杆状病毒在家蚕体内表达乙肝表面抗原的研究

报道了将乙型肝炎病毒（ａｄｒ亚型）Ｓ区基因（共６８１ｎｔ）克隆于家蚕核型多角体病毒的基因组中，并将其导入家蚕细胞，通过多轮筛选得到纯的重组家蚕杆状病毒，用该病毒接家蚕，初步证明能够得到了乙肝表面抗原的高效表达，在家蚕幼虫的血淋巴和蛹体中，用ＲＰＨＡ法检测的滴度可达１：４０９６。     

人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体在家蚕中的表达与鉴定

目的 以家蚕为生物反应器表达人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL),并检测其生物学活性.方法 将人TRAIL(93～281aa)基因重组于质粒pBacPAK8构建重组转移载体pBacAK8-TRAIL.与经线性化修饰的家蚕棱型多角体病毒(BmBacPAK)DNA共转染家蚕培养细胞株BmN,获得了插入TRAIL基因的重组病毒,重组病毒感染家蚕细胞和家蚕幼虫,使其表达人TRAIL.结果 Southern杂交表明重组病毒基因组中含有人TRAIL基因片段,RNA斑点杂交表明人TRAIL基因得到了转录,重组病毒感染家蚕细胞株(BmN)、家蚕幼虫,在细胞培养上清、细胞抽提物、幼虫的体液样品中通过Westblot分析都能检测得到表达产物的特异性条带;采用L929细胞检测TRAIL的生物学活性.结论 提示人TRAIL基因分别在家蚕培养细胞和蚕幼虫中得到高效表达,此基因杆状病毒表达系统的建立为进一步研究TRAIL奠定了基础.     

LAK细胞治疗慢性活动型乙型肝炎的疗效与机理研究

应用自体LAK细胞回输治疗40例慢性活动型乙型肝炎患者。疗程结束时，LAK治疗组HBeAg和HBVDNA转阴率分别为22·5％和40％，与对照组相比差异显著（P均＜0.001）。12个月复查HBeAg、HBVDNA转阴率分别达到4O％和68.57％。LAK治疗后患者CD4 细胞数及CD4 ／CD8 比，IL－2水平及mIL－2R表达，NK细胞及LAK细胞活性等各项指标均较治疗前明显升高（P均＜0．01）。其中HBeAg转阴的患者，IL－2升高更为显著（P＜0．005）。     

血清药理学方法研究广西藤茶提取物对乙肝病毒的作用

目的研究广西藤茶提取物APS在体外对乙肝病毒（HBV）的作用。方法采用血清药理学方法，将APS含药血清作用于2,2．15细胞，收集细胞上清液，用MTT法测定细胞上清液中HBsAg、HBeAg的含量。结果APS含药血清对2．2．15细胞分泌的HBsAg、HBeAg有显着抑制作用。结论APS对2．2．15细胞分泌乙型肝炎病毒抗原有抑制作用。     

重组病毒／家蚕细胞系统稳定高效表达HBeAg基因的研究

以ＨＢｅＡｇ基因置换家蚕核多角体病毒中多角体蛋白基因编码序列，获得高效表达ＨＢｅＡｇ的重组病毒ｒＢｍＨＢｅ。在重组病毒复制过程中，家蚕ＢｍＮ细胞的病理变化与野型生型病毒的感染相同，但不能形成多角体。     

藤茶双氢杨梅树皮素对2215细胞分泌HBsAg及HBeAg的抑制作用

目的研究藤茶双氢杨梅树皮素（DHM）在2215细胞培养中对乙型肝炎病毒分泌HBsAg及HBeAg的抑制作用。方法接种2215细胞24h后．加入DHM培养8d，观察DHM对细胞的毒性．在无毒质量浓度下，将药物加入2215细胞培养8d，测定培养液中HBsAg和HBeAg水平。结果DHM半数细胞毒质量浓度（TC50）为272．5ug／mL，最大无毒质量浓度（TCu）为62．5ug／mL；在最大无毒质量浓度下，DHM对2215细胞分泌HBsAg及HBeAg具有明显的抑制作用？对于HBsAg，DHM半数有效量（IC50）为17．7ug／mL，治疗指数（TI）为15．4；对于HBeAg，IC50为21．8ug／mL，TI为12．5。结论DHM对2215细胞分泌HBsAg及HBeAg有明显的抑制作用。     

转阴灵抗乙型肝炎病毒的体外实验研究

目的通过体外实验,探讨转阴灵抗乙肝病毒(HBV)的作用。方法将转阴灵作用于体外培养的2.2.15细胞,以MTT比色法观察转阴灵的细胞毒性,以ELISA法检测细胞培养液中HBsAg和HBeAg的变化,观察药物对2.2.15细胞分泌HBsAg和HBeAg的影响。结果转阴灵作用于2.2.15细胞8d后,对细胞的半数毒性质量浓度(TC50)为4.5g·L-1,对HBsAg和HBeAg抑制的半数有效质量浓度IC50分别为0.42和0.15g·L-1,转阴灵对HBsAg和HBeAg的治疗指数(TI)分别为10.71和30.00。结论转阴灵在体外细胞培养中对HBsAg和HBeAg的分泌有较好的抑制作用,有显著的抗HBV作用。     

用杆状病毒载体在家蚕细胞中表达HBeAg基因及其表达产物纯化的 …

以ＰＣＲ技术扩增含有Ｐｒｅ－Ｃ信号肽序列及完整的ＨＢｅＡｇ基因序列，克隆至家蚕核多角体病毒转移载体ｐＢｍ０３０，与野生型ＢｍＮＰＶ ＤＮＡ共转染家蚕ＢｍＮ细胞，空斑纯化后得重组病毒，研究结果表明ＢｍＮ细胞能正确识别与切割ＨＢｅＡｇ信号肽序列，所表达的ＨＢｅＡｇ效价高，纯度好，ＥＬＩＳＡ法测得培养上清中ＨＢｅＡｇ效价达１：３２０００。上清经过Ｓｅｐｈａｃｒｙ １ Ｓ－２００和ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏ     

抗乙型肝炎反义核酸药物的筛选及细胞毒性研究

为了筛选抗乙型肝炎（HBV）反义寡核苷酸药物，根据HBV基因组序列择S基因起始区、SPⅡ帽子区、前核心基因起始区、核心起始区、包装信号起始区等5个基因靶位点，设计并合成硫代反义寡核苷酸（S－asODN），以HePG22215细胞为研究对象，利用ELIAS法、MTT比色法、电子显微镜观察等手段，观察上述s－asODN对HePG22215细胞HBsAg和HBeAg表达以及对细胞的杀伤作用和细胞形态、超微结构的影响，结果显示s－asODN能显著抑制HBsAg和HBeAg的表达，s－asODN抗HBV具有序列特异性、剂量相关性、抗核酸酶性、联合用药协同性。     

深海嗜压菌水通道蛋白AqpSS9在Bac-to-Bac家蚕杆状病毒系统中表达

利用家蚕杆状病毒表达系统合成深海嗜压菌Photobacterium profundum SS9的新型水通道蛋白AqpSS9。首先通过家蚕核型多角体病毒BmNPV的Bac-to-Bac系统构建重组转移载体pFasBac HTB-AqpSS9,将其转化到含穿梭载体Bm-Bacmid的大肠杆菌Bm-DH10Bac中进行转座作用,白斑筛选得到重组穿梭载体Bacmid-AqpSS9。用脂质体介导将Bacmid-AqpSS9转染家蚕BmN细胞,在细胞内包装形成重组的BmNPV病毒rBm AqpSS9。利用SDS-PAGE及Western blot检测重组蛋白AqpSS9在家蚕培养细胞中的表达,结果显示目标蛋白被成功表达。该实验为新型水通道蛋白AqpSS9的进一步应用研究奠定了基础。     

贺普丁治疗慢性乙型肝炎的病例对照研究

目的：研究贺普丁治疗慢性乙型肝炎的治疗作用及其特点,方法：采用1：1病例配对方法,比较贺普丁（治疗组）和护肝片＋当飞利肝宁（对照组）对患血清ALT、HBeAg、抗－HBe及HBVDNA的作用。结果：治疗组ALT较对照组下降的慢,但在6个月时,两接近（P＞0．05）;治疗组在治疗后1、3、6月HBVDNA的阴转率分别是51．3％、78．1％和84．4％,对照组相比差异有显性（P＜0．001）;但HBeAg的阴性,与对照组相比,无统计学意义,结论贺普丁治疗慢性乙型肝炎HBV DNA转阴率高,ALT下降的慢,而对HBeAg作用不太理想。     

应用ELISA法检测门冬酰胺酶中残余大肠杆菌菌体蛋白含量的研究

采用Cygnus公司"大肠杆菌菌体残留蛋白检测试剂盒"检测门冬酰胺酶中残余宿主菌菌体蛋白含量,建立门冬酰胺酶中宿主菌菌体蛋白残留检测方法并进行了相关方法验证。验证结果表明:宿主菌菌体蛋白浓度在0～100 ng/mL范围内呈良好的线性关系,线性相关系数大于0.99,不同实验人员测得的精密度RSD均小于5%,平均回收率为94.34%。通过对8批门冬酰胺酶样品的检测,测得门冬酰胺酶中的残余宿主菌体蛋白含量均小于550×10-6。该方法具有快速,操作安全简便等优点,灵敏度高,重现性好,可用于门冬酰胺酶的宿主菌体蛋白的残留检测。     

GST-hS100A9融合蛋白的原核表达、纯化及鉴定

目的制备GST-hS100A9融合蛋白。方法从pHAHA-hS100A9中PCR扩增获取hS100A9基因,亚克隆至原核表达载体pGST-moluc,构建pGST-hS100A9;后者转化BL21菌后,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组菌表达融合蛋白GST-hS100A9,经谷胱甘肽-琼脂糖4B球珠(GS4BB)分离纯化、SDS-PAGE及Western blot鉴定,BCA法蛋白定量,CCK-8测定GST-hS100A9对乳腺癌细胞MCF-7增殖的作用。结果经酶切、测序分析证实pGST-hS100A9质粒构建正确;重组菌株经IPTG诱导后,表达相对分子质量约36 000的蛋白;纯化后纯度达94%;该蛋白可被S100A9的抗体特异识别;该蛋白产量约为20 mg/L菌液;且其抑制MCF-7的增殖。结论成功构建GST-hS100A9融合蛋白的原核表达质粒pGST-hS100A9;该质粒可在BL21中诱导表达GST-hS100A9,产率高,且对MCF-7增殖有抑制作用。     

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎的多中心、随机双盲、安慰剂对照研究

目的：研究拉米夫定对血清乙型肝炎病毒＿脱氧核糖核酸（ＨＢＶ＿ＤＮＡ）阳性的慢性乙型肝炎病毒感染病人的疗效和安全性。方法：４２９例病人,随机分成拉米夫定治疗组（３２２例）和安慰剂对照组（１０７例）。治疗组每日口服拉米夫定１００ｍｇ,对照组服用外形相同的安慰剂每日１片,共１２ｗｋ。结果：治疗组累计９２．２％病人血清ＨＢＶ＿ＤＮＡ阴转（低于１．６ｎｇ／Ｌ）,最终持续阴转率为７８．５％。对照组ＨＢＶ＿ＤＮＡ累计阴转率为１４．１％,最终阴转率为１１％。２组疗效比较Ｐ＜０．０１。治疗前丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）增高的病人,１２ｗｋ时治疗组的ＡＬＴ复常率为６０．３％,对照组为２７％,Ｐ＜０．０１。２组ＨＢｅＡｇ／抗ＨＢｅ的血清转换率差别无显著意义（Ｐ＞０．０５）。２组的不良反应发生率比较,差别无显著意义（Ｐ＞０．０５）。结论：拉米夫定能明显降低血清ＨＢＶ＿ＤＮＡ水平,促使ＡＬＴ恢复正常,不良反应轻,耐受性好。     

Pathogenecity of fosfomycin-resistant strains isolated from Escherichia coli

Two fosfomycin-resistant strains, FRC14 (parent strain, Escherichia coli [E.coli] c73-18) and FRK104 (parent strain, E. coli O124), were isolated from spleens before the bacterial disappearance, after inoculating the parent strains intraperitoneally into mice and treating them with a single oral dose of fosfomycin. The resistant strains were successfully isolated by a replica method from a mass of sensitive cells of respective parent. To elucidate the pathogenesis of the resistant strains, their characteristics were investigated. The MIC of fosfomycin for FRC14 was 25 micrograms/ml (4 times the MIC for the parent) and that for FRK104 was 100 micrograms/ml (8 times the MIC for the parent). The strain FRC14 showed a defective utilization of sn-glycerol 3-phosphate (G3P), but utilization of other carbohydrates was similar to that of the parent strain. Thus, the strain FRC14 seemed to be a glpT mutant. The strain FRK104 did not use variety of carbohydrates including G3P, but used glucose 6-phosphate. The utilization of G3P was recovered in the presence of cAMP. Thus, the strain FRK104 seemed to be a ptsI mutant. These resistant strains were diminished their killing activity for mice in comparison to that of the each parent strain when they were inoculated intraperitoneally. The cell number of FRC14 decreased or disappeared in blood and spleen in mice, while that of the parent increased. The strain FRK104 diminished its ability of producing keratoconjuctivitis in guinea pigs in comparison to that of the parent strain.     

检测大肠杆菌菌体蛋白的夹心ELISA试剂盒的建立及应用研究

目的  建立特异、敏感的检测大肠杆菌菌体蛋白的夹心ELISA试剂盒。方法  采用大肠杆菌菌体蛋白免疫家兔,制备得到高效价抗菌体蛋白抗血清。将经饱和硫酸铵盐析、阴离子交换柱层析和亲和层析纯化的兔抗大肠杆菌菌体蛋白特异性多克隆抗体作为包被抗体和检测抗体,用生物素标记检测抗体,并加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的亲和素。结果　建立的大肠杆菌菌体蛋白夹心ELISA检测方法的敏感性为0.32 μg/L,检测范围为1~100 μg/L,与国际同类商品化试剂盒相当。此法具有良好的稳定性,其批内变异系数小于7.7%,批间变异系数小于6.2%。结论  建立了特异、敏感、稳定的检测大肠杆菌菌体蛋白的夹心ELISA试剂盒,为生物制品中残留大肠杆菌菌体蛋白的质量控制提供了一种重要的检测方法。     

拉米夫定联合P-转移因子口服液治疗慢性乙型肝炎的疗效

目的探讨慢性乙型肝炎病毒（HBV）携带者的治疗方法。方法应用拉米夫定（Lamivudine）联合P-转移因子口服液治疗HBV携带者HBeAg、抗HBc—lgM、HBVDNA均阳性者75例为观察组,对照组38例只服拉米夫定,观察6—12个月。结果治疗6个月时观察组HBeAg、抗-HBe、HBVDNA阴转达47．9％、15．4％和78．9％;对照组为28．8％、13．8％和68．1％;治疗12个月时,观察组HBeAg、抗-HBe、HBVDNA阴转达64．8％、36．7％和82．3％;对照组为36．6％、13．8％和68．2％。两组比较,差异有显著性垆〈0．05）。结论P-转移因子口服液能够提高HBV携带者对拉米夫定的生化学、血清学应答率,二者联合是一种较好的抗HBV的治疗方法。     

滑动平均法的改良及其在大肠埃希菌头孢他啶耐药性拟合中的应用

目的：探讨滑动平均法（SAM）的改良及其在大肠埃希菌头孢他啶耐药性拟合中的应用价值。方法：对滑动平均法进行改良得到滑动平均改良法（ISAM）。收集1996～2008年期间国内中文期刊全文数据库（CNKI）中文献报道大肠埃希菌头孢他啶耐药性数据。分别用SAM与ISAM对数据进行拟合与分析,以RSE、MAD、ARE判断拟合效果。结果：共收集1996～2008年期间国内大肠埃希菌头孢他啶耐药相关文献386篇,数据910条。ISAM计算所得RSE、MAD、ARE值均最小。结论：ISAM拟合效果优于SAM,ISAM拟合结果显示1996～2008年期间国内大肠埃希菌头孢他啶耐药性呈上升趋势。可考虑加强联合用药,适当更换药物以防止耐药率进一步上升,以减少资源的浪费。     

培养基pH值与提纯方法对大肠杆菌表达rhGM-CSF产率的影响

目的为了提高大肠杆菌表达的重组人粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子 (rhGM CSF)的产率 ,对影响工程菌生长、产物表达和产物提纯等因素进行探索。方法设计 3种pH值培养基 ,以菌得率、表达率为指标 ,观察 pH对工程菌生长和表达的影响。以包涵体得率、纯度和产品得率、纯度、活性为指标 ,观察表达产物提纯各步对产率的影响。用SDS PAGE薄层扫描法测定包涵体和产品纯度。用TF1细胞MTT法测定产品rhGM CSF活性。结果 pH7.0培养基最好 ,菌得率 2 .2 2g/L ,表达率为 2 3 % ,比其它pH值培养基约高 1倍。菌体不经冻存处理即进行破菌制备包涵体 ,得率可提高 2 .5倍。在rhGM CSF复性步中 ,复性液中加入少量PEG 40 0 0 ,可提高复性率 0 .8倍。采用优化条件制备大肠杆菌rhGM CSF ,可提高产率约 8倍。结论影响大肠杆菌表达rhGM CSF产率的因素较多 ,优化培养、表达、纯化各步的条件 ,均可大幅度提高产率。     

重组人血管生长素基因工程菌发酵条件的初步研究

目的研究表达重组人血管生长素 (rhANG)工程菌的发酵条件。方法采用摇瓶发酵 ,研究不同宿主菌对表达rhANG的影响 ,同时对培养基、诱导时期、诱导时间和初始pH等发酵条件以及质粒稳定性进行研究。结果选用E .coliCDH为宿主菌 ,在SOB培养基中培养至A6 0 0nm 为 0 .5～ 0 .6时 ,诱导表达 5h ,rhANG表达量最高达 30 %。重组质粒具有良好的分离稳定性和结构稳定性。结论此发酵条件可以较好地提高rhANG的表达量 ,为发酵规模的扩大奠定了基础