异体耳廓移植后局部淋巴结MIP-3β的含量变化及趋化活性的研究

目的研究异体耳廓移植后局部淋巴结内趋化因子MIP-3β的含量变化及对树突状细胞的趋化作用.方法进行吻合血管的大鼠同种异体耳廓移植,ELISA法测定术后局部淋巴结MIP-3β的含量变化趋势,应用改良Boyden小室进行淋巴结组织液对体外培养树突状细胞的趋化实验.结果同系移植组术后局部淋巴结MIP-3β含量升高,持续至术后第2天,以后恢复至正常水平;异系移植组MIP-3β含量持续上升,后期显著高于正常淋巴结内的表达水平,其对体外培养树突状细胞的趋化作用增强,这种趋化作用可被MIP-3β抗体所阻断.结论器官移植后局部引流淋巴结内MIP-3β表达增高,促进树突状细胞的迁移运动,可能是同种异体移植排斥反应启动与进展的重要因素.     

异体皮肤移植后局部淋巴结内MIP-3β与树突状细胞的动态变化

目的观察异体皮肤移植后局部引流淋巴结内趋化因子MIP-3β含量与树突状细胞数量的动态改变。方法应用异基因大鼠皮肤移植模型,ELISA法测定移植后局部淋巴结内MIP-3β的含量变化,免疫组化及图像分析测定树突状细胞的数量改变。结果异基因皮肤移植后局部引流淋巴结MIP-3β含量与树突状细胞数量持续上升,后期显著高于正常淋巴结内的水平(P<0.01);同基因移植组术后MIP-3β含量与树突状细胞数量早期短暂性增高,以后恢复至水平(P>0.05)。结论器官移植后局部引流淋巴结内MIP-3β表达增高,促进树突状细胞向淋巴组织迁移,可能是异体移植排斥反应启动与发展的重要因素。     

异体皮肤移植后MIP-3α的表达及其抗体延长存活的研究

目的　研究异体皮肤移植后表皮MIP 3α的表达及其抗体延长移植皮肤存活的作用。方法　进行同种异体小鼠皮肤移植 ,免疫组化测定移植皮肤组织内MIP 3α的表达 ;局部应用MIP 3α抗体 ,观察其对移植皮肤存活的影响。结果　移植术后表皮MIP 3α表达增加 ,分别于术后 2 4h及第五天出现两个高峰 ,真皮及其皮下组织未见MIP 3α的表达 ;异体皮肤平均存活时间为 (7 5± 0 9)d ,MIP 3α单抗局部注射 1μg/ml治疗组存活 (8 3± 1 2 )d ,与对照组相比无明显差异 (P >0 0 5 ) ;10 μg/ml组与 5 0 μg/ml组分别为 (15 3± 2 3 )d与 (2 1 8± 1 6)d ,二者均显著延长移植皮肤的存活时间 (P <0 0 1)。结论　异体皮肤移植后表皮MIP 3α分泌增加 ,促进郎格罕细胞的迁移以进行抗原递呈 ,是移植排斥反应启动与进展的重要因素 ;应用MIP 3α抗体可有效延长异体移植皮肤的存活     

TGFβ1基因修饰供者树突状细胞降低移植心脏RANTES表达

目的 探讨移植前输注人TGFβ1基因修饰树状细胞(dendritic cell，DC)对移植心脏正常T细胞表达和分泌的活化调节因子(RANTES)表达的影响。方法 TGFβ1-pcDNA3重组质粒转染供者DC；，静脉输注异体大鼠，1周后检测TGFβ1-DC；在受者脾和淋巴结的分布。TUNEL法检测受者大鼠脾T细胞凋亡水平，并检测受者脾RANTES表达的变化；同时另一部分输注大鼠接受同种异体心脏移值，观察DC输注后移植心脏存活时间变化，比较移植后不同时间排斥反应级别，免疫组化检测移植心脏RANTES的表达。结果 TGFβ1-DC输注受者后，1周内可在脾和淋巴结内形成微嵌合，并有效诱导T细胞的凋亡。TGFβ1-DC输注大鼠移植后排斥反应明显低于对照组，移植心脏存活时间明显延长，并发现移植心脏RANTES表达明显低于对照组。结论 TGFβ1-DC能有效降低移植心脏RANTES表达，增强移植心脏免疫耐受性。     

安素泰诱导的小鼠肺癌凋亡细胞对树突状细胞功能的影响

目的 探讨体外低剂量安素泰对正常小鼠骨髓源性树突状细胞(DC)功能的影响,及其在恢复受小鼠肺癌抑制的DC功能中的作用.方法 筛选小鼠肺癌细胞--3LL细胞30%凋亡的安素泰浓度;培养小鼠骨髓来源的DC(mDC);利用分离小室系统,分别设置mDC组、mDC与低剂量安素泰组、mDC与3LL组以及mDC与经低剂量安素泰诱导的30%凋亡率的3LL细胞组;分析上述4组DC细胞表面标志和对细胞因子MIP 1α、MIP-3β的趋化能力以及刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力.结果 50 nmol/L的安素泰引起3LL细胞30%的凋亡率.50 nmol/L的安素泰具有对DC的保护作用,上调DC表面成熟表型标志:CD11cCD80、CD11cCD86、CD11cCD40、CD11cCDIab;对趋化因子MIP-3β的趋化能力增强.此浓度安素泰诱导的3LL的30%凋亡致敏的DC,与肿瘤共培养的DC组相比,上调DC表面CD11cCD40表达,刺激DC对趋化因子MIP1α、MIP-3β的趋化能力,刺激T细胞增殖的能力.结论 50 nmol/L的安素泰对DC具有保护和促进成熟的作用;并部分逆转受肿瘤抑制状态的DC表型和功能.     

安素泰诱导的小鼠肺癌凋亡细胞对树突状细胞功能的影响

目的探讨体外低剂量安素泰对正常小鼠骨髓源性树突状细胞(DC)功能的影响,及其在恢复受小鼠肺癌抑制的DC功能中的作用。方法筛选小鼠肺癌细胞——3LL细胞30%凋亡的安素泰浓度;培养小鼠骨髓来源的DC(mDC);利用分离小室系统,分别设置mDC组、mDC与低剂量安素泰组、mDC与3LL组以及mDC与经低剂量安素泰诱导的30%凋亡率的3LL细胞组;分析上述4组DC细胞表面标志和对细胞因子MIP 1α、MIP-3β的趋化能力以及刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力。结果50 nmol/L的安素泰引起3LL细胞30%的凋亡率。50 nmol/L的安素泰具有对DC的保护作用,上调DC表面成熟表型标志:CD11cCD80、CD11cCD86、CD11cCD40、CD11cCDIab;对趋化因子MIP-3β的趋化能力增强。此浓度安素泰诱导的3LL的30%凋亡致敏的DC,与肿瘤共培养的DC组相比,上调DC表面CD11cCD40表达,刺激DC对趋化因子MIP1α、MIP-3β的趋化能力,刺激T细胞增殖的能力。结论50 nmol/L的安素泰对DC具有保护和促进成熟的作用;并部分逆转受肿瘤抑制状态的DC表型和功能。     

同种异体免疫反应对I-TAC及其受体表达诱导的体外研究

目的 探讨同种异体免疫反应对干扰素诱导的T细胞α亚族趋化剂(I-TAC)及其受体CXCR3的表达的影响.方法同种异体外周血单个核细胞(PBMC)混合培养后,将培养上清液作用于ECV304细胞系,RT-PCR检测ECV304的I-TAC mRNA表达,ELISA检测培养上清液中IFN-γ和TNF-α浓度,流式细胞术检测PBMC表面CXCR3的表达.结果与单独PBMC培养组相比,混合PBMC培养组上清液中细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达显著升高,且能促进ECV304细胞I-TAC mRNA的表达;混合培养后PBMC表面CXCR3的表达亦呈显著升高.结论同种异体免疫反应可能通过细胞因子、趋化因子I-TAC及其在T细胞上的受体CXCR3的表达,以正反馈形式加剧同种异体移植排斥反应.     

同种异体移植大鼠耳廓组织中RANTES表达的实验研究

目的　探讨趋化因子RANTES在同种异体移植的大鼠耳廓组织中的表达与相关免疫细胞的浸润。方法　使用Lewis大鼠 8只作为供体 ,BN大鼠 8只作为受体 ,进行异体耳廓移植 (LewisBN) ;使用BN大鼠 16只进行自体移植 (BNBN)。观察移植耳廓的生存时间及病理改变 ,并采用免疫组织化学技术检测RANTES的表达与T淋巴细胞、单核细胞的浸润情况。结果　同种异体移植耳廓平均生存 (7 3± 0 2 5 )d ,移植耳廓组织中RANTES的表达于术后 3d达到高峰 ,并与组织中T淋巴细胞的浸润有明显的关系 ,同时可见大量单核细胞的浸润。结论　同种异体大鼠耳廓移植后 1周左右发生排斥反应 ,并与趋化因子RANTES的表达及进一步T淋巴细胞与单核细胞的浸润有关     

人肿瘤细胞培养上清对树突状细胞表型和功能的影响

目的：观察肿瘤细胞分泌的可溶性因子对树突状细胞表型和功能的影响，以进一步揭示肿瘤的免疫逃逸机制。方法：体外分离单核细胞，加入白细胞介素4（IL-4)、粒－巨噬细胞集落刺激因子（GM－CSF）和肿瘤细胞培养上清体外培养树突状细胞，采用流式细胞术、同种异体混合淋巴细胞反应等方法观察肿瘤细胞上清对树突状细胞表型和功能的影响，并用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）法检测了免疫抑制因子IL－10、血管内皮生长因子（VEGF）和转化生长因子β1（TGF－β1)的mRNA在人结肠、人卵巢和人肝脏肿瘤细胞中的表达。结果：当培养体系中加入人肿瘤细胞培养上清后，树突状细胞表面MHC Ⅱ类分子和CD80等共刺激分子的表达较低，树突状细胞刺激T细胞增殖能力下降，且IL－10mRNA、VEGF、mRNA和TGF－β1 mRNA在3种种瘤细胞中均有不同程度的表达。结论：提示肿瘤细胞培养上清可能抑制树突状细胞的抗原提呈能力，肿瘤细胞分泌的免疫抑制因子可能是导致肿瘤微环境中的树突状细胞功能低下、机体的免疫系统无法有效激活和启动抗肿瘤免疫反应的原因之一。     

去势大鼠睾丸间质细胞移植的实验研究

目的：探讨对去势大鼠动物模型行睾丸间质细胞（Leydig细胞）移植的可行性。方法：随机选择SD大鼠离体睾丸进行Leydig细胞的体外培养及同种异体去势鼠大腿内侧肌群Leydig细胞移植，并进行绒毛膜促性腺激素（hCG)激发试验，监测其血清睾酮分泌情况的变化，结果：体外培养的Leydig细胞对hCG的刺激敏感，能分泌大量睾酮，而一旦进入机体后虽然短期内仍然成活，但分泌功能明显受阻，结论：通过施行同种异体睾丸Leydig细胞移植以提高血清睾酮含量的前景值得商榷。     

同种异体猴胚脑移植的实验研究

采用猴10只,其中妊娠猴2只孕期为10—12周。同种异体胚脑组织移植9只自体移植1只,术后健康生存8只,术后分别于1、2、3、4、6个月处死行组织学检查结果:同种异体移植物1—3个月内,在宿主脑内有少数神经元存活,3个月后神经元消失大量胶质细胞增生,6个月时全是胶质瘢痕。自体移植1只4个月时可见神经元存活,有新生的毛细血管,周围胶质增生不明显,本实验表明:同种异体脑移植后神经元在宿主脑内不能长期存活,而自体移植可以存活,这个与异体移植排异有密切关系。     

TGF-β1诱导猕猴同种异体肝移植免疫耐受的实验研究

目的利用大型哺乳动物猕猴作为研究对象,建立同种异体原位肝脏移植模型.探讨TGF-β1对同种异体肝脏移植免疫耐受的诱导作用及机理.方法同种异体原位肝脏移植对照组及TGF-β1组各5例.对术后生存时间、肝功能、IL-2、IL-10、各时间段移植物的组织切片排斥反应的病理学分级结果及术后肝脏细胞凋亡指数进行观察分析.结果 （1）对照组移植猕猴平均存活时间为6.60d,TGF-β1组移植猕猴平均存活时间为14.90d,两组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;（2）肝功能变化：对照组移植猕猴术后ALT明显升高,ALB则明显降低;TGF-β1组ALT及ALB均维持于正常稳定水平;（3）细胞因子变化：对照组循环血中IL-2表达水平相对较高,而TGF-β1组IL-10的表达水平较对照组高;（4）移植物病理排斥反应分级：在移植术后第3天及以后各时间段TGF-β1组排斥反应程度明显比对照组轻;（5）对照组移植猕猴术后肝脏细胞凋亡指数（A）I较TGF-β1组明显升高.结论 （1）TGF-β1可以诱导移植后受体细胞因子网络发生Th1→Th2转变,从而诱导移植后免疫耐受,延长受体生存时间;（2）TGF-β1通过发挥多种免疫效应,在诱导移植耐受中具有重要作用;（3）细胞因子IL-2升高或者IL-10降低可能作为监测移植排斥反应或者免疫耐受的实验室指标之一.     

病毒性心肌炎中树突状细胞的体内迁移过程及其机制

目的免疫反应参与病毒性心肌炎(VMC)的发生、发展,前期研究发现树突状细胞(DCs)在病毒感染的心肌炎症组织中数量增多,本研究旨在通过研究VMC中DCs的体内迁移过程,进而探讨趋化因子在DCs迁移机制中的作用。方法雄性Balb／c小鼠140只,体质量约16-20 g,随机分为正常对照组60只和VMC组80只。VMC组小鼠腹腔注射柯萨奇B组病毒(CoxB3),滴度为1×105TCID50／0．1 mL,正常对照组小鼠腹腔注射等容积不含病毒的EMEM液。应用反转录-聚合酶链反应检测心肌组织中DCs相应的趋化因子受体CCR5、CCR7的表达变化和趋化因子MIP-1β、MIP-3β的表达变化以及脾脏中CCR7和MIP-3β的表达变化:从小鼠的骨髓中分离诱导培养DCs,经光学显微镜、电子显微镜和Giemsa染色鉴定后,应用趋化实验在体外分析DCs对MIP-1β、MIP-3β的趋化反应。结果与正常对照组相比, VMC组心肌组织中趋化因子受体CCR5和CCR7表达增加,且局部趋化因子MIP-1β和MIP-3β表达也增加(P值均<0．05),脾脏中CCR7和MIP-3β表达增加(P值均<0．05);VMC组骨髓来源的DCs对趋化因子MIP-1β、MIP-3β的趋化反应能力增强(P值均<0．05)。结论骨髓来源的不成熟DCs表达CCR5、CCR7,分别在心肌局部的MIP-1β、MIP-3β趋化作用下迁移至心肌病变部位,并且逐渐演变为成熟DCs,同时高表达CCR7,在脾脏MIP-3β趋化作用下迁移至脾脏T细胞区引发适应性免疫反应;病毒组DCs的趋化作用明显强于正常对照组。因此,病毒感染心肌后DCs逐渐成熟,引发趋化因子表达增高,进而使心肌组织中炎症细胞聚集,导致心肌细胞坏死,出现临床心肌炎的表现。     

pcDNA3-HBV瞬时转染对树突状细胞的影响

目的：研究HBV感染对树突状细胞功能的影响,探讨慢性乙型肝炎患者免疫耐受发生的机制。方法：利用脂质体转染的方法,以携载HBV全基因的真核表达载体pcDNA3-HBV及对照空载体pcDNA3质粒DNA分别转染小鼠骨髓细胞,以细胞因子GM-CSF、IL-4及TNF-α诱导培养树突状细胞,RT-PCR检测转染后HBV PreS1 mRNA的表达。流式细胞术检测转染前后树突状细胞表面分子CD80的表达,3HTdR掺入法观察其刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力,流式细胞术进一步检测NF-κB RelA蛋白的表达。结果：pcDNA3-HBV瞬时转染后树突状细胞CD80表达降低,其刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力下降,NF-κB RelA蛋白表达显著减少。结论： HBV可抑制树突状细胞的分化成熟,降低其刺激T淋巴细胞增殖的功能,这可能是慢性乙型肝炎患者免疫耐受的机制之一。     

脂肪来源干细胞免疫原性和免疫调节作用的实验研究

目的 探讨脂肪来源干细胞(ADSCs)在体外的免疫原性,以及ADSCs在家兔同种异体皮片移植中的免疫调节作用.方法 将家兔淋巴细胞分别与自体和异体ADSCs混合培养48h后加入CCK-8试剂,并用酶标仪检测OD值;在家兔同种异体移植皮片下注射自体ADSCs,观察移植皮片的坏死时间,并于术后第7日切取移植皮片的周边组织进行组织学观察.结果 家兔淋巴细胞与自体、异体ADSCs混合培养后用酶标仪检测OD值分别为(1.527±0.402)和(1.615±0.351),两组OD值差异无统计学意义;家兔同种异体移植皮片下注射ADSCs的移植皮片的坏死时间为(7.170±1.472)d,未注射ADSCs的对照组移植皮片的坏死时间为(5.830±1.169)d,两组皮片坏死时间差异具有统计学意义:术后第7日组织学观察见实验组皮下浸润的炎症细胞较少,皮下组织结构完整、清晰;对照组皮下浸润的炎症细胞较多.结论 脂肪来源干细胞在体外的免疫原性低,对家兔同种异体皮片移植有免疫调节作用.     

转化生长因子（TGF—β1）mRNA在移植肾纤维化中分子病理机制的研究

目的：为探讨TGF—β1在同种异体肾脏移植后慢性排异反应所致肾纤维化中的作用和意义，揭示其发病机制。方法：32例慢性排异反应失功的移植肾，经手术切除后，取肾组织做常规病理观察和原位杂交，以正常肾组织为对照。结果：纤维化的肾组织TGF—β1表达较正常对照组增高，与纤维化程度呈正相关。结论：TGF—β1可能参与了肾脏移植后慢性捧异反应所致肾纤维化的发生及发展。     

TNF-α基因转染增强树突细胞迁移及CCR7受体表达

为探讨腺病毒介导肿瘤坏死因子－α（TNF－α）基因转染诱导树突细胞（DCs)趋化因子受体差异性表达，分别用100MOI的AdV-TNF－α和AdV-pLpA(无外源基因插入）感染小鼠树突细胞（mDCs)，经流式细胞仪检测细胞表型变化，RNA酶保护实验检测其趋化因子受体表达，体内、体外细胞趋化试验分析比较其迁移差异。发现AdV-TNF－α感染mDCs后CD11b、CD40、CD86、ICAM－1以及CC7授 体表达较对照组明显增高，CCR2受体表达量却下调；体外细胞趋化试验表明DCTNF－α对MIP－3β（CCR7配体）迁移应答增强，体内细胞趋化试验显示DCTNF－α淋巴结趋化迁移效率较空白对照组和AdV-pLpA感染组分别增高7倍和3倍。提示：AdV-TNF－α感染促使mDCs成熟，增强其次级淋巴结趋化迁移效率。     

术前输注负载供者抗原的受者未成熟树突状细胞延长移植心存活时间的实验研究

目的:利用负载供者抗原的受者未成熟树突状细胞(imDC)干扰T细胞抗原间接识别途径,观察对同种异体移植心存活时间的影响。方法:用低剂量粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)培养受者小鼠骨髓源性imDC,并在培养过程中加入供者可溶性抗原共同孵育,流式细胞术检测细胞表型,观察其在体外刺激自体T细胞增殖的能力,并于术前1周将约2.0×106个树突状细胞(DC)输入受者体内,观察其对同种异体移植心存活时间的影响。结果:受者DC可通过共同孵育的方式有效负载供者抗原,负载供者抗原的受者imDC在体外不能有效刺激自体T细胞活化增殖,将其于术前输入受者体内,移植心的存活时间由(7.2±1.7)天延长至(17.7±3.3)天。结论:术前输注负载供者抗原的受者imDC,可明显延长移植心的存活时间。     

转染血管内皮细胞生长因子基因的同种异体骨髓间充质干细胞移植大鼠缺血心肌的实验研究

目的 腺病毒介导血管内皮细胞生长因子基因（AdVEGF165）转染同种异体大鼠骨髓间充质干细胞（BM-SCs），移植到大鼠缺血心肌后，观察其对心功能的影响。方法 体外培养同种异体大鼠BMSCs，用AdVEGF165转染同种异体大鼠BMSCs，采用ELISA法检测血管内皮细胞生长因子（VEGF）的表达和分泌。结扎Wistar大鼠冠状动脉前降支，4周后随机将其分为4组，组Ⅰ：移植转染后的BMSCs；组Ⅱ：移植单纯BMSCs；组Ⅲ：心肌内注射AdVEGF。（基因治疗）；组Ⅳ：心肌内注射DMEM（对照组）。4周后通过超声检查观察心脏射血分数（EF）变化，评价其对心功能的影响；免疫组织化学观察移植的BMSCs在局部存活、分化情况。结果 ELISA检测提示：转染后BMSCs的培养上清液中有大量VEGF表达，较未转染组差异有极显著性意义（P〈0．01）。超声检查结果提示：组IEF改善幅度较组Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ明显（均P〈0．01）。免疫组织化学检测提示：组Ⅰ、Ⅱ中大部分移植细胞能够在移植处存活并转化为心肌细胞。结论 转染AdVEGF165的同种异体BMSCs能有效修复大鼠心肌，并能改善其心功能。     

供体骨髓来源的未成熟树突状细胞抑制小鼠同种异体牙移植后排斥反应的效果研究

目的:研究供体小鼠骨髓来源的未成熟树突状细胞(Immature dendritic cell, imDC)对小鼠同种异体牙移植后排斥反应的抑制效果.方法:运用50 U/ml粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, GM-CSF)诱导出小鼠骨髓来源imDC,流式细胞术鉴定细胞表型,并于同种异体牙移植前1周以2×106个/只回输入受者体内,组织病理切片观察imDC对小鼠同种异体牙移植后排斥反应的抑制效果.结果:imDC回输组与未回输imDC的同种异体牙移植组相比,淋巴细胞浸润减少、炎症反应减轻.结论:imDC可以减轻同种异体牙移植后的排斥反应.