柱前衍生-高效液相色谱法测定L-(-)-岩藻糖含量

目的采用对氨基苯甲酸乙酯(p-ABBE)为衍生剂,建立L-(-)-岩藻糖含量测定的柱前衍生-高效液相色谱法。方法对L-(-)-岩藻糖样品与p-ABBE的衍生比例、衍生温度、衍生时间等衍生条件进行优化,同时进行色谱柱、流动相等高效液相色谱条件的优化。结果衍生化条件为:衍生化试剂(p-ABEE)和L-(-)-岩藻糖的摩尔比为7∶1,衍生温度为85℃,反应时间为1.5 h;色谱条件为:色谱柱Agilent 5 TC-C18(2)(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.02%TFA-乙腈(77∶23,V/V),流速为1.0 ml/min,检测波长为307 nm。本方法在0.50 mmol/L^6.02 mmol/L浓度与峰面积呈现良好的线性关系(r=0.9995),定量限(S/N=10)及检出限(S/N=3)分别为0.20 ng/ml和0.10 ng/ml;平均加标回收率为82.94%,RSD为1.74%。结论本方法操作简便、结果准确、实用性强,能够用于L-(-)-岩藻糖的含量测定。     

测定外周血核黄素及其衍生物含量的HPLC方法研究

目的:建立测定外周血核黄素及其衍生物FMN、FAD含量的高效液相色谱方法。方法:血浆和红细胞样品用乙腈、三氯甲烷处理,离心后取上清液进样分析。采用WatersAtlantisTMC18色谱柱(150mm×4.6mmi.d.,5μm)分离,以甲醇-5mmol/L乙酸铵(体积比为35:65)为流动相,流速1.0ml/min,荧光检测器检测(激发波长450nm,发射波长520nm)。结果:本法测定核黄素、FMN、FAD的线性范围均为1~400nmol/L,最低检测限依次分别为0.2、0.25、0.25nmol/L(S/N=3);日内和日间测定的峰面积的相对标准偏差(RSD)核黄素分别为1.3%,2.2%,FMN分别为2.9%,3.7%,FAD分别为2.0%,3.6%。三者在血浆样品和红细胞样品中的加标回收率均达到要求。结论:本法灵敏、快速、准确,可用于测定血浆和红细胞中核黄素、FMN、FAD含量。     

茶叶中黄曲霉毒素的碘柱后衍生化和光化学柱后衍生化-高效液相色谱法比较

目的比较茶叶中黄曲霉毒素测定的碘柱后衍生化和光化学柱后衍生化-高效液相色谱法。方法样品经过多功能净化柱净化,HPLC-柱后衍生化-荧光检测器检测。采用Agilent XDB C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱分离,检测激发波长为360 nm,发射波长为420 nm;以甲醇-水(40∶60,V/V)为流动相,流速为1.0 ml/min。柱后衍生化系统:(1)碘衍生化:衍生化溶液为0.05%碘溶液,流速为0.5 ml/min,衍生化反应温度为70℃;(2)光化学衍生化:接Welch Toxin Star光化学衍生器,内含254 nm紫外光源及15 m反应环。结果对于碘衍生化和光化学衍生化方法,黄曲霉毒素G2、B2在0.6 ng/ml~6 ng/ml,黄曲霉毒素G1、B1在2 ng/ml~20 ng/ml时线性关系良好,r0.999 0,回收率为80.2%~97.5%。结论 2种衍生化方法的测定结果比较接近,光化学衍生化方法较灵敏,操作简单,2种柱后衍生方法都适用于茶叶中黄曲霉毒素的测定。     

柱前衍生高效液相色谱法测定饮用水中草甘膦、草铵膦和氨甲基膦酸

目的建立柱前衍生-固相萃取-液相色谱-荧光法测定饮用水中草甘膦、草铵膦和氨甲基膦酸的方法。方法样品经衍生和固相萃取后,采用Waters Atlantis T3(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱分离,流动相为甲醇-0.02 mol/L乙酸铵水溶液(50∶50,V/V),流速1.0 ml/min,荧光检测激发波长为266 nm,发射波长为315 nm,进样体积为10μl。结果 3种目标物质在0.01~1.0 mg/L范围内线性良好,线性相关系数(r)均在0.9994~0.9998之间。通过对自来水样进行3个加标水平的添加回收试验(n=6),草甘膦、草铵膦和氨甲基膦酸的平均回收率分别为84.4%~92.0%、86.5%~93.8%和87.8%~96.8%,相对标准偏差(RSD)分别为1.12%~4.22%、1.05%~4.04%和1.08%~3.95%,方法的检出限分别为0.0021、0.0025和0.0032mg/L。结论该方法准确灵敏,适用于饮用水中草甘膦、草铵膦和氨甲基膦酸3种物质的同时分析。     

茶叶中草甘膦的柱前衍生-固相萃取-高效液相色谱荧光测定法

目的建立快速、准确的茶叶中草甘膦的柱前衍生-固相萃取-高效液相色谱荧光测定方法。方法茶叶提取液样经衍生后经固相萃取,在C_(18)色谱柱上,以甲醇/水(70+30,体积分数)为流动相,流速1.0 ml/min,荧光检测激发波长为265 nm,发射波长为315 nm。结果草甘膦的加标回收率在89.4%~98.9%之间,其相对标准偏差在4.26%~13.63%之间,在0.5~20.0 ng/ml范围内呈现良好的线性,其回归系数0.999,最低定量检出限(LOQ)为0.02 mg/kg。结论该方法回收率高,净化效果好,杂质干扰少,可满足茶叶中痕量草甘膦的残留检测要求。     

柱前衍生HPLC-FLD法测定水产品中3种麻痹性贝类毒素

目的建立水产品中3种麻痹性贝类毒素成分(GTX2,3、dcSTX和STX)的柱前荧光衍生高效液相色谱(HPLC-FLD)检测方法。方法样品用1%乙酸提取,C18固相萃取柱净化,2%H2O2荧光衍生,以Symmetry?C18柱(4.6mm×150mm,5μm)为色谱柱分离,以乙腈和0.1mol/L甲酸铵(595)作为流动相,流速1.0mL/min,荧光检测器激发波长340nm,发射波长395nm。结果该法在10~500μg/L范围内线性关系良好,平均加标回收率为72.5%~88.6%,RSD为2.8%~4.7%。方法的检出限分别为dcSTX 3μg/kg、STX 10μg/kg和GTX2,34μg/kg。结论本方法灵敏度高、结果可靠,为检测水产品贝类麻痹性毒素的含量提供了一种高效便捷的方法。     

高效液相色谱-荧光检测法分析血浆中ALA的含量

目的建立血浆中δ-氨基-γ-酮戊酸(ALA)含量的高效液相色谱-荧光检测方法。方法将血浆样品与乙酰丙酮工作液(乙酰丙酮-乙醇-水,15∶10∶75,V/V)和10%甲醛溶液在沸水浴中反应10 min后,置于冰水浴中充分冷却。经微孔滤膜过滤后以C18柱为分析柱进行高效液相色谱测定。色谱分析以甲醇-水-乙酸(1 000∶1 000∶2,V/V)为流动相,流速为0.6 ml/min;荧光检测器的激发波长为370 nm,发射波长为460 nm,柱温为40℃。结果 ALA浓度为5μg/L~100μg/L时,与色谱峰面积之间呈良好的线性关系。本方法的最低检出限为0.5μg/L,定量限为2.0μg/L,多次重复测定结果的RSD为0.35%(n=6),不同浓度的平均加标回收率为86.56%~100.09%。结论所建立的血浆中ALA含量的高效液相色谱-荧光检测法,简便、准确,可用于血浆中ALA含量的测定,为生物样品中ALA低浓度水平的检测提供了新的途径。     

RP-HPLC法测定儿童心肺体外循环后异丙酚的血浆浓度

目的建立儿童经过体外循环后血浆异丙酚的浓度测定方法方法采用反相高效液相色谱—荧光检测技术,血浆样品经过加入内标(麝香草酚)的甲醇溶液沉淀蛋白质后,取上清液20μl进行HPLC分析,流动相为乙腈:水=56:44(V/V),流速为1ml/min,荧光检测条件为λex276nm,λem=312nm,机器采用Agilent1100系列高效色谱仪,分离色谱柱采用DikmaDiamonsilC18(150mm×4.6nm,5.0um),保护柱为PhenomenexSecurity(4mm×3mm)。结果在0.02~8.0mg/L的范围内线性关系好(r=0.9993,n=9),最低检测浓度是0.005ug/ml,(S/N=2),日内,日间RSD分别为0.810%~5.73%和0.932%~7.337%,平均回收率为96.99%。结论本法灵敏度高,方法简单,实验快速,线性关系好,专一性强,可用于儿童经过体外循环后血浆异丙酚的浓度测定。     

免疫亲和柱净化-超高效液相色谱-串联质谱法测定烤鱼片中河豚毒素

目的建立免疫亲和柱净化-超高效液相色谱-串联质谱法测定烤鱼片中河豚毒素(TTX)的检测方法。方法样品经酸化甲醇提取,提取液经磷酸盐缓冲液稀释、免疫亲和色谱柱净化后,在ACQUITY UPLC BEH Amide柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm)上进行分离,以5 mmol/L乙酸铵溶液(含0.1%甲酸)-乙腈(30∶70,V/V)为流动相,电喷雾正离子多反应模式监测,外标法定量。结果河豚毒素在0.5μg/L~50μg/L时具有良好的线性关系,相关系数0.995,检出限为0.3μg/kg,回收率为81.7%~92.6%,相对标准偏差10%。采用该方法对70份烤鱼片样品进行测定,其中9件样品中检出TTX,含量为9.12μg/kg~155μg/kg。结论该方法具有快速、灵敏、简便、准确等优点,适用于烤鱼片中河豚毒素的测定。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定鱼丸中的河鲀毒素

目的建立鱼丸中河鲀毒素(TTX)的超高效液相色谱-串联四级杆质谱联用测定方法。方法鱼丸样品中的TTX经酸化甲醇提取,免疫亲和柱净化,氮气吹干后用流动相定容,经Hilic Amide(2.1 mm×100 mm,1.8μm)色谱柱分离,甲醇-0.1%甲酸(含5 mmol/L乙酸铵)溶液作为流动相梯度洗脱,选择电喷雾离子源正离子多反应监测(MRM)模式进行监测,外标法基质标准曲线定量。结果 TTX在HILIC Amide柱上能与杂质良好分离,在2 ng/ml~200 ng/ml时,线性关系良好,相关系数为0.999 1。在10μg/kg、50μg/kg和100μg/kg的加标水平下,回收率为72.9%~95.2%,相对标准偏差为2.32%~5.62%,方法的定量限为10μg/kg。应用该方法对市售的30份鱼丸样品进行检测,均未检出TTX。结论该法操作简单快速,准确度和灵敏度高,适合于鱼丸中TTX的检测,具有较好的应用价值。     

血清和尿液中4种鹅膏肽类毒素的UPLC-ESI-Q-TOF分析

目的建立血清和尿液中α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、二羟鬼笔毒肽、羧基二羟鬼笔毒肽毒素的超高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱测定方法。方法血清样品先用乙腈沉淀蛋白,再用含0.1%TFA的二氯甲烷提取,残渣用含2mmol/L乙酸铵的甲醇-水(30∶70)溶解;尿液样品直接过0.22μm微孔滤膜;样品溶液经HSS T3色谱柱分离后用Q-TOF MS进行测定。结果毒素准分子离子准确质量数及其同位素特征、色谱峰保留时间可作为毒素定性鉴定的依据,血清和尿液样品的检出限分别为10 ng/ml和5 ng/ml,定量限为20 ng/ml和10 ng/ml,加标回收率分别为77.4%~95.6%和73.8%~103.8%,相对标准偏差在3.0%~18.0%和1.2%~25.4%之间。应用该方法测定了大鼠染毒尿液中鹅膏肽类毒素。结论本方法简便、准确、可靠,适用于中毒事件生物样品中4种鹅膏肽类毒素的检测和确证分析。     

邻苯二甲醛-柱后衍生-高效液相色谱荧光法测定功能型饮料中的牛磺酸

目的建立功能型饮料中牛磺酸的柱后衍生-高效液相色谱荧光法。方法样品稀释后直接进样,柱后OPA衍生,荧光检测器检测,外标法定量。色谱条件:流动相:乙腈-水(20∶80,V/V);柱后衍生反应温度:55℃;荧光检测器激发波长:330 nm;发射波长:450 nm。结果牛磺酸的浓度为0μg/L~80μg/L时,标准曲线线性关系良好,线性相关系数(r)为0.999 9,检出限为1μg/L,相对标准偏差(RSD)为0.2%~1.0%,加标回收率为97.2%~102.8%,精密度和准确度符合检测要求。结论本方法具有选择性好、精密度高和准确度好等优点,而且由于采用荧光检测器,大大提高了灵敏度,可采取大体积稀释,更易排除其他组分的干扰,更简便,更快捷,适用于日常的检测工作中。     

固相萃取-超高效液相色谱-高分辨质谱法测定尿液中草甘膦

目的建立尿液中草甘膦的固相萃取-超高效液相色谱-高分辨质谱(UPLC-HRMS)分析方法。方法尿液样品采用0.1%(V/V)甲酸-乙腈沉淀蛋白后,利用MCX阳离子交换固相萃取小柱净化,采用Phenomenex Luna NH2柱(50 mm×4.6 mm,3μm)为分离柱,以乙腈/10 mmol/L乙酸铵-0.1%(V/V)氨水溶液为流动相进行梯度洗脱,采用电喷雾负离子源在选择离子监测模式(SIM)下检测,定量检测离子为m/z 168.006 7。结果尿液中草甘膦在1.0μg/L~100.0μg/L具有良好的线性关系,相关系数(r)为0.999 2,尿液中草甘膦的检出限(S/N=3)为0.3μg/L,定量检出限(S/N=10)为1.0μg/L,方法的回收率在92.0%~97.2%,低、中、高3个添加水平浓度的日内RSD为2.4%~4.4%,日间RSD为3.3%~6.9%。结论建立的方法准确、简便、灵敏,可用于中毒者尿液中草甘膦的检测。     

HPLC法测定血清肉碱的研究

目的:建立高效液相色谱(HPLC)测定血清中肉碱浓度的方法。方法:血清样品用乙腈、甲醇沉淀蛋白,加入肉碱衍生剂,60℃恒温水浴2h后进样10μl。色谱柱为AtlantisC18柱(4.6mm×150mm,5μm),流动相为甲醇∶异丙醇∶乙腈(35∶45∶20,v/v),流速1.0ml/min,紫外检测波长260nm。结果:在上述色谱条件下,血清肉碱分离良好,回归方程为Y=8490X-48200,r=0.9999,线性范围为12.5~400μmol/L。最低检测浓度为12.5μmol/L。日内精密度1.6%~13.2%,日间精密度(%)1.8%~12.1%,回收率98.5%。结论:通过加入肉碱衍生剂,建立了HPLC法测定血清中肉碱浓度的方法。此法操作简单,耗时少,有良好的准确度,适用于临床检测。     

高效液相色谱法紫外检测器串联荧光检测器同时测定血浆中10种抗凝血类杀鼠剂

目的:建立同时测定血浆中10种抗凝血类杀鼠剂的高效液相色谱方法。方法:血浆样品经乙腈超声提取后,采用甲醇 40 mmol/L乙酸铵梯度洗脱,在XBridge C18柱上实现10种杀鼠剂完全分离,紫外检测器串联荧光检测器实现高灵敏检出,外标法定量。结果:加标回收率在73%~112%之间,测定的相对标准偏差在2.4%~8.6%。对于4-羟基香豆素类杀鼠剂,方法检出限在1~2 ng/ml;对于茚满二酮类杀鼠剂检出限为20 ng/ml。结论:本法灵敏度高,操作简单,适合于中毒病人的诊断检测。     

离子色谱-荧光检测同时测定3种喹诺酮类药物

目的：建立一种离子色谱-荧光检测方法,用于同时测定3种喹诺酮类药物-诺氟沙星（Norfloxacin NOR）、环丙沙星（Ciprofloxacin CIP）和恩诺沙星（Enoxacin ENO）。方法：选用Dionex OmniPac PAX 500色谱柱,淋洗液为15 mmol/L H2SO4内含有35%（V/V）甲醇,流速1.0 ml/min,荧光检测激发波长和发射波长分别是347和420 nm。结果：在1-100μg/ml浓度范围内,各待测物线性关系良好（r〉0.9995,n=8）,NOR、CIP和ENO的检测限（信噪比S/N=3）分别是50、105、80 ng/ml,NOR和CIP片粉中加样回收率分别是103.5%和100.1%。结论：该方法准确、灵敏、快速,可用于药物制剂和食品中药物残留分析。     

HPLC柱前衍生测定保健食品中牛磺酸含量

目的:建立高效液相色谱法测定保健食品中牛磺酸含量的测定方法。方法:采用ZORBAX Bonus-RP色谱柱(5μm,4.6 mm×150 mm),以甲醇+水=20+80为流动相,流速1.0 m l/m in,波长330 nm,柱温为25℃,在柱前进行衍生反应后直接进样。结果:线性范围:30.3~252.0 ng,r=0.9997(n=8)。加标回收率98.3%~101.7%。最低检测限(S:N=3)为4.1 ng。最低定量限(S:N=10)为13.7 ng。结论:本法测定条件下所用色谱柱对测定组分专一性较好,简便快速,定量准确,灵敏度高,重现性好,适用于保健食品中牛磺酸的测定,可作为产品的质量控制方法。     

LC-MS/MS法同时测定大鼠血浆中的奥氮平和盐酸氟西汀

目的建立大鼠血浆中奥氮平和盐酸氟西汀的LC-MS/MS同时测定方法。方法血浆样品在碱性条件下用乙醚提取浓缩后,采用XDB-CN(2.1 mm′150 mm I.D.,5μm)柱进行分离,流动相为乙腈-10 mmol/L乙酸铵(p H=4.0)=55:45(v/v);ESI选择性反应正离子模式检测,氯雷他定作为内标。结果奥氮平在0.25~400 ng/m L范围内相关系数r=0.9979,最低检测限为0.10 ng/ml,日内、日间精密度分别为2.26%~8.38%及3.54%~7.37%;盐酸氟西汀在0.50~800ng/ml范围内相关系数r=0.9976,最低检测限为0.20 ng/ml,日内、日间精密度分别为1.03%~2.52%及3.26%~7.29%。结论本方法灵敏度高、专属性强、准确性好,符合生物样品的分析要求。     

人尿肌酐的高效液相色谱快速测定法

目的建立一种快速测定人尿肌酐的高效液相色谱测定方法。方法尿样用10 mmol/L乙酸铵溶液-甲醇(体积比为95:5)稀释100倍,过0.45μm滤膜,经Atlantis dC18色谱柱分离,以10 mmol/L乙酸铵-甲醇溶液作为流动相进行等度洗脱,紫外检测器于吸收波长为230 nm时测定,标准曲线定量。结果在0.08~100μg/ml的线性范围内,所得肌酐的回归方程为y=28.05x+9.391,r=0.999 9。该方法的检出限为0.022μg/ml,定量下限为0.072μg/ml;当对尿液样本进行100倍稀释处理时,尿液中肌酐的检出限为2.2μg/ml,定量下限为7.2μg/ml。该方法的回收率为93.61%~104.09%,RSD为2.06%~4.57%。结论该方法具有线性范围宽、操作简便、灵敏度高、稳定性好的特点,适用于快速测定人尿中肌酐浓度。     

饮用水中草甘膦残留量的柱前衍生-高效液相色谱测定法

目的建立饮用水中草甘膦的柱前衍生-高效液相色谱(HPLC)测定法。方法水样经氧化、衍生后,在DIKMAC18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇+0.05 mol/L磷酸二氢钾(pH=6.0)+四氢呋喃(体积比为45+55+2),流量为1.0 ml/min,柱温为25℃,激发波长为230 nm,发射波长为450 nm条件下,进行HPLC测定。结果该方法在0.025～1.0μg/ml的线性范围内,所得回归方程为y=1 571.69x+60.789,相关系数为0.999 2,方法定量下限为25μg/L。该方法的平均回收率为94.0%～106.0%,RSD为3.8%～4.6%。结论该方法操作简便、快速,适合于饮用水中草甘膦含量的检测。