戴蒙开颗粒对阿尔茨海默病小鼠脑组织线粒体动力学的影响

目的:探讨戴蒙开颗粒对阿尔茨海默病小鼠脑组织线粒体动力学的影响。方法:30只APP/PS1小鼠随机分为模型组、戴蒙开颗粒治疗组(中药组),并以15只同月龄同性别的C57BL/6J野生型小鼠作为空白组。中药组给予剂量2.0 g·kg~(-1)·d~(-1)的戴蒙开颗粒0.2 ml灌胃,模型组和空白组给予等体积的0.9%Na Cl溶液灌胃;均灌胃12周。干预结束后,取脑组织分离线粒体,运用Western Blot法检测小鼠脑组织线粒体及去线粒体胞浆动力相关蛋白1(dynamin-related protein1,Drp1)、分裂蛋白1(fission1,Fis1)、视神经萎缩蛋白1(optic atrophy-1,Opa1)和小鼠脑组织NIX蛋白的含量;Elisa法检测小鼠脑组织Bax、Bcl-2蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组小鼠脑组织线粒体及去线粒体胞浆Drp1、Fis1、NIX、Bax蛋白含量均明显升高(P0.01),Opa1、Bcl-2含量则明显降低(P0.01);与模型组比较,中药组小鼠脑组织线粒体及去线粒体胞浆Drp1、Fis1、NIX、Bax含量明显降低(P0.05,P0.01),Opa1、Bcl-2含量明显升高(P0.01)。结论:戴蒙开颗粒可改善阿尔茨海默病小鼠脑内线粒体分裂融合异常。     

下调Drp1对高糖条件下肾小管上皮细胞凋亡、氧化应激及炎症因子表达的影响

目的:探讨下调线粒体动力相关蛋白1(Drp1)对高糖条件下肾小管上皮细胞凋亡、氧化应激及炎症反应的影响.方法:肾小管上皮细胞HK-2分为正常对照组和高糖组(给予30.0 mmol/L葡萄糖),采用Real-time PCR和Western blot法检测细胞中Drp1的表达.另取HK-2细胞分为正常对照组、高糖组、Lv...     

针刺百会、大椎穴对帕金森病小鼠脑线粒体复合物活性的影响

目的 探讨针刺对帕金森病(PD)小鼠脑线粒体功能的保护作用.方法 C57BL/6雄性小鼠随机分为5组:正常组、模型组、针刺组、美多巴组、针刺结合美多巴组(简称针美组).首先腹腔注射1-甲基4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)建立帕金森病模型,后3组造模后采取不同的治疗措施,动物分别存活14 d和28 d,取脑,应用蔗糖差数离心法分离提取、溶解脑线粒体.采用考马斯亮蓝G250染色法进行其蛋白定量,运用生化比色法检测小鼠脑线粒体复合物I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的活性.结果 14 d时,模型组小鼠脑线粒体复合物I活性下降(P＜0.05),针刺组线粒体复合物Ⅱ比模型组活性显著升高(P＜0.05),美多巴组的线粒体复合物Ⅱ活性较针刺组明显降低(P＜0.05).28 d时,模型组线粒体复合物Ⅳ活性显著下降(P＜0.05),针刺组和针美组线粒体复合物Ⅳ活性较模型组显著升高(P＜0.05),而美多巴组对复合物IV的活性无明显影响(P＞0.05).结论 针刺百会、大椎穴和加灌胃美多巴可在一定程度上抑制PD小鼠脑线粒体复合物活性的下降,保护脑线粒体的功能.     

线粒体动力相关蛋白Drp1对阿尔茨海默病早期诊断价值的研究

目的 探究血浆和脑脊液线粒体动力学相关蛋白(dynamic-related protein 1，Drp1)作为生物标志物在阿尔茨海默病(AD)早期诊断中的临床价值。 方法 选取2015年6月—2017年6月就诊于杭州市第七人民医院老年科125例患者为研究对象，其中轻度认知功能障碍(mild cognitive impairment，MCI)患者67例，AD患者58例，32例认知功能正常的健康老人为对照组。采用简易智能状态检查量表(MMSE)、蒙特利尔认知评估量表(MoCA)、日常生活能力量表(ADL)进行认知功能评估；Western blotting测定Drp1与SNO-Drp1蛋白。 结果 MCI组、AD组、对照组MMSE、MoCA评分差异有统计学意义(均P<0.05)。AD组血浆Drp1显著低于对照组(P<0.05)。脑脊液SNO-Drp1在AD组的表达高于MCI组与对照组(均P<0.05)，AD组SNO-Drp1/Drp1值高于对照组。ROC曲线预测MCI的灵敏度和特异度分别是77.6%和56.2%，预测AD的灵敏度和特异度分别是86.2%和87.5%。 结论 AD患者脑脊液SNO-Drp1/Drp1比值诊断AD的敏感度和特异度较高且接近，在早期诊断AD方面具有推广价值。      

滋肾活血方对血管性痴呆大鼠分裂与融合蛋白Mfn1、Mfn2、Drp1、Fis1的影响

目的 观察滋肾活血方对血管性痴呆（vascular dementia, VD）大鼠海马组织线粒体融合蛋白1(mitofusin 1, Mfn1)、线粒体融合蛋白2(mitofusin 2, Mfn2)、线粒体动力蛋白相关蛋白1(dynamin-related protein 1, Drp1)、线粒体分裂蛋白1(fission mitochondrial 1, Fis1)表达的影响。方法 选用雄性SD大鼠60只,随机均分为假手术组、模型组、滋肾活血高剂量组、滋肾活血中剂量组、滋肾活血低剂量组、西药组。除假手术组外,其余各组均采用改良2-VO法建立VD大鼠模型。每组大鼠按9 mL/(kg·d)剂量灌胃相应药物。模型组、假手术组给予蒸馏水,滋肾活血低剂量组、滋肾活血中剂量组、滋肾活血高剂量组予以滋肾活血方溶液[9.8、17.8、35.6 g/(kg·d)]灌胃,西药组以多奈哌齐溶液[150 mg/(kg·d)]灌胃。连续喂药2周后,采用水迷宫实验评估大鼠学习记忆功能;取海马组织,采用免疫组化法检测实验大鼠海马组织中的Mfn1、Mfn2、Drp1、Fis1蛋白表达量。结果 与假手术组比较,模型...     

缺氧后线粒体Drp1通过LRRK2-HK2诱导mPTP过度开放的机制研究

目的：探究缺氧后线粒体动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)对线粒体膜通透性转换通道（mitochondrial permeability transition pore,mPTP）开放的调控机制。方法：在血管平滑肌细胞中通过免疫荧光方法观察缺氧后mPTP开放情况;通过超速离心法分离线粒体和细胞质成分蛋白;使用Co-IP和Westernblot检测缺氧或者干预Drp1、干预己糖激酶-2(hexokinase-2,HK2)后Drp1的表达分布情况、HK2与电压依赖性阴离子通道蛋白（voltage dependent anion channel,VDAC）结合情况、Drp1与富含亮氨酸重复激酶2(leucine-rich repeat kinase 2,LRRK2)结合情况;使用蛋白分子对接和蛋白芯片方法筛选Drp1的潜在结合蛋白及结合位点;使用Drp1抑制剂和点突变法用于相应机制探究。结果：缺氧后Drp1发生线粒体转位促使mPTP过度开放（P<0.05）。使用Mdivi-1减少线粒体Drp1表达后可抑制mPTP开放,减少细胞色素C(cytoc...     

禁食对小鼠杏仁核HAP1表达的影响

目的探讨小鼠杏仁核中的亨廷顿蛋白相关蛋白HAP1(huntingtin associated protein 1,HAP1)的分布及是否与饥饿有关。方法采用半定量免疫印迹法(Western blotting)检测禁食过程小鼠杏仁核HAP1表达的变化。应用免疫组织化学染色法观察禁食对杏仁核HAP1表达的影响。结果连续禁食1日、2日、3日、4日的小鼠杏仁核的HAP1含量与正常进食的小鼠相比,呈逐渐增多的趋势。其HAP1阳性细胞的表达随禁食时间的延长显著增高。结论HAP1与饥饿有关,并有可能参与了食欲的调节。     

VEGF对缺氧复氧小鼠海马神经元细胞线粒体凋亡的抑制作用

目的 研究血管内皮生长因子(VEGF)对缺氧复氧小鼠海马神经元细胞系HT22细胞凋亡与线粒体动力相关蛋白1(Drp1)表达情况的影响.方法 取对数生长期的HT22细胞,随机分3组:正常对照组(Control)、缺氧复氧组(Model)、Model+VEGF组(Model+VEGF).除Control组外,其余各组细胞在...     

磷酸化ERK1/2对MPTP帕金森病小鼠黑质iNOS表达的影响

目的 研究磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致帕金森病(PD)小鼠模型黑质诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达调控作用,探讨PD中脑黑质多巴胺(DA)能神经元丢失的可能机制.方法 建立PD小鼠模型,观察小鼠行为学变化;免疫组化和免疫印迹法检测黑质酪氨酸羟化酶(TH)、iNOS和P-ERK1/2的阳性细胞数和蛋白表达水平的变化,并观察给予人参皂甙Rg1(Rg1)对上述变化的影响.结果 模型组小鼠出现典型PD行为学症状.在MPTP第5次注射后7 d,与对照组相比黑质区TH阳性神经元数量显著丢失77%(P<0.01),中脑黑质TH蛋白印记表达水平显著降低约75%(P<0.01);Rg1预处理后,PD小鼠行为学症状减轻,与对照组相比TH上述指标分别下降约44%和41%(P<0.01).MPTP第3次注射后1.5 h P-ERK1/2核内始见,至6 h iNOS有较高表达.Rg1预处理可显著阻抑P-ERK1/2和iNOS的表达(P<0.01).Spearman相关性分析,P-ERK1/2和iNOS的表达呈显著正相关(P<0.01).结论 P-ERK1/2可能通过捌控iNOS表达进而导致PD黑质DA能神经元丢失,Rg1可能阻抑此通路以保护DA能神经元.     

线粒体动力相关蛋白DRP1对肝癌细胞糖代谢的调控作用研究

目的探讨线粒体动力相关蛋白1(dynamic-related protein 1,DRP1)在肝癌细胞糖代谢重编程中的作用。方法 (1)siRNA下调肝癌细胞SNU-739中DRP1表达后,检测对肝癌细胞葡萄糖摄取与乳酸产生的影响,以明确DRP1对肝癌细胞糖酵解的调控作用。(2)siRNA下调肝癌细胞SNU-739中DRP1表达后,检测对肝癌细胞氧耗速率与ATP产生的影响,以明确DRP1对肝癌细胞氧化磷酸化的调控作用。(3)siRNA下调肝癌细胞SNU-739中DRP1表达后,利用质谱检测对糖酵解与线粒体三羧酸循环代谢产物的影响。结果 (1)下调DRP1可显著抑制肝癌SNU-739细胞的葡萄糖摄取(siCtrl:si-DRP1#1:si-DRP1#2=1.000±0.069:0.417±0.032:0.400±0.040;F=141.400,P<0.001)与乳酸产生(siCtrl:si-DRP1#1:si-DRP1#2=1.000±0.050:0.327±0.040:0.310±0.036;F=256.700,P<0.001)。(2)下调DRP1可激活肝癌SNU-739细...     

天麻素对阿尔茨海默病小鼠的脑内氧化应激及tau蛋白磷酸化的影响

目的研究天麻素对AD模型小鼠脑内氧化应激及tau蛋白磷酸化水平的影响。方法实验分为正常对照组、AD模型组(tau转基因小鼠)和天麻素治疗组,治疗组小鼠选取tau转基因小鼠,隔日给予天麻素[5 mg/(kg·d)]灌胃处理3个月,对照组和模型组小鼠(tau转基因小鼠)则均给予生理盐水灌胃处理。通过分子生物学及形态学相关技术检测各组小鼠脑内p-tau202磷酸化水平及CHAT的表达;并考察氧化应激相关指标的变化。结果 Western blot及免疫荧光结果显示,模型组小鼠脑内p-tau202的表达高于对照组小鼠,而天麻素治疗组小鼠脑内p-tau202的表达水平较模型组小鼠降低;氧化应激结果显示,天麻素干预处理后,小鼠脑内的MDA含量降低,SOD活性明显升高;Western blot结果显示,与模型组小鼠相比较,天麻素治疗组小鼠脑内CHAT表达水平降低。结论天麻素能够通过减少氧化应激进而降低AD模型小鼠脑内tau蛋白的磷酸化水平,最终起到对神经元的保护作用。     

人参皂苷Rg1对帕金森病小鼠黑质中酪氨酸羟化酶及ephrinB2和磷酸化c-Jun表达的影响

目的观察人参皂苷Rg1对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致帕金森病(PD)模型小鼠黑质中酪氨酸羟化酶(TH)mRNA、ephrinB2和磷酸化c-Jun(p-c-Jun)蛋白表达的影响,探讨人参皂苷Rg1对PD的治疗作用及其可能机制。方法将27只C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组和人参皂苷Rg1组,每组9只。模型组和人参皂苷Rg1组小鼠腹腔注射MPTP构建PD模型。注射MPTP前,对照组和模型组小鼠腹腔注射生理盐水(1 mL·kg-1·d-1),人参皂苷Rg1组小鼠腹腔注射人参皂苷Rg1(10 mg·kg-1·d-1),连续3 d。通过爬杆实验观察小鼠行为学变化,2周后采用反转录聚合酶链反应检测小鼠黑质中TH mRNA的表达,免疫组织化学法检测小鼠黑质中ephrinB2及p-c-Jun蛋白的表达。结果不同时间点模型组小鼠的爬杆时间均显著长于对照组和人参皂苷Rg1组,差异均有统计学意义(P<0.05);模型组小鼠脑黑质中TH mRNA表达水平显著低于对照组和人参皂苷Rg1组,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);模型组小鼠脑黑质中ephrinB2、p-c-Jun阳性表达细胞数显著高于对照组和人参皂苷Rg1组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 MPTP可能通过促进小鼠中脑黑质中ephrinB2、p-c-Jun的表达及诱导多巴胺能神经元细胞凋亡导致PD;人参皂苷Rg1可能通过降低小鼠中脑黑质中ephrinB2、p-c-Jun的表达并缓解多巴胺能神经元凋亡而改善PD症状。     

磷酸化 ERK1/2 对 MPTP 帕金森病模型小鼠黑质NF-κB p65表达的影响

目的研究磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致帕金森病(PD)小鼠模型黑质NF-κB p65的表达调控作用。方法应用MPTP建立PD小鼠模型,观察小鼠行为学变化;采用免疫组织化学和免疫蛋白印迹法观察小鼠黑质抗酪氨酸羟化酶(TH)、NF-κB p65及p-ERK1/2的表达变化;并观察给予ERK特异性抑制剂U0126后对上述变化的影响。结果模型组小鼠于MPTP第3次注射后1h,黑质区p-ERK1/2阳性细胞数多于NF-κB p65阳性细胞,第5次注射后24h,NF-κB阳性细胞增多,p-ERK1/2阳性细胞减少,同时伴有TH阳性神经元丢失;给予ERK特异性抑制剂U0126后,上述变化明显减轻。结论在MPTP所致PD小鼠模型中ERK1/2信号通路可能通过调控NF-κB p65活化从而导致多巴胺能神经元变性丢失。     

磷酸化ERK1/2对MPTP帕金森病模型小鼠黑质NF-κB p65表达的影响

目的 研究磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致帕金森病(PD)小鼠模型黑质NF-κB p65的表达调控作用.方法 应用MPTP建立PD小鼠模型,观察小鼠行为学变化;采用免疫组织化学和免疫蛋白印迹法观察小鼠黑质抗酪氨酸羟化酶(TH)、NF-κB p65及p-...     

电针对控制性超排卵小鼠子宫内膜磷酸化胰岛素样生长因子-1受体表达及其信号转导通路的调控

目的观察电针对控制性超排卵(COH)小鼠子宫内膜胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)表达及丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)、磷酯酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)信号转导通路的影响,探讨电针改善胚胎着床的作用机制。方法将昆明纯种性成熟雌性小鼠随机分成自然周期组、COH组、电针组、电针+BMS-536924组、电针+LY-294002组、电针+PD-98059组(其中BMS-536924、LY-294002、PD-98059为IGF-1R、PI3K、MAPK阻断剂的名称),每组20只,每组又分为供体鼠和受体鼠。采用控制性超促排卵长方案制备动物模型,并于注射绒毛膜促性腺素(HCG)日取关元、中极、三阴交行电针治疗,1次/d,至取材停止针刺。取供体鼠受精卵体外培养后移植至同组同日见阴栓的受体鼠子宫内,观察临床妊娠率和胚胎着床位点数,用Western blot法检测子宫内膜IGF-1R、磷酸化胰岛素样生长因子-1受体(p-IGF-1R)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)的表达。结果 COH组妊娠率、平均着床位点数和子宫内膜IGF-1R、p-IGF-1R、p-Akt、p-ERK1/2的表达均较自然周期组低(P0.05或0.01),电针组、电针+LY-294002组、电针+PD-98059组各项指标均较COH组显著性增加(P0.05或0.01),但电针+BMS-536924组妊娠率、平均着床位点数未见明显改善,且p-IGF-1R表达显著性低于自然周期组(P0.01)。电针+BMS-536924组、电针+LY-294002组、电针+PD-98059组相比较,电针+PD-98059组p-Akt蛋白和电针+LY-294002组p-ERK1/2蛋白表达较高,其差异具有统计学意义(P0.01)。结论电针改善COH小鼠胚胎着床可能与上调p-IGF-1R表达及PI3K/Akt、MAPK/ERK1/2信号转导通路有关。     

艾地苯醌对帕金森病模型小鼠行为学及脑组织线粒体自噬水平的影响

目的:探讨艾地苯醌是否通过抑制素2(prohibitin 2,PHB2)介导的线粒体自噬改善帕金森病(Parkinson disease,PD)模型小鼠行为学障碍。方法:第一个小实验选取30只小鼠按照随机数字表法随机分为正常对照组、模型组和治疗组,每组10只,观测艾地苯醌对帕金森模型小鼠行为学的影响。第二个小实验选取2...     

外周胰岛素抵抗对MAPT转基因小鼠认知损害和大脑Tau蛋白磷酸化的影响

目的:探讨长期高脂饮食引起的胰岛素抵抗对pR5株系MAPT Tau转基因小鼠的认知功能和大脑Tau蛋白磷酸化的影响。方法:8周龄雌性pR5 MAPT转基因小鼠分为标准饮食(standard diet,STD)组(pR5 STD, n＝8)和高脂饮食(high-fat diet,HFD)组(pR5 HFD, ...     

早老蛋白-1过度表达对神经母细胞瘤NG-108的tau蛋白磷酸化的影响

目的观察早老蛋白-1（Presenilin-1,PS1）的过度表达对tau蛋白磷酸化的影响。方法在NC-108细胞上转染不同的PS1质粒,利用免疫双标,免疫印记,免疫细胞化学,MTT,Western blot等方法,观察早老蛋白-1的过度表达对tau蛋白磷酸化的影响。结果免疫双标显示,在散发性AD（sporadic Alzheimer disease）患者脑内,PS1主要分布于神经元,并与磷酸化tau蛋白部分共存。免疫印迹显示,与空质粒组相比,转染野生型PS1组和转染一种家族性AD（familial Alzheimer disease,FAD）突变型早老蛋白-1（mPS1）质粒组的NG-108细胞中磷酸化的tau蛋白均增加。MTT方法未检测到这两组的转染细胞与对照组有显著差异。用Confocal显微镜观察PS1-EGFP质粒转染组,发现在转染后早期12h,PS1-EGFP主要分布在细胞膜表面或细胞器上,随后PS1-EGFP主要在细胞浆中弥散分布。同时,免疫细胞化学检测显示,部分PS1-EGFP转染细胞中有明显的tau蛋白磷酸化,并且这些磷酸化tau蛋白能与PS1-EGFP蛋白一起形成聚集体。在给予磷酸酯酶抑制剂岗田酸后,PS1-EGFP转染细胞比未转染细胞含有更多的磷酸化的tau蛋白。结论野生型PS1可能参与了散发性阿茨海默氏病中的tau蛋白的病理改变。     

红景天苷对MPTP-帕金森病小鼠模型自噬通路影响的实验研究

目的:探讨红景天苷(Sal)对帕金森病(PD)小鼠黑质纹状体(SNpc)自噬通路相关蛋白表达的影响及其可能机制。方法:爬杆实验检测小鼠的行为学变化;免疫荧光组织化学法检测黑质纹状体TH阳性神经元数目的变化; Western blot检测自噬相关蛋白的表达情况。结果:模型组小鼠T_turn及T_LA时间明显延长(P<0.01),与模型组比较,治疗组T_turn及T_LA时间明显缩短(P<0.05);模型组黑质纹状体中TH阳性神经元的数目明显减少(P<0.01),Sal干预后小鼠TH阳性神经元有所恢复(P<0.05);1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)处理后黑质纹状体中LC-3β、Beclin1表达增多,PINK1、Parkin表达减少,而Sal预处理可以明显改善这些变化(P<0.05)。结论:Sal对PD小鼠DA能神经元具有保护作用,而其机制可能与抑制黑质纹状体中自噬通路相关蛋白的表达有关。