肿瘤细胞株)如1990(胰腺导管癌)、MCF-7(乳腺癌)、A5 4 9(肺癌)、U251(星形胶质瘤)、HepG-2(肝细胞癌)、M85(胃癌)、CNE-2(鼻咽癌)、Hep-2( 喉癌)、AT-29(结肠癌)、3AO(卵巢癌)和B16-MB(黑色素瘤),髓性恶性细胞如Jurkat、K56 2、U937、6T-CEM,鼠源性S180(肉瘤)、Ehrlich(腹水瘤)和Lewis(肺癌),以及人内皮细胞株ECV304等发生凋亡;而其他9株细胞,如SK-N-SH(人神经母细胞瘤)、8898(人胰腺导管癌)、HeLa(人宫颈癌)、SMMU7721(人肝癌)、HL60(人白血病)、COS-7(猴肾)、人成纤维细胞、L929(鼠成纤维细胞)、Wish(人羊膜细胞)等需大于100 mg/L的TRAIL才能使其凋亡;观察到上述部分对TRAIL敏感的人源细胞的FHIT基因有缺失突变,而不敏感的人源细胞FHIT 基因完整.结论:原核表达的人可溶性TRAIL具有明显诱导多种肿瘤细胞凋亡的活性,其机制可能与FHIT基因的缺失有关.     

线粒体凋亡途径参与TRAIL诱导胃腺癌细胞凋亡

目的研究TRAIL诱导胃腺癌细胞凋亡的途径。方法PI染色、流式细胞仪检测细胞凋亡;广谱caspase抑制剂(z-VAD-fmk)、caspase-8抑制剂(z-IETD-fmk)和caspase-9抑制剂(z-LEHD-fmk)分别与TRAIL共同作用后PI染色、流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化;Western blot检测caspase-3的活化及PARP的裂解;JC-1染色、流式细胞仪分析线粒体膜电位的变化。结果TRAIL诱导胃腺癌细胞凋亡具有剂量和时间依赖性,BGC-823较SGC-7901对TRAIL诱导的凋亡更敏感,TRAIL(100μg/L)作用24h细胞凋亡率分别是59.9%、24.3%;3种caspase抑制剂都能很大程度上阻止TRAIL诱导胃腺癌细胞凋亡;caspase-3、PARP在TRAIL作用早期即活化、裂解,且BGC-823比SGC-7901发生得更快;线粒体膜电位随TRAIL处理时间延长而不断下降。结论TRAIL能诱导胃腺癌细胞凋亡,且这种凋亡依赖于caspases;除死亡受体途径外,线粒体途径也参与了凋亡信号通路。     

TRAIL与胎盘细胞凋亡关系的研究进展

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TNF related apoptosis inducing ligand，TRAIL）是新发现的TNF超家族成员，与FasL和TNFα一样能诱导细胞发生凋亡。细胞凋亡（apoptosis）是多细胞有机体为调控机体发育、维护内环境稳定、由基因控制的细胞主动死亡过程，与机体的正常发育有密切的关系。胎盘是妊娠过程中发展起来的联系母体与胎儿的物质交换器官，对妊娠的维持有着重要作用。细胞增殖、凋亡的平衡是胎盘发挥作用的基础。现将TRAIL与细胞凋亡的研究进展综述如下。     

TRAIL诱导结肠癌SW480细胞的凋亡

目的探讨TRAIL对结肠癌SW480细胞凋亡的影响。方法实验分rmhTRAIL处理组和阴性对照组。MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western Blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达变化。结果 TRAIL能明显呈浓度依赖性地抑制结肠癌SW480细胞增殖（P〈0.05）,SW480细胞经rmhTRAIL处理后,流式细胞术分析显示其凋亡率明显上升（P〈0.01）,Western Blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达情况,显示Bcl-2蛋白表达明显下降,而Bax蛋白的表达明显升高（P〈0.05）。结论 TRAIL可以诱导结肠癌细胞的凋亡,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达、上调Bax蛋白表达有关。     

TRAIL诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

目的研究TRAIL对胃癌细胞株MKN28细胞体外诱导凋亡的作用及机制,并研究此过程中Caspase-3的表达规律及与凋亡效应的相关性。方法培养细胞,MTT法分析细胞增殖抑制率及细胞存活率,流式细胞仪分析细胞凋亡及细胞周期,细胞免疫组化检测细胞Caspase-3的表达水平,AO/EB染色观察凋亡细胞。结果 TRAIL可明显抑制MKN28细胞的增殖,并可诱导细胞的凋亡。细胞阻滞于G0/G1期,Caspase-3在MKN28细胞中低表达,经TRAIL处理细胞后高表达。AO/EB染色后可见典型细胞凋亡特征。结论 TRAIL可诱导MKN28细胞株的凋亡,并呈剂量依赖性。TRAIL通过上调Caspase-3的表达,阻滞细胞周期,诱导MKN28细胞的凋亡。     

肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体与肿瘤治疗的关系进展

 肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体（tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand, TRAIL）能选择性诱导肿瘤细胞和转化细胞凋亡,对机体正常组织细胞无毒副作用,有望成为新型的抗肿瘤制剂。探讨TRAIL的生物学特点及其对肿瘤的治疗策略,能够为其临床应用于肿瘤治疗提供理论基础。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体与肝癌细胞凋亡

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体TRAIL是近年来发现的极具潜力的抗肿瘤药物,尽管TRAIL对大多数肿瘤细胞表现出强大的诱导凋亡作用,但几乎所有的肝细胞肝癌(HCC)细胞系均对TRAIL表现出不同的耐药性。c-FLIP的过度表达及Caspase-8低表达可能是HCC细胞系耐受TRAIL的主要机制,NF-κB途径的激活及死亡受体的表达不足也参与了这一耐受过程。化疗药物及其他一些生物制剂联合TRAIL可以改变HCC细胞对TRAIL的敏感性,大大提高了TRAIL应用于肝癌临床治疗的可能性。肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体TRAIL是近年来发现的极具潜力的抗肿瘤药物,尽管TRAIL对大多数肿瘤细胞表现出强大的诱导凋亡作用,但几乎所有的肝细胞肝癌(HCC)细胞系均对TRAIL表现出不同的耐药性。c-FLIP的过度表达及Caspase-8低表达可能是HCC细胞系耐受TRAIL的主要机制,NF-κB途径的激活及死亡受体的表达不足也参与了这一耐受过程。化疗药物及其他一些生物制剂联合TRAIL可以改变HCC细胞对TRAIL的敏感性,大大提高了TRAIL应用于肝癌临床治疗的可能性。     

脂筏参与耐药: 多药耐药相关ABC转运蛋白与脂筏的关系

脂筏(lipid raft)和细胞的许多功能,如信号转导、蛋白质和脂类的转运等都相关。近来有研究发现,与多药耐药密切相关的ABC转运蛋白(ATP-binding cassette transporter)定位于脂筏中,因此推测脂筏可能与耐药性有一定关系。本文综述了3种和耐药相关的ABC转运蛋白的定位与其功能之间的联系,分别是和肿瘤细胞多药耐药相关的ABC转运蛋白Pgp/ABCB1、MRP1/ABCC1以及与白假丝酵母菌(白念珠菌)多药耐药相关的ABC转运蛋白Cdr1p;并进一步讨论了脂筏的重要组成成分胆固醇和鞘脂对上述3种ABC转运蛋白的定位和功能的影响。     

内源性一氧化氮提高TRAIL诱导的细胞凋亡率

目的 探讨内源性一氧化氮在TRAIL诱导的细胞凋亡中的作用,以期了解许多肿瘤组织表达诱导性一氧化氮合成酶的分子和细胞学机制.方法 用短暂转染、稳定转染方法在人胚胎肾细胞HEK293中进行重组质粒载体转染,并对可诱导表达一氧化氮合成酶NOS2载体筛选稳定可被诱导的细胞克隆.一氧化氮表达通过ponastrone A试剂进行...     

人可溶性TRAIL蛋白诱导多种肿瘤细胞的凋亡

探讨原核表达的凋亡激活因子－人可溶性ＴＲＡＩＬ蛋白放导多种肿瘤,尤其实体瘤细胞凋亡的人作用及与Ｐ５３突变的关系。方法ＰＣＲ扩增人ＴＲＡＩＬ密码子１１４－２８１,ＪＦ１１２５大肠杆菌表达,复发并纯化该可溶性片段。免疫组织化学分析各细胞株Ｐ５３的突变。     

TRAIL联合5氟尿嘧啶诱导喉癌细胞株的凋亡

目的 探讨TRAIL与化疗药物5氟尿嘧啶(5-Fu)单独和联合对喉癌HEP-2细胞株增殖、凋亡的影响并探讨其可能机制.方法 不同浓度的TRAIt、5-FU单独及联合作用于HEP-2细胞株,MTT法检测其增殖抑制作用,FCM法检测细胞凋亡率,荧光显微镜下观察细胞形态,Western blot法检测c-FLIP、NF-κB蛋白的表达.结果 TRAIL与5-Fu联合作用于HEP-2细胞株时,其抑制率、凋亡率较单独作用时高,c-FuP、NF-κB蛋白的表达水平低于单独作用时的表达水平.结论 TRAIL与5-Fu联合作用有协同诱导 HEP-2细胞株凋亡的作用,可能机制为下凋c-FLIP、NF-κB蛋白的表达水平.     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导骨肉瘤细胞凋亡的研究

目的：研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）对骨肉瘤OS-732细胞的诱导凋亡作用，探寻骨肉瘤临床化疗的斯方案。方法：将TRAIL应用于体外培养的骨肉瘤OS-732细胞，采用MTr法检测细胞毒性作用，倒置相差显微镜及荧光染色方法观察肿瘤细胞形态改变，扫描及透射电镜在亚细胞形态上证实凋亡细胞。结果：不同浓度TRAIL作用下，细胞抑制率问差别十分显著（P〈0.01）。超微结构观察显示骨肉瘤细胞凋亡。结论：TRAIL诱导骨肉瘤细胞凋亡，且具有浓度依赖性。     

TRAIL系统与肿瘤细胞的凋亡

目的了解TRAIL及其受体的结构功能、凋亡途径及在临床肿瘤治疗中的应用前景。方法参阅国内外文献,就有关的研究资料做一综述。结果研究资料表明TRAIL是肿瘤坏死因子家族的新成员,能选择性诱导肿瘤细胞凋亡,而对大多数正常细胞无毒性作用,且与传统的放疗、化疗有协同作用,有可能成为一种新型抗肿瘤药物。结论TRAIL能诱导肿瘤细胞凋亡,在临床肿瘤治疗中有良好的应用前景。     

TRAIL选择性诱导细胞凋亡的作用机理及意义

ＴＮＦ为一庞大的家族 ,到目前为止发现的ＴＮＦ家族成员主要有 :ＴＮＦα、ＴＮＦβ、ＬＴα、ＬＴβ、ＣＤ30Ｌ、ＣＤ2 7Ｌ、ＣＤ40Ｌ　Ｆａｓ、ＯＸ- 40Ｌ、4-ＩＢＢＬ ,以及ＴＲＡＮＣＥ(ＴＮＦ -ＲｅｌａｔｅｄＡｃｔｉｖａｔｉｏｎ -Ｉｎ ｄｕｃｅｄＣｙｔｏｋｉｎｅ)和ＴＲＡＩＬ(ＴＮＦ -ＲｅｌａｔｅｄＡｐｏｐｔｏｓｉｓ -ＩｎｄｕｃｉｎｇＬｉｇ ａｎｄ)等。其中ＴＲＡＮＣＥ和ＴＲＡＩＬ是新近发现的ＴＮＦ家族成员。大多数ＴＮＦ家族成员为ＩＩ型跨膜蛋白质 ,即Ｃ末端在胞外区 ,且Ｃ末端有一同源三聚体。ＴＮＦ家族成员具有多…     

TRAIL诱导乙型肝炎病毒转染细胞株凋亡的实验研究

目的探讨人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)对HBV稳定转染的肝癌细胞株HepG2.2.15的凋亡诱导效果。方法应用MTT法了解TRAIL对HepG2.2.15细胞的诱导效果,琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术和Caspase-3酶活性分析TRAIL诱导HepG2.2.15细胞凋亡过程。结果TRAIL(0.1μg/mL)作用于HepG2.2.15细胞株12、24、36h后,细胞抑制率分别为17.91%、41.26%、59.85%;PI单染亚二倍体含量12h后为21.8%,高于对照组的8.7%;24h后DNA电泳200bp处出现特异性条带;6h后Caspase-3酶活性为对照组的4.76倍。结论TRAIL诱导后,HBV稳定转染的肝癌细胞株HepG2.2.15发生凋亡。     

凋亡诱导基因TRAIL的受体在卵巢肿瘤中的表达

应用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测３例正常卵巢、６例良性卵巢肿瘤和１６例恶性卵巢肿瘤组织中ＴＮＦ家族新成员ＴＲＡＩＬ的受体ＤＲ５,ＤｃＲ１和ＤｃＲ２表达。结果显示：正常人外周血淋巴细胞及３例正常卵巢组织中ＴＲＡＩＬ受体均为阳性表达。良性卵巢肿瘤中ＤＲ５阳性表达率为８３．３％（５／５）,ＤｃＲ１为８３．３％（５／６）,ＤｃＲ２为１００％（６／６）。恶性卵巢肿瘤中Ｄ Ｒ５阳性表达率为６８．８％（１１／１６）,Ｄ     

TRAIL诱导的白血病细胞凋亡过程中的基因差异表达

目的分离鉴定重组可溶性肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(rsTRAIL)在诱导JurkatT淋巴细胞白血病细胞凋亡过程中差异表达的基因。方法采用抑制性差减杂交(suppressionsubtractivehybridization,SSH)及PCR技术筛选差异表达的基因。采用狭缝杂交和Northern印迹技术鉴定差异基因片段;以DNA自动序列分析仪测定所获cDNA核苷酸顺序。结果获得了6个差异表达的基因片段,4个在TRAIL诱导的白血病细胞凋亡过程中被抑制,2个被激活;其中,A14、X1、D1、A23和C5等5个基因片段为新基因,其GeneBank登记号分别为AW731601、AW731602、AW731603、AW731604和BE239235。Northern印迹显示,基因D1在Jurkat和MCF-7中的表达明显高于其它肿瘤细胞,提示该基因可能具有肿瘤特异性。结论TRAIL诱导的细胞凋亡过程,涉及多种基因表达的改变。     

凋亡诱导基因TRAIL的受体在卵巢肿瘤中的表达

应用RT PCR方法检测 3例正常卵巢、6例良性卵巢肿瘤和 16例恶性卵巢肿瘤组织中TNF家族新成员TRAIL的受体DR5 ,DcR1和DcR2表达。结果显示 :正常人外周血淋巴细胞及 3例正常卵巢组织中TRAIL受体均为阳性表达。良性卵巢肿瘤中DR5阳性表达率为 83.3% (5 /6 ) ,DcR1为 83.3% (5 /6 ) ,DcR2为 10 0 % (6 /6 )。恶性卵巢肿瘤中DR5阳性表达率为 6 8.8% (11/16 ) ,DcR1为 6 8.8% (11/16 ) ,DcR2为 0 % (0 /16 )。提示不同TRAIL受体特别是DcR2表达可能参与了卵巢肿瘤发生过程中细胞凋亡的调控