端粒酶反义RNA对人髓性白血病细胞系HL-60的作用

目的 探讨抗端粒酶在急性白血病治疗中的意义。方法 用脂质体介导法将pBBS212-hTR(反义端粒酶RNA真核表达载体）导入人髓性白血病细胞系HL-60中,采用TRAP法测定端粒酶活性,细胞生长动力学检测,电镜,DNA片段分析等方法观察其对HL-60细胞的端粒酶活性、细胞增殖及细胞凋亡影响。结果 端粒酶反义RNA能显抑制HL-60细胞的端粒酶活性,抑制HL-60细胞的增殖并促进其凋亡。结论 以端粒酶反义RNA抑制端粒酶活性是治疗白血病的潜在途径。     

降低端粒酶表达对人喉癌细胞系Hep-2生长的影晌

目的：用表达端粒酶反义RNA的方法研究端粒酶在喉癌细胞生长中的作用。方法：将端粒酶反义RNA真核表达载体，pBBS212-hTR转染入人喉癌Hep-2细胞系中，采用端粒重复扩增法测定端粒酶活性，用MTT法及流式细胞仪检测细胞周期，并用电镜观察细胞生长状况。结果：端粒酶反义RNA表达后能抑制Hep-2细胞的端粒酶活性，抑制细胞增殖并促进其凋亡.结论：以端粒酶反义RNA降低端粒酶的方法对人喉癌细胞系Hep-2的生长有明显抑制作用。     

脂质体介导端粒酶反义RNA对人乳腺癌细胞MCF-7活性及增殖的影响

目的:探讨经脂质体介导转染端粒酶反义RNA对MCF-7细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响。方法:用脂质体介导法将pBBS212-hTR(反义端粒酶RNA真核表达载体)导入人乳腺癌细胞MCF-7中,采用TRAP-PCR-ELISA法测定端粒酶活性,四唑盐比色(MTT)法检测MCF-7细胞的增殖,FCM分析等方法观察其对MCF-7细胞的增殖影响。结果:端粒酶反义RNA能显著抑制MCF-7细胞的端粒酶活性,抑制MCF-7细胞的增殖并诱导其凋亡。结论:脂质体转染反义端粒酶RNA在封闭细胞端粒酶活性表达的同时,可促进MCF-7细胞凋亡。     

益气解毒片对鼻咽癌细胞端粒酶和端粒酶RNA抑制作用的实验研究

为研究益气解毒片对鼻咽癌细胞端粒酶和端粒酶RNA的影响,先用MTT法检测其杀伤鼻咽癌细胞(HNE1)的半抑制浓度(IC50),再用10×IC50、1×IC50、0.5×IC50作用HNE1 12 h、24 h、48 h、72 h、96 h,然后检测HNE1端粒酶(Telomerase)活性和端粒酶RNA的表达.结果:10×IC50作用HNE1 24 h,端粒酶活性下降为阴性,同时端粒酶RNA的表达受到抑制;1×IC50作用后,端粒酶活性稍有下调,但端粒酶RNA表达无明显改变;0.1×IC50作用后,端粒酶活性没有明显变化,但低于白空对照组.这提示较高浓度益气解毒片在体外能抑制端粒酶的活性和端粒酶RNA表达,可能通过对鼻咽癌细胞及其端粒酶的活性抑制而发挥抑瘤效应.     

反义核酸对胃癌细胞端粒酶活性与细胞生长的抑制

目的阐述反义核酸对端粒酶活性抑制作用的浓度依赖性和序列特异性,表明端粒酶活性表达对胃癌细胞分化的不依赖性. 方法运用改良的端粒酶活性定量检测法,测定三种胃癌细胞(MKN-28、SGC-7901、MKN-45)的端粒酶活性;用台盼蓝染色法,观察胃癌细胞的活力.结果三种不同分化程度的胃癌细胞均有端粒酶活性的表达,但其活性的高低与其分化程度没有显著关系.在指定的浓度下,端粒酶反义核酸作用于胃癌细胞后,MKN-45和SGC-7901胃癌细胞出现明显的端粒酶活性和细胞生长的抑制,但在同样浓度条件下,MKN-28胃癌细胞只出现端粒酶活性的抑制.错义序列对照组则无明显变化.结论端粒酶活性与胃癌细胞的分化没有显著相关性.端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能抑制胃癌细胞的生长和端粒酶活性,其抑制作用有浓度依赖性和序列特异性,其作用机制是通过抑制端粒酶活性,端粒酶活性的抑制并不总是同细胞生长的抑制平行的.     

反义核酸对胃癌细胞端粒酶活性与细胞生长的抑制

目的：阐述反义核酸对端粒酶活性抑制作用的浓度依赖性和序列特异性，表明端粒酶活性表达对胃癌细胞分化的不依赖性。方法运用改良的端粒酶活性定量检测法，测定三种胃癌细胞(MKN-28、SGC-7901、MKN-45)的端粒酶活性；用台盼蓝染色法，观察胃癌细胞的活力。结果：三种不同分化程度的胃癌细胞均有端粒酶活性的表达，但其活性的高低与其分化程度没有显著关系。在指定的浓度下，端粒酶反义核酸作用于胃癌细胞后，MKN-45和SGC-7901胃癌细胞出现明显的端粒酶活性和细胞生长的抑制，但在同样浓度条件下，MKN-28胃癌细胞只出现端粒酶活性的抑制。错义序列对照组则无明显变化。结论：端粒酶活性与胃癌细胞的分化没有显著相关性。端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能抑制胃癌细胞的生长和端粒酶活性，其抑制作用有浓度依赖性和序列特异性，其作用机制是通过抑制端粒酶活性，端粒酶活性的抑制并不总是同细胞生长的抑制平行的。     

RNA干涉对人胃癌细胞端粒酶活性影响的研究

目的：研究RNA干涉技术对人胃癌细胞株MGC80-3和BGC-823端粒酶活性表达的影响,以找到抑制端粒酶活性的简便方法。方法：根据RNA干涉原理,针对端粒酶基因序列设计了抑制端粒酶表达的核苷酸序列,克隆进真核表达载体中;并以脂质体转入到胃癌细胞系的MGC80-3和BGC-823细胞中,以空质粒为对照,48h后收集细胞的总RNA,逆转录成cDNA后,通过荧光差异显示法检测基因表达的变化。结果：检测到一些基因的表达发生改变,端粒酶活性明显下降。结论：可以通过RNA干涉影响端粒酶活性。     

反义寡核苷酸抑制端粒酶活性对喉癌细胞癌基因表达的影响

目的探讨针对端粒酶的反义寡核苷酸对喉癌细胞端粒酶活性的抑制及对P53和PCNA基因表达的影响.方法用PCR-ELISA法检测喉癌细胞株Hep-2细胞内端粒酶的活性.用免疫组化的方法检测喉癌细胞P53和PCNA基因的表达.结果该反义寡核苷酸可抑制喉癌细胞端粒酶活性,此作用有序列特异性和浓度依赖性.40μM反义寡核苷酸抑制了喉癌细胞PCNA的表达,而对P53表达无明显影响.结论靶向于端粒酶的反义寡核苷酸能抑制喉癌细胞Hep-2PCNA基因的表达.     

端粒酶与乳腺癌关系的研究进展

端粒是真核细胞染色体末端的重复结构.端粒酶是合成端粒重复结构的一种具有逆转录活性的DNA聚合酶.在乳腺癌组织中普遍存在高水平端粒酶表达,而在癌旁组织、正常乳腺组织及良性病变组织中无表达或只是极低表达.细针穿刺组织中检测端粒酶有助于乳腺癌的早期诊断.化疗能够明显抑制乳腺癌中端粒酶活性.端粒酶活性与预后的关系尚有待深入研究.目前研究认为,端粒酶是乳腺癌抗癌治疗的一种新靶点,并可能作用为临床治疗的潜在指标.     

小归芍超临界提取物诱导人胃癌细胞凋亡的机制研究

目的 研究小归芍超临界提取物对人胃癌BGC-823细胞端粒酶活性和端粒酶逆转录酶基因表达的影响,以阐明其诱导凋亡的可能机制.方法 用不同稀释度(0,12.5、25.0、50.0、100.0、200.0 mg/kg)的小归芍超临界提取物作用于培养的人胃癌BGC-823细胞,以PCR-ELISA法检测端粒酶活性,western-blotting法半定量检测端粒酶逆转录酶基因的表达.结果 小归芍超临界提取物能抑制BGC-823细胞端粒酶的活性和端粒酶逆转录酶基因的表达.结论 小归芍超临界提取物诱导人胃癌细胞凋亡的机制可能与其抑制端粒酶的活性和端粒酶逆转录酶基因的表达有关.     

肿瘤患者外周血细胞端粒酶表达及临床意义

目的探讨肿瘤患者外周血单个核细胞端粒酶活性的表达.方法采用端粒重复序列扩增-微孔板杂交法测定恶性肿瘤患者48例,良性患者34例和38例正常对照者外周血单个核细胞端粒酶表达.结果恶性肿瘤和良性肿瘤患者组外周血单个核细胞端粒酶活性比对照组明显增高(P＜0.01),且对恶性肿瘤和良性肿瘤患者的检出阳性率分别达77.1%和47.1%.结论外周血单个核细胞端粒酶表达与肿瘤的发生、发展有关,因而检测外用血单个核细胞端粒酶活性有助于肿瘤的早期诊断和治疗.     

膀胱癌早期诊断中尿脱落细胞端粒酶活性检测的临床价值

目的探讨尿脱落细胞端粒酶活性检测在膀胱癌早期诊断中的临床意义。方法采用TRAPPCRELISA法检测32例膀胱癌患者尿液及14例非膀胱肿瘤患者尿液脱落细胞的端粒酶活性,并行尿脱落细胞学检查。结果32例膀胱癌患者尿脱落细胞端粒酶活性阳性率为65.6%,14例非膀胱肿瘤患者尿脱落细胞仅1例端粒酶活性阳性。膀胱癌与非膀胱肿瘤患者的端粒酶活性比较有显著性差异(P<0.01),但与膀胱肿瘤的分级、分期无明显相关性(P>0.05),尿脱落细胞端粒酶活性检测的敏感性明显高于尿细胞学检查。结论尿脱落细胞端粒酶活性检测敏感性较高,可用于膀胱肿瘤的早期诊断和术后随访。     

妇科肿瘤组织中端粒酶活性的研究

目的 :探讨端粒酶与妇科肿瘤发生发展的关系及其作为妇科肿瘤标志的可能性。方法 :采用端粒重复序列扩充法 ,结合银染色 ,研究 2 3例妇科恶性肿瘤、2 1例良性肿瘤及 2 2例正常组织的端粒酶活性。结果 :2 3例恶性肿瘤中端粒酶表达阳性者 2 1例 (91.3% ) ,且多数为强阳性 ,强阳性率 73.9% ,阳性表达与肿瘤发展阶段、恶性程度不相关。良性肿瘤 2 1例 ,10例弱阳性 (4 7.6 % )。正常组织 2 2例 ,5例弱阳性 (2 2 .7% )。结论 :端粒酶在妇科恶性肿瘤的发生发展中起重要作用 ,端粒酶活性的检测可能成为妇科恶性肿瘤的标志物     

非小细胞肺癌端粒酶活性的相对定量检测

应用端粒酶聚合酶链反应 (PCR) -酶联免疫吸附测定 (ELISA)法 ,检测手术切除标本中肺癌组织、癌旁组织及正常肺组织端粒酶活性。结果显示 :1 5例肺癌组织端粒酶活性为 0 84± 0 3 8;其中 8例鳞癌为 0 82± 0 3 9,7例腺癌为 0 86± 0 3 9,明显高于 1 5例癌旁组织 0 1 6± 0 0 3和 3例正常肺组织 0 1 4± 0 0 2 (均P <0 .0 0 1 )。以吸光度A450>0 .2 0为阳性 ,1 5例肺癌组织端粒酶活性阳性率为 86 7% (1 3 /1 5 ) ;其中腺癌阳性率为 85 7% (6 /7) ,鳞癌阳性率为87 5 % (7/8) ;而 1 5例癌旁组织和 3例正常肺组织端粒酶活性表达均为阴性。提示端粒酶活性可作为非小细胞肺癌诊断的特异性较强的分子标记物 ;TRAP PCR ELISA法检测端粒酶活性具有方法简便 ,结果可靠。     

人胃癌中端粒酶活性表达的研究

目的　探讨人胃癌组织中端粒酶的活性表达。方法　采用端粒重复序列扩增法 (temolericrepeatamplificationprotocol,TRAP)检测 4 2例原发性胃癌及相应的癌旁组织中端粒酶活性。结果　在 4 2例胃癌中 ,有 35例端粒酶呈阳性 ,而癌旁组织中仅有 2例阳性。结论　端粒酶激活与胃癌的发生有关 ,并可能成为诊断胃癌的肿瘤标记物     

端粒重复序列扩增法检测胃癌组织中端粒酶活性研究

目的：研究胃癌组织,癌旁及远端正常胃组织中的端粒酶活性,探讨其作为胃癌肿瘤标记物的可能性。方法：采用ＴＲＡＰ－ＥＬＩＳＡ法检测了５１例胃癌组织,癌旁及远端正常胃组织的端粒酶活笥表达。结果：５１例胃癌组织中端粒酶阳性表达４８例（９４．１％）,癌旁组织为１７例（３３．３％）,远端正常胃组织未检测出端粒酶活性。结论：端粒酶是特异较强的恶性肿瘤其因标志,有可能成为胃癌早期诊断和治疗的理想标记物。     

Telomerase expression in sebaceous carcinoma of the eyelid

Background In humans telomerase is expressed in most cancers and immortal cell lines, and astivation of telomerase may play important roles in tumorigenesis and immortalization. This study was to investigate the roles of telomerase activity (TA) and human telomerase RNA (hTR) in sebaceous carcinoma of the eyelid.Methods The telomerase repeated amplification protocal (TRAP) was used to demonstrate telomerase activity in 12 cases of sebaceous carcinoma of the eyelid. In situ hybridization (ISH) was used to demonstrate the expression of hTR in 55 cases of paraffin-embedded sebaceous carcinoma of the eyelid, and the results were compared with the proliferative index determined by Mib-1 immuno-labeling, histological patterns and recurrence of the tumor.Results Different telomerase activity was shown in the 12 cases of sebaceous carcinoma of the eyelid. The positive expression of hTR was 85.5% (47/55) in tumor cells, but not in the adjacent tissues. The positive expression of hTR was correlated with the proliferative activity (as assessed by Mib-1 immunolabelling, r=0.942, P&lt;0.001) and the differentiation of sebaceous carcinoma of the eyelid (χ2=17.621, P&lt;0.001), but not significantly related to tumor recurrence. The level of hTR expression increased with the decrease of differentiation of sebaceous carcinoma of the eyelid.Conclusions The results suggest that the up-regulation of telomerase expression plays some roles in tarsal gland carcinogenesis, and the expression of hTR is a useful marker for malignant degree of sebaceous carcinoma of the eyelid.     

端粒酶与肿瘤治疗研究进展

由于端粒酶特异地表达于大部分肿瘤细胞,并且为大多数肿瘤细胞持续分裂所必需,因此抑制端粒酶活性就成了一种治疗肿瘤的特异靶点。随着对端粒酶研究的深入,应用靶向端粒酶的方法治疗肿瘤成为热点,并取得了较多的新进展,本文针对端粒酶在肿瘤中的表达调控和靶向端粒酶的肿瘤寡核苷酸治疗、基因治疗、免疫治疗、联合治疗以及干细胞治疗的研究进展进行综述。     

大肠癌及其转移淋巴结中端粒酶活性的研究

目的　研究大肠癌、癌旁组织及转移淋巴结中端粒酶的活性表达 ,探讨其与大肠癌的生物学特性及预后诸因素的关系。方法　采用PCR ELISA法定量检测 34例大肠癌组织、2 0例癌旁组织及 1 6例转移淋巴结中端粒酶的活性 (TA)。结果　 34例大肠癌组织中 ,端粒酶阳性表达 31例 ,阳性率 91 2 %。 2 0例癌旁正常粘膜组织中 ,仅 2例为阳性 (1 0 % )。 1 6例转移淋巴结中 ,1 3例检出端粒酶活性表达 ,阳性率为 81 3 %。淋巴结转移“ +”的大肠癌组织与淋巴结转移“ -”的大肠癌组织端粒酶活性A值相比有显著差异 (P <0 .0 5)。大肠癌组织与癌转移淋巴结中端粒酶活性水平明显高于癌旁组织 (P <0 .0 1 )。端粒酶的活性表达与大肠癌的部位、病理类型、分化程度、分期及侵袭范围等临床病理因素无明显相关性。结论　端粒酶的活性水平与大肠癌的发生、发展密切相关 ,是一种特异性很强的恶性肿瘤标志物 ,有可能成为大肠癌早期诊断的标志物和治疗的新靶点     

乳腺癌端粒酶活性表达研究

目的　探讨端粒酶活性水平同乳腺癌临床病理指标的关系及其作为化疗疗效评价指标的意义。方法　用半定量TRAP 银染法测定 5 3例乳腺癌、10例纤维腺瘤及 6例癌旁组织标本的相对端粒酶活性。结果　乳腺癌组织端粒酶活性表达明显高于乳腺良性病变 (P <0 .0 1) ;术前未经治疗的原发性乳腺癌中 ,端粒酶活性表达与TNM分期、局部淋巴结状态、雌激素受体及孕激素受体表达有关 ;术前化疗组端粒酶活性水平较未化疗组低。结论　端粒酶活性水平可反映肿瘤的侵袭性 ,并可作为乳腺癌的预后判断指标及化疗疗效的评价指标。