人精子穿透去透明带金黄地鼠卵试验与人精卵体外受精的比较

目的　研究在人工助孕技术中能否以人精子穿透去透明带金黄地鼠卵试验 ( SPA)结果作为确定采用人精卵体外受精 ( IVF)或经卵细胞胞浆内单精子注射 ( ICSI)的指标。方法　对 2 2例准备行 IVF的夫妇男方精子 SPA受精率与其 IVF受精率结果进行比较。结果　 SPA和 IVF受精率分别为 38.6 %± 2 3.5 %与 5 3.5 %±2 8.4% ,SPA受精率较 IVF受精率低 ,但随着 SPA受精率的增加 ,IVF受精率也呈明显增加的趋势。在 SPA受精率大于 10 %的病例中 ,约 76 %的病例 IVF受精率大于 5 0 %。经统计学分析两者有显著相关性 ( rs=0 .70 46 ,| U | =3.2 2 84>u0 .0 1 /2 )。结论　 SPA受精率可作为助孕技术中确定 IVF或 ICSI助孕方案的参考指标     

人精子穿透去透明带金黄地鼠卵试验与人精卵体外受精的比较

OBJECTIVE: The research question was whether the result of human sperm zona-free hamsterovum penetration assay (SPA) could serve as an indicator for in vitro fertilization (IVF) or intracytoplasmic sperm injection (ICSI). METHODS: The semen samples of 22 male partners in couples with infertile marriage were assessed for their fertilizing capacity by SPA. The fertilization rate of SPA was compared with that of IVF. RESULTS: The fertilization rates of SPA and IVF were 38.6% +/- 23.5% and 53.5% +/- 28.4% respectively, and a significant correlation between SPA and IVF was observed (rs = 0.7045). CONCLUSION: The result of SPA may be used as a reference indicator for assisting fertilization, IVF or ICSI.     

精子-去透明带仓鼠卵穿透试验与精液分析主要参数的关系

目的：了解精液分析（ＳＡ）与精子－去透明带仓鼠卵穿透试验（ＺＨＯＴ）检测结果的关系,以评价此两种实验方法对评估男性生育力的临床实用价值。方法 对２２例男性不育症患者作了ＳＡ和ＺＸＨＯＴ（改良的Ｙａｎａｇｉｍａｃｈｉ方法）的检测,并对ＳＡ主要参数的指标的检测结果与ＺＨＯＴ的检测结果（穿卵率）进行统计分析。结果 ＺＨＯＴ之穿卵率与ＳＡ主要参数;精子密度、正常形态精子百分率间有显著的正相关（Ｐ〈０．０５     

猪卵透明带单克隆抗体体外对人精卵结合的影响

在于观察猪卵透明带单克隆抗对人精卵结合的影响，采用体外精卵结合试验方法，结果提示当１７Ｄ３单抗按１：２，１：１０，１：２０，１：３０稀释时，抑制率分别为９９．３％，９４％，７５．７％和４６．７％，其抑制人精卵结合的生物效应呈剂量相关，结论为猪卵透明带单克隆抗体对人精卵结合有抑制作用。     

猪卵透明带单克隆抗体体外对人精卵结合的影响

在于观察猪卵透明带单克隆抗体对人精卵结合的影响。采用体外人精卵结合试验方法。结果提示当１７Ｄ＿３单抗按１：２、１：１０、１：２０、１：３０稀释时，抑制率分别为９９．３％、９４％、７５．７％和４６．７％，其抑制人精卵结合的生物效应呈剂量相关。结论为猪卵透明带单克隆抗体对人精卵结合有抑制作用。     

重组人透明带蛋白3诱导精子的顶体反应

目的：在体外条件下检测重组人透明带蛋白诱导的顶体反应。 方法：体外采集已生育健康男子精液,采用非连续密度梯度法分离精子,将获能的精子悬液分成阴性对照组(C组,200 μL精子悬液加1 μL DMSO)、阳性对照组(A组,200 μL精子悬液加A23187至终浓度为10 μmol•L^-1)和ZP3组(200 μL精子悬液加ZP3至终浓度为10 mg•L^-1),考马斯亮蓝染色法检测重组人ZP3蛋白诱导的顶体反应。结果：C组、A组和ZP3组发生顶体反应的精子百分率分别为(5.00±1.70)%、(46.10±7.49)%和(13.20±2.70)%,各组间比较差异有显著性(P<0.05)。 结论：重组人透明带蛋白能够诱导人精子发生顶体反应。     

小鼠透明带溶解液诱导人精子顶体反应

目的 研究小鼠透明带溶解液诱导人精子顶体反应的效果，建立人精子顶体反应模型，方法正常生育力人精子经ＢｉｇｇｅｒｓＷｈｉｔｔｅｎａｎｄＷｈｉｔｔｉｎｇｈａｍｍｅｄｉｕｍ（ＢＷＷ）获能５～６ｈ后，分别用小鼠透明带溶解液（ｍＺＰＳ），ｍＺＰＳ的缓冲液ｈａｌｏｇｅｎｂｕｆｆｅｒ（ＨＢ），Ｃａ＾２＋载体Ａ２３１８７处理１ｈ，对实验和对照组精子用经典的豌豆凝集素（ＰＳＡ）法检测顶体反应。结果 ｍＺＰＳ组的顶体     

Ca^2＋对人精子穿透无透明带金黄地鼠卵的影响

应用人精子穿透无透明带金黄地鼠卵（SPA）技术，在BWW培养液中分别以不同浓度的Ca^ （1．71mmol,3.42mmol,5.13mmol,1.71mmol和ETA0．50mmol,1.71mmol和EGTA1．71mmol),对10例人精液标本进行分析，研究Ca^ 对人精子体外获能和穿透无透明带金黄地鼠卵的生物学效应，同时用透射电镜观察精子的亚细胞结构变化。结果表明：对照组（Ca^ 1．71mmol)穿透率为82．2％，而试验组的穿透率显著降低（P＜0．01），分别为9．5％，0，17．2％，0。Ca^ 对人精子亚微结构的影响主要发生在精子的顶体和颈部。本试验初步表明Ca^ 与人精子获能和顶体反应存在着一定的依存关系，Ca^ 浓度过高（＞1．71mmol）或过低（＜1．71mmol)，对精子获和穿透能力都有明显的抑制作用。     

甘露糖及其相关分子对小鼠精子与透明带结合的影响

为探讨甘露糖及其受体在小鼠精子－透明带结合中的作用，小鼠附睾尾精子经Ｍ１６工作液获能培养２ｈ后，分别用ＤＭＡ（甘露糖基化的牛血清白蛋白）、Ｄ－甘露糖处理１５ｍｉｎ，然后与未作处理的带透明带卵子共培养３０ｍｉｎ；另２组卵子分别用甘露糖苷酶、Ｃｏｎ Ａ（植物凝集素）处理１５ｍｉｎ后分别与未作处理的获能精子共培养３０ｍｉｎ。卵子固定，在相差显微镜下计数各组卵子的精子结合数。结果表明：ＤＭＡ、Ｄ－甘露糖、     

豚鼠精子顶体反应期间卵透明带诱导激活磷酸脂酶A2活性

目的 为了探讨HA是否参与ZP诱发的AR，它的激活是否依赖于Ca^2 的存在以及HA在豚鼠精子AR过程中的信号转导通路。方法 将豚鼠精子悬浮在最小获能培养基(MCM-LCa^2 ，23μM／LCa^2 )中预培养1h后，用[^11C]氯化胆碱或[^11C]花生四烯酸(AA)标记精子，并持续获能培养5h。经间断percoll密度梯度(30％～55％～85％)离心、洗涤。并将精子重新悬浮于MCM—LCa^2 培养其中。然后暴露于1mM/LCa^2 和／或ZP、百日咳毒素(PIX)、PLA2抑制剂、EGTA和甘油二脂激酶抑制剂(DAGKI),15分钟。精子膜脂类的提取、分离和鉴定采用Roldan和Varquer（1996)所报道方法。同时部分精子用相差显微镜检测AR百分率。结果获能精子Ca^2 ／ZP合并应用后，可进一步加速AA释放和溶血磷脂酰胆碱(LysoPC)产生。同时伴有磷脂酰胆碱减少(这些变化是PLA2活性的指征)。Ca^2 ／ZP的刺激亦导致精子AR率的增高；上述效应可被PLA2抑制剂马兜铃酸所阻断；采用PIX(G蛋白抑制剂)作用于已获能精子。结果发现由ZP引起AA和LysoPC含量升高以及AR率增加的效应均可被PIX抑制；23μMCa^2 存在下。精子虽不发生AR，但AA释放和LySoPC生成仍维持于较低的水平，而加入2mMEGTA(Ca^2 螫合剂)或250μMCa^2 (Ca^2 通道阻滞剂)可抑制HA的激活，导致AA和LySoPC的生成降低。DAG激酶抑制剂及K59022可加速AA及LySoPC产生,并促进口激发的AR。结论 上述结果表明，PLA2在四诱发豚鼠精子AR过程中起着关键作用,其激活仅需要低钙参与,同时PLA2活性受DAG和G蛋白介导信号转导通路的调控。     

猪卵透明带抗体对卵巢功能的影响

用sephadex G-100柱层析分离提纯的猪卵透明带(ZP)抗原,及卵巢组织中的其他蛋白抗原,分别免疫兔和猪。观察到不论是异种还是同种兔疫时,只有在猪被免疫时,其卵巢功能受到不同程度的抑制。提示ZP免疫动物的抗生育作用,与卵巢功能受抑制有关。     

人精子穿透金黄仓鼠卵试验在男性不育症中的诊断价值

用人精子穿透金黄仓鼠卵试验（ＳＰＡ），对３４例已知有生育力的供者和４８例男性不育症患者进行了检测。３４例有生育力的供者，穿透率为２６％￣１００％，平均为８３．４％；４８例男性不育症患者，穿透率为０％￣３１％，平均为４．３％，穿透率≤１０％者占９３％。不育组ＳＰＡ穿透率与精液常规检查中的精子密度，精子活动率和畸形率无明显相关关系（Ｐ〉０．０５）。结果提示：ＳＰＡ是评价精子受精能力的一个 良好方法。     

人精子穿透金黄仓鼠卵试验在男性不育症中的诊断价值

用人精子穿透金黄仓鼠卵试验（ＳＰＡ），对３４例已知有生育力的供者和４８例男性不育症患者进行了检测。３４例有生育力的供者，穿透率为２６％～１００％，平均为８３．４％；４８例男性不育症患者，穿透率为０％～３１％，平均为４．３％，穿透率≤１０％者占９３％。不育组ＳＰＡ穿透率与精液常规检查中的精子密度，精子活动率和畸形率无明显相关关系（Ｐ＞０．０５）。结果提示：ＳＰＡ是评价精子受精能力的一个良好方法。     

子宫内膜异位症患者卵泡液对精子与透明带结合能力的影响

目的 探讨子宫内膜异位症及非子宫内膜异位症患者卵泡液对精子与透明带结合能力的影响,方法 卵泡液取自２０例进行体外表胚胎的不孕症患者,其中１０例为子宫内异位症,１０例为单纯炎症性输卵管不通,应用半透明带配对研究,培养液ＥＢＳＳ／ＢＳＡ做为对照,观察子宫内膜异位症及非子宫内异位症患者卵泡液对精子与透明带结合能力的影响。结果 经子宫内膜异位症２卵泡液与非子宫内膜异位症患者卵泡液处理后的精子与透明带结合的     

人卵透明带重组融合基因及其表达载体的构建

目的构建人卵透明带蛋白3（zona pelludda 3，ZP3）／GST蛋白融合基因原核表达载体。方法利用PCR法扩增出去N端的信号肽和C端的跨膜区huZP3成熟蛋白编码基因。先将其克隆到pGEM-T载体，进行序列测定和分析，然后将huZP3核心DNA片断克隆入GST蛋白融合原核表达载体pGEX4T-1内。结果获得一个核苷酸长度约为1000bp的基因，与GenBank（NCBI：M60504）公布的ZP3基因序列有99％的同源性。DNA序列分析发现。有一个氨基酸出现变异。酶切鉴定后证明ZP3基因完整插入GST融合蛋白原核表达载体pGEX4T-1中。结论成功构建出含ZP3基因的GST融合蛋白原核表达载体。     

人精子单克隆抗体抑制精子穿透无透明带田鼠卵

本工作观察了4个人精子单克隆抗体(BAS_(1—4))对人精子穿透无明带田鼠卵的影响。取获能人精子加入不同稀释度的人精子单克隆抗体处理30min,再加入无透明带的田鼠卵15—20枚,经孵育3h后,观察精子穿卵情况。空白对照组和血清对照组分别用BWW液和灭活小鼠血清代替人精子单克隆抗体。用统计学处理比较实验组和血清对照组受精率及受精指数的差异。结果表明,4个人精子单克隆抗体中,除BAS_4对精子穿卵无抑制作用外,其余3个均有明显抑制作用。以上结果表明,我们所制备的人精子单克隆抗体不仅具有免疫学活性,也具有生物学活性。我们的初步结果为利用人精子单克隆抗体纯化人精子膜抗原,研究精子结构与功能的关系,以及发展一种可能用于局部的新型避孕方法或免疫避孕提供了基础。     

人卵透明带3蛋白的二级结构和B细胞抗原表位预测

目的:预测并综合分析人卵透明带3(human zona pellucida 3,hZP3)蛋白的二级结构及其B细胞抗原表位。方法:以hZP3蛋白的基因序列为材料,采用Garnier-Robson法、Chou-Fasman法和Karplus-Schulz法预测其结构蛋白的二级结构及蛋白骨架区的柔韧性,采用Kyte-Doolittle法对蛋白的亲水性进行分析,Emini法预测蛋白的表面可能性,Jameson-Wolf法预测蛋白的抗原指数。结果:hZP3蛋白含有较多的β折叠和转角结构。该蛋白第27~31、36~46、114~133、140~151、237~240和324~329区段可能是α-螺旋中心;hZP3蛋白分子第52~54、60~67、74~78、100~111、158~169、181~185、190~193、210~218、226~229、311~317、335~349和353~360区段可能是β-折叠中心。hZP3蛋白具有多处抗原指数较高的区段,其中近中部区段和近羧基端的第92~95、132~137、171~178、239~245、252~255、279~286、292~305和319~324区段含有潜在的B细胞优势抗原表位。结论:以蛋白质的二级结构预测作为辅助手段,用抗原指数、亲水性参数和表面可能性参数预测hZP3蛋白的B细胞抗原表位,为实验确定hZP3蛋白的B细胞抗原表位并以此进行免疫避孕研究奠定基础。     

猪卵透明带抗独特型抗体对鼠免疫抗生育作用的研究

目的评价猪卵透明带抗独特型抗体的免疫对生育功能的作用。方法利用一株鼠抗猪卵透明带单克隆抗体（１７Ｄ３ｍＡｂ）,通过异种动物免疫及亲和层析纯化制备猪卵透明带抗独特型抗体（Ａｂ２）。结果用Ａｂ２免疫小鼠,妊娠率有下降趋势,平均胚胎数明显低于对照组（正常兔ＩｇＧ免疫的小鼠）（Ｐ＜００５）。卵巢组织形态学显示,Ａｂ２只影响晚期生长卵泡。结论虽然Ａｂ２组对卵巢的损伤程度较热溶解透明带组明显减轻,但抗生育效果不完全,可能与Ａｂ２中内影像结构仅占Ａｂ２分子的成份较低有关。因此,未来通过基因工程筛选Ａｂ２内影像表位并连续表达,可能是克服这一障碍的有效手段。     

顶体蛋白酶抑制剂4-胍基苯甲酸盐对人精子功能的影响

目的：研究顶体蛋白酶抑制剂４－胍基苯甲酸盐（ＫＦ－９５０）对人精子功能的影响。方法：体外用不同浓度的ＫＦ－９５０作用于人精子,观察其活动率;用免疫组化ＡＢＣ法观察ＫＦ－９５０对精子顶体结构的影响。结果：ＫＦ－９５０对人精子的作用与其浓度和明关。经≥０．２ｍｇ／ｍｌ ＫＦ－９５０处理,随着时间的延长以精子活动率明显下降,精子膜功能有不同程度的损害,顶体脱落率以及已发生顶体反应的精子死亡率明显上升。结