邻苯二甲酸二丁酯抑制大鼠睾酮合成的影响机制

目的 探讨邻苯二甲酸二丁酯(DBP)抑制睾酮合成作用的可能机制.方法 选择6周龄清洁级雄性Wistar大鼠,随机分为0.25、0.50、1.00、2.00g/kg DBP染毒组和溶剂对照组(玉米油),每组16只,经口灌胃染毒,每天1次,连续30 d.染毒结束后,各组随机处死8只大鼠,剩余动物恢复饲养15d后处死.称量大鼠体重以及睾丸、附睾和肾上腺湿重,计算脏器系数.采用放射免疫法检测血清中T、CORT、LH及17β-E2的水平.并进行病理组织学检查.结果 第21天开始,2.00g/kg染毒组大鼠体重低于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).至第45天时,各组间体重比较,差异均无统计学意义(P＜0.05).与对照组比较,染毒期0.50、1.00、2.00 g/kg染毒组睾丸系数和1.00、2.00 g/kg染毒组附睾系数以及恢复期1.00、2.00 g/kg染毒组睾丸系数、附睾系数较低,差异有统计学意义(均P＜0.05).与对照组比较,染毒期0.50、1.00、2.00g/kg染毒组大鼠血清中LH水平和1.00、2.00g/kg染毒组大鼠血清中T、17B-E2水平较低,1.00、2.00 g/kg染毒组大鼠血清中CORT水平较高,差异均有统计学意义(均P＜0.05).恢复期不同剂量组大鼠血清中T、17β-E2、LH、CORT水平间比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).对照组睾丸组织曲细精管内精子发生完全,不同发育阶段的生精细胞排列规整.2.00 g/kg染毒组可见睾丸萎缩,曲细精管退变,生殖上皮变薄,胞浆淡染,管腔内生精细胞和精子数明显减少;恢复期亦未见明显好转.结论 DBP具有睾丸毒性作用,能明显抑制睾酮合成,卵泡刺激素和皮质酮可能参与其抑制作用.     

糖皮质激素通路介导邻苯二甲酸二丁酯对大鼠睾酮合成的抑制作用

目的 探讨邻苯二甲酸二丁酯(DBP)抑制大鼠睾酮(T)合成的作用机制.方法 雄性Wistar大鼠按数字表法随机分为5组,即0.25、0.50、1.00和2.00g/kg DBP剂量组和溶剂对照组,每组16只.经口灌胃,每天1次,连续30 d,染毒结束后,每组处死8只动物,另8只饲养15 d后处死.放射免疫法检测血清T和糖皮质激素(GC)水平;RT-PCR法检测11 β-羟类固醇脱氢酶(11β-HSD)和类固醇生成急性调控蛋白(StAR)基因表达水平;Western blotting检测糖皮质激素受体(GR)表达水平.结果 染毒期,1.00和2.00 g/kg DBP剂量组血清T水平分别为(0.260±0.218)和(0.260±0.342)ng/ml,GC水平分别为(13.470±5.661)和(13.740±3.977)ng/ml,对照组血清T水平为(1.045±1.222)ng/ml,GC水平为(9.224±3.496)ng/ml,1.00和2.00g/kg DBP剂量组与对照组比较,差异有统计学意义(tT值分别为-2.295、-2.295,tGC值分别为2.159和2.296,P值均小于0.05);1.00和2.00 g/kg DBP剂量组StAR基因表达水平降低,STAR/β-Actin比值分别为0.657±0.060和0.407±0.033,与对照组(0.871±0.081)比较,差异有统计学意义(t值分别为-3.707和-8.037,P值均小于0.05);1.00和2.00 g/kg DBP剂量组11β-HSD基因表达水平(11β-HSD/β-Actin比值分别为0.538±0.138和0.988±0.133)和GR蛋白表达水平(GR/β-Actin比值分别为0.785±0.106和0.956±0.076)与对照组(0.285±0.106和0.275±0.035)比较,差异有统计学意义(t11β-HSD/β-Actin值分别为2.829、7.860,tGR/β-Actin值分别为8.064和10.77,P值均小于0.05),与DBP剂量呈正相关,r值分别为0.776和0.790.恢复期,DBP各剂量组上述指标与对照组比较差异均无统计学意义.结论 DBP能通过GC通路介导对大鼠T合成的抑制作用.     

17β-雌二醇通过HPGA和ERα干扰睾酮合成调控精子发生

目的观察17β-雌二醇(E2)暴露对雄性大鼠的生殖内分泌毒性,探讨其调控精子发生的机制。方法 E2经口灌胃染毒Wistar大鼠8周,剂量为1.00、0.50、0.10和0.01mg.kg-1.d-1,对照组为玉米油。观察一般状况,检测精子参数,利用放免方法检测血清激素T、E2、LH和FSH的水平,原子吸收法检测金属Zn和Ca水平,荧光定量PCR检测睾丸中类固醇急性调节蛋白(StAR)、细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)和3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)转录水平,免疫印迹检测雌激素受体(ERα和ERβ)和雄激素受体(AR)的蛋白水平。结果染毒8周后睾丸重量及系数显著减轻(P<0.01);血清T在各剂量组出现剂量相关的下降,E2出现剂量相关的增加,各剂量组差别均具有统计学意义(P<0.01)。LH和FSH也有不同程度降低。血清中Zn的水平降低,在0.50和1.00mg/kg剂量组差别具有统计学意义(P<0.01)。附睾尾精子计数明显减少,精子存活度下降。RT-PCR结果表明睾丸内StAR、P450scc mRNA水平下降。ERα蛋白表达显著增加,AR蛋白表达显著减少,差别均具有统计学意义(P<0.01)。结论青春期E2暴露可影响睾丸发育,包括睾酮合成和精子发生,其机制可能是循环雌激素的增加干扰下丘脑-垂体-性腺轴(HPGA)间接作用于睾丸间质细胞,还可能通过ERα途径直接抑制了睾酮合成酶。金属Zn可能参与了生殖毒性作用。     

雌激素代谢酶CYP17、CYP1A2基因多态性与子宫肌瘤易感性的关系

目的:探讨参与雌激素合成和代谢的CYP17和CYP1A2基因多态性与成都地区子宫肌瘤发病的关系。方法:应用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,对100例子宫肌瘤患者和100例对照组人群CYP17基因启动子区T-C多态和CYP1A2基因2964位点G-A多态性进行分析。结果:两组均存在CYP17基因T-C多态,但两组基因型TT、TC、CC频率和等位基因T、C频率的比较差异均无统计学意义(P>0.05);两组均存在CYP1A2基因G-A多态,但两组基因型GG、GA、AA频率和等位基因G、A频率的比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:CYP17基因启动子区T-C多态和CYP1A2基因2964位点G-A多态性与成都地区子宫肌瘤发病风险无相关性。     

维生素C对青春期邻苯二甲酸二丁酯暴露致大鼠卵巢氧化应激的干预作用

目的探讨维生素C(vitamin C,Vit C)对青春期邻苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate,DBP)暴露致大鼠卵巢氧化应激的干预作用。方法将160只健康初断乳SPF级Wistar雌性大鼠随机分为5组,分别为对照(玉米油)组和低(100mg/kg)、高(500 mg/kg)剂量DBP暴露组及低(100 mg/kg)、高(500 mg/kg)剂量DBP+Vit C(125 g/L)干预组。采用灌胃方式暴露DBP,暴露容量为10 ml/kg,每天1次;采用自由饮水方式暴露Vit C,连续暴露30 d。分别于暴露第5、10、20、30天,测定大鼠卵巢组织中MDA、GSH含量和SOD、CAT、GSH-Px活力。结果与对照组相比,DBP暴露组大鼠卵巢组织中MDA含量均升高,而GSH含量和SOD、CAT、GSH-Px活力均下降;与相同剂量DBP暴露组相比,Vit C干预组大鼠卵巢组织中MDA均下降,而GSH含量和SOD、CAT、GSH-Px活力均升高。且随着DBP暴露剂量的升高,DBP暴露组和Vit C干预组大鼠卵巢组织中的GSH含量和SOD、CAT、GSH-Px活力均呈下降趋势,而MDA含量呈上升趋势。结论 DBP暴露可致青春期雌性大鼠卵巢组织产生脂质过氧化反应,诱导氧化应激,导致卵巢抗氧化能力下降;而抗氧化剂Vit C对于DBP所致生殖系统的氧化损伤具有一定的拮抗作用。     

邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯对大鼠睾丸发育及StAR、CYP19a1、CYP11a1基因表达的影响

目的通过邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)28天短期重复暴露,探讨DEHP对雄性大鼠生殖系统发育的影响及其作用机制。方法40只7～9周龄雄性Wistar大鼠分为对照组(灌胃玉米油)和低、中、高剂量染毒组(每天灌胃DEHP10、100和1000mg/kg),每组10只,动态观察动物一般状况、体重变化。28天后断头处死大鼠,测定睾丸组织脏器系数;对睾丸和附睾进行病理学观察。提取睾丸组织的总RNA,逆转录合成cDNA,通过PCR扩增产物比较DEHP不同剂量染毒对StAR、CYP19a1和CYP11a1基因表达的影响。结果随着DEHP剂量增加,大鼠体重增长受限(F=3.54,P0.05);睾丸重量及其脏器系数降低,且高剂量组与对照组相比差异有显著性(F=105.545,P0.05);DEHP可使大鼠睾丸和附睾组织结构发生病理性改变,在中、高剂量组尤为明显;RT-PCR检测表明,与对照组相比,CYP19a1及CYP11a1基因表达降低,而StAR基因表达在各组间差异无显著性。结论DEHP对青春期雄性大鼠的生殖系统发育具有明显的毒性作用,导致睾丸重量降低,发育不全。DEHP及其代谢产物可能通过影响CYP19a1和CYP11a1等芳香化酶的基因表达,干扰内分泌平衡而使青春前期雄性大鼠产生生殖系统的发育障碍。     

三氯生暴露引起大鼠睾丸组织氧化应激与睾酮合成抑制

目的 研究三氯生(triclosan,TCS)暴露对青春期雄性大鼠睾丸形态学、类固醇激素水平以及激素受体表达的影响,探讨TCS抑制大鼠睾酮合成的潜在机制.方法 选取24只青春期雄性SD大鼠,用不同剂量TCS连续灌胃染毒31 d.通过苏木精—伊红染色(HE)分析睾丸组织形态学变化;通过酶联免疫吸收试剂盒(ELISA)测定...     

CYP1B1基因敲除对高脂膳食诱导小鼠肥胖的抑制作用

目的 从整体水平探讨基因CYP1B1在机体脂肪代谢中的作用.方法 选择3周龄SPF级CYP1B1基因敲除(KO)和野生型(WT)雄性小鼠各16只,给予低(LFD)、高脂肪(HFD)饲料,每组8只.连续喂养11周.测定血清中甘油三酯(TG)的含量和肝脏组织中过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR-γ)、脂肪酸转移酶(CD3...     

IL-1对冷应激大鼠睾丸间质细胞睾酮浓度的调节

目的观察白细胞介素-1(IL-1)对冷应激大鼠睾丸间质细胞(Leydig)睾酮浓度的影响。方法将大鼠随机分为对照组与冷应激组,分离培养睾酮Leydig细胞。利用冰箱进行冷应激处理,采用放射免疫分析法测定睾酮和cAMP及IL-1。结果(1)IL-1对Leydig细胞培养24 h睾酮生成量的影响:实验组为(1 821.7±99.7)fmol.mL-1,明显高于对照组(984.1±104.8)fmol.mL-1(P<0.01);(2)IL-1对冷应激Leydig细胞培养24 h睾酮生成量的影响:实验组为(212.4±123.7)fmol.mL-1,明显低于对照组(398.4±112.6)fmol.mL-1(P<0.01);(3)IL-1对冷应激Leydig细胞培养24 h时cAMP生成量的影响:实验组为(0.202±0.042)pmol.mL-1,明显低于对照组(0.368±0.017)pmol.mL-1P<0.01。结论IL-1单独作用能促进Leydig细胞睾酮分泌,IL-1对睾酮合成的影响与cAMP系统有关。     

AhR及CYP1A1基因多态性与焦炉工外周血淋巴细胞DNA损伤的关系

[目的]研究多环芳烃受体(AhR)G1661A和细胞色素P4501A1(CYP1A1)Msp1位点多态性与焦炉工外周血淋巴细胞DNA损伤的关系。[方法]选取220名焦炉工和65名无职业性多环芳烃(PAHs)暴露的工人为研究对象,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)及等位基因特异性扩增(ASA)方法分别检测CYP1A1及AhR基因型,使用碱性单细胞凝胶电泳技术评价淋巴细胞DNA损伤,使用调查表收集研究对象的年龄、性别、吸烟和饮酒、职业暴露史等信息。[结果] 经过广义线性模型对外暴露等级和工龄进行校正后,焦炉工中AhR基因1661位点A/A G/A基因型者经自然对数转换的Olive尾矩(1．36±1．04)高于G/G基因型者(1．03土1．16),差异有显著性(P<0．05),未发现CYP1A1 Msp1位点多态性与Olive尾矩有关。[结论]焦炉工AhRG1661A位点多态性与其外周血淋巴细胞DNA损伤有关。     

Inhibition of alveolar macrophage killing by di(2-ethylhexyl)phthalate

The phthalate ester plasticizer di(2-ethylhexyl) phthalate (DEHP) affected the phagocytosis and killing ofStaphylococcus aureus by rabbit alveolar macrophages. Pre-exposure to DEHP caused a slight increase in phagocytosis and a dose-dependent inhibition of alveolar macrophage killing ofS. aureus, reaching a 14-fold decrease in the killing index at a concentration of 2 mg DEHP per 100 ml of media. The significance of this inhibition is discussed with respect to the role of the plasticizer in lung disease and macrophage research.     

Effects of di(2-ethylhexyl) phthalate and dibutyl phthalate on the collembolan Folsomia fimetaria

Lethal and sublethal effects of di(2-ethylhexyl) phthalate (DEHP) and dibutyl phthalate (DBP) on adult individuals of the collembolan Folsomia fimetaria were investigated in the laboratory by the use of small microcosms. Effects of DEHP and DBP were also tested on newly hatched collembolans in a multidish system. The endpoints were juvenile mortality, growth, and development. When exposed to DEHP, adults and juveniles were unaffected at all test concentrations, that is, up to 5,000 mg/kg. However, DBP caused increased adult mortality at 250 mg/kg and juvenile mortality at 25 mg/kg. For DBP, adult reproduction was a more sensitive endpoint than was survival, with an EC10 and EC50 of 14 and 68 mg/kg, respectively. Juvenile molting frequency seems to be a sensitive parameter, because number of cuticles produced by young springtails was reduced at 1 mg/kg. Toxicity was reduced when soil spiked with DBP was stored at 20 degrees C for a period of up to 28 d before adding the animals. Reduction in toxicity of DBP may be due a combination of degradation, evaporation, and adsorption of DBP to soil material. This was confirmed by chemical analyses, which showed a rapid initial disappearance followed by a much slower disappearance. Our results lead to the overall conclusion that significant adverse effects of phthalates on collembolans are not likely to occur as a result of normal sewage sludge application.     

邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯对小鼠血清及肺组织中氧化损伤指标的影响

目的 探讨邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(diethylhexyl phthalate,DEHP)对小鼠血清及肺组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力及谷胱甘肽(GSH)和过氧化氢含量的影响.方法 将40只健康4周龄清洁级昆明小鼠按体重随机分为4组,分别为对照组和低( 1/40 LD50,750 mg/kg)、中(1/20 LD50,1500 mg/kg)、高(1/10 LD50,3000 mg/kg)剂量DEHP染毒组,每组10只,雌雄各半.采用自由摄食方式进行染毒,连续染毒4周.测定小鼠血清和肺组织匀浆中GSH-Px活力和GSH、过氧化氢含量.结果 DEHP染毒可使小鼠血清和肺组织匀浆中GSH-Px活力和GSH含量显著下降,过氧化氢含量显著升高.结论 DEHP可致小鼠肺组织发生氧化性损伤,使机体的抗氧化能力降低.     

邻苯二甲酸二乙基己基酯对大鼠睾丸细胞DNA损伤和睾丸组织氧化应激影响

目的 探讨邻苯二甲酸二乙基己基酯(DEHP)对大鼠睾丸细胞DNA的损伤和睾丸组织氧化应激的作用.方法 雄性Wistar大鼠25只,随机分为5组,每组5只,通过灌胃的方法摄入DEHP,4个染毒组剂量分别为1 500、3 000、4 500、6000mg·kg-1 ·d-1,1个阴性对照组.用单细胞凝胶电泳技术检测大鼠睾丸细胞DNA的损伤,睾丸组织中活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)的水平以及睾丸组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)的活力.结果 各染毒组和阴性对照组大鼠睾丸细胞DNA损伤率分别为29.0％、71.0％、89.0％、95.0％和15.0％,各染毒组睾丸细胞DNA损伤程度与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01),且大鼠睾丸细胞DNA损伤率与染毒剂量之间呈剂量-反应关系(r =0.930,P＜0.01);各染毒组大鼠睾丸组织的ROS、MDA的水平均较阴性对照组显著升高(P＜0.05,P＜0.01),而GSH-Px、SOD的活力又较阴性对照组明显下降(P＜0.05,P＜0.01).结论 DEHP可造成大鼠睾丸组织明显的氧化应激并引起睾丸细胞DNA的损伤.     

Metabolism and biochemical pathway of n-butyl benzyl phthalate by Pseudomonas fluorescens B-1 isolated from a mangrove sediment

n-Butyl benzyl phthalate (BBP) is an endocrine-disrupting chemical. Biodegradation of BBP was investigated using the bacterium Pseudomonas fluorescens B-1 isolated from mangrove sediment of Mai Po Nature Reserve of Hong Kong. The microorganism was capable of utilizing BBP as the sole source of carbon and energy while BBP was degraded in 6 days under aerobic batch culture conditions. The optimum pH, temperature, and salinity for BBP degradation by P. fluorescens B-1 was found to be 7.0, 37 degrees C, and 15 per thousand, respectively. Biodegradation of BBP was fitted to the first-order kinetics model. The process of BBP biodegradation was monitored by reversed-phase high-performance liquid chromatography with ultra-violet detection after solid-phase extraction. The major metabolites of BBP degradation were identified as mono-butyl phthalate, mono-benzyl phthalate, phthalic acid, and benzoic acid by gas chromatography-mass spectrometry. BBP-degrading activity of P. fluorescens B-1 was found mostly in the soluble fraction associated with the smaller fragments of cellular membranes. Results suggest that mineralization of BBP can be achieved by microorganism of the mangrove environment.     

Urine phthalate determinations as an index of occupational exposure to phthalic anhydride and di(2-ethylhexyl)phthalate

Although it has been estimated that over 600 000 workers in the United States are exposed to di(2-ethylhexyl)phthalate (DEHP), an animal carcinogen, and that over 100 000 are exposed to phthalic anhydride (PA), few data are available on levels of phthalates in biological fluids of these workers. For a determination of occupational exposure to PA and DEHP at a plant manufacturing DEHP from PA and 2-ethylhexanol, air samples were taken for PA and DEHP, and pre- and postshift urine samples were collected for the determination of total phthalates. Urine samples were obtained from 48 workers in jobs with high exposure to phthalates and from 47 workers in jobs with low exposure. The airborne concentrations of DEHP ranged from 20 to 4 110 micrograms/m3, and the concentrations of PA ranged from 4 to 203 micrograms/m3. The most heavily exposed workers had the highest mean postshift urine phthalate concentration (geometric mean 7.6 nmol/ml) (p = 0.015), and also the greatest mean increase (4.4 nmol/ml) in preshift to postshift urine phthalate levels. Twofold increases over the shift in urine phthalate concentration and postshift phthalate levels of greater than 10 nmol/ml were observed in 8 (25%) of 32 chemical operators, but in none of 52 other workers. These data suggest that measurement of urine phthalate levels may have utility for monitoring the exposure of workers manufacturing or using PA.     

邻苯二甲酸二乙基己酯致小鼠不同器官细胞 DNA-蛋白质效应研究

目的为了探讨邻苯二甲酸二乙基已酯（DEHP）导致生物机体内不同器官DNA-蛋白质的交联（DPC）作用。方法以采用KCl-SDS沉淀法来检测DEHP体外染毒后昆明纯系小鼠体内肝、脑、睾丸、肺等4个器官的细胞中DNA-蛋白质交联含量。结果当DEHP的浓度为5μM时,小鼠肝细胞的DPC系数与对照组相比没有发生显著的变化;当DEHP的浓度分别升高到10、20、40和80μM时,DPC系数显著上升,且DPC含量与对照组相比有极显著差异;在脑细胞中,当DEHP的浓度分别为5、10μM时,能显著诱导DPC的生成（P〈0．05）,但是,随着DEHP的浓度升高,DPC的含量与对照组相比没有显著性差异;在睾丸的细胞中,当DEHP的浓度为5μM时,小鼠睾丸的细胞DPC系数与对照组相比有显著的升高（P〈0．05）;当DEHP的浓度升高到10、20、40、80μM时,DPC系数显著上升,且DPC含量与对照组相比有极显著差异（P〈0．01）;在肺细胞中,DEHP的浓度为5μM时,就能显著诱导DPC的生成（P〈0．05）。结论DNA-蛋白质交联是一种严重的DNA损伤。DEHP可诱导DNA-蛋白质交联的产生。