燃煤型氟中毒大鼠血清中Ⅰ型胶原交联N末端肽变化

目的观察血清Ⅰ型胶原交联N末端肽(NTX)在燃煤型氟中毒大鼠血清中的变化,探讨骨吸收在氟骨症发生中的地位。方法将160只断乳4周的SD大鼠随机分为对照组、低氟组、中氟组、高氟组,食用病区煤烘玉米,复制燃煤型氟中毒动物模型。分别于染毒后30 d、90 d、180 d分批处死动物,ELISA法检测血清NTX水平。结果随着染毒时间增加,各实验组尿氟、骨氟、氟斑牙发生率、股骨病理积分逐渐增加(P小于0.05)。实验不同阶段各实验组与对照组比较,差异具有统计学意义(P小于0.05),并有随着染氟剂量增加而增加的趋势(P小于0.05)。实验30 d和90 d时,各组NTX水平差异无统计学意义。实验180 d时,低氟组及中氟组NTX高于对照组及高氟组(P小于0.05)。结论在摄氟早期,氟未增强骨吸收,随着时间及染氟剂量增加,可促进骨吸收。     

燃煤型氟中毒大鼠血清骨碱性磷酸酶及Ⅰ型胶原羧基端前肽的变化

目的 观察骨碱性磷酸酶(BALP)及Ⅰ型胶原羧基端前肽(C ⅠCP)在燃煤型氟中毒大鼠中的表达变化,探讨骨形成在氟中毒骨病变中的地位.方法 将断乳4周的SD大鼠160只随机分为对照组、低氟组、中氟组、高氟组(饲料氟:6.30、9.56、15.89、23.00 mg/kg),食用病区煤烘玉米,复制燃煤型氟中毒动物模型.分别于染氟后30、90、180d以ELISA法检测血清BALP和CⅠCP水平.结果 染氟30和90 d时各组动物血清BALP水平差异无统计学意义,180 d时中氟组、高氟组BALP均高于对照组和低氟组(P＜0.01).染氟30 d时高氟组血清CⅠCP水平低于对照组(P＜0.05);90 d时中氟组和高氟组血清CⅠCP水平均高于对照组(P＜0.05),且有随着剂量增加而增加的趋势;180 d时各组动物血清C ⅠCP水平高于对照组(P＜0.01),且有随着剂量增加而增加的趋势.结论 氟可以使大鼠骨形成加速,且氟对CⅠCP表达的影响较BALP显著.     

过量氟对大鼠牙本质Ⅰ型胶原影响的免疫组化研究

目的 了解氟对大鼠牙本质I型胶原的影响。方法 将新生SD仔鼠80只，分为对照组和实验组，每组40只。实验组按每次每公斤体重2mg皮下注射NaF，于出生后第5天开始染毒，每间隔4d染毒1次。分别于第2次染毒后4d(出生后13d)和第7次染毒后4d(出生后33d)每组处死20只，免疫组织化学方法观察牙本质I型胶原的分布。对照组以等体积的O．9％NaCl代替NaF，余同实验组。结果 染毒2次实验组20只SD仔鼠中4只出现I型胶原分布异常，主要表现为成牙本质细胞内胶原聚集，前期牙本质胶原排列紊乱，最初形成的牙本质层胶原染色加深；染毒7次实验组，20只仔鼠全部出现I型胶原分布异常，主要表现为近髓牙本质基质I型胶原浓染，成牙本质细胞内胶原明显聚集。结论过量氟对发育牙本质I型胶原代谢有不良影响。     

燃煤型氟中毒对大鼠骨骼组织形态计量学影响

目的 探讨燃煤型氟中毒对大鼠骨组织形态计量学影响。方法 建立低蛋白低钙条件下燃煤型氟中毒大鼠模型;测定大鼠24 h尿氟、骨氟,根据氟斑牙判断损伤程度;采用X线骨密度仪测定大鼠股骨及胫骨骨密度;扫描电子显微镜下观察大鼠股骨松质骨超微结构的形态学改变,观察大鼠胫骨上端骨形态静态计量学参数改变。结果 染氟组大鼠100%发生氟斑牙;染氟组大鼠骨氟含量[(199.90±106.84) mg/kg]与骨密度(0.205 3 g/cm²)明显高于对照组[分别为(30.06±6.11) mg/kg、0.185 4 g/cm²],差异有统计学意义(P<0.05);形态计量学结果显示,染氟组大鼠胫骨上端骨小梁面积[(67 612.02±1 662.23)mm²]、骨小梁周长[(7 655.44±918.05)mm]、骨小梁个数[(38.25±4.99)个/mm]均明显高于对照组[分别为(50 951.43±9 046.88)mm²、(5 172.42±789.70)mm、(27.75±4.19)个/mm](均P<0.05)。结论 单纯低蛋白低钙条件下,过量氟暴露可导致大鼠骨形态计量学出现以骨软化为主的病理改变。     

实验性氟中毒骨组织中Ⅱ型胶原基因表达及结构的改变

目的 观察过量氟对大鼠骨组织中Ⅱ型胶原基因表达的影响和对大鼠骨骼中胶原类型及胶原结构的作用。方法 制备Ⅱ型胶原cDNA探针，采用cDNA-mRNA原位杂交技术，检测饮用过量氟水(氟化钠221mg／L)的大鼠骨组织中Ⅱ型胶原的改变。采用苦味酸天狼星红染色—偏振光法对骨组织中胶原类型及胶原纤维结构进行观察。结果 染氟后，股骨等骨组织出现成软骨细胞。cDNA-mRNA原位杂交显示，软骨化的骨组织软骨陷窝的软骨胞质中可见Ⅱ型胶原基因表达。染氟0．5个月组肋软骨软骨细胞胶原mRNA水平最高，其灰度值和标准误分别为0．086和0．013，染氟1个月及2个月后逐渐减弱，其灰度值和标准误分别为0．047、0．008和0．039、0．007。苦味酸天狼星红染色-偏振光法观察骨组织中出现多色性Ⅱ型胶原纤维，胶原纤维断裂、排列紊乱、含量下降。结论 过量氟可致骨组织中胶原类型和胶原结构的改变，导致Ⅱ型胶原在软骨化骨组织中的表达及在肋软骨组织中的表达增强。     

姜黄素脂质体对人黄韧带细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响

目的观察姜黄素（Cur）对人黄韧带细胞（LFCs）Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响,探讨其抗黄韧带纤维化的机制。方法采用组织块加酶预消化法培养LFCs作为研究模型,予以不同浓度姜黄素0、10、50、100、200ng／ml刺激人LFCs12h,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测姜黄素对人LFCs的抑制效应,采用Real—time PCR法检测姜黄素对人LFcs的Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响。结果MTT检测结果显示：10ng,／ml姜黄素作用于人LFCs,表现为增殖倾向,其光吸收值（OD值）显著地高于正常对照组。而在50-100ng／ml的浓度范围内,随着姜黄素药物浓度的增加,其抑制作用逐渐增强,100ng/ml和200ng／ml姜黄素能显著抑制人LFCs增殖（p≤0．05）;Real—timePCR结果显示200．g／ml姜黄素组能够显著抑制人LFCsⅠ、Ⅲ型胶原合成（p≤O．05）。结论较高浓度的姜黄素能有效抑制人LFCs增殖和Ⅰ、Ⅲ型胶原合成,对人黄韧带纤维化可能有治疗作用。     

博莱霉素大鼠肺纤维化Ⅰ、Ⅲ型胶原表达

特发性肺纤维化病因不明,中位生存时间仅3年左右,肺移植是目前唯一有望提供长期生存的方法。由于部分研究结论难以从临床患者中得到,肺纤维化动物模型便成为研究人类特发性肺纤维化的有力工具⁽¹⁾。20世纪70年代初,Snider等⁽²⁾首次用博莱霉素造模成功,由于该模型病理学特点与人类特发性肺纤维化十分相似,目前成为国内外公认的用于研究人类肺纤维化的动物模型。Ⅰ、Ⅲ型胶原是肺组织中的主要胶原成分,也成为评价博莱霉素肺纤维化模型的特异指标⁽³⁾。     

牛磺酸对染矽尘大鼠肺组织Ⅰ和Ⅲ型胶原合成及比例的影响

目的 探讨牛磺酸对染矽尘大鼠肺组织不同时相Ⅰ、Ⅲ型胶原合成及比例的影响.方法 将Wistar大鼠144只随机分为对照组（生理盐水,普饲）、矽肺组（普饲）和牛磺酸组（牛磺酸饲料）给予气管内注入1 ml矽尘混悬液（50 mg/ml）,每组48只.分别在第1、3、7、14、21、28天时,用高效液相色谱法测定其血浆中牛磺酸含量;取肺组织制作石蜡切片,天狼猩红法染色,偏振光显微镜观察各组动物肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成及比例的变化,图像分析系统对其进行定量分析.结果 第7、14、21和28天,矽尘组Ⅰ型胶原含量分别比对照组增加3.84%、3.77%、3.73%、9.83%,差异有统计学意义（P＜0.01）.第7、21和28天时,牛磺酸组Ⅰ型胶原含量分别比矽尘组降低2.39%、1.62%和7.13%;与对照组比较,第14、21和28天Ⅰ型胶原含量分别增加2.12%、2.11%和2.70%,差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）.第28天时,牛磺酸组Ⅲ型胶原含量比矽尘组减少2.62%,差异有统计学意义（P＜0.05）.矽尘组Ⅰ/Ⅲ型胶原比例第7天开始增加,第28天时达到最大比值1.87,牛磺酸组Ⅰ/Ⅲ型胶原比例从第7天开始增加,且增加幅度高于矽尘组,第28天时增加幅度低于矽尘组.结论 牛磺酸对矽尘诱导大鼠肺组织不同时相的Ⅰ、Ⅲ型胶原合成抑制作用不同.     

久效磷对大鼠皮肤成纤维细胞胶原Ⅰ和ⅢmRNA表达的影响

目的 研究久效磷对体外培养的大鼠皮肤成纤维细胞生长及胶原Ⅰ和Ⅲ合成的影响.方法取4只出生3d清洁级SD大鼠背部皮肤,以组织块法培养大鼠皮肤成纤维细胞,正常传代.取第4代成纤维细胞,按1.0×10(6)个/瓶接种于25 c㎡培养瓶中,当细胞至亚融合状态,分别加入0(对照)、0.01、0.1、1 μg/L的久效磷溶液,培养...     

肌肉和脂肪组织工程骨中Ⅰ型胶原的表达

[目的]对HA/β-TCP陶瓷在狗的肌肉和皮下脂肪组织中构建的体内组织工程骨的Ⅰ型胶原进行mRNA水平的定量分析,为优化选择体内组织工程骨的构建部位提供理论基础和实验依据。[方法]制备5mm×8mm的磷酸钙陶瓷30粒并分别植入5只狗的竖直肌和皮下脂肪中。术后4、8、12、16和24周,取出在肌肉和皮下脂肪中构建的体内组织工程骨。提取总RNA,经逆转录成cDNA后,实时相对定量PCR检测Ⅰ型胶原mRNA的表达。[结果]M组(肌肉内构建的体内组织工程骨)的Ⅰ型胶原mRNA在第12周时达到表达高峰(相对表达量为34.45),较F组(皮下脂肪内构建的体内组织工程骨)的(16周)早,但M组的Ⅰ型胶原mRNA最大表达量明显低于F组。两组中,Ⅰ型胶原mRNA的表达趋势相似。[结论]肌肉中体内组织工程骨的发生较早,但形成的骨量却不如脂肪中的多。临床上,可根据实际需要选择体内组织工程骨的构建部位。     

抗纤二号对大鼠肝纤维化的I,III胶原表达的影响

目的　在过去临床实践的基础上 ,欲探讨复方抗纤二号抗肝纤维化的治疗机制。　方法　雄性Wistar大鼠分成五组 ,除正常对照外 ,余四组大鼠肝纤维化造模均采用腹腔注射猪血清 (0 .5ml /次 ,2次 /周 )。抗纤二号早期治疗组在第三周给予中药灌胃 ,1g/10 0 g每天一次。抗纤二号晚期治疗组在造模第九周给予中药灌胃 ,1g/10 0g每天一次。γ -干扰素治疗组在造模第九周每天皮下注射 10万单位的干扰素。模型组和正常对照组给等量的生理盐水灌胃。在 12周杀大鼠 ,HE和Masson染色观察肝纤维化的形成 ,RT -PCR检测肝组织中I ,III型胶原mRNA的表达 ,免疫组化观察I ,III型胶原蛋白的表达。　结果　病理学观察 ,抗纤二号早期治疗组显著逆转了猪血清诱导的肝纤维化 ,与模型组比较 ,经HE和Masson染色抗纤二号治疗组能明显降解纤维化大鼠肝中的胶原 (P <0 .0 5 )。PT -PCR分析I ,III型胶原mRNA的表达在抗纤二号治疗组均明显减少。同时分析表明I ,III型胶原蛋白的表达在抗纤二号治疗组均明显减少。　结论　抗纤二号能逆转免疫引起的肝纤维化 ,这是由于能促进肝脏胶原的降解作用 ,最终导致肝纤维化的逆转。肝纤维化的早期治疗用药优于后期的治疗。     

claudin-6 mRNA在胃癌组织中的表达及意义

目的 检测claudin-6 mRNA在不同病变胃黏膜的表达,探究claudin-6基因与胃癌的发生及临床病理参数之间的关系.方法 采用原位杂交的方法检测45例胃癌、40例不典型增生胃黏膜和10例正常胃黏膜中claudin-6 mRNA的表达.结果 正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜及胃癌组织中claudin-6 mRNA的阳性表达率分别是100％、67.5％、57.8％,x2检验3组间阳性表达率的差异性有统计学意义(x2=6.573,P＜0.05);经x2检验和四格表校正卡方检验claudin-6 mRNA的表达在不同浸润深度及有无淋巴结转移组内的差异有统计学意义(P＜0.05),而在年龄、性别和脉管侵犯组内阳性表达的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 胃癌组织中claudin-6 mRNA呈低表达,且低表达的claudin-6 mRNA与胃癌的发生及浸润转移有关.     

乳腺癌IL-8mRNA和TSP-1mRNA检测及临床病理意义

目的研究乳腺癌和小叶增生组织中IL-8mRNA和TSP-1mRNA表达水平及临床病理意义.方法 58例乳腺癌和15例小叶增生病例标本经10%福尔马林固定后常规制作石蜡包埋切片.IL-8mRNA、TSP-1mRNA染色方法为原位杂交法.结果乳腺癌IL-8mRNA阳性率明显高于小叶增生(56.9% vs 13.3%,P＜0.01),但TSP-1mRNA则相反(48.3% vs 86.7%,P＜0.01),且IL-8mRNA阳性和TSP-1mRNA阴性表达小叶增生均为相同病例;组织学分级I级和淋巴结未转移病例IL-8mRNA和TSP-1mRNA表达可能是反映乳腺癌生物学行为和预后的重要标记物.结论联合两者检测乳腺良性病变中的表达对预防和早期发现乳腺癌可能有重要临床意义.     

脑溢安对试验性脑出血大鼠血管内皮生长因子表达的影响

目的　研究实验性脑出血大鼠脑内血管内皮生长因子 (VEGF)的时空分布及中药脑溢安的影响。方法　通过立体定位向脑内苍白球注入Ⅶ型胶原酶 0 .4U建立脑出血模型 ,运用免疫组化和原位杂交法检测脑出血后 3h、6h、12h、1d、4d、7d ,14d七个时间点VEGF的表达变化 ,以阳性细胞数作为观察指标。结果　脑出血 3hVEGF开始表达 ,6h增强 ,12h及 1d阳性细胞达到高峰 ,4d开始下降 ,到 7d和 14d仍有少量表达。脑溢安组在 6h、12h、1d、4d高于模型组 (P <0 0 5 )。结论　脑出血后脑内VEGF表达增加 ;脑溢安可上调脑出血后VEGF的表达 ,可能是其神经保护机制之一。     

过量氟对体外培养大鼠软骨细胞的作用

目的探讨过量氟对体外培养软骨细胞糖胺多糖(glycosaminoglycan,GAG)和胶原分泌的影响。方法取2月龄大鼠下肢髋关节及膝关节软骨分离、培养出软骨细胞后,接种于细胞培养瓶,分空白对照组和NaF受试组(6.25μmol/ml、12.5μmol/ml、25μmol/ml、50μmol/ml和100μmol/ml),孵育6 d后,分别进行GAG含量测定、阿利新蓝染色和Ⅱ型胶原免疫组化染色。结果 NaF受试6 d后,大鼠软骨细胞培养液GAG含量各组比较,差异无统计学意义(P0.05)。阿利新蓝染色显示NaF处理大鼠软骨细胞后,细胞内GAG分泌颗粒无明显差异;Ⅱ型胶原免疫组化染色则显示,过量氟可引起软骨细胞外Ⅱ型胶原的分泌增多,半定量分析显示随着剂量升高,软骨细胞外Ⅱ型胶原的分泌逐渐增多。结论 NaF对大鼠软骨细胞GAG分泌无影响,但可引起Ⅱ型胶原分泌增多,有一定的剂量-反应关系。     

矽肺大鼠和病人肺组织中Ⅰ型与Ⅲ型胶原纤维的分布及相对含量的研究

免疫酶标法用于观察肺组织中胶原的分布。显微分光光度法用于研究大鼠与矽肺病人的纤维化组织中Ⅰ型与Ⅲ型胶原的相对含量。染色中应用大鼠及人的抗Ⅰ型与Ⅲ型胶原多克隆抗体。Ⅰ型胶原分布于正常肺泡间隔及间质中。Ⅲ型胶原也在相同的部位存在。在由石英所致的大鼠纤维化肺组织中,Ⅰ型与Ⅲ型胶原在极度扩展的间质中聚集。Ⅲ型胶原是早期纤维化肺中主要增生的胶原。Ⅰ型胶原是纤维化后期主要增生的胶原。在矽肺病人肺组织中也见到同样的现象。染电焊烟尘的大鼠肺,直至180天以前,Ⅲ型胶原为主要积聚的胶原,而在180天以后,Ⅰ型胶原的增加才占优势。     

人端粒酶催化亚单位基因转染人胚胎成纤维细胞后胶原的变化

目的 将重组正义hTERT基因荧光真核表达载体导入人胚胎成纤维细胞(hEF)中，探讨外源性hTERT基因转染对hEF细胞胶原含量变化的影响。方法 应用脂质体法将正义重组pIRES2-EGFP—hTERT质粒及空载pIRES2-EGFP质粒分别转染至原代培养hEF中，western blot检测转染细胞和未转染细胞中I、Ⅲ型胶原表达变化；放免法检测转染细胞和未转染细胞培养液上清中I、Ⅲ型胶原含量。结果 外源性hTERT基因转染细胞(hEF—hTERT)较未转染细胞(hEF)和空载体转染细胞(hEF—EGFP)中I、Ⅲ型胶原表达明显增加；hEF—hTERT细胞培养上清液中I、Ⅲ型胶原含量也较hEF和hEF—EGFP细胞有显著增加。结论 外源性hTERT基因转染能使原代培养的hEF细胞胶原合成增加，细胞增殖能力增强。     

血清ICTP、ALP测定对骨肿瘤的诊断价值

目的 检测原发性良性骨肿瘤、原发性恶性骨肿瘤及转移性骨肿瘤患者血清中的Ⅰ型胶原交联羧基端肽（ICTP）和碱性磷酸酶（ALP）活性,以观察ICTP和ALP在骨肿瘤的鉴别诊断中的价值.方法 将2012年中南大学湘雅医院收治的16例原发性良性骨肿瘤、16例原发性恶性骨肿瘤及18例转移性骨肿瘤患者作为研究对象,并将同期的16例没有骨骼、关节、肝脏及肠道等疾病的正常人群作为正常对照组.采用法国临床化学会推荐的速率法测定血清ALP活性及酶免疫测定法（EIA）测定ICTP水平.结果 除原发性良性骨肿瘤与正常对照组血清ICTP差异无统计学意义（P＞0.05）外,其余各组两两之间差异均有统计学意义（P＜0.05）;除原发性恶性骨肿瘤组血清ALP显著高于其余各组,且差异有统计学意义（P＜0.01）外,其余各组两两比较差异均无统计学意义（P＞0.05）.ICTP诊断原发性良性骨肿瘤、转移性骨肿瘤、原发性恶性骨肿瘤的AUC值（0.923、0.926、0.874）高于ALP的ROC曲线下面积（AUC）值（0.354、0.702、0.865）.结论 血清ICTP和ALP是反映骨肿瘤骨代谢的一个灵敏而简便的生化指标,其血清ICTP比ALP更为特异和敏感,对骨肿瘤的鉴别诊断具有一定的临床意义,可作为骨肿瘤诊断的指标之一.     

hTRT和bax在甲状腺乳头状癌中的表达

目的研究不同类型甲状腺乳头状癌(PTC)中的人端粒酶逆转录酶(hTRT)mRNA和bax蛋白质的表达及意义。方法hTRTmRNA的检测采用原位杂交方法;bax蛋白质的检测采用免疫组化方法。结果hTRTmRNA在PTC、微小癌、腺内型、腺外型及癌旁组织中阳性表达率分别为86.21%、68.97%、93.33%、96.43%和41.79%;癌组织中hTRTmRNA的阳性表达显著高于癌旁组织(P<0.001);而各癌组间hTRTmRNA的阳性表达随PTC浸润程度增加而增强(P<0.05);bax在PTC、微小癌、腺内型、腺外型及癌旁组织中阳性表达率分别为72.41%、62.07%、76.67%、78.57%和55.22%,癌组织中bax的阳性表达显著高于癌旁组织(P<0.005);而各癌组间bax的阳性表达随PTC浸润程度增加而增强(P<0.05);在75例hTRTmRNA阳性病例中bax有58例阳性,hTRTmRNA和bax表达相关(P<0.05)。结论hTRTmRNA与bax蛋白质的表达均与PTC的浸润程度有关,hTRTmRNA与bax蛋白质的表达具有一致性;检测hTRTmRNA对PTC的诊断及其预后评估具有辅助价值。