小剂量维甲酸诱导对神经母细胞瘤耐药的影响

目的探讨小剂量维甲酸诱导对神经母细胞瘤(NB)化疗耐药的影响。方法选择人NB细胞株SH SY5Y,用RT PCR方法检测小剂量全反式维甲酸(ATRA)作用下TrkB mRNA水平;通过四甲基偶氮蓝比色(MTT)法及流式细胞仪(FCM)检测ATRA诱导前后顺铂对人NB细胞株SH SY5Y的生长及凋亡的影响。结果SH SY5Y中未检测到TrkB mRNA表达,用1、10、100nM/LATRA诱导5d后可检测到TrkB mRNA表达,且随ATRA浓度增加TrkB mRNA水平逐渐升高。100nM/LATRA诱导7d,TrkB mRNA的相对比值与诱导5d比差异无显著性意义(P>0.05);MTT分析显示:BDNF+顺铂组(无TrkB表达)、ATRA+顺铂组(无BDNF刺激)细胞存活率同单用顺铂组比较无显著性差异(P>0.05);10nM/LATRA+BDNF+顺铂组NB细胞存活率明显高于单用顺铂组(P<0.01);FCM分析显示:ATRA+BDNF+顺铂组NB细胞凋亡率明显低于单用顺铂组(P<0.01)。结论存在BDNF的条件下,小剂量ATRA能阻断顺铂对SH SY5Y的细胞毒性作用,从而使SY5Y细胞对化疗耐药。     

9-顺式维甲酸协同γ-干扰素诱导神经母细胞瘤分化、凋亡及生长抑制的实验研究

目的 观察9-顺式维甲酸（9-cis retinoic acid，9-cis RA）联合γ干扰素（gammm interferon，γ-IFN）在体外诱导神经母细胞瘤（neuroblastoma，NB）SK-N-SH细胞分化、凋亡过程中细胞形态、周期的变化，探讨其协同作用的效果及其机制。方法 将细胞分为A（对照组）、B（9-cisRA用药组）、C（γ-IFN用药组）和D（9-cisRA和γ-IFN联合用药组）4组，在处理后适当的时间分别观察细胞形态学变化，进行分化神经节细胞计数，用Hoechst-PI荧光染色法观察细胞的凋亡和死亡，四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定NB细胞抑制率，流式细胞仪（flow cytometry，FCM）检测细胞周期分布及其凋亡和死亡。结果 联合用药组细胞形态学分化明显，神经节细胞分化率显著高于其他各组（P〈0．01）；MTT法测定显示联合用药能显著提高NB细胞抑制率并明显优于单独用药；Hoechst-PI荧光染色及FCM钙依赖性磷脂结合蛋白V和碘化丙啶（annexin V／PI）染色法检测一致显示联合用药对于诱导NB细胞早期凋亡和坏死具有显著的协同作用；FCM细胞周期动力学分析发现联合用药组C0-G1期细胞比率增加，S期细胞比率减少。结论 9-cisRA联合γ-IFN在体外对NB细胞的分化、凋亡和生长抑制能产生明显的协同作用，为其联合应用于临床提供理论依据和指导。     

α2β1整合素对神经母细胞瘤细胞侵袭迁移的影响

目的：近年来研究表明细胞间黏附分子整合素的变化与肿瘤细胞的侵袭迁移之间有着重要的联系,该研究进一步深入探讨α2β1整合素对神经母细胞瘤细胞侵袭和迁移能力的影响,为预防神经母细胞瘤细胞的转移和辅助治疗提供理论依据。方法：采用细胞倾斜实验、聚碳酸酯膜侵袭试验观察神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株细胞在整合素α2单克隆抗体(anti-α2)和β1单克隆抗体(anti-β1)作用下,瘤细胞迁移、侵袭能力的变化。迁移或侵袭的细胞通过姬姆萨染色,200倍显微镜下计数,计算不同条件下细胞迁移或侵袭抑制率。结果：anti-α2和anti-β1阻断组细胞的迁移能力较对照组98.1±7.4明显降低,分别为50.9±10.5和54.3±9.0(P<0.01),抑制率分别为48.1%和44.5%。anti-α2和anti-β1阻断组细胞的侵袭能力较对照组41.5±4.8明显减弱,分别为25.3±4.4和18.8±3.9(P<0.01),抑制率分别为39.0%和54.7%;结论：α2β1整合素在神经母细胞瘤细胞迁移侵袭过程中起着促进作用。     

熊果酸对神经母细胞瘤细胞增殖凋亡及MYCN表达的影响

目的实验研究熊果酸作用于体外培养的神经母细胞瘤细胞株（SH—SY-5Y）,对肿瘤细胞增殖、凋亡及MYCN基因mRNA表达的影响,探讨熊果酸对儿童神经母细胞瘤的治疗的作用。方法以终浓度为4uM／L、8uM／L、12uM／L的熊果酸作用于神经母细胞瘤细胞SH—SY-5Y,WST-1法检测SH—SY-5Y细胞增殖情况,流式细胞术检测SH—SY-5Y细胞凋亡情况,采用RealtimePCR方法检测MYCNmRNA的表达情况。结果熊果酸对SH—SY-5Y细胞增殖的抑制呈明显的剂量、时间依赖性,随剂量的增加,作用时间的延长,抑制效果逐渐加强;熊果酸对SHSY-5Y细胞凋亡的促进呈明显的剂量依赖性,随剂量的增加,促进凋亡效果逐渐加强;熊果酸对SH—SY-5Y细胞MYCN表达有抑制作用并有明显的剂量依赖性,随剂量的增加,抑制效果逐渐加强。12uM／L作用72h后神经母细胞瘤细胞增殖抑制效率达98．3％,MYCN基因mRNA表达抑制率达52．37％。结论应用熊果酸在体外环境作用SH—SY-5Y细胞,可以有效抑制该细胞的增殖、促进细胞凋亡、抑制原癌基因MYCNmRNA的表达。     

Differential gene regulation by 9-cis and all-trans retinoic acid in neuroblastoma cells

BACKGROUND: 9-cis retinoic acid (RA) is more effective than all-trans RA at inducing neuroblastoma differentiation in vitro, and has distinct biological properties with respect to its ability to promote apoptosis in N-type neuroblastoma cells. The cellular effects of 9-cis RA may, in part, result from activation of retinoid X receptor (RXR) homodimers. If this hypothesis is correct, 9-cis RA may control the expression of a different subset of retinoid-regulated genes compared to all-trans RA. PROCEDURE: We have therefore used differential mRNA display to identify genes differentially expressed in neuroblastoma cells in response to all-trans and 9-cis RA. RESULTS: The majority of cDNAs differentially expressed in response to all-trans or 9-cis RA matched to nonredundant Genbank sequences or EST database sequences. Differential-display profiles were similar in SH SY 5Y and SH S EP cells, clonal derivatives of the mixed neuroblastoma cell line SK N SH, although there were apparent differences between these cell lines with respect to the retinoid-regulation of specific RT-PCR cDNA fragments. CONCLUSIONS: These data support the view that 9-cis and all-trans RA act via different receptor mechanisms.     

Apollon反义寡核苷酸对K562细胞增殖、凋亡和耐药的影响

目的 探讨Apollon反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASODN)对白血病细胞K562增殖、凋亡及耐药的影响.方法 设计合成特异性的Apollon硫代磷酸ASODN及其对照错义寡核苷酸(missense oligonucleotide,MSODN),脂质体介导转染K562细胞后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测K562细胞增殖,Annexin V-FITC法检测细胞的凋亡,并用MTT法检测K562细胞对依托泊苷、长春新碱及联合用ASODN的耐药性.结果 Apollon ASODN对K562细胞的生长抑制作用随浓度和时间增加而增加.Apollon ASODN在终浓度为600nmoL/L作用K562细胞时,能明显抑制其增殖,K562细胞凋亡率显著增加(P＜0.01),联合用药组对细胞的半数抑制浓度低于单药组.结论 Apollon ASODN可下调Apollon基因表达,有效抑制K562细胞的增殖,并促进K562细胞的凋亡,Apollon ASODN与依托泊苷和长春新碱联合作用可降低细胞生存率,降低细胞耐药性.     

苦参碱对人横纹肌肉瘤RD细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨苦参碱（matrine, Mat）对体外人横纹肌肉瘤RD细胞增殖和凋亡的影响,以及Mat诱导RD细胞凋亡的相关机制。方法：采用MTT比色法检测终浓度为0.5、1.0、1.5和2.0 mg/mL Mat对RD细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测上述4种不同浓度Mat对RD细胞的凋亡作用;RT-PCR法检测终浓度为0.5、1.0和1.5 mg/mL Mat对RD细胞Cyclin D1及Survivin mRNA表达的影响。结果：各浓度实验组RD细胞的增殖抑制率和凋亡率均高于未经Mat处理的对照组（均P<0.01）,且随着药物浓度增加,细胞增殖抑制率逐渐增高,呈剂量依赖性。RT-PCR检测Cyclin D1 及Survivin mRNA在各组RD细胞中均有表达,两者的表达水平在各浓度处理组中与对照组相比均有明显下降（P＜0.01）。其中Cyclin D1在各浓度组间比较差异均有统计学意义（P＜0.05）,而Survivin仅在0.5 mg/mL 和1.5 mg/mL组间差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：Mat能明显抑制RD细胞的增殖,并诱导其凋亡;其抗肿瘤机制可能与下调Survivin和Cyclin D1 mRNA的表达有关。     

三氧化二砷对人神经母细胞瘤细胞凋亡作用的影响

目的：三氧化二砷(As2O3 )通过诱导细胞凋亡和诱导细胞分化效应治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)患者已取得很好疗效。与APL细胞相似,神经母细胞瘤(NB)细胞也是分化成熟受阻,该文对As2O3 在体外对人神经母细胞瘤细胞凋亡作用的影响及可能的机制进行探讨。方法：比色法观察As2O3 对神经母细胞瘤SK N SH细胞增殖的影响;Giemsa染色观察细胞形态学改变;Annexinⅴ/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡;免疫细胞化学染色方法检测bcl 2蛋白表达变化。结果：As2O3 明显抑制SK N SH细胞增殖,抑制作用呈剂量时间依赖效应,并出现细胞凋亡的形态学改变;流式细胞仪检测4. 0μmol/LAs2O3 作用SK N SH细胞72h后,早期凋亡细胞比例( 9. 9±0. 8 )%,与对照组( 3. 7±0. 2 )%相比明显增多,差异有显著性(P< 0. 05 );分别以1. 0, 2. 0,4. 0μmol/L的As2O3 处理SK N SH细胞72h后,bcl 2表达随As2O3 浓度增加呈降低趋势,bcl 2表达阳性率分别为(26. 3±8. 0)%, (15. 0±4. 5)%和(4. 8±3. 2)%,与对照组(73. 6±6. 1)%相比,差异有显著性(P<0. 01)。结论：As2O3 可在体外抑制神经母细胞瘤细胞增殖,诱导凋亡,bcl 2参与了其调节作用。     

The vitamin A analogues: 13-cis retinoic acid, 9-cis retinoic acid, and Ro 13-6307 inhibit neuroblastoma tumour growth in vivo

BACKGROUND: Neuroblastoma, a childhood tumour of the sympathetic nervous system, may undergo spontaneous differentiation or regression due to apoptosis after no or minimal therapy. However, the majority of neuroblastomas are diagnosed as metastatic tumours with a poor prognosis in spite of intensive multimodal therapy. Vitamin A and its analogues (retinoic acid, RA) play an important role in normal cel lular differentiation and programmed cell death. RA regulates neuroblastoma growth and differentiation in vitro, and has shown activity against human neuroblastoma in vivo. PROCEDURE: Recently, 9-cis RA was shown to induce apoptosis in vitro in neuroblastoma using a 5 days short-term treatment and subsequent washout. In the present study, nude rats with human neuroblastoma SH-SY5Y xenografts were treated with 13-cis RA (4 mg po daily), 9-cis RA (5 mg po daily) or the novel analogue Ro 13-6307 (0.3 mg po daily) using either a continuous or short-term schedule. RESULTS: ALL three different retinoids decreased neuroblastoma growth significantly in terms of tumour weight after 8-12 days when compared to untreated controls (P < 0.05). Minor signs of toxicity in 13-cis RA treated rats were observed. However, severe toxicity with significant weight loss was seen in all rats treated with 9-cis RA and Ro 13-6307. Toxicity was more pronounced with the continuous regimen. CONCLUSIONS: We conclude that different retinoids reduce neuroblastoma tumour growth in vivo. Drug scheduling and dosage may affect both therapeutic efficacy and toxic side effects. Further in vivo studies are warranted, including pharmacokinetic and molecular analyses, before clinical trials with promising retinoids like 9-cis RA and Ro 13-6307 can be started in children with neuroblastoma.     

二氧化碳对小鼠神经母细胞瘤细胞跨间皮细胞迁移影响的实验研究

目的 本实验研究不同气体条件对神经母细胞瘤细胞跨间皮细胞迁移的影响,探讨CO2气腹对腹腔肿瘤细胞迁移影响的潜在机制.方法 经0.125%胰酶预处理后,通过腹腔灌洗分离培养C57/BL6小鼠腹膜间皮细胞.间皮细胞纯化通过细胞形态学及免疫组化方法(小鼠间皮细胞角蛋白特异性抗体AE1/AE3)鉴定.MTT实验确定细胞活力.使用Transwell系统培养连续间皮细胞层,分别暴露于100%CO2及5%CO2 2 h,经荧光染色后的小鼠神经母细胞瘤细胞(Neuro2a)加入至Transwell系统上室,细胞迁移数目经多功能检测仪进行测定.结果 MTT实验提示,间皮细胞于5%CO2及100%CO2暴露后4 h、6 h、10 h及24 h后两组细胞活力分别为0.82±0.28比0.62±0.22、0.87士0.24比0.62±0.28、0.88±0.69比0.69±0.81及1.05±0.86比0.97±0.25,差别无统计学意义.迁移实验表明,间皮细胞于100%CO2中暴露后,细胞屏障功能下降,Neuro2a迁移数目增加258.56±71.08比77.05±27.89(P＜0.05).结论 100%CO2利于神经母细胞瘤细胞跨间皮细胞迁移.因此,小鼠模型中发现的CO2气腹后神经母细胞瘤转移增加可能与间皮细胞屏障削弱有关.

Abstract：

Objective This study was to assess the effect of CO2 pneumoperitoneum on transepithelial neuroblastoma cell migration. Methods Purification of primary murine peritoneal mesothelial cells was achieved by sequential, peritoneal lavage after 0. 125% trypsin pretreatment. Purity of the mesothelial cell culture was confirmed by cell morphology and immunohistochemical staining for specific cytokeratine (AE1/AE3). In all experiments vitality of the cells was confirmed by MTT assay. Monolayers of mesothelial cells were established on transwell systems. Following incubation with 100% CO2 or 5% CO2 for 2 h, fluorescent stained Neuro2a (neuroblastoma) cells were added to the upper chamber and their migration to the lower chamber was measured by multi - detection reader. Results The conversion of MTT was nearly same 4h, 6 h, 10 h and 24 h after 5% CO2 or 100% CO2 exposition,0. 82 ± 0. 28 VS 0. 62 ± 0. 22,0. 87 ± 0. 24 VS 0. 62 ± 0. 28, 0. 88 ± 0. 69 VS 0. 69 ± 0. 81 and 1. 05 ± 0. 86 VS 0. 97 ± 0. 25 respectively. Migration studies showed that the barrier function of the mesothelial monolayer decreased. A significantly increased migration of neuroblastoma cells was found after 100% CO2 exposure 258. 56 ± 71. 08 VS 77. 05 ± 27. 89 (P＜0. 05). Conclusions 100% CO2 facilitated transepithelial neuroblastoma cell migration. Thus, the increased neuroblastoma metastasis observed after CO2 pneumoperitoneum in mice might be related to an impaired mesothelial barrier function.     

二氧化碳对小鼠神经母细胞瘤细胞跨间皮细胞迁移影响的实验研究

Objective This study was to assess the effect of CO2 pneumoperitoneum on transepithelial neuroblastoma cell migration. Methods Purification of primary murine peritoneal mesothelial cells was achieved by sequential, peritoneal lavage after 0. 125% trypsin pretreatment. Purity of the mesothelial cell culture was confirmed by cell morphology and immunohistochemical staining for specific cytokeratine (AE1/AE3). In all experiments vitality of the cells was confirmed by MTT assay. Monolayers of mesothelial cells were established on transwell systems. Following incubation with 100% CO2 or 5% CO2 for 2 h, fluorescent stained Neuro2a (neuroblastoma) cells were added to the upper chamber and their migration to the lower chamber was measured by multi - detection reader. Results The conversion of MTT was nearly same 4h, 6 h, 10 h and 24 h after 5% CO2 or 100% CO2 exposition,0. 82 ± 0. 28 VS 0. 62 ± 0. 22,0. 87 ± 0. 24 VS 0. 62 ± 0. 28, 0. 88 ± 0. 69 VS 0. 69 ± 0. 81 and 1. 05 ± 0. 86 VS 0. 97 ± 0. 25 respectively. Migration studies showed that the barrier function of the mesothelial monolayer decreased. A significantly increased migration of neuroblastoma cells was found after 100% CO2 exposure 258. 56 ± 71. 08 VS 77. 05 ± 27. 89 (P＜0. 05). Conclusions 100% CO2 facilitated transepithelial neuroblastoma cell migration. Thus, the increased neuroblastoma metastasis observed after CO2 pneumoperitoneum in mice might be related to an impaired mesothelial barrier function.     

脐血CD3AK细胞培养上清液对白血病细胞株HL-60细胞的影响

目的在体外实验中,研究脐血CD3AK细胞培养上清液（cord blood CD3AK supematant,CS）对HL-60细胞增殖、分化和凋亡的影响。方法以不同浓度的CS（10％CS、15％CS、20％CS）作用于不同时间（3d,6d和9d）的HL-60细胞为实验对象,应用细胞计数法结合锥虫蓝拒染法研究CS诱导的HL-60增殖情况。应用流式细胞仪分析CS作用前后细胞周期及细胞表面分化标志CD11b的变化,光学显微镜下观察细胞形态变化,氯化硝基唑蓝（NBT）还原实验研究细胞的NBT还原阳性百分率,从而研究HL-60细胞的分化。应用电子显微镜观察细胞凋亡,原位末端标记法研究CS作用前后HL-60细胞的凋亡变化。结果随CS作用时间的延长和剂量的增加,细胞增殖速度逐渐减慢。细胞周期分析显示,CS作用后G0期和G1期显著增多,S期显著减少,G2期和M期无明显变化,说明CS使细胞阻滞在G0和G1期。随CS作用时间的延长,细胞体积逐渐增大,3d后被诱导的细胞表面开始表达分化标志物CDm并出现细胞核型变化,NBT阳性细胞增多,随cs浓度的增加和作用时间的延长,这些变化越明显。20％CS诱导72h后,被诱导的细胞出现凋亡,随诱导时间延长,凋亡细胞增多。结论CS能抑制HL-60细胞的增殖,诱导HL-60细胞分化和凋亡。     

小白菊内酯诱导人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞凋亡的研究

目的 探讨小白菊内酯对人神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH细胞凋亡的影响及机制.方法 MTT法检测不同浓度小白菊内酯对SK-N-SH细胞增殖抑制的影响,同时计算IC50,根据IC50选取实验组小白菊内酯浓度(10、15μmol/L);流式细胞仪分析对照组及实验组肿瘤细胞凋亡率;EMSA检测NF-κB的活性;Western Blot法检测细胞凋亡相关蛋白表达.结果 小白菊内酯抑制神经母细胞瘤SK-N-SH细胞生长,并呈浓度依赖关系.用10、15μmol/L小白菊内酯处理细胞48 h后凋亡率分别为(35.63±0.98)％,(53.32±1.08)％,与对照组(6.42±1.26)％比较,差异显著(P＜0.01).EMSA结果表明,小白菊内酯处理组细胞NF-κB活性降低.Western Blot结果显示,小白菊内酯使细胞中Bax、Caspase-3蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达降低.结论 小白菊内酯促进神经母细胞瘤SK-N-SH细胞凋亡,可能与抑制NF-κB活性,下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax、Caspase-3蛋白表达有关.     

Eg5蛋白靶向抑制剂S-Trityl-L-Cysteine对神经母细胞瘤增殖和分裂的影响

目的 研究驱动蛋白Eg5在神经母细胞瘤中表达及其靶向抑制剂S-三苯甲基-L-半胱氨酸(S-Trityl-L-Cysteine,STLC)对神经母细胞瘤的诱导作用.方法 通过免疫荧光及Western-blot检测Eg5蛋白在神经母细胞瘤中的表达水平,通过相差显微镜观察STLC对细胞形态学的影响,采用CCK-8法、流式细胞术检测STLC对细胞增值、凋亡及周期的影响,采用FISH法检测STLC对原癌基因MYCN扩增的影响,并经DAPI细胞核染色实验观察STLC对细胞核形态变化的影响.结果 免疫荧光及Western-blot结果显示Eg5蛋白在神经母细胞瘤中稳定表达.细胞形态学观察结果表明,细胞经不同浓度的STLC诱导,当浓度≥5μmol/L,诱导时间为72 h时,细胞形态变圆,出现大量凋亡样小体.CCK-8细胞增殖能力检测及流式细胞术分析结果显示,STLC具有促进细胞凋亡,抑制细胞分裂与增殖的作用,将细胞周期阻滞在G2/M期,且其诱导作用呈时间剂量依赖性.FISH实验证实STLC对MYCN基因扩增无影响.结论 神经母细胞瘤组织及细胞株中均表达Eg5蛋白,STLC通过抑制Eg5,影响神经母细胞瘤细胞的分裂及增值,从而促进细胞凋亡.结果表明Eg5有望作为神经母细胞瘤分子治疗的靶点.     

三氧化二砷对维甲酸耐药的神经母细胞瘤细胞SK-N-AS中HoxC9表达的影响

目的 本研究通过检测三氧化二砷(ATO)处理前后维甲酸(RA)耐药的SK-N-AS细胞中HoxC9以及EZH2的表达,初步探寻ATO促进RA耐药的NB细胞分化的具体机制.方法 用CCK-8试剂盒测定ATO对NB细胞SK-N-AS增殖抑制率,倒置相差显微镜下观察细胞生长情况,并测量神经突触总长度值.利用质谱技术和非标定量...     

三氧化二砷对神经母细胞瘤细胞增殖的影响

目的探讨三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）对儿童神经母细胞瘤有无潜在的治疗价值及伍用细胞因子有无增强疗效的作用。方法应用四甲基偶氮唑蓝法于体外观察Ａｓ２Ｏ３对神经母细胞瘤细胞株ＳＪ－Ｎ－ＳＨ增殖的影响；并观察Ａｓ２Ｏ３伍用重组人γ－干扰素、肿瘤坏死因子、白细胞介素４、６、１０后的情况。结果０．５～４μｍｏｌ／Ｌ的三氧化二砷明显抑制ＳＪ－Ｎ－ＳＨ细胞的增殖，Ａｓ２Ｏ３伍用γ－干扰素、白细胞介素４可明显增强Ａｓ２Ｏ３对ＳＪ－Ｎ－ＳＨ细胞增殖的抑制，而其他几种细胞因子无明显作用。结论Ａｓ２Ｏ３为治疗神经母细胞瘤的有效药物，联合应用合适的细胞因子可增强Ａｓ２Ｏ３的疗效。     

微生态制剂对坏死性小肠结肠炎大鼠肠上皮细胞凋亡和增殖的影响

目的研究复方嗜酸乳杆菌对坏死性小肠结肠炎大鼠肠上皮细胞凋亡及增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响,为应用复方嗜酸乳杆菌防治新生儿坏死性小肠结肠炎(NEC)提供参考。方法36只出生48 h新生SD大鼠,采用随机数字表法分为正常组、模型组、干预组,每组12只。采用缺氧加冷刺激3 d建立NEC模型,干预组在建模同时给予复方嗜酸乳杆菌;于模型建立后禁食12 h处死所有大鼠,剖取其肠组织采用原位末端标记法(terminal-deoxynucleoitidyl transferase mediated nick end labeling,TUNEL)测定细胞凋亡情况,采用实时荧光定量PCR检测大鼠肠组织中PCNA基因表达情况。结果1.大鼠肠组织细胞凋亡的检测结果:模型组、正常组、干预组凋亡指数分别为(88.33±2.77)%、(4.75±0.75)%、(44.41±4.81)%,各组间两两比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。2.大鼠肠组织中PCNA基因表达结果:模型组、正常组、干预组PCNA基因mRNA表达水平分别为(9.28±3.26)×10^-4、(15.35±1.91)×10^-4、(12.09±3.06)×10^-4,各组间两两比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论NEC时新生大鼠肠上皮细胞凋亡增加,PCNA表达减少;复方嗜酸乳杆菌能减少细胞凋亡,促进肠上皮细胞增殖,可能有助于降低新生大鼠发生NEC的风险及严重程度。     

MiR-483-3P下调RIOK3蛋白表达促进神经母细胞瘤的增殖和迁移

目的探讨microRNA-483-3P(miR-483-3P)对神经母细胞瘤细胞的增殖、侵袭及迁移能力的影响,预测并验证miR-483-3P的靶基因及其对靶基因的影响。方法 miRNA微阵列芯片结果发现miR-483-3P在神经母细胞瘤中表达上调,差异倍数显著,并居于差异表达miRNA的首位。利用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将化学合成的miR-483-3P inhibitor、miR-483-3P inhibitor的阴性对照序列分别瞬时转染人人神经母细胞瘤SH-SY-5Y细胞株中,RT-qPCR技术检测各组中miR-483-3P的表达水平,CCK-8法检测各组癌细胞的增殖情况,Transwell小室实验检测各组癌细胞的体外侵袭和迁移能力。利用生物信息学软件预测miR-483-3P的靶基因并用荧光素酶报告基因检测实验、Western blot实验加以验证。结果与癌旁正常组织相比,miR-483-3P在神经母细胞瘤中高表达(P0.01);与阴性对照组相比,癌细胞转染miR-483-3P inhibitor后,miR-483-3P表达显著下调(P0.01),细胞的增殖情况和体外迁移能力均降低(P0.05)。生物信息学软件预测出RIOK3是miR-483-3P的靶基因之一,当细胞转染了miR-483-3P inhibitor后荧光酶活性升高(P0.01)。与阴性对照组相比,当细胞转染了miR-483-3P inhibitor后在蛋白质水平RIOK3表达升高(P0.01)。结论.RIOK3是miR-483-3P的靶基因之一,miR-483-3P能下调RIOK3的表达并显著促进神经母细胞瘤细胞的增殖和体外迁移。