用聚合酶链反应检测肺癌myc族癌基因扩增

应用聚合酶链反应分析人非小细胞肺癌组织标本中ｍｙｃ族癌基因扩增情况。在３３例中检测出５例有ｍｙｃ癌基因扩增，说明在非小细胞肺癌中ｍｙｃ族癌基因扩增的频率较低。其中１例为腺癌复发患者，提示ｃ－ｍｙｃ扩增可能同癌复发相关。同时还发现另外一条带，可能是ｍｙｃ族的新成员，有待于进一步研究。     

聚合酶链反应分析多肿瘤抑癌基因1第二外显子纯合性缺失

目的 摸索可靠、高效和特异的聚合酶链反应（ＰＣＲ）条件，分析多肿瘤抑癌基因１（ＭＴＳ１）第二外显子纯合性缺失。方法 对一系列ＰＣＲ参数进行摸索同时设立对照，并对ＰＣＲ产物进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分析。结果 ＰＣＲ产物是特异的ＭＴＳ１第二外显子。结论 扩增ＭＴＳ１第二外显子的ＰＣＲ反应条件可以得到可靠、特异的结果。     

聚合酶链反应检测小细胞肺癌myc族癌基因扩增的研究

应用通用引物ＰＣＲ技术检测１６例小细胞肺癌组织ｍｙｃ族癌基因（ｃ－ｍｙｃ，Ｌ－ｍｙｃ，Ｎ－ｍｙｃ）扩增状况，１６例小细胞肺癌中，５例有ｍｙｃ基因扩增（３１％）。其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期小细胞肺癌ｍｙｃ癌基因扩增发生率分别为２５％（１／４），２９％（２／７）和４０％（２／５）。并且，有ｍｙｃ癌基因扩增的病例平均生存期较无扩增者短。研究结果提示ｍｙｃ族癌基因扩增是小细胞肺癌发展过程中产生的遗传学改变，并可影响患者的预后。     

聚合酶链反应检测宫颈癌组织中HPV16DNA相关序列

从石蜡包埋的宫颈癌组织和宫颈上皮瘤样病变(CIN)组织中提取DNA,用聚合酶链反应体外扩增人乳头瘤病毒16型(HPV16)的E6区,然后检测组织DNA中HPV16相关序列,以探讨人乳头瘤病毒16型与宫颈癌发生的关系。共检测标本28份,阳性率为42.9%(12/28)。其中宫颈癌阳性率为47.8%(11/23),高于宫颈上皮瘤样病变的阳性率。表明人乳头瘤病毒16型与人宫颈癌的发生有十分密切的关系。     

用聚合酶链反应检测宫颈癌组织中人巨细胞病毒DNA相关序列

为建立检测人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染的ＰＣＲ方法并探讨ＨＣＭＶ与宫颈癌的关系，从石蜡包埋和活检宫颈癌组织中提取ＤＮＡ，用聚合酶链反应体外扩增ＨＣＭＶＥｃｏＲＩＤ片段上一段长１５２ｂｐ的核酸序列，再用地高辛末端转移酶标记法标记和扩增片段互补的ＨＣＭＶ寡核苷酸探针，用该探针证实扩增片段的特异性。检测宫颈癌标本４３例，阳性率为２５．６％（１１／４３），正常宫颈组织８例，阳性率为０。宫颈癌标本阳性率高于正常宫颈标本，提示ＨＣＭＶ与宫颈癌的发生有关。     

用改良的竞争性聚合酶链反应测定乳腺癌癌基因HER2、mdm－2和myc的扩增

使用改良的竞争性聚合酶链反应法，对１５例乳腺癌基因ＨＥＲ２、ｍｄｍ－２和ｍｙｃ的扩增进行测定，发现分别有５、６和６例存在扩增。其中ＨＥＲ２和ｍｄｍ－２基因的扩增分别与肿瘤临床分期和淋巴结转移存在相关关系，说明上述基因扩增的测定可以成为对乳腺癌病人进行预后判断和研究乳腺癌生物学行为的指标。这种方法具有准确、操作简单、对ＤＮＡ质量和数量要求不严格、不需使用同位素等优点。     

载脂蛋白A-I的凝胶切割纯化法及其抗血清制备的研究

本文介绍以肝素-柠檬酸液沉淀法提取纯化人血清载脂蛋自 A-I(ApoA-I)法,方法简便易行,同时免疫得到高效价羊抗人 ApoA-I 单价抗血清。测定了1169名健康人和31例冠心病患者血清 ApoA-I 和 ApoB 的含量,并计算 Apok-I/ApoB 比值。对血清 ApoA-I、B 及其比值变动的临床意义进行了讨论。     

胃肠肿瘤中H-ras癌基因第十二位密码子点突变的研究

采用聚合酶链反应和寡核苷酸探针杂交法检测20例胃肠肿瘤中H-ras癌基因第十二位密码子的G→T点突变,结果在1/1贲门癌和4/13胃癌中发现有这种点突变的存在,而6例大肠癌中无1例发生突变,提示H—ras癌基因的点突变可能是贲门癌和胃癌中癌基因的激活方式之一。     

神经系统疾患脑脊液寡克隆IgG区带的检测及其临床意义

聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳法检测 CSF 寡克隆 IgG 区带已作为反映中枢神经系统体液免疫异常的定性指标。聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳方法作 CSF 寡克隆 IgG 区带分折分辨力高,不需要浓缩 CSF,只要200μg 蛋白的 CSF 就可灵敏地反映出γ-球蛋白质和量的变化.作者应用本方法对124例 CSF 标本检测的结果表明:该法操作简便、灵敏度高,具有一定的临床实用价值。     

二步温控法聚合酶链反应检测宫颈癌中HPV-16E_6/E_7相关序列

应用改良的二步温控法 PCR 技术,检测34例人宫颈癌组织 DNA,发现宫颈癌中 HPV-16 E_6/E_7相关序列存在的阳性率为67.6%(23/34)。结果提示:HPV-16可能在宫颈癌的发生发展过程中起重要作用,采用改良 PCR 技术选择性地检测 HPV-16的转化基因(E6、E7)对深入探讨宫颈癌发生的机理、早期发现宫颈癌患者等有重要意义。     

采用通用引物进行PCR检测宫颈中人乳头瘤病毒的基因

采用可检测九个型别人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）的通用引物进行多聚酶链反应，在４７份宫颈糜烂患者的宫颈细胞标本中检出了ＨＰＶ阳性的标本２３份。在这２３份阳性标本中ＨＰＶ１６型特异性引物进一步用ＰＣＲ进行扩增，检出ＨＰＶ１６型阳性者１０份，在２４份ＨＰＶ阴性的标本中用ＨＰＶ１６型特异性引物未检出ＨＰＶ１６阳性的标本。结果表明：用通用引物进行ＰＣＲ检测人乳头瘤病毒的感染，方法简便、灵敏、经济，特别适合于ＰＣＲ     

阴道镜下宫颈癌血管图象分析

本文分析了经阴道镜检查的3987例(4818人次)患者,检出癌前及癌变患者共229例,其中165例有血管异型,占72.05％。各类病变的异型血管图象归纳有点状、镶嵌和非典型三种,均出现于移行区,只有浸润癌的异型血管才有可能播及到宫颈边缘甚至达到阴道穹窿部。病灶所见异型血管种类的多寡、异型的程度及分布的范围,综合反映了病变的严重程度,因此在阴道镜下观察血管型的改变,是诊断宫颈癌前、早期癌肿和浸润癌的依据之一。     

宫颈癌组织基因组中C-MYC癌基因同源序列的检测及其临床意义

以α-~(32)p-dCTP标记的C-MYC癌基因为探针,采用斑点杂交法检测38例慢性宫颈炎,49例宫颈癌组织DNA中C—MYC癌基因的同源序列。结果慢性宫颈炎、宫颈癌杂交阳性率分别为26.32％(10/38)、83.67％(41/49)。而以α-~(32)p-dCTP标记的C-MYC重组体作探针进行杂交,结果49例宫颈癌杂交阳性率分别为100％(49/49)。结果提示:(1)分子杂交法检测以C—MYC DNA的同源序列有助于宫颈癌的早期诊断;(2)人体组织基因组中存在有PBR_(322)的同源序列,因此以克隆化重组体作探针进行条交必须注意到载体所产生的假阳性。     

应用多聚酶链反应检测肺炎支原体

参考Ｂｅｒｎｅｔ法合成引物一对，建立肺炎支原体ＤＮＡ的多聚酶链反应检测法，靶ＤＮＡ为１４４ｂｐ。特异性试验显示仅肺炎支原体呈阳性。敏感性试验显示≥１１３ｃｆｕ肺炎支原体呈阳性。检测３０例临床疑似肺炎支原体肺炎患儿的咽拭子，肺炎支原体ＤＮＡ阳性率８０％，１０例健康小儿咽拭子均呈阴性，全部操作可在２４ｈ内完成。     

用PCR检测新疆部分女性尖锐湿疣与宫颈上皮内瘤变组织HPV的初探

应用多重引物人乳头瘤病毒(HPV)6b、11、16、18型聚合酶键反应(PCR)技术检测74例新疆南疆、北疆部分地区女性下生殖道尖锐湿疣(CA)与宫颈上皮内瘤变(CIN)组织中人乳头瘤病毒DNA(HPV DNA).其中在南疆检测出CA17例,CIN Ⅲ级20例,在北疆检测出CA22例,CINⅠ～Ⅲ级2例,CINⅢ级13例.结果:总HPV DNA检出率分别为94.1%、90.0%、90.9%、86.7%.CIN与CA患者的HPVDNA检出率在地区性方面无显著性差异(P>0.05).在南、北疆患者CA组织中HPV6b、11、16、18型检出率分别为89.7%、12.8%、5.1%.CIN组织中HPV6b、11型检出率为0%,HPV16、18型检出率分别为65.7%、20%.提示CA与HPV6b、11型感染有关,CIN则与HPV16、18型密切相关.并且在南、北疆CA与CIN患者所感染的HPV亚型无地理分布差异(P>0.05).CIN组织中,HPV16、18型检出率较国内外报道高,值得重视;CA组织中,检出HPV高危型(HPV16、18型)7例,其中1例伴宫颈不典型增生Ⅰ～Ⅱ级,这些病例应继续密切随访.     

应用套式PCR检测嗜肺军团杆菌的实验研究

应用套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测１￣６型嗜肺军团杆菌，两轮ＰＣＲ都分别出现了９９６ｂｐ和６５０ｂｐ的特异性扩增产物；而金黄色葡萄球菌等七种细菌均未出现特异性扩增。两轮ＰＣＲ分别可以检测１０ｐｇ和１０ｆｇ的模板ＤＮＡ。８份嗜肺军团杆菌含量分别为１￣１０＾７ｃｆｕ／ｍｌ的痰感染模拟标本均出现了特异性扩增产物。提示该方法可用于临床，特别是检测含微量嗜肺军团杆菌的临床标本。     

聚合酶链反应检测无菌性体液中真菌

目的：评价聚合酶链反应（PCR）直接检测无菌性体液中真菌结果可靠性。方法：采用真菌通用引物，通过PCR对96份临床无菌性体液扩增菌DNA，同时对这些标本进行细菌、真菌培养。结果：PCR诊断无菌性体液真菌感染与培养法完全一致，培养出细菌的标本PCR检测真菌PCR检测真菌DNA均阴性。结论：PCR直接检测无菌性体液中真菌敏感、特异、快速、准确，但不能代替培养法。     

内蒙古妇女宫颈癌组织中人乳头瘤病毒的PCR检测

目的了解我国宫颈癌高发区妇女宫颈癌组织中人乳头瘤病毒感染状况,探讨HPV感染与宫颈癌的关系.方法以PCR和多重PCR法检测76例宫颈癌组织中HPV感染及型别分布状况.结果HPV阳性率为80.0%.HPV感染率在不同临床分期及不同病理分级宫颈癌组织间无显著性差异(P＞0.05).宫颈鳞癌中HPV 16阳性率为63.4%,HPV 18阳性率为5.6%,在宫颈腺癌中HPV 18的阳性率高于鳞癌,差异有显著性(P＜0.05).结论HPV感染是宫颈癌的主要致病因素,HPV 16和宫颈鳞癌密切相关,HPV18和宫颈腺癌密切相关,HPV感染对宫颈癌的进展及组织分化无影响.     

线粒体直接PCR扩增法

为建立一种不需提取线粒体DNA而直接用线粒体进行聚合酶链反应 (PCR)的方法 ,将得到的线粒体用高温加热 ,使线粒体膜破裂 ,释放DNA后 ,直接用于PCR扩增。结果 :扩增产物与提纯的线粒体DNA扩增得到的产物一样丰富。提示 :该方法适用于对线粒体DNA纯度没有特别要求的试验