1株引起皮肤播散型孢子丝菌病的申克孢子丝菌临床分离株的真菌学鉴定

目的:探讨一株引起皮肤播散型孢子丝菌病的申克孢子丝菌临床分离株的真菌学特点,并对其进行鉴定。方法:自1例皮肤播散型孢子丝菌病患者皮损中分离1株菌株,分别以1株固定型孢子丝菌菌株及淋巴管型孢子丝菌菌株作为阳性对照,利用常规真菌形态学方法对其进行鉴定。结果:引起皮肤播散型孢子丝菌病的临床分离株经真菌学鉴定为申克孢子丝菌。结论:引起皮肤播散型孢子丝菌临床分离株经真菌学鉴定为申克孢子丝菌,其在SDA固体培养基及小培养镜下的形态特征与其他类型孢子丝菌菌株基本一致,无法区分。     

肺炎克雷伯菌基因分型与药敏结果分析

目的对肺炎克雷伯菌各型菌株的耐药现状进行流行病学研究。方法采用改进的随机引物扩增多态性DNA分型法(RAPD)基因分型技术,对分离自门诊和住院患者的48株肺炎克雷伯菌进行基因分型,同时对菌株进行12种抗生素敏感试验。结果48株肺炎克雷伯菌41株有稳定的RAPD带型,共分16型,同型菌株药敏结果基本相同。结论该院呼吸科R ICU存在肺炎克雷伯菌的小流行;合理使用抗生素,加强重点病区的消毒隔离措施,是控制医院感染流行的重要措施。     

白色念珠菌的耐药性和随机扩增DNA多态性分型研究

采用Etest药敏试验方法检测 30株临床分离白色念珠菌对 5种抗真菌药物的敏感性 ,并用随机扩增DNA多态性 (RAPD)分型方法对这些菌株进行基因分型。结果发现有两株对氟康唑耐药 ,且它们的RAPD带型有着高度相似性 ,提示RAPD带型可能与耐氟康唑基因有关。     

白色念珠菌的耐药性和随机扩增DNA多态性分型研究

采用Etest药敏试验方法检测30株临床分离白色念珠菌对5种抗真菌药物的敏感性,并用随机扩增DNA多态性(RAPD)分型方法对这些菌株进行基因分型。结果发现有两株对氟康唑耐药,且它们的RAPD带型有着高度相似性,提示RAPD带型可能与耐氟康唑基因有关。     

应用M13引物PCR指纹法分析假丝酵母菌氟康唑耐药性

目的探讨M13微卫星引物PCR指纹法用于假丝酵母菌氟康唑耐药性基因分型的可行性。方法采用纸片扩散法分析假丝酵母菌氟康唑耐药性,并进一步对41株假丝酵母菌进行M13引物PCR指纹分析,采用RAPD200软件邻接法(neighbour joining,NJ)聚类分析电泳带型模式。结果41例主要从痰液和阴道分泌物中分离的假丝酵母菌标本中中,氟康唑药物敏感11株(26.8%),依赖8例(19.5%),耐药22例(53.7%),PCR指纹分析至少可检测到12种不同的条带,条带数目从2条到12条不等,电泳带型模式与感染部位和氟康唑药物反应性有关。结论假丝酵母菌氟康唑耐药性菌珠所占比例较大,M13微卫星引物PCR指纹法可用于假丝酵母菌的分子流行病学调查和氟康唑耐药性基因分型。     

随机引物扩增多态性DNA技术在大肠埃希菌分型中的应用

目的：应用随机引物扩增多态性DNA(RAPD)技术分析大肠埃希菌DNA多态性，并对其进行分型，观察敏感株、耐药株基因型之间的关系。方法：利用蛋白酶K、酚—氯仿抽提DNA模板，应用一对随机引物建立RAPD的检测分析方法，并对12株敏感型、15株耐药型(ESBLs)大肠埃希菌进行基因分析。结果：12株敏感型有8种基因型；15株耐药型中有12种基因型。27株大肠埃希菌在250bp处有共同条带；15株耐药型在1200bp处有共同条带，而敏感型则没有。结论：大肠埃希菌属间有特异性共同条带；耐药菌株中存在共同的特异性条带，与耐药性有关。因此，大肠埃希菌对β-内酰胺类耐药，可利用RAPD基因分型技术进行鉴定。     

应用M13引物PCR指纹法分析假丝酵母菌氟康唑耐药性

目的 探讨M13微卫星引物PCR指纹法用于假丝酵母菌氟康唑耐药性基因分型的可行性。方法 采用纸片扩散法分析假丝酵母菌氟康唑耐药性，并进一步对41株假丝酵母菌进行M13引物PCR指纹分析，采用RAPD200软件邻接法(neighbour joining，NJ)聚类分析电泳带型模式。结果 41例主要从痰液和阴道分泌物中分离的假丝酵母菌标本中中，氟康唑药物敏感11株(26.8％)，依赖8例(19.5％)，耐药22例(53．7％)，PCR指纹分析至少可检测到12种不同的条带，条带数目从2条到12条不等，电泳带型模式与感染部位和氟康唑药物反应性有关。结论 假丝酵母菌氟康唑耐药性菌珠所占比例较大，M13微卫星引物PCR指纹法可用于假丝酵母菌的分子流行病学调查和氟康唑耐药性基因分型。     

波氏假阿利什菌和尖端赛多孢子菌随机扩增DNA多态性分析

为了解波氏假阿利什菌和尖端赛多孢子菌的基因学特征，研究其DNA分型与菌种来源的关系。采用随机扩增多态性DNA分析（RAPD）方法。发现3种引物可将来自5个国家的13株波氏假阿利什菌和18株尖端赛多孢子菌分为31个基因型。     

马尔尼菲青霉AP-PCR基因指纹分析

目的：观察马尔尼菲青霉基因特征及与致病的相关性。方法：采用AP-PCR技术,以P215’AGTCAGCCAC-3',PL1055'-AGTCGTCCEE-3’,P120 5'-GGGAGACATC-3’为单引物对12株竹鼠分离的马尔尼菲青霉及3株临床分离菌株进行DNA指纹分析。结果：①菌株DNA指纹图谱呈多态性,主要带型相同;②引物P23扩增竹鼠分离菌株与临床分离菌株DNA带型有较大差异。结论：马尔尼菲青霉基因差异可能与致病力相关。     

金黄色葡萄球菌RAPD基因分型研究

目的了解医院内金黄色葡萄球菌RAPD基因分型,分析MRSA的流行传播情况。方法应用K-B纸片扩散法和随机多态性扩增DNA技术（Randomly amplified polymorphic DNA,RAPD）对医院分离的金黄色葡萄球菌进行MRSA鉴定和基因分型。结果 57株金黄色葡萄球菌中有MRSA31株,经RAPD扩增后,扩增产物在2~6条带之间,通过聚类分析57株菌产生10个基因型。结论Ⅵ型为本院金黄色葡萄球菌的流行优势基因型,不同来源菌株基因型分布有明显差异。RAPD分型技术简便、快速,在医院感染流行病学研究具有很大的应用前景。     

Characterization of Sporothrix schenckii by random amplification of polymorphic DNA assay

Objectives To investigate the DNA polymorphism of Sporothrix schenckii(S.schenckii)and to find the relationship between DNA patterns and geographic areas and clinical manifestations.Method The total DNA was extracted with hexadecyltrimethyl-ammonium gromide.Random Amplification of Polymorphic DNA(RAPD) assay was used to study DNA typing of 24 strains of S.schenckii collected from different aress and isolated from different clinical types.Results Of seven random primers used,three primers(OPAA1,OPD18 AND OPB07)gave good reactions,the sequences of which were 5‘-ACCCGACCTG-3‘,5‘-GAGAGCCAAC-3‘,5‘-GGTGACGCAG-3‘ respectively.The RAPD patterns of the 24 isolated were not completely identical,showing certain degrees of hereditary variability.Different isolates showed a common conserved dna band with the same primer.Dirrerent clinical types showed different genotypes.Conclusion RAPD analysis is useful in DNA typing of S.schenckii,the DNA band type of which is related to geographic origin and Clinical manifestation.     

幽门螺杆菌对克拉霉素的耐药性和基因型的同一性

目的 明确克拉霉素耐药的幽门螺杆菌(Hp)菌株耐药性和基因型的混合感染情况.方法 从16株对克拉霉素耐药的Hp混合菌落菌株中各随机挑选10个单菌落,转代扩菌后,用琼脂稀释法测定单菌落对克拉霉素的最低抑菌浓度(MIC),CTAB/NaCl方法提取单菌落的DNA,用PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)检测其点突变,随机扩增的多态性DNA(RAPD)方法比较各菌落的基因型.结果 来自16个耐药Hp菌株的共160个单菌落均对克拉霉素耐药,且都存在23 S rRNA基因的点突变.来自同一患者的克拉霉素耐药菌株的10个单菌落具有相同的RAPD指纹图谱,与亲代混合菌落菌株也有相同的RAPD指纹图谱.结论 克拉霉素耐药的Hp菌株中未发现耐药性或基因型的混合感染存在.     

RAPD技术在肠炎沙门氏菌同源性分析中的应用

目的 研究2004年广州市3起肠炎沙门氏菌食源性疾病分离的20株菌株和来源于从业人员健康体检的18株肠炎沙门氏菌的分子特征,为肠炎沙门氏菌食源性疾病的流行病学溯源和疫情控制提供有效手段。方法 采用随机引物扩增多态性DNA分析（randomly amplified polymorphic DNA analysis,RAPD）对38株肠炎沙门氏菌进行分子分型,结合SPSS软件构建以上菌株的带型关系系统树状图,对菌株进行基因多态性分析。结果 38株肠炎沙门氏菌的RAPD结果经聚类分析可分为3个聚类群,分属3个不同的克隆。结论 RAPD技术可用于肠炎沙门氏菌食源性疾病的流行病学调查和溯源。     

PCR对新生隐球菌的基因分型研究

目的：用AP-PCR方法检测新生隐球菌的临床和环境分离株,观察PCR指纹与血清型的关系。探索PCR指纹对于新生隐球菌的分型标准。方法：采用3种寡核苷酸重复序列即CN1[（GTG5）]、CN2[（GACA）4]和CN3[（GATA）4]为引物对从患和鸽粪中分离到的48株新生隐球菌DNA进行扩增,根据圹增产物的电泳带型对比PCR指纹和血清型之间的关系。结果：38株血清A型株中,34株有完全相似的DNA带型,另4株中1株与血清D型的DNA带型相似,3株的PCR指纹与血清A、B、C、D型的带型均不相同,各有独特的PCR指纹带型。2株B型和2株C型产生几乎完全一致的PCR指纹带型,3株D型和3株其他隐球菌则各自产生特定的DNA带型。结论：（1）大多数血清A型产生隐球菌株具有相似PCR指纹带型;（2）血清B型和C型（gattii变种）的PCR指纹不易区别,相同血清型不同的株可能有不同的PCR指纹带型;（3）PCR指纹法用于新生隐球菌菌株鉴定的一种快速、方便、可行的方法。     

RAPD技术用于结核病交叉感染的鉴别

目的：调查RAPD技术用于结核菌株DNA指纹鉴定的效果。方法：采用多重PCR方法对一组2例母女同时发病的肺结核患者和一组2例先后发病的兄妹肺结核患者的病原菌进行了菌种鉴定。采用RAPD技术对它们的基因组DNA进行指纹多态性分析。结果：4株病原菌均为结核分支杆菌。经RAPD分型，其中母女组2菌株的DNA指纹图谱完全相同，兄妹组2菌株的DNA指纹图谱有所不同。证明母女组所染病原菌的同源性很好，很可能为同一感染源，母女之间交叉感染的可能性很大；兄妹组病原菌的同源性较差，为非交叉感染。结论：RAPD技术适用于结核分支杆菌流行病学调查，特别是交叉感染的鉴别。     

DNA-based subtypes and antimicrobial susceptibility profiles of Haemophilus influenzae and Haemophilus parainfluenzae isolated from different tonsillar sites of children undergoing tonsillectomy and/or adenoidectomy

We did a comparative analysis between DNA-based subtypes and antimicrobial susceptibility profiles on Haemophilus influenzae and Haemophilus parainfluenzae, isolated from multiple tonsillar sites per individual from patients with chronic recurrent tonsillitis and/or tonsillar idiopathic hypertrophy and undergoing tonsillectomy and/or adenoidectomy. A total of eighty-eight Haemophilus isolates were obtained aseptically from the surface and core of tonsils and/or adenoids of 32 out of 60 patients and identified at the species level by the X and V factors and the API NH Kit. The H. influenzae and H. parainfluenzae isolates as well as ATCC strains were tested for antimicrobial susceptibility using a panel of antimicrobial agents. Random amplified polymorphic DNA (RAPD) was done on extracted DNA from all Haemophilus isolates and ATCC strains, using one 10 mer and one 18 mer primers to subtype the two species. Antimicrobial susceptibility testing data have shown a variation in generated susceptibility patterns to tested antimicrobial agents among H. influenzae and H. parainfluenzae isolates. This variation was demonstrated too among isolates obtained from different tonsillar sites (core and surface) in a single patient. RAPD analysis identified 58/88 (66%) different RAPD patterns. Variations in RAPD patterns among H. influenzae and H. parainfluenzae were also observed in isolates obtained from different tonsillar sites of the same individual. A correlation between RAPD patterns and antimicrobial susceptibility data, have shown: 1) the predominance of one strain (RAPD pattern) of either Haemophilus species among isolated organisms per patient, and exhibiting different antimicrobial susceptibility profiles or 2) the existence of multiple strains (RAPD patterns) of either Haemophilis species per patient, and showing either a single or multiple antimicrobial susceptibility profile(s). These observations question the validity of swab cultures obtained from a single tonsillar site per patient, for detection, identification and determination of antimicrobial profiles of the etiology of tonsillitis, since swab specimens taken from only one site may or may not reflect the etiology of infection.     

仅黏菌素敏感的多重耐药铜绿假单胞菌分子流行病学研究

目的从基因水平了解多重耐药铜绿假单胞菌中仅黏菌素敏感铜绿假单胞菌(COS-PA)的流行情况。方法①收集本院灼伤科2001年3月至2003年12月临床分离的铜绿假单胞菌52株,其中COS-PA 32株。②收集外科重症监护病房(SICU)2003年1月至2003年12月临床分离的铜绿假单胞菌57株,其中COS-PA 22株;收集SICU水池下水口非仅黏菌素敏感铜绿假单胞菌(non-COS-PA)1株。③采用多种引物随机扩增DNA多态性(RAPD)技术和统计学方法分析其流行情况。结果①灼伤科2001~2003这3年的COS-PA,经RAPD(引物ER IC2、325、272)分型均为同一型别(Burn-A型)。②SICU 2003年收集的COS-PA,经RAPD(引物325)分型为同一型别(SICU-A型);在SICU收集的non-COS-PA也多数呈同一型别(SICU-B型),自SICU水池下水口收集到的1株non-COS-PA也属于此型。③灼伤科及SICU经RAPD(引物325)联合分析证实,两个科室的COS-PA为不同型别,无同源性。结论灼伤科和SICU都存在科室内COS-PA流行,SICU还存在non-COS-PA流行。应严格消毒隔离措施,加强对铜绿假单胞菌在潮湿环境及患者中流行情况的严密监测。多种引物RAPD分析是判断铜绿假单胞菌流行情况的有利工具。