Ⅰ类整合子介导大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌耐药机制的初步研究

目的了解临床分离的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌中I类整合子的分布情况,探讨整合子与细菌耐药之间的关系。方法琼脂平皿稀释法进行药敏试验;双纸片法筛选出产ESBLs的菌株;运用PCR扩增、DNA测序及DNA序列比对等方法对其携带的I类整合子相关耐药基因进行分析。结果 36株大肠埃希菌与46株肺炎克雷伯菌对头孢克肟、头孢克洛、头孢氨苄、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、头孢噻肟钠、阿莫西林纳/舒巴坦钠、氨苄西林钠/舒巴坦钠及头孢哌酮/舒巴坦钠等的耐药率分别为61%、86%、86%、50%、75%、64%、39%、47%、30%与65%、63%、78%、52%、67%、54%、48%、41%、28%;10株细菌检测出产ESBLs,其中大肠埃希菌4株,肺炎克雷伯菌6株,并全部检测出1类整合子,其整合子可变区的耐药基因排列顺序与GenBank登录号为NC010410的菌株达到100%相似,并且皆含有blaVEB-1耐药基因盒。结论Ⅰ类整合子及整合子相关基因盒在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中分布广泛,整合子在细菌耐药中发挥作用。     

肺炎克雷伯菌ESBLs基因型与Ⅰ类整合子的相关性研究

整合子与基因盒是细菌基因组中可移动的遗传物质,是细菌的天然克隆与表达,携带位点特异性重组系统组分,可将许多耐药基因盒整合在一起,从而形成细菌的多重耐药性[1]。产ESBLs的肺炎克雷伯菌(K.pneumoniae Kpn)的耐     

产ESBLs肺炎克雷伯菌的整合子介导耐药的研究

目的研究产ESBLs肺炎克雷伯菌临床分离株的耐药性、整合子的分布以及ESBLs的基因表型,探讨整合子介导的耐药机制在产ESBLs菌耐药性中的作用。方法对368株产EsBLs肺炎克雷伯菌进行PCR检测,分析其整合子结构基因以及ESBLs基因（blaT旷bla…和6肠CTXM）。结果I类整合子、6肠sH。、6f口T旷6f口cTx_M的检测率分别为54．35％、40．93％、42．75％、44．82％,未检测到II、III类整合子阳性菌;携带6肠。。基因的菌株检测到I类整合子的比例显著高于携带6肠。~NSDbtaCTXM基因的菌株（P〈O．01）;环丙沙星、头孢吡肟、左旋氧氟沙星和哌拉西林外,整合子阳性和整合子阴性产ESBLs肺炎克雷伯菌株对其他8种抗生素的耐药率不同（P〈O．05）。结论我院产ESBLs肺炎克雷伯菌中整合子以I类整合子为主,II类和III类整合子较少;我院ESBLs肺炎克雷伯菌b／a…．．比例略高;I类整合子参与产ESBLs肺炎克雷伯菌耐药性的形成。     

产ESBLs肺炎克雷伯菌的耐药基因研究

目的研究产ESBLs肺炎克雷伯菌临床分离株的耐药性以及ESBLs的基因表型.方法对500株产ESBLs肺炎克雷伯菌的可疑临床分离株进行ESBLs确证,并采用琼脂稀释法进行药敏试验;采用聚合酶链（PCR）反应分析368株产ESBLs肺炎克雷伯菌株的ESBLs基因（blaTEM、blaSHV和blaCTX-M）,分析产ESBLs肺炎克雷伯菌的耐药性及ESBLs的基因表型情况.结果产ESBLs肺炎克雷伯菌筛选试验初步筛出500株,通过进一步确认试验368 （77.2％）株确认为出产ESBLs菌;368株产ESBLs肺炎克雷伯菌株中有158株（40.93％）检测到blasHv,165株（42.75％）检测到blaTEM,173株（44.82％）检测到blacTX-M;除阿米卡星、加替沙星、环丙沙星、左旋氧氟沙星外,产ESBLs肺炎克雷伯菌株和不产ESBLs肺炎克雷伯菌株对其他8种抗生素的耐药率不同（P＜ 0.01）;结论产ESBLs肺炎克雷伯菌其耐药性高于非产ESBLs肺炎克雷伯菌;我院ESBLs肺炎克雷伯菌blaCTX-M比例略高.     

铜绿假单胞菌Ⅰ类整合子相关基因的解析和定位

目的对4株铜绿假单胞菌临床菌株携带的Ⅰ类整合子相关基因进行解析和定位,探讨Ⅰ类整合子相关基因在细菌耐药性形成和耐药基因播散中的作用。方法采用PCR扩增、DNA测序、DNA序列比对的方法对4株铜绿假单胞菌临床菌株携带的Ⅰ类整合子相关基因进行解析,采用接合试验对该类整合子进行定位分析。结果4株铜绿假单胞菌I类整合子都含有耐药基因,该耐药基因在相应菌株中发挥耐药作用;该菌整合子位于质粒上。结论Ⅰ类整合子耐药基因在铜绿假单胞菌耐药性形成和耐药基因的播散中发挥作用。     

大肠埃希菌中Ⅰ类整合子耐药基因的分析

目的 对临床分离大肠埃希菌株携带的Ⅰ类整合子及相关耐药基因进行筛选和分析.探讨Ⅰ类整合子在大肠埃希菌耐药中的作用.方法 对43株大肠埃希菌临床分离株做药敏试验;采用PCR扩增、DNA测序、DNA序列比对的方法 对其携带的Ⅰ类整合子相关耐约基因进行分析.结果 43株大肠埃希菌分离株对10种抗菌药物的耐药率依次为亚胺培南4.7%、阿米卡星18.6%、头孢他啶、27.9%、头孢吡肟37.2%、头孢呋辛55.8%、复方磺胺甲嗯唑58.1%、妥布霉素74.4%、庆大霉素79.1%、头孢噻肟81.4%和哌拉两林83.7%.在43株大肠埃希菌分离株中有25株含有Ⅰ类整合子,其中18株携带整合子相关耐药基因,如介导对磺胺类和氨基糖苷类约物的耐药基因等;某些菌株携带的整合子相关耐药基因相同.结论 Ⅰ类整合子在大肠埃希菌中广泛存在,整合子相关耐约基因在该菌耐药性的形成和播散中发挥作用.     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌β-内酰胺酶相关基因及Ⅰ类整合子的检测

目的 研究耐亚胺培南铜绿假单胞菌(PA)β-内酰胺酶相关基因及Ⅰ类整合子的携带情况.方法 采用K-B法对临床分离的PA进行药敏试验,选出26株耐亚胺培南PA,用PCR法检测其β-内酰胺酶相关基因和Ⅰ类整合子(int Ⅰ1和qacE△1-sull基因).结果 26株耐亚胺培南PA体外对15种抗菌药物的药敏结果显示对多黏菌素B的敏感率为100%,对头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、阿米卡星的敏感率分别为61.54%、61.54%、65.39%、30.77%、50.00%.对复方新诺明的耐药率为100%.16种基因检出率由高到低依次为qacE△1-sull(92.31%),OprD2缺失(46.15%),TEM(42.31%),OXA-10(26.92%),VIM(11.76%),SPM(7.69%),VEB(7.69%),SHY(7.69%),未检出IMP、GIM、PER、GES、CARB、DHA、CTX-M、intⅠ 1基因.结论 耐亚胺培南PA的耐药主要与Ⅰ类整合子、OprD2缺失有关.     

肺炎克雷伯菌抗生素耐药性的研究进展

The resistance of Klebsiella pneumoniae is becoming more and more serious, which brings severe challenges to clinical treatment. This article summarizes related research in recent years, and elaborates the resistance mechanism, molecular characteristics of Klebsiella pneumoniae to various antibiotics, and the possible relationship between Klebsiella pneumoniae resistance and virulence with the hope to bring clinical practice new perspectives and new     

肺炎克雷伯菌耐氟喹诺酮机理研究

目的:探讨肺炎克雷伯菌耐氟喹诺酮类药物的机理。方法:采用NCCLS推荐的K-B法测定50株肺炎克雷伯菌对氟喹诺酮类药物的耐药性并初步筛选出耐环丙沙星菌株。试管稀释法测定耐环丙沙星菌株对环丙沙星和左氧氟沙星的最低抑菌浓度(MIC)。对此23株菌GyrA的基因(gyrA)进行PCR扩增和基因序列的分析比较。结果:23株耐环丙沙星肺炎克雷伯菌中,20株存在gyrA变异:Ser83(TCC)→Phe(TTC)、Tyr(TAC),Asp87(GAC)→Asn(AAC)、Ala(GCC)。结论:肺炎克雷伯菌对氟喹诺酮类药物耐药机理主要与药物作用靶位gyrA基因的突变有关,并且gyrA基因突变位点越多其耐药程度越高。     

肺炎克雷伯菌抗生素耐药性的研究进展

肺炎克雷伯菌的耐药问题日益严重,给临床治疗带来了严峻挑战。本文总结了近年来的相关研究,阐述了肺炎克雷伯菌对多种抗生素的耐药机制及分子特征,以及肺炎克雷伯菌耐药性与毒力之间可能存在的联系,希望能给临床实践带来新视角和新选择。     

Characterisation of integrons containing the plasmid-mediated quinolone resistance gene qnrA1 in Klebsiella pneumoniae

The aim of this study was to determine the structural relationships of qnrA1 and other resistance genes in four integrons contained in four clinical isolates of Klebsiella pneumoniae. In the four integrons, the sequences surrounding qnrA1 were similar to those described for pMG252 (accession no. AY070235). The four integrons carried a class 1 integrase gene belonging to the complex class 1 integron. Three of the strains contained an identical integron coding for resistance to β-lactams, aminoglycosides, chloramphenicol and trimethoprim. The fourth strain contained a different integron coding for resistance to β-lactams, aminoglycosides and chloramphenicol. Downstream of the last integron, copies of IS6100 and IS26 were present. We describe two new and different integrons containing qnrA1. These integrons code for resistance to different groups of antimicrobial agents from K. pneumoniae clinical strains isolated in the USA.     

医院感染阴沟肠杆菌中整合子的检测及特点

目的 研究整合子在医院感染阴沟肠杆菌中的分布及其与细菌耐药的相关性,探讨Ⅰ类整合子与临床耐药播散的关系.方法 运用K-B法检测临床株的耐药表型,双纸片扩散法检测ESBLs,PCR扩增筛选含整合子的临床菌株,接合传递实验、套式PCR、质粒谱分析及DNA测序研究携带耐药基因的Ⅰ类整合子与耐药播散的关系.结果 医院感染阴沟肠杆菌69.2%含Ⅰ类整合子,未检测出Ⅱ类和Ⅲ类整合子.Ⅰ类整合子可变区扩增片段大小从1.0～2.3kb不等,编码对氨基糖苷类抗生素、磺胺类药物和氯霉素耐药的基因.整合子阳性组中ESBLs、多重耐药菌均明显高于阴性组.整合子可通过质粒在不同菌属间水平传播.结论 Ⅰ类整合子在医院感染阴沟肠杆菌中广泛分布.可通过质粒在不同菌属间水平传播,在耐药基因传播中起重要作用,应引起临床足够的重视.     

肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶基因分型研究

目的调查广州地区下呼吸道感染肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)的分离率及各种基因型的流行病学分布。方法收集广州地区13家医院2001-10～2002-12临床分离的肺炎克雷伯菌511株,采用美国临床实验室标准化委员会规定的ESBL表型筛选和确证试验确定ESBL的发生率、PCR扩增对产ESBL菌初步分型,然后对部分PCR扩增阳性产物测序,序列分析进一步确定基因型。结果肺炎克雷伯菌产ESBL分离率为40.1%。TEM型49株占21.9%,均为TEM-1型;CTX-M型59株占28.8%;SHV型96株占46.8%。结论SHV型是广州地区下呼吸道感染肺炎克雷伯菌产ESBL流行的常见基因型。     

Detection and genetic characterisation of qnrB in hospital isolates of Klebsiella pneumoniae in Singapore

Polymerase chain reaction (PCR) screening of 116 ciprofloxacin-resistant Klebsiella pneumoniae hospital isolates for the presence of qnr genes that mediate plasmid quinolone resistance revealed that none were positive for qnrA or qnrS. However, qnrB was detected in ca. 5.2% of the isolates. Southern hybridisation demonstrated that the qnrB-hybridising plasmids were large (>70kb) and capable of transferring quinolone resistance by conjugation. Sequence analysis of the qnrB genes detected in this study showed that they were identical to previously identified qnrB1, qnrB4 and qnrB6 genes, although a novel variant designated qnrB20 was also identified. Analysis of the genetic environment around the cloned qnrB genes showed that they were present in diverse plasmid backbones, sometimes within novel genetic contexts, but always associated with mobile or transposable elements.     

肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗菌药物的主要耐药机制及治疗策略

肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,Kpn)是临床常见的条件致病菌。碳青霉烯类药物抗菌活性强,对各种类型的β-内酰胺酶高度稳定,是治疗Kpn感染的最佳抗菌药物。然而,随着碳青霉烯类抗菌药物的使用,对碳青霉烯耐药Kpn(Carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae,CR-Kp)在临床的分离率逐年升高。CR-Kp感染治疗可供选择的抗菌药物非常有限,这给临床治疗带来很大挑战。本文主要从碳青霉烯酶的产生、细胞膜孔道蛋白缺失或者数量不足两个方面对CR-Kp的耐药机制以及治疗进展做一综述。     

基因芯片技术检测大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌中ESBLs和AmpC酶基因

目的检测大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌产生的ESBLs和AmpC酶的基因。方法在对ESBLs和AmpC酶表型检测的基础上,利用基因芯片和PCR技术研究大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌产生ESBLs和AmpC酶的基因,并对部分ESBLs和AmpC酶的基因扩增产物进行序列分析。结果大肠埃希菌和产酸克雷伯菌以单产ESBLs为主,肺炎克雷伯菌则以同时产生ESBLs和AmpC酶为主。大肠埃希菌产生的ESBLs(除TEM型外)主要是CTX-M-9组型,占63.5%。肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌产生的ESBLs分别以SHV型和CTX-M-3组型为主,分别占70.4%和89.8%。肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌的AmpC酶均为DHA-1型酶的基因,大肠埃希菌的AmpC酶主要编码CMY-2型AmpC酶。结论基因芯片技术可同时检测多种耐药基因,是ESBLs和AmpC酶基因检测的新途径。     

肺炎克雷伯碳青霉烯酶的研究进展

肺炎克雷伯碳青霉烯酶型β-内酰胺酶（KPC）是近年来发现的肠杆菌科细菌对碳青霉烯酶抗生素耐药的主要机制,可水解除头霉素以外的所有β-内酰胺类抗生素。然而由于实验室检测KPC的及时性与准确性仍不能达到临床要求,这必将给一线的抗感染治疗和管理院内感染带来困难,因此,临床医师和实验室更应该重视,相互加强联系与沟通。     

Gene cloning and characterization of KdeA, a multidrug efflux pump from Klebsiella pneumoniae

We cloned a gene related to multidrug resistance from a drug-resistant Klebsiella pneumoniae strain MGH78578. We designated the gene kdeA, which encodes a protein possessing 12 hydrophobic regions. The deduced amino acid sequence of KdeA is similar to that of MdfA, a well-characterized multidrug efflux pump from Escherichia coli. Introduction of the kdeA gene into cells of the drug-hypersusceptible E. coli strain KAM32 resulted in elevated minimum inhibitory concentrations of chloramphenicol, norfloxacin, acriflavine, and ethidium bromide. We observed elevated energy-dependent ethidium efflux activity with cells carrying kdeA compared with control cells. We also observed expression of kdeA in cells of K. pneumoniae under normal growth conditions.