放射免疫沉淀试验检测鼠疫FI抗体的研究——Ⅰ.特异性与敏感性

试验证明,用放射免疫沉淀试验(RIP)检测鼠疫抗体时,将被试血清与相应的阴性对照血清的结合比定为≥3作为反应标准是适宜的;用RIP检测假结核,小肠结肠炎菌等抗血清30份,这些抗血清在1:10到1:100的各种稀释度中与~(125)I-鼠疫FI抗原均无交叉反应,从非鼠疫疫区收集的2196份哺乳动物血清,亦未发现阳性反应,说明该法特异性强。由于RIP是用分离剂沉淀鼠疫抗原-抗体复合物,故能检出不完全抗体,检出率不仅高于常规的间接血球凝集试验(IHA)和酶联免疫吸附试验(ELISA),且滴度往往高十几倍、几十倍,乃至几百倍。所以用RIP检测潜在性鼠疫疫源地、考核灭源效果以及在科研中用于检测微量鼠疫抗体具有重要意义。加之该法自动化程度高,测试信息以数字显示,因而指标客观,容易分析,适于大规模现场调查。     

放射免疫沉淀试验检查鼠疫FI抗体诊断标准的研究

用放射免疫沉淀试验对云南省鼠疫历史疫区、非鼠疫疫区、现疫流行区、当年分离出鼠疫菌的地区共计48个县(市)、40种动物、14149份标本进行了检查。研究结果表明,该项技术具有很高的敏感性及特异性。黄胸鼠、褐家鼠、大绒鼠、齐氏姬鼠、狗等血清试验管与正常同源血清对照管结合率(B/Bo)比值≥3可作为阳性反应标准,阳性滴度标准(SPA法)为1:80。抑制试验在RIP中可作阳性标准是否成立的复判手段。结果同时表明RIP也同样存在“前滞现象”。     

放射免疫沉淀试验检测人血清鼠疫F_1抗体诊断标准的研究

本文应用RIP(放射免疫沉淀试验),对云南2956份人血清进行鼠疫F_1抗体检测,结果表明,阳性检出率和阳性抗体几何平均滴度RIP均高于IHA(血凝试验)(P<0.005),且IHA阳性者RIP无一阴性。被检人血清与正常人血清结合率比值(B/B_O)≥3可作为阳性反应标准,阳性滴度标准为l:80(SPA法)。人血清RIP诊断标准的提出,为诊断鼠疫病人和鼠疫免疫学研究提供了一种较为先进的手段。     

固相放射免疫试验检测鼠疫F1抗体

建立了固相放射免疫试验(SPRIA)检测鼠疫F1抗体的方法。被测抗体经F1抗原两次选择结合,提高了检测特异性。检测人和5种非鼠疫疫区动物血清205份,以及假结核菌等6株非鼠疫菌免疫动物血清,全部阴性。检测鼠疫康复人和接种鼠疫苗的7种动物血清8份,IHA和SPRIA全部阳性,放射免疫沉淀(SPA—RIP)有两种动物为阴性结果;阳性反应GMT、SPRIA比IHA高,比SPA—RIP低。试验表明SPRIA检测鼠疫F1抗体,具有良好的特异性和敏感性,操作简便、快速,可检测各种标本。     

放射免疫沉淀试验(RIP)检查鼠疫抗体诊断标准的研究

本项研究通过对219260只各种鼠类及5456只犬的检测,制定了RIP(SPA法)检测鼠疫F_1抗体的反应标准为被检血清与正常同源血清对~(125)Ⅰ—F_1的结合率比值等于或大于3(P/1V≥3)。黄鼠鼠疫的诊断滴度标准为≥1:320;早獭、长爪沙鼠、黄胸鼠及犬为≥1:80。同时探讨了RIP的阳性检出率、阳性滴度与鼠疫动物病当年流行的关系,进而提出了当年鼠疫动物病流行的指征。     

放射免疫沉淀试验检测鼠疫FI抗体的研究——Ⅱ.在鼠疫疫源地血清学监测中的应用

1985～1986年期间,在新疆13个鼠疫疫区县,2片疑似鼠疫疫区和3个非疫区县,用放射免疫沉淀试验(RIP)和间接血凝试验(IHA)共检测各种动物血清14248份,疫区血清的阳性率分别为4.24％和1.94％,疑似疫区血清的阳性率分别为0.43％和0.19％,而且RIP的阳性滴度明显高于IHA。实际应用的结果表明,RIP的特异性和敏感性明显高于IHA及ELISA。RIP对于发现潜在的鼠疫疫源地、监测鼠疫动物病及其流行强度等既有理论价值,又具有实践意义。     

应用RIP法检测小肠结肠炎耶氏菌对鼠疫F_1抗体的交叉反应性

利用放射免疫沉淀试验(RIP)检测鼠疫F_1抗体的敏感性与特异性均优于广泛应用的间接血凝试验(IHA)。本文将鼠疫抗血清用本室保存的小肠结肠炎耶氏菌抗原吸收后以RIP和IHA测定鼠疫抗血清的残留效价,观察小肠结肠炎耶氏菌对鼠疫F_1的交叉反应。现将结果报告如下。     

鼠疫菌F1抗原与假结核菌和钩端螺旋体抗原的交叉性研究

鼠疫菌F_1抗原作为特异性抗原已广泛应用于鼠疫诊断中,WHO推荐的F_1抗原IHA和RIP试验,已作为常规诊断方法,从1973年我们用IHA方法在雷州半岛历史鼠疫区反复从鼠类血清中检出阳性,RIP方法检出2份低滴度阳性血清,但始终没检出鼠疫菌,为了排除F_1抗原与其它细菌有无相关抗原与相应抗体存在交叉反应,我们从1984年～1992年用IHA、RIP、MAT做了多次研究,现将结果报告如下。     

RIP检出人群血清鼠疫F1抗体的调查报告

为探索和进一步验证RIP的特异性问题,我省近年来在开展鼠类标本RIP检测的同时,对人群血清F_1抗体也进行了检测,并对人群血清RIP阳性检出者进行了流行病学个案调查,同时对照测定了30岁以下年龄组的健康人群血清,结果报告如下:1 材料与方法1.1 血清来源 随机收集不同年龄、不同地区的布病监测余留血清1360份,30岁以下年龄组的从业人员体检血清465份,历史鼠疫康复者血清4份。1.2 鼠疫RIP IHA试剂盒为全国鼠布基地生产,在有效期内使用。1.3 FT-630G微机多探头r计数器,北京核仪器厂生产,效率>85%,本底<100。1.4 判定标准 RIP结合率比≥3,滴度1∶80以上为阳性。IHA凝集价1∶20(++)以上为阳性。被检血清均进行初筛试验,阳性者再作RIP确证试验及IHA复判试验。     

2002年陕西省鼠疫F1抗体放射免疫监测结果分析

自1985年以来,陕西省连续18年在鼠疫疫区开展了放射免疫监测,用放射免疫沉淀试验(RIP)方法,来检查被检血清中是否存在鼠疫F1抗体。现将2002年放射免疫监测结果报告如下。1 材料和方法1.1 血清来源:2002年采自本省鼠疫疫区定边县各种鼠类血清246份,微量间接血凝试验(IHA)全部为阴性。1.2 试剂盒:放射免疫沉淀试验(RIP)试剂盒,由全国鼠疫布     

鼠疫放射免疫沉淀试验在鼠疫监测中的应用及效果评价

目的：建立敏感性高、特异性强的鼠疫血清学诊断方法，应用于鼠疫血清学监测。方法：用标记的鼠疫菌FI抗原（^123I-FI）检测阳性血清、免疫黄鼠血清、实验区各种动物血清及正常血清。结果:建立鼠疫放射免疫沉淀试验（RIP），并确定其诊断标准，研制出了鼠疫抗体放免测定盒及其使用方法。RIP在鼠疫监测中的应用。结论：RIP的敏感性和特异性均明显高于IHA，是目前建立的鼠疫血清学方法中最为敏感特异的方法。     

放射免疫沉淀试验在鼠疫监测中的应用与评价

在全国各省(区)鼠疫监测中,特别是多年连续检不出鼠疫菌,间接血凝(IHA)阳性血清的历史疫区及疫源地毗邻地区,放射免疫沉淀试验(RIP)作为一种高敏感性的血清学诊断技术在我国鼠疫监测中广泛应用,获得了大量有价值的资料。本文对近年来RIP的应用实践及前景进行简要综述和分析。1疫源地动物鼠疫监测1.1RIP应用概况自从RIP的诊断标准确定之后犤1犦,有16个省(区)在鼠疫监测中采用这一方法。其中有11个省(区)作为常规方法应用已十几年。从1985年以来,用RIP检测各种动物血清70余万份。1989～1999年共检出阳性血清882份,由于使用RIP检测的…     

放射免疫沉淀试验对甘肃黄鼠鼠疫疫源地的监测结果

1985～1987年我们应用RIP检测疫区黄鼠血清3957份,1985年血清滴度>1:1O的有1O份(0.51％),其中>1:320的有2份(0.10％)。1986～1987年血清均为阴性。检测非疫区黄鼠血清3008份,滴度为1:20～80的为7份(0.23％),疫区犬血清110份全部阴性。结果表明该疫区近年来黄鼠血清中鼠疫F1抗体滴度呈下降趋势。     

马关县鼠疫F1抗体的发现及分析

云南省鼠疫流行历史悠久,据记载,马关县曾于1858～1904年多次发生过鼠疫大流行,属鼠疫远史流行县。在长期的鼠疫监测工作中,1984年从黄胸鼠血清中检出鼠疫F_1抗体(SPA-血凝,1:40),1985年应用放射免疫沉淀试验(RIP),在同地区的黄胸鼠血清中检出鼠疫F_1抗体(1:80),1996年从县城食品加工房捕获的2只褐家鼠血清中检出鼠疫F_1抗体(1只 RIP1:5120,IHA1:40~(++),另1只RIP1:2560,IHA1:20~(++))。由此认为该县近年来曾发生过动物鼠疫流行,应加强鼠疫监测工作,密切监视疫情发展态势,检测结果如下。     

富集血凝试验检测鼠疫F_1抗体的有效性

实际应用富集血凝试验(Richened-IHA)检测多种动物的鼠疫阳性血清115份。证明R—IHA和RIP两法用于检测鼠疫F_1抗体其效果基本一致。阳性率均为100%。而IHA的检出效果则明显地低,阳性率为87.82%,比R—IHA低110倍。     

鼠疫监测血清学中的非特异凝集反应

目的探讨鼠疫间接血凝中的非特异凝集反应的影响因素。方法股动脉采集、分离鼠类血清,56℃30m in灭活,首先进行鼠疫间接血凝的初筛试验。初筛检出的阳性血清,经醛化吸收后,再进行复判,严格按照中华人民共和国鼠疫诊断标准GB15991-1995执行。同时进行鼠疫血清的放射免疫沉淀试验。结果在广东省鼠疫疫源地(雷州市)采集鼠类血清799份,其中7份血清发生非特异凝集,初筛假阳性率0.9%。在广东鼠疫历史疫区(兴宁市)采集鼠类血清1 008份,其中56份血清发生非特异凝集,初筛假阳性率5.6%。在非鼠疫历史疫区(曲江)采集鼠类血清1 114份,其中64份血清发生非特异凝集,初筛假阳性率5.8%。但三个不同地区来源的127份非特异凝集血清,经复判结果全部为阴性;放射免疫沉淀试验也全部为阴性。在广东省鼠疫监测中鼠类血清发生间接血凝非特异凝集的假阳性率为4.4%。结论鼠疫血清的放射免疫沉淀试验的特异性远远高于间接血凝试验。在广东不同地区来源的鼠类血清样本中,间接血凝出现假阳性率明显不同,非疫区明显高于疫区。     

鼠疫FI单克隆抗体致敏红细胞用于反向血凝抑制试验检测鼠疫FI抗体的试验研究

本文介绍了鼠疫FI MCAb致敏红细胞用于反向血凝抑制试验检测鼠疫FI抗体的试验。结果表明,用该法检测95份正常人和8种动物血清,7种非鼠疫菌免疫动物血清,全部阴性;检测9份抗鼠疫强毒株和1份弱毒株血清及1份接种鼠疫菌苗的人血清,全部阳性,滴度比间接血凝试验(IHA)高2~1～2~3。该法可省去另做一排抑制试验的操作程序,较IHA简便、快速,在鼠疫疫源地调查和疫情监测中有良好的应用前景。     

RIP和IHA检测人血清F1抗体的比较研究

检测鼠疫F_1抗体通常采用间接血凝试验(IHA)。80年代初放射免疫沉淀试验(RIP)被引入国内,并很快得到推广使用,本文采用这两种方法,检测了我省近两年发生的鼠疫患者,疑似鼠疫患者和部分健康人群血清F_1抗体,并通过直线回归比较了两法的敏感性,结果如下。     

从表达菌培养液中提取鼠疫菌重组F1抗原

目的从表达鼠疫耶尔森氏菌F1蛋白的诱导培养液中提取纯化重组F1并检测其免疫反应性。方法收集诱导培养后离心去除菌体的培养液,采用硫酸铵沉淀法和PEG浓缩法提取F1蛋白,产物经镍离子金属螯合亲和层析纯化,免疫印迹(Western blot)鉴定其免疫反应性。结果硫酸铵沉淀法和PEG浓缩法均能从培养液中提取到重组F1蛋白,产物经纯化后可与鼠疫疫苗株免疫兔血清和既往鼠疫患者血清发生特异性结合反应。结论该表达菌表达效能较高,在诱导培养液中存在大量具有免疫学活性的重组F1蛋白。     

甘南州近年来鼠疫监测血清学检测结果分析

目的通过对甘南州近年来鼠疫监测血清学检测结果的分析,预测该疫源地旱獭鼠疫复燃的可能性。方法对1990年以来鼠疫监测中应用IHA、RIP和ELISA方法,检验该块疫源地的动物及人血清的结果进行研究,分析该地区鼠疫流行现状。结果夏河县自1991年至今用IHA方法检出22份旱獭阳性血清,用ELISA方法检出1份人阳性血清(滴度为1∶64);碌曲县用RIP方法检出2份旱獭阳性血清;历史鼠疫疫源地玛曲县用RIP方法检出1份犬阳性血清。结论该块旱獭鼠疫疫源地已渐入复燃期,应进一步加强当地旱獭鼠疫的血清学和病原学监测,开展牧羊犬血清鼠疫FI抗体检测,同时开展历史鼠疫疫源性的调查。做好群众以"三报三不"为主的宣传教育工作,进行基层医疗卫生人员的鼠疫防治全员培训,严防人间鼠疫的发生和流行。