UHPLC-Q-TOF/MS鉴定大鼠体内隐绿原酸的代谢产物

目的定性分析隐绿原酸在大鼠血浆、尿液和粪便中的代谢产物。方法大鼠给予隐绿原酸后,采集血液、尿液和粪便并进行样品处理,采用UHPLC-Q-TOF/MS法检测各生物样品中的代谢产物。结果通过相应的色谱保留行为、精确相对分子质量、特征碎片离子、质谱裂解规律、文献报道以及对照品比对,最终分析鉴定了47个代谢产物。其主要体内代谢途径为水解反应、异构化反应、甲基化、氢化、葡萄糖醛酸化以及它们的复合反应。结论 UHPLC-Q-TOF/MS法能较全面地鉴定隐绿原酸在大鼠体内的代谢产物,有助于进一步阐明隐绿原酸的药效学物质基础。     

丹参素在大鼠体内代谢产物的鉴定分析

应用UHPLC-LTQ-Orbitrap技术对丹参素在大鼠血浆和尿液中的代谢产物进行鉴定。SD大鼠灌胃给药丹参素CMC-Na混悬液后,收集其血浆和尿液,应用固相萃取法进行样品前处理。采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱。在电喷雾负离子模式下采集生物样品的质谱数据。根据精确相对分子质量以及多级质谱裂解信息,结合对照品及文献报道结果比对,最终鉴定了丹参素以及21个丹参素Ⅰ相和Ⅱ相代谢产物,同时分析了丹参素主要的体内代谢反应,如脱水、甲基化、葡萄糖醛酸化、硫酸酯化、去羟基化以及相关的复合反应等。该文应用高分辨液质联用技术快速阐明了丹参素在大鼠体内的代谢产物,为今后药效物质基础和作用机制研究奠定了基础。     

乔松素在大鼠体内外代谢产物的UPLC-MS/MS鉴定

目的:以超高效液相质谱联用法鉴定了乔松素在大鼠体内外的代谢产物。方法:分析乔松素经大鼠肝微粒体体外代谢和大鼠口服给药后的胆汁、尿液、粪便中的代谢产物,以超高效液相质谱联用法分离鉴定代谢产物。结果:在大鼠肝微粒体和胆汁、尿液、粪便中共检测到5个代谢产物,根据裂解规律及与标准品对照,鉴定了其中3个代谢产物的结构,推测了另外2个代谢产物的结构。结论:通过大鼠体内外代谢产物的比较,发现乔松素的代谢途径主要是羟基化和葡萄糖醛酸化。其原型和柚皮素是在体内的主要作用形式,在胃肠道及肝脏中的葡萄糖醛酸化是其代谢失活的主要途径。     

复方丹参滴丸在大鼠体内代谢产物的分析

目的分析复方丹参滴丸在大鼠体内的代谢产物。方法大鼠灌胃给予药物混悬液(68.58 mg/mL),每天1次,连续21 d,最后1次给药后于0、0.25、0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、10、12、24 h各取血0.4 mL,通过UPLC-qTOF/MS进行分析。条件为Poroshell 120 SB-C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm, 2.7μm);流动相乙腈-水(含0.1%甲酸);柱温35℃;体积流量0.2 mL/min。结果共检测出85个代谢产物,其中3个为首次报道,15个结构得到确认,负离子模式下有59个,主要为酚酸类、三萜皂苷类,代谢途径包括甲基化、羟基化、水解、去羟基化、萄糖醛酸化、硫酸酯化等;正离子模式下有26个,主要为丹参酮类,代谢途径包括甲羟基化、呋喃环裂解、加氢还原、甲氧基化、葡萄糖醛酸化、硫酸酯化等。结论本研究较全面地分析了复方丹参滴丸入血成分及其代谢产物,可为相关药理学和毒理学研究奠定基础。     

黄芪建中汤在大鼠胆汁中代谢产物的鉴定

目的研究黄芪建中汤在正常大鼠胆汁中的代谢产物,并归纳主要代谢途径。方法采用高效液相色谱-静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q-Exactive MS)方法,结合Compound Discover 3.0软件等技术,系统分析黄芪建中汤在大鼠胆汁中的原型成分和代谢产物。结果在大鼠体内共检出6个原型成分和88个代谢产物,主要代谢途径为氧化、还原、脱水、乙酰化、甲基化、硫酸化、葡萄糖醛酸化、葡萄糖苷结合等。结论建立的高分辨质谱方法可以分析黄芪建中汤在大鼠胆汁中的代谢产物,初步阐明了黄芪建中汤的体内代谢特征,为其在体内发挥疗效的药效物质基础研究提供了依据。     

酒制蜂胶中6种活性成分体内药动学研究及其代谢产物鉴定

目的 研究酒制蜂胶中乔松素、白杨素、高良姜素、对香豆酸、山柰酚、柚皮素体内药动学，并鉴定其代谢产物。方法 大鼠灌胃给予酒制蜂胶(1.0 g/kg),于0.033、0.083、0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、4、6、9、12、24、36 h采血，采用UPLC-Q Exactive Orbitrap MS法测定6种活性成分血药浓度，计算主要药动学参数，并对其代谢产物进行分析。结果 乔松素、白杨素、高良姜素、对香豆酸、山柰酚、柚皮素AUC_0～t分别为179.52、277.30、430.93、21 778.14、59.76、778.35 ng/mL·h,T_max均在0.30 h以内。共鉴定出15种代谢产物，主要涉及葡萄糖醛酸化、硫酸酯化等途径。结论 该方法准确可靠，可为明确酒制蜂胶药效物质及其体内过程提供依据。各活性成分不仅以原型成分入血，又可通过Ⅰ、Ⅱ相代谢发挥药效。     

新绿原酸的大鼠体内代谢产物的UPLC-Q-TOF MS鉴定

目的:采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF MS)高分辨质谱技术分析鉴定新绿原酸大鼠体内的代谢产物。方法:灌胃给药后,收集正常组和给药组大鼠的血浆、尿液和粪便。以固相萃取法处理生物样品后,采用Waters HSS T3 UPLC色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),0.1%甲酸水溶液(B)-乙腈(A)流动相系统进行梯度洗脱;在负离子模式下对生物样品进行分析。结果:最终根据所获得的精确相对分子质量、色谱保留行为、质谱裂解规律、特征碎片离子、对照品比对以及相关文献报道,共分析鉴定了包括原型药物在内的43个代谢产物。其主要代谢途径为异构化反应、水解反应、甲基化、葡萄糖醛酸化以及其复合反应。结论:应用UHPLC-Q-TOF MS高分辨液质联用技术能较为全面地阐明新绿原酸在大鼠体内的代谢情况,并为进一步的药效学以及绿原酸类物质的开发、利用提供借鉴。     

甜茶素在大鼠体内的代谢产物鉴定与药动学研究

目的对甜茶素在大鼠体内的代谢产物进行定性分析,并考察甜茶素在大鼠体内的药动学特征。方法 SD大鼠ig甜茶素(125mg/kg),收集不同时间段的尿液、粪便、胆汁和血浆。采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q-TOF-MS/MS)分析其在大鼠体内的代谢产物;基于超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)建立一种测定大鼠血浆中甜茶素含量的方法,初步研究甜茶素的药动学特征。结果大鼠ig甜茶素后,在尿液、粪便、胆汁和血浆中共检测并初步鉴定了1种原型成分和58种代谢物,主要代谢途径有脱氢化、羟基化、去葡萄糖基化、葡萄糖醛酸化、硫酸酯化等。甜茶素在大鼠体内的吸收较快,在0.12 h血药浓度达到最大值,半衰期为4.20 h,较大的表观分布容积提示甜茶素可能存在一定的组织分布。结论甜茶素在大鼠体内吸收迅速,并经历广泛的代谢反应,为进一步阐明甜茶素药效物质基础提供依据。     

苦地丁化学成分和体内代谢产物的LC-MS鉴定

目的 研究苦地丁Corydalis bungeana提取物中的化学成分和体内代谢产物,探究其代表性成分质谱裂解规律。方法采用高效液相色谱-电喷雾质谱联用技术（HPLC-Q-TOF/MS）,正离子模式扫描,对苦地丁提取物和大鼠口服苦地丁提取物后不同时间段内的血浆、胆汁、尿液和粪便分别进行检测分析,通过与对照品和文献比对保留时间和质谱碎片信息,确定化学成分归属及其裂解方式,预测代谢产物的动态变化。结果 在苦地丁提取物中共鉴定得31个化合物,其中共有21个化合物以原型进入体内;并以紫堇灵为研究对象,在大鼠血浆、胆汁、尿液和粪便中分别发现3、3、4、4个代谢产物。结论 借助HPLC-Q-TOF/MS方法鉴定了苦地丁体外化学成分和体内以原型存在的化学成分,阐明了代表性成分紫堇灵的代谢产物及代谢规律,推测苦地丁在体内发生了I相和II相代谢,其中以II相代谢方式为主（硫酸化、糖基化、甲基化和去甲基化）,为阐明苦地丁的药效物质基础提供依据。     

补肺活血胶囊大鼠体内代谢产物鉴定及代谢途径分析

目的 研究补肺活血胶囊（Bufei Huoxue Capsules,BHC）在大鼠血浆、胆汁、尿液、粪便中的原型成分及其代谢产物,归纳总结不同类型化合物的体内代谢规律。方法 大鼠igBHC后,收集血浆、胆汁、尿液和粪便样品并进行预处理,采用超高效液相色谱-飞行时间质谱（ultra-high performance liquid chromatography-time-of-flight mass spectrometry,UPLC-Q-TOF-MS）及质量亏损过滤技术,分别在正、负离子模式下对原型成分及代谢产物进行分析鉴定。结果 共检测到没食子酸、芍药苷、毛蕊异黄酮、新补骨脂异黄酮、(S)-异补骨脂二氢黄酮、补骨脂苷等原型成分及代谢产物67个,其中酚酸类成分10个、单萜类成分7个、黄酮类成分35个、香豆素类成分12个、皂苷类成分3个,主要代谢途径包括氧化、还原、甲基化、葡糖醛酸结合、硫酸结合等。结论 初步阐明了BHC大鼠体内的代谢产物及其代谢转化特征,为基于体内过程揭示其药效物质基础奠定了基础,为其临床安全用药提供了科学依据。     

三七皂苷R_1在大鼠体内的代谢产物分析

目的 研究三七皂苷R_1在大鼠体内的代谢情况,阐述三七皂苷R_1在大鼠体内的代谢产物.方法 以三七皂苷R1的微生物转化产物为对照品;采用LC-ESI-MS/MS方法,检测大鼠体内的代谢产物.结果 在大鼠体内共检测到8个代谢产物,并利用对照品鉴定了它们的结构分别为:20(S)-三七皂苷R_2,20(R)-三七皂苷R_2,20(S)-人参皂苷Rh_1,20(R)-人参皂苷Rh_1,人参皂苷Rh_4,原人参三醇,人参皂苷F_1和3β, 12β -二醇达玛烷-E-20(22),24-二烯-6-O-β-D-木糖-(1→2)-β-D-葡萄糖苷.结论 三七皂苷R_1在大鼠体内的代谢产物较多,且与微生物转化产物具有很强的相似性.     

丹参酚酸B的代谢产物研究△

目的：分离鉴定大鼠灌胃丹参酚酸B后尿液中的代谢产物。方法：大鼠尿液的醋酸乙酯萃取物用聚酰胺柱色谱和制备HPLC方法分离纯化；根据谱学数据进行结构鉴定。结果：从大鼠尿液醋酸乙酯萃取物中分离鉴定了5个化合物，分别是8．羟基-3，4-二氢喹啉-2（1H）-酮（1），1-甲基-1H-吲哚-2-羧酸（2），反式-3-（3-羟基苯基）丙烯酸（3），1H-吲哚-2-羧酸（4），8-氨基喹啉-2（1H）-酮（5）。结论：化合物1，2，4和5为首次从灌胃丹参酚酸B大鼠尿液中分离得到。     

异绿原酸A在大鼠体内的生物利用度和药物代谢动力学

目的:研究异绿原酸A在大鼠体内的生物利用度和药代动力学,为该制剂的临床应用提供参考。方法:建立大鼠血浆中异绿原酸A的HPLC检测,检测波长300 nm,流动相甲醇-0.1%磷酸水(50∶50)。考察大鼠经静脉注射(32 mg·kg-1)与灌胃(90 mg·kg-1)给予异绿原酸A后的血药浓度变化,利用3P97软件计算药动学参数,根据药时曲线下面积AUC0-∞和给药剂量,计算异绿原酸A的绝对生物利用度。结果:异绿原酸A在0.16~110.00 mg·L-1线性良好(R2=0.998);质量浓度分别为0.43,6.88,55.00 mg·L-1的异绿原酸A的提取回收率分别为(89.43±2.84)%,(93.16±3.95)%,(85.91±2.04)%;日内精密度RSD分别为11.8%,4.0%,4.0%,日间精密度RSD分别为6.5%,5.8%,5.8%。大鼠静脉注射和灌胃异绿原酸A后,异绿原酸A在大鼠体内的代谢过程均符合二室模型,消除半衰期分别为(29.49±0.75),(44.48±0.13)min,AUC0-∞分别为(355.40±32.58),(319.91±51.00)mg·min-1·L-1。异绿原酸A在大鼠体内的绝对生物利用度30.71%。结论:异绿原酸A在大鼠体内的过程符合线性动力学过程,且代谢快、半衰期短。     

基于UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS的类风湿性关节炎大鼠脂质代谢紊乱及祖师麻片的干预作用研究

目的采用基于UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS的代谢组学方法探索类风湿性关节炎大鼠内源性脂质代谢物在不同病程时期的变化趋势及祖师麻片对差异性代谢物的调控作用。方法采用胶原诱导关节炎(CIA)大鼠模型,分别收集对照组、模型组及祖师麻片[0.6 g/(kg·d)]组大鼠造模前(0 d)及造模后14、21、36 d的血清样本,提取样本中脂质成分,经生物信息学分析鉴定并寻找差异性代谢物,并探讨代谢规律。结果与对照组比较,胶原诱导的CIA大鼠脂质代谢出现明显异常,具体表现为3个酰基肉碱含量显著上升,TG碳链中碳原子个数小于58的TG含量呈现下调趋势,碳原子个数大于58的TG类物质含量显著升高。与模型组比较,祖师麻片对1种磷脂酰丝氨酸、1种神经酰胺、2种酰基肉碱、4种磷脂酰胆碱和4种三酰甘油的代谢水平有很好的调节作用。结论类风湿性关节炎能够引发机体血清中脂质代谢紊乱,祖师麻片对部分脂质代谢物有调控作用。     

UPLC-Q-TOF-MS/MS鉴定马钱苷大鼠体内代谢产物

目的采用超高效液相色谱与串联四级杆飞行时间质谱仪联用技术（UPLC-Q-TOF-MS/MS）分析鉴定大鼠灌胃马钱苷后其在尿液中的代谢产物,阐明马钱苷代谢途径。方法大鼠灌胃给予马钱苷,收集给药前后的尿样,经固相萃取进行预处理,采用超高液相色谱C18色谱柱,流动相为乙腈-1%甲酸水,梯度洗脱,采用动态背景扣除（DBS）触发信息关联采集（IDA）进行MS/MS数据采集。结果经MetabolitePilot代谢物分析软件处理后,根据MS/MS给出质谱碎片信息对代谢产物进行结构推测,共鉴定马钱苷代谢物3种,并归纳了马钱苷在大鼠体内的代谢过程。结论该方法简单可靠,灵敏度高,可用于体内微量成分的分析鉴定。     

羟基积雪草苷大鼠体内代谢研究

目的：研究羟基积雪草苷在大鼠体内的主要代谢产物,寻找羟基积雪草苷体内药效物质。方法：采用高效液相色谱一电喷雾串联质谱（HPLC—ESI—MS“）法鉴定大鼠腹腔注射羟基积雪草苷（50mg·kg-1）后体内的代谢产物。结果：从大鼠含药血浆、尿液及脑组织中检测到羟基积雪草苷原形成分和11种代谢产物,均为相代谢产物。结论：羟基积雪草苷在大鼠体内代谢广泛,主要的代谢途径为去甲基化、羟基化、脱水等反应。     

Identification of Icaritin Metabolites in Rats by LC-MS/MS

Objective Icaritin is the main aglycone and also active intestinal metabolite of prenylflavonoids from the Chinese materia medica Epimedii Herba. Modern pharmacological studies have demonstrated that icaritin has a wide range of biological activities. However, its metabolites and biotransformation pathways have not yet been comprehensively investigated. The present study aims to identify icaritin metabolites in rats by using a sensitive and effective LC-MS/MS method. Methods The plasma and urine samples of rats were collected before (blank) and after oral administration of icaritin, and subjected to liquid-liquid extraction with ethyl acetate. The full-scan LC-MS chromatograms of the plasma and urine samples were compared with those of blank samples to detect the possible metabolites, which were later identified by their product ion spectra. Results A total of 23 metabolites were identified, and conjugated icaritins produced by glucuronidation, glycosylation, and sulfation were its major metabolites. Minor demethylation, hydrogenation, and oxidation metabolites were also found. Conclusion Phase II metabolism is the main metabolic pathway of icaritin.     

Metabolites Identification of Curcumin, Demethoxycurcumin and Bisdemethoxycurcumin in Rats After Oral Administration of Nanoparticle Formulations by Liquid Chromatography Coupled with Mass Spectrometry

Background: Curcuminoids are promising cancer chemopreventive agents. Curcumin, demethoxycurcumin(DMC) and bisdemethoxycurcumin(BDMC) are the major bioactive curcuminoids in turmeric. However, comprehensive metabolic studies of these three curcuminoids are still limited.Objective: To identify the metabolites of curcumin, DMC and BDMC in rats after oral administration of solid lipid nanoparticles(SLNs).Methods: Male Sprague-Dawley rats(250 ± 20 g, body weight) were randomly divided into 4 groups(n=3), and were orally administered with curcumin-SLN, DMC-SLN, BDMC-SLN, or blank-SLN, respectively. Plasma samples(500 μL) via the angular vein were collected at 1, 2 and 4 h post dosing, and the urine and feces samples were collected at 0–12 h and 12–24 h post-intake. An HPLC-DAD-ESI-MSnmethod was developed to identify the metabolites. The structures of phase II metabolites were further confirmed by enzyme hydrolysis.Results: A total of 34 metabolites were identified in rats plasma, urine, and feces. Most of them were phase II metabolites, including glucuronide conjugates and sulfate conjugates. Among them, the glucuronide conjugates were the major metabolites in rats plasma. In the meanwhile, the three parent curcuminoids were detected in high amounts in the urine and feces samples.Conclusion: The possible metabolic pathways of curcuminoids in rats were proposed.     

基于UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS和网络药理学研究银甲片治疗盆腔炎的有效成分及作用机制

目的 研究银甲片治疗盆腔炎的有效成分及作用机制。方法 利用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法（UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS）,结合文献与对照品比对鉴定银甲片的化学成分。将化学成分和盆腔炎疾病的交集靶点导入String数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络;通过DAVID数据库进行基因本体（GO）富集分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析;采用Cytoscape 3.9.1软件构建药材-成分-靶点-通路可视化图;利用Maestro 11.9软件进行分子对接。结果 从银甲片中共鉴定58个化学成分,包含黄酮类、有机酸类、萜类、生物碱类。PPI分析得到类固醇受体辅激活因子（SRC）、热休克蛋白90α家族A类成员1（HSP90AA1）、磷脂酰肌醇3-激酶调节亚基1（PIK3R1）、信号转导和转录激活因子3（STAT3）、丝裂原活化蛋白激酶3（MAPK3）5个核心靶点;KEGG结果显示银甲片主要通过磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶B（PI3K-Akt）、MAPK等通路发挥作用。分子对接结果表明,木犀草苷、山柰酚、木犀草素、香叶木素等成分与SRC、HSP90AA1、PIK3R1等5个核心靶点的对接构象稳定。结论 银甲片可能通过木犀草苷、山柰酚、木犀草素、香叶木素、芹菜素等活性成分调控PI3K-Akt、MAPK等通路发挥治疗盆腔炎作用。     

UPLC-Q-TOF/MS鉴定芦丁在大鼠体内的代谢产物

目的:研究大鼠口服芦丁后血浆、尿液、粪便和胆汁中的代谢产物。方法:按50 mg·kg~(-1)剂量对Wistar大鼠一次性灌胃芦丁,取不同时间点的血浆、尿液、粪便和胆汁,采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF/MS)对各生物样品进行检测,分析样品中芦丁的代谢产物。流动相乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B)梯度洗脱(0~10 min,5%~15%A;10~15 min,15%~60%A;15~18 min,60%~90%A;18~19 min,90%~5%A;19~22 min,5%A),流速0.4 m L·min~(-1),样品温度4℃;电喷雾离子源(ESI),负离子监测模式。结果:从大鼠血浆、尿液、粪便和胆汁中共鉴定出22个代谢产物,其中血浆中7个,尿液中19个,粪便中12个,胆汁中15个,代谢产物主要包括Ⅰ相的水解代谢产物和Ⅱ相的葡萄糖醛酸结合、硫酸结合及甲基化代谢产物。结论:芦丁在大鼠体内存在多种代谢途径,代谢产物主要包括去糖基化产物和苷元槲皮素进一步生物转化的代谢产物,为芦丁的体内代谢提供了重要信息。