H_(22)小鼠肝癌细胞接种数与实验性肺转移的相关性

目的:探讨H22小鼠肝癌细胞接种数与实验性肺转移的相关性。方法:昆明种小鼠尾静脉注射不同数量(1×107、7.5×106、5×106、2.5×106、1×106)H22细胞制作实验性肺转移模型,肉眼及镜下观察肺内肿瘤的有无、大小、转移程度及分布情况,血清ICAM-1、IL-2蛋白的表达情况。结果:接种1×107细胞浓度组小鼠肺转移率、恶化程度及血清中ICAM-1蛋白表达的量均高于其他接种组(P0.01),IL-2蛋白表达低于其他接种组(P0.01),其中部分小鼠有脑转移。结论:小鼠实验性肺转移的发生率、转移程度及血清中ICAM-1、IL-2蛋白的表达量与细胞接种数变化密切相关。     

异种MMP-2 DNA疫苗联合小剂量顺铂治疗肿瘤转移的实验研究

目的 通过异种基质金属蛋白酶-2(MMP-2)DNA疫苗(c-MMP-2)联合小剂量的顺铂(DDP)治疗小鼠结肠癌肺转移,了解两者的协同治疗作用.方法 构建编码与人类及鼠类高度同源的鸟类MMP-2分子的重组真核表达质粒作为DNA疫苗.建立负载小鼠结肠腺癌肺转移动物模型,将模型小鼠分为生理盐水对照组(NS组)、DDP治疗组(小鼠腹腔注射DDP 100 μg/次,每周1次,连续2周)、c-MMP-2 DNA疫苗治疗组(小鼠后股肌肉注射1 mg/mL疫苗100 μL,每周1次,连续4周)、c-MMP-2 DNA疫苗联合DDP治疗组.在接种肿瘤细胞后第28 d断颈处死小鼠,取出肺并称其质量,检查并计数肺部＞3 mm的肿瘤转移灶,免疫组化法测肿瘤组织微血管密度,TUNEL法测凋亡小体,ELISA检测小鼠血清中的抗体滴度及类型.结论 联合治疗组肺部肿瘤转移灶个数(3±1.64)少于c-MMP-2组(10±3.49,P=0.041)、DDP组(45±4.07,P=0.032)及NS组(85±8.70,P=0.003),肺的质量(0.4±0.03) g少于c-MMP-2组[(0.8±0.06) g,P=0.044]、DDP组[(1.0±0.16) g,P=0.032]及NS组[(1.6±0.22) g,P=0.003],肿瘤组织中微血管密度低于对照组,Tunel法显示凋亡小体明显增多,ELISA法检测发现c-MMP-2治疗组和联合治疗组小鼠血清中有针对MMP-2的自身反应性抗体.结论 异种MMP-2 DNA疫苗与小剂量的顺铂联合治疗恶性肿瘤转移有协同抗肿瘤转移作用.     

rhBMP-2m对γ射线辐射造血损伤小鼠的治疗

目的: 探讨重组人骨形成蛋白-2成熟肽(rhBMP-2m)对γ射线辐射造血损伤小鼠的影响. 方法: 15只小鼠随机分成3组:照射组、BMP治疗组和对照组,每组5只. 照射组和BMP治疗组均以60Co-γ射线7.5 Gy照射200 s,对照组不接受照射. 照射后,照射组和对照组每日腹腔注射生理盐水1 Ml,BMP治疗组注射等量0.5 g/L rhBMP-2m生理盐水稀释液,各6 d. 照射后1, 3, 5, 7, 9, 11 d以尾静脉采血观察3组小鼠外周血白细胞、红细胞及血小板变化;照射后11 d观察照射组、BMP治疗组小鼠脾结节形成数变化. 结果: 3组间小鼠的外周血白细胞、血小板数目随时间的变化差异有统计学意义 (P＜0.01),而外周血红细胞数目随时间的变化差异无统计学意义(P＞0.05). 与对照组相比,照射组外周血白细胞[如(0.32±0.11)×109 vs (4.05±1.18)×109, 7 d]、红细胞[如(6.73±1.68)×1012 vs (9.09±1.92)×1012, 7 d]、血小板计数[如(26.60±7.47)×109 vs (814.20±187.01)×109, 7 d]显著下降 (P＜0.01);与照射组相比,BMP治疗组外周血白细胞[如(1.61±0.31)×109 vs (0.32±0.11)×109, 7 d]、血小板计数[如(142.60±35.71)×1012 vs (26.60±7.47)×1012, 7 d]显著增高 (P＜0.01),外周血红细胞数目虽然增高[如(7.38±2.22)×1012 vs (6.73±1.68)×1012, 7 d],但差异无统计学意义(P＞0.05);BMP治疗组小鼠脾结节形成数显著多于照射组(P＜0.01). 结论: BMP可提高γ射线放射损伤小鼠各系的造血细胞数目及脾结节形成数,具有促进造血功能恢复的作用.     

电转染血管能抑素基因对C57小鼠Lewis肺癌生长和转移的影响

目的建立Lewis肺癌移植瘤模型,人血管能抑素(canstatin)基因重组表达载体电穿孔法转染至肿瘤局部,观察对肿瘤生长和转移的抑制作用。方法将Lewis肺癌细胞接种于C57BL小鼠皮下,成瘤后将30只小鼠随机分成3组,分别瘤体内注射血管能抑素重组载体、空载体和生理盐水,基因枪于注射部位电击,2周后PT-PCR法检测肿瘤组织中血管能抑素基因的表达并观察小鼠体重、肿瘤体积变化及肺转移结节数目。结果成功建立Lewis肺癌皮下移植瘤模型;电击2周后重组载体组仍存在血管能抑素基因的表达,重组载体组小鼠肿瘤体积由(1.03±0.11)cm3增加至(1.51±0.19)cm3,而空载体组由(1.01±0.09)cm3增至(2.45±0.18)cm3、NS组由(1.02±0.10)cm3增至和(2.54±0.21)cm3;重组载体组体积与后两组比较(P<0.01),即生长速度受到显著的抑制。重组载体组、空载体组和NS组的肺转移结节数分别为(3.50±1.24),(7.60±2.51)和(7.70±2.45);重组载体组与后两组比较(P<0.01),即肿瘤转移亦受到显著的抑制。结论血管能抑素可明显抑制Lewis肺癌移植瘤的生长与转移。     

Effect of cyclooxygenase-2 inhibitor on P-selectin and intercellular adhesion molecule 1 in rats with ischemia/reperfusion injury following pancreaticoduodenal transplantation

[目的]探讨特异性环氧合酶-2抑制剂(cyclooxygenase-2 inhibitor,COX-2 inhibitor)NS398能否抑制大鼠胰十二指肠移植缺血再灌注损伤中P选择素(P-selectin,P8)及细胞间粘附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)的表达.[方法]采用单纯随机抽样的方法将75只SD大鼠分为3组:假手术组(15只)、移植组(15对)、移植+NS398组(15对).各组均于术后1、3、6h取血测定血清淀粉酶含量,光镜下观察胰腺病理改变,免疫组织化学法和RT-PCR法分别检测胰腺组织中ICAM-1及Ps的表达情况和基因水平的变化.[结果]假手术组各时间点胰腺组织损伤不明显,血淀粉酶不升高(P＞0.05);随再灌注时间的延长,移植组胰腺组织损伤加重,血淀粉酶较同时点假手术组明显升高(P＜0.05);但与移植组比较,移植+NS398组胰腺组织损伤及血淀粉酶升高均较轻(P＜0.05).假手术组各时点Ps和ICAM-1均不表达;移植组、移植+NS398组各时点Ps和ICAM-1均有表达,但移植+NS398组Ps和ICAM-1的表达均明显低于移植组(P＜0.05).[结论]NS398能抑制胰十二指肠移植缺血再灌注损伤大鼠的Ps及ICAM-1表达,对大鼠胰十二指肠移植缺血再灌注损伤有保护作用.     

羟基红花黄色素对博莱霉素致间质性肺病小鼠的作用机制研究

[目的]研究羟基红花黄色素对博莱霉素致间质性肺病小鼠的作用机制。[方法]将90只KM小鼠随机分为对照组、模型组、红花黄色素组3组,建立雄性间质性肺病小鼠模型。实验第21天、第28天取右下肺分别做病理切片;第28天取左下肺叶用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定转化生长因子(TGF-β1)、白介素(IL)-6;第28天取右中上肺叶应用实时定量荧光PCR(RT-PCR)法检测血管内皮生长因子(VEGF)和内皮细胞型纤溶酶原激活物抑制因子(PAI-1)的表达。[结果]与空白组比较,模型组小鼠肺组织TGF-β1、IL-6、PAI-1、VEGF m RNA表达水平明显升高(P0.01);与模型组比较,红花黄色素组小鼠肺组织TGF-β1含量明显降低(P0.01),IL-6含量降低(P0.05),红花黄色素组小鼠肺组织VEGF m RNA表达水平明显降低(P0.01),PAI-1m RNA表达水平无差异。[结论]羟基红花黄色素能降低TGF-β1、IL-6、VEGF m RNA表达水平,改善肺纤维化。     

参杞合剂抗肿瘤免疫的动态实验研究

[目的]研究参杞合剂对抗肿瘤治疗后期荷瘤小鼠免疫功能的动态调节.[方法]取小鼠荷瘤,分组:生理盐水(NS)对照组,环磷酰胺(CY)组,参杞合剂(SQ)组.分别予NS组及SQ组小鼠口服灌胃NS及SQ,CY组则腹腔注射CY.测NK/ MΦ细胞杀伤活性;IL-12/TNF-α含量.[结果]①参杞合剂能够延长荷瘤小鼠生存期,抑制肿瘤生长.抑瘤率达65.68%,CY组抑瘤率为45.76%,与NS组比较差异均有显著性意义(P＜0.05);SQ组抑瘤效果强于CY组(P＜0.05),而且抑瘤持久,停药5 d和停药9 d,其抑瘤率仍可达49.43%和41.39%.②能增强荷瘤小鼠免疫功能,增强荷瘤小鼠的NK/MΦ细胞杀伤活性.停药第1天SQ治疗组体内的NK/MΦ细胞的含量可达(55.78±2.23)%/(57.23 ±1.37)%,较NS组(36.51±1.94)%/(38.57±1.15)%明显增强,停药5 d,9 d仍可维持于正常水平范围之内(47.43±1.06/47.67±1.01);而CY组却逐渐下降低于正常水平(29.66±1.99)%/(27.28±1.42)% (P＞0.05).③能增强荷瘤小鼠细胞因子活性.SQ组的TNF-α含量较NS组有明显增加(P＜0.05);CY组的IL-12、TNF-α含量较NS组有明显降低(P＜0.05).停药5 d,9 d SQ组IL-12,TNF-α含量维持刚停药时的较高水平,逐渐下降仍维持于正常范围内(P＞0.05).相应的NS组IL-12为35.15±2.62,显著低于正常水平(P＜0.01),而TNF-α却显著高于正常水平(P＜0.01),CY组则维持刚停药时的状态. [结论]参杞合剂有较好的抑瘤作用.     

抑癌扶正平衡Ⅱ号方对乳腺癌小鼠移植瘤生长转移的实验研究

[目的]观察抑癌扶正平衡Ⅱ号方对乳腺癌小鼠移植瘤生长及肺转移的抑制作用,并探索其抗肿瘤效应与硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的相关性。[方法]建立4T1乳腺癌小鼠模型,随机分为空白组、模型组、低分子肝素组、抑癌扶正平衡Ⅱ号方高、中、低剂量组,连续给药14 d后处死取材。测定移植瘤瘤质量和计数肺转移结节个数,并计算瘤质量抑制率及肺转移抑制率。ELISA法检测各组小鼠移植瘤、转移瘤、血清中硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)的表达。[结果]中药各组瘤质量、肺转移结节数随中药剂量增高而下降(P0.05);高剂量中药组瘤质量抑制率及肺转移抑制率均优于低分子肝素组(P0.05)。中药各组移植瘤、转移瘤、血清中HSPG的表达随中药剂量增高而上升(P0.05);高剂量中药组移植瘤、转移瘤、血清中HSPG的表达高于低分子肝素组(P0.05)。[结论]抑癌扶正平衡Ⅱ号方可显著抑制乳腺癌小鼠移植瘤的增殖和肺转移,其作用机制可能与增高硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的表达有关。     

清金得生片抗肿瘤作用的实验研究

[目的]观察中药复方清金得生片(清金片)的抗肿瘤作用。[方法]复制C57小鼠Lewis肺癌模型,以替加氟片(FT-207)为阳性对照药(0.2g/kg),观察清金片高、中、低刑量(3.15、1.05、0.35 g/kg)组的抑瘤率;复制NIH小鼠艾氏腹水癌(EAC)模型,观察清金片各剂量组的生存时间和生命延长率;以 8 g/kg清金片灌胃SD大鼠,制备含药血清,采用体外培养与四甲基偶氯唑盐(MTT)法,观察体积分数为10％、20％、30％的清金片含药血清对人肺腺癌细胞株(LAC)生长的抑制作用;观察清金片各剂量组时肉瘤180(S180)荷瘤小鼠二甲苯致炎的耳肿胀度,以及H22腹水瘤荷瘤小鼠气管内酚红排出量的影响。[结果]清金片高、中、低剂量组在抑制小鼠Lewis肺癌生长方面作用与FT-207相仿,延长EAC荷瘤小鼠的存活时间和生命延长率的作用优于FT-207,高剂量组在减少二甲苯所致小鼠耳肿胀方面作用与FT-207及阿斯匹林相似,而在促进荷瘤小鼠气管内酚红排出量方面的作用优于FT-207而与溴已新片相仿;清金片各浓度含药血清均能抑制LAC的生长,其作用与模型组比较均有显著性差异(P<0.05或P<0.01),且均呈现剂量效应关系。[结论]清金得生片对原发性支气管肺癌及转移性肺癌有抑瘤、抗炎、祛痰作用。其作用总体与化疗药FT-207相似,但在延长荷瘤小鼠的存活时间方面优于FT-207     

椒目油对哮喘豚鼠白细胞介素4,5及气道反应性的影响

目的: 探讨椒目油对哮喘豚鼠模型白细胞介素4,5(IL-4,5)水平及气道高反应性(AHR)的影响,为椒目油治疗哮喘提供理论依据. 方法: 实验分为4组: 正常对照组、哮喘模型组、地塞米松治疗组和椒目油治疗组,每组各10只豚鼠. 用卵白蛋白(OVA)腹腔注射致敏和雾化吸入激发建立哮喘豚鼠模型,三通管做气管插管进行机械通气,测定气道内压力(IP)以反映气道反应性,ELISA法检测豚鼠血清中IL-4,5含量. 结果: 哮喘模型组豚鼠血清IL-4,5含量[分别为(38.2±3.4)和(344.4±21.8) ng/L]显著高于正常对照组[分别为(19.8±1.2)和(77.8±26.0) ng/L](P＜0.01);椒目油组IL-4,5含量[分别为(22.8±3.5)和(89.2±38.7) ng/L]和地塞米松组IL-4,5含量[分别为(22.0±1.8)和(234.6±35.1) ng/L]均明显低于哮喘模型组(P＜0.01);椒目油组豚鼠IL-4含量与地塞米松组比较无统计学意义(P＞0.05),但IL-5含量显著低于地塞米松组(P＜0.01). 哮喘豚鼠模型组气道反应性(0.013±0.014 g/L)与正常对照组(0.168±0.186 g/L)比较显著升高(P＜0.01);椒目油治疗组与地塞米松治疗组气道反应性[分别为(0.160±0.180)和(0.144±0.154) g/L]与哮喘模型组比较均显著降低(P＜0.01),与正常对照组比较无统计学意义(P＞0.05);椒目油组气道反应性与地塞米松组相比无显著性差异(P＞0.05). 结论: 椒目油能有效降低哮喘豚鼠AHR,其机制可能是抑制哮喘豚鼠体内IL-4,5的生成.     

四君子汤加减治疗酒精性脂肪肝286例

[目的]评价四君子汤加减治疗酒精性脂肪肝的临床疗效。[方法]运用四君子汤加减配合禁酒治疗酒精性脂肪肝286例。[结果]接受治疗者临床症状减轻甚至消失,有效率为97.6%。[结论]以四君子汤为基本方治疗酒精性脂肪肝非常有效。     

彭万年教授应用经验方改善石瘿患者临床症状验案1则

[目的]探究彭万年教授经验方治疗石瘿患者的疗效。[方法]采用温补脾肾、行气活血为基本大法,用四君子汤合小柴胡汤加减,对1例石瘿患者进行治疗。[结果]该患者以上方随症加减调理1年余,生存质量得到了极大的改善。[结论]以温补脾肾为法,用四君子汤合小柴胡汤加减治疗石瘿患者,可获良好疗效,值得临床推广。     

不同剂量四君子汤对急性肝衰竭小鼠肠屏障功能的影响

目的:探讨四君子汤对急性肝衰竭小鼠肠屏障功能的影响及治疗最佳剂量。方法:小鼠经腹腔一次性注射D-GaIN/LPS,制备急性肝衰竭模型,观察3种剂量(10g/kg、15g/kg、25g/kg)四君子汤对肠道正常菌群,肠黏膜sIgA含量及肝功能的影响。结果:小鼠腹腔注射D-GaIN/LPS后,血清中ALT、AST活性显著提高(P<0.01);肠道内肠杆菌、肠球菌数量明显上升(P<0.01),乳酸杆菌、双歧杆菌数量明显下降(P<0.01);肠黏膜sIgA含量明显降低(P<0.01)。3种剂量组上述指标均得到明显改善,与自然恢复组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);治疗组间比较发现中、高剂量组效果相当,但好于低剂量组。结论:急性肝功能衰竭时肠道菌群失调,肠粘膜免疫功能下降,四君子汤具有一定的调整作用,且中剂量的四君子汤(15g/kg)可能为适宜剂量。     

四君子汤加减治疗酒精性脂肪肝286例

[目的]评价四君子汤加减治疗酒精性脂肪肝的临床疗效。[方法]运用四君子汤加减配合禁酒治疗酒精性脂肪肝286例。[结果]接受治疗者临床症状减轻甚至消失,有效率为97.6%。[结论]以四君子汤为基本方治疗酒精性脂肪肝非常有效。     

祛风止动方对小鼠急性毒性反应的实验研究

[目的]观察祛风止动方对小鼠的急性毒性反应。[方法]祛风止动方以最大浓度及最大给药体积的药液灌胃给药2次/d,连续观察14d,记录小鼠毒副反应情况。]结果]观察14d后,全部动物健存,未见任何毒性反应。计算得祛风止动方最大给药量为130g/kg,相当于成人推荐剂量的120倍。[结论]提示祛风止动方毒性较低。     

加味四君子汤对肌萎缩侧索硬化症AR2小鼠运动功能的影响

目的：探索加味四君子汤对肌萎缩侧索硬化症（ALS）AR2小鼠运动功能的影响。方法：采用转基因方法制作保留部分运动功能的ADAR2flox/flox小鼠为对照组（I组），将ALSAR2小鼠随机分为空白组（Ⅱ组）、中药低剂量组（Ⅲ组）及高剂量组（Ⅳ组）。各组小鼠正常进食水，中药组分别给予灌胃低、高剂量的加味四君子汤，每日1次。每4周观察小鼠活动状况以及抓握力、爬滚筒能力等运动功能，并在第24周检测小鼠血常规、心肝肾功能。结果：各组小鼠第8周开始均有不同程度的运动功能减退，到24周为止I组运动功能减退速度缓慢，Ⅱ组AR2小鼠从12周开始无论活动度、抓握力还是爬滚筒能力均迅速下降，而AR2小鼠中药治疗组运动功能降低程度被延缓，且与中药剂量有关；24周时Ⅱ组AR小鼠的体质量、抓握力和爬滚筒能力与其余3组比较明显降低，差异有统计学意义。各组小鼠24周时的生化检测均无异常。结论：加味四君子汤能够延缓ALS小鼠运动功能的衰退。     

名中医程锦国运用温肾解毒汤治疗肾功能衰竭终末期

[目的]总结名中医程锦国治疗肾功能衰竭终末期的临证经验。[方法]通过临床跟师、收集病例,对程锦国主任中医师运用温肾解毒汤治疗终末期肾功能衰竭的理论及思路进行分析总结,并列举医案验证。[结果]名中医程锦国认为",肾劳"体现肾功能衰竭终末期患者以脾失健运、肾失开阖为本,以阴浊内聚、瘀血内停为标的病理特点,以苏叶黄连汤清热和胃、大黄附子汤温阳散寒和四君子汤健脾安中,三方合成温肾解毒汤化裁治之,能够延缓患者病情进展。所举验案为无法接受血液净化治疗的肾功能衰竭终末期患者,辨证为脾肾阳虚、浊毒内蕴,治以温肾健脾、泻浊排毒,方用温肾解毒汤化裁,延缓了病情进展,取得较好疗效。[结论]名中医程锦国运用温肾解毒汤治疗终末期肾功能衰竭,契合病机,疗效确切,值得学习和总结。     

加味四君子汤对小鼠CT26大肠癌移植瘤的抑制作用及肿瘤相关巨噬细胞CD68、CD206蛋白表达的影响

目的:观察加味四君子汤对小鼠CT26大肠癌移植瘤的抑制作用及肿瘤相关巨噬细胞CD68、CD206蛋白表达的影响。方法:取大肠癌CT26细胞体外培养,建立BALB/C小鼠大肠癌皮下移植瘤模型。取造模成功的BALB/C小鼠随机分为模型组和加味四君子汤低、中、高剂量组,每组5只。加味四君子汤各组小鼠分别灌胃给予0.035、0.07、0.14 g/g药液,模型组小鼠灌胃给予等体积0.9%NaCl溶液,连续21 d。末次给药后,剥离瘤体,测量移植瘤体积并计算抑瘤率;免疫组化检测各组小鼠瘤体组织中肿瘤相关巨噬细胞CD68和CD206的蛋白表达。结果:药物干预21 d后,与模型组相比,加味四君子汤中剂量组小鼠的移植瘤体积显著减小(P0.05),肿瘤生长抑制率显著升高(P0.05),且其抑瘤效果明显优于低、高剂量组(P0.05)。免疫组化观察显示,与模型组相比,加味四君子汤中剂量组小鼠瘤体组织内肿瘤相关巨噬细胞CD68和CD206表达显著降低(P0.01);且中剂量组对CD68和CD206表达的抑制作用明显强于低、高剂量组(P0.05,P0.01)。结论:加味四君子汤能有效抑制小鼠CT26大肠癌移植瘤生长,其作用机制可能与下调肿瘤相关巨噬细胞CD68和CD206的表达有关。     

四君子加川牛膝方对大鼠下肢难愈性创面愈合的影响

目的：观察四君子加川牛膝方治疗大鼠下肢难愈性创面的疗效。方法：建立大鼠右下肢难愈性创面模型,将32只清洁级雄性SD大鼠随机分为模型组、四君子加川牛膝方组、四君子汤组、川牛膝方组。各组分别给予生理盐水及相应中药灌胃处理,观察各组大鼠创面面积、创面愈合率及创面愈合时间。结果：四君子汤组、四君子加川牛膝方组与模型组相比,均可明显缩短创面愈合时间（P〈0.01,P〈0.05）;而四君子加川牛膝方组创面愈合时间明显少于四君子汤组（P〈0.05）。造模后第7、10、14天,四君子汤组创面面积、创面愈合率优于模型组（P〈0.05）;造模后第3、7、10、14天,四君子加川牛膝方组创面面积、创面愈合率明显优于模型组（P〈0.01,P〈0.05）;造模后第10、14天,四君子加川牛膝方组创面面积、创面愈合率优于四君子汤组（P〈0.05）。结论：四君子汤、四君子加川牛膝方可以促进大鼠下肢难愈性创面愈合,且以四君子加川牛膝方效果明显。