下调miR-19b靶向TP53INP1对骨肉瘤细胞侵袭迁移和凋亡的影响

目的研究miR-19b靶向调控TP53INP1对骨肉瘤细胞侵袭迁移和凋亡的影响。方法将骨肉瘤MG63细胞分为:对照组、抑制物阴性对照组(转染抑制物阴性对照)、miR-19b抑制物组(转染miR-19b抑制物)、siRNA阴性对照+miR-19b抑制物组(转染siRNA阴性对照和miR-19b抑制物)、TP53INP1 siRNA+miR-19b抑制物组(转染TP53INP1 siRNA和miR-19b抑制物)、模拟物阴性对照组(转染模拟物阴性对照)、miR-19b模拟物组(转染miR-19b模拟物)。以qRT-PCR测定转染效果,Transwell小室测定细胞侵袭和迁移,流式细胞术测定细胞凋亡。靶基因预测软件预测TP53INP1为miR-19b的靶基因,双荧光素酶报告载体鉴定靶向关系。以Western blot测定上调或下调miR-19b对TP53INP1表达的影响。以miR-19b抑制物和TP53INP1 siRNA共转染至MG63细胞中,以流式细胞术和Transwell小室测定细胞凋亡和侵袭迁移变化。结果 miR-19b抑制物MG63细胞中miR-19b表达水平下降,侵袭和迁移能力下降,细胞凋亡率升高,与对照组、抑制物阴性对照组比较,差异有统计学意义(P 0. 05)。miR-19b与TP53INP1mRNA的3,UTR有结合位点,荧光素酶报告载体鉴定TP53INP1为miR-19b的靶基因。与抑制物阴性对照组比较,miR-19b抑制物组上调细胞中TP53INP1蛋白表达水平,与模拟物阴性对照组比较,miR-19b模拟物组下调细胞中蛋白表达水平。与siRNA阴性对照+miR-19b抑制物组比较,TP53INP1 siRNA+miR-19b抑制物组能够上调MG63细胞的侵袭和迁移能力并减少细胞凋亡(P 0. 05)。结论下调miR-19b通过靶向调控TP53INP1可抑制骨肉瘤细胞侵袭迁移并诱导细胞凋亡。     

上调miRNA-22表达对卵巢癌细胞株SKOV-3侵袭的影响及与VEGF和P53蛋白表达的关系研究

目的研究上调miRNA-22表达对卵巢癌细胞株SKOV-3侵袭的影响及与血管内皮生长因子(VEGF)和P53蛋白表达的关系。方法前瞻性收集新疆维吾尔自治区人民医院的卵巢癌组织标本112例(A组)、卵巢癌旁组织标本85例(B组)及正常卵巢组织标本75例(C组)。采用实时荧光定量PCR法对三组标本中的miRNA-22表达量进行检测。将卵巢癌SKOV-3细胞株分为转染miRNA-22-mimic(转染组)、miRNA-22-NC(空白载体组)及正常对照组。采用实时荧光定量PCR法对各组细胞中的miRNA-22表达量进行测定,通过Transwell小室法对各组细胞的侵袭能力进行检测,并用Western blot法对各组细胞中的P53及VEGF蛋白表达情况进行检测。结果 A组miRNA-22表达量较B、C组均明显下降(P 0. 05),而B、C组miRNA-22表达量的比较,并无显著差异(P 0. 05)。相比正常对照组与空白载体组,转染组细胞中的miRNA-22表达量明显升高(P 0. 05),而正常对照组与空白载体组细胞中miRNA-22表达量的比较,无显著差异(P 0. 05)。Transwell小室法检测结果发现,转染组卵巢癌SKOV-3细胞株侵袭能力较正常对照组与空白载体组明显减弱(P 0. 05),而正常对照组与空白载体组侵袭细胞数的比较,无显著差异(P 0. 05)。Western blot法检测结果发现,转染组细胞中P53和VEGF蛋白表达水平较正常对照组与空白载体组明显下降(P 0. 05),而正常对照组与空白载体组细胞中P53和VEGF蛋白表达水平的比较,无显著差异(P 0. 05)。结论上调miRNA-22表达可起到阻滞卵巢癌SKOV-3细胞株侵袭的作用,其机制可能与P53和VEGF蛋白表达水平下降密切相关。     

miR-17对靶基因转化生长因子受体β_2的负性调控表达

目的探讨miR-17在HEK293T细胞中对转化生长因子受体β2(transforming growth factor receptor beta 2,TGFRβ2)的调控作用。方法采用生物学信息预测软件对miRNA-17的靶基因进行预测,选定TGFRβ2为靶基因,构建pCDNA3.1+miRNA-17重组表达载体。将HEK293T细胞分为3组,分别为对照组(无转染)、空载组(转染空质粒)和miR-17组(转染pcDNA3.1-GW/EmGFP-miR-17质粒),3组采用实时定量PCR检测miRNA-17和TGFRβ2mRNA表达水平,采用Western blot检测TGFRβ2蛋白表达水平。将HEK293T细胞再分为3组,分别为CTL组(转染miR-17无义寡核苷酸序列)、miR-17组(转染pcDNA3.1-GW/EmGFP-miR-17质粒)和ASO-miR-17组(转染miR-17反义寡核苷酸序列),采用免疫荧光法检测各组TGFRβ2荧光强度。结果转染24h后,空载组和miR-17组HEK293细胞处于对数生长期,细胞突起和包体均正常,与对照组比较差异无统计学意义(P0.05);miR-17组miR-17表达量(5.391±0.053)明显高于空载组(1.654±0.075)与对照组(1.436±0.038),TGFRβ2mRNA和蛋白表达量(2.449±0.092、1.030±0.030)明显低于空载组(6.135±0.058、5.550±0.040)和对照组(6.862±0.074、5.090±0.030)(P0.05);ASO-miR-17组TGFRβ2荧光强度(1.144±0.079)明显高于CTL组(0.776±0.044)和miR-17组(0.917±0.096)(P0.05)。结论 miR-17可负性调节靶基因TGFRβ2的表达。     

miR-17对靶基因转化生长因子受体β2的负性调控表达

目的 探讨miR-17在HEK293T细胞中对转化生长因子受体β2(transforming growth factor receptor beta 2,TGFRβ2)的调控作用.方法 采用生物学信息预测软件对miRNA-17的靶基因进行预测,选定TGFRβ2为靶基因,构建pCDNA3.1+ miRNA 17重组表达载体.将HEK293T细胞分为3组,分别为对照组(无转染)、空载组(转染空质粒)和miR-17组(转染pcDNA3.1-GW/EmGFP-miR-17质粒),3组采用实时定量PCR检测miRNA-17和TGFRβ2mRNA表达水平,采用Western blot检测TGFRβ2蛋白表达水平.将HEK293T细胞再分为3组,分别为CTL组(转染miR-17无义寡核苷酸序列)、miR-17组(转染pcDNA3.1-GW/EmGFP-miR-17质粒)和ASO-miR-17组(转染miR-17反义寡核苷酸序列),采用免疫荧光法检测各组TGFRβ2荧光强度.结果 转染24 h后,空载组和miR-17组HEK293细胞处于对数生长期,细胞突起和包体均正常,与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);miR-17组miR-17表达量(5.391±0.053)明显高于空载组(1.654±0.075)与对照组(1.436±0.038),TGFRβ2 mRNA和蛋白表达量(2.449±0.092、1.030±0.030)明显低于空载组(6.135±0.058、5.550±0.040)和对照组(6.862±0.074、5.090±0.030) (P＜0.05);ASO-miR-17组TGFRβ2荧光强度(1.144±0.079)明显高于CTL组(0.776±0.044)和miR-17组(0.917±0.096) (P＜0.05).结论 miR-17可负性调节靶基因TGFRβ2的表达.     

结直肠癌组织及血清中miRNA-107相对表达水平与临床病理特征及预后的关系

目的探究结直肠癌组织及血清中微小RNA-107(miRNA-107)相对表达水平与临床病理特征及预后的关系。方法选取2017年11月至2019年4月期间于该院收治的60例患者作为试验组,根据疾病进展分为早期癌症组及进展期癌组,每组30例。并选取同期体检健康的20例就诊者为对照组,20例结直肠息肉患者为息肉组。比较各组受试者miRNA-107相对表达水平的差异及与临床特征的相互关系,绘制患者无进展生存曲线,评估miRNA-107相对表达水平与结直肠癌患者的预后相关性。结果息肉组、早期癌症组和进展期癌组血清miRNA-107水平明显高于对照组(P0.05),早期癌症组和进展期癌组血清miRNA-107水平明显高于息肉组(P0.05),进展期癌组血清miRNA-107水平明显高于早期癌症组(P0.05)。进展期癌组肿瘤组织miRNA-107水平明显高于早期癌症组(P0.05)。Spearman相关分析表明,试验组血清、肿瘤组织miRNA-107相对表达水平呈正相关(r=0.446,P0.05)。血清、肿瘤组织miRNA-107相对表达水平与患者的无进展生存期(PFS)相关,其相对表达水平越高,预后越差。血清、肿瘤组织miRNA-107相对表达水平在癌胚抗原(CEA)≤3.52 ng/L和CEA3.52 ng/L患者之间差异有统计学意义(P0.05)。血清、肿瘤组织中miRNA-107阳性及CEA3.52 ng/L可作为影响结直肠癌患者PFS的独立预后危险因素(P0.05)。结论 miRNA-107在结直肠癌患者的血清、肿瘤组织中均高表达,其相对表达水平无明显差异,且相对表达水平越高则预后越差,可作为结直肠癌诊断、预后的参考指标。     

miRNA-381靶向PTEN对胃癌细胞增殖与凋亡的影响及相关机制研究

目的 探讨与研究miRNA-381靶向10号染色体上磷酸酶与张力蛋白同源缺失基因(PTEN)对胃癌细胞增殖与凋亡的影响及相关机制。方法 将处于对数生长期的BGC-823细胞平均分为三组:对照组、实验1组与实验2组,分别转染miRNA NC 20 nmol/L与miRNA-381 mimic 20 nmol/L、40 nmol/L。采用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Transwell小室实验检测细胞迁移情况,实时定量PCR检测miRNA-381表达情况,Western blotting检测PTEN蛋白表达情况。结果 转染后24 h、48 h,实验1组与实验2组的细胞增殖指数、细胞迁移指数、miRNA-381表达量高于对照组,差异均具有统计学意义(P 0. 05);实验2组高于实验1组,两组比较差异具有统计学意义(P 0. 05)。实验2组与实验1组的细胞凋亡指数、PTEN蛋白相对表达量均显著低于对照组,实验2组也较实验1组显著降低,差异均具有统计学意义(P 0. 05)。与转染后24 h相比,转染后48 h三组细胞增殖指数、凋亡指数、迁移指数以及miRNA-381相对表达量均显著增加,而PTEN蛋白相对表达量仅对照组显著增加,两个实验组均显著降低(P 0. 05)。结论 在胃癌细胞中,miRNA-381可通过靶向抑制PTEN表达,从而促进胃癌细胞增殖与迁移,抑制胃癌细胞的凋亡。     

过表达SHIP-1对白血病细胞侵袭、迁移及PI3K/AKT信号通路的影响

目的:探讨含有SH2结构的5'肌醇磷酸酶-1(SHIP-1)对白血病细胞增殖、侵袭和迁移能力以及磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路的影响。方法:采用脂质体Lipofectamine 2000将过表达载体p CDNA3.1-SHIP1转染白血病THP-1细胞,实验分为3组:对照组(未做处理的细胞),空载体组(转染空载体p CDNA3.1-NC)和过表达组(转染过表达载体p CDNA3.1-SHIP1);应用CCK-8法检测细胞的增殖情况,Transw ell法检测细胞侵袭、迁移能力,免疫印迹实验(Western blot)检测细胞中SHIP-1、AKT、磷酸化AKT(p AKT)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达量。结果:细胞转染过表达载体后SHIP-1的表达量显著高于对照组(P0.05);与对照组相比,空载体组细胞的吸光值没有明显差异(P0.05),过表达组细胞的吸光值显著降低(P0.05);空载体组细胞的侵袭、迁移数与对照组无明显差异(P0.05),过表达组细胞的侵袭、迁移数显著低于对照组(P0.05);与对照组相比,空载体组细胞中AKT、p AKT和MMP-9的表达量没有显著差异(P0.05),过表达组细胞中AKT蛋白的表达量无显著差异(P0.05),但p AKT、MMP-9的表达量均显著降低(P0.05)。结论:SHIP-1抑制白血病细胞的增殖,且降低其侵袭、迁移能力,其机理可能与通过影响PI3K/AKT信号转导通路的活化从而下调MMP-9的表达有关。     

miRNA-221和miRNA-222对前列腺癌细胞PC-3的增殖、迁移及SIRT1表达的调控

目的观察前列腺癌PC-3细胞中微小RNA(microRNA,miRNA)-221和miRNA-222对细胞增殖和迁移的作用,以及对沉默信息调节因子1(SIRT1)表达的影响。方法设立无处理细胞组(简称control组)、转染空载质粒pEX-5组(简称pEX-5组)、转染miRNA-221反义抑制质粒组(简称miRNA-221抑制组)、转染miRNA-222反义抑制质粒组(简称miRNA-222抑制组),应用细胞计数试剂盒(CCK-8法)检测miRNA-221和miRNA-222对前列腺癌细胞增殖的影响;采用细胞划痕修复实验检测miRNA-221和miRNA-222对细胞迁移能力的影响;采用免疫印迹法和荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测SIRT1在蛋白水平和mRNA水平的变化;采用miRNAanda靶标进行预测分析。结果在成功抑制了PC-3细胞中miRNA-221或miRNA-222的表达后,连续7 d检测细胞活性,miRNA-221抑制组和miRNA-222抑制组的细胞活性(A450 nm值)较pEX-5组降低1.5~2.0倍,自第3天起两组之间即有明显差异(t=6.7,P0.01;t=5.3,P0.01);划痕实验显示,miRNA-221抑制组和miRNA-222抑制组的迁移能力明显低于pEX-5组。miRNA-221抑制组、miRNA-222抑制组中SIRT1蛋白的相对表达量分别为(0.26±0.021)、(0.21±0.005 8),与pEX-5组(0.14±0.017)比较差异均有统计学意义(t值分别为6.3、6.4,P均0.05);而SIRT1 mRNA的表达水平3组之间差异无统计学意义(P0.05)。结论 miRNA-221和miRNA-222能促进前列腺癌PC-3细胞的增殖与迁移能力,影响SIRT1蛋白的表达。     

miRNA-195在膀胱癌细胞中功能的研究

目的研究微小RNA(miRNA)-195对人膀胱癌细胞5637增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法利用阳离子脂质体方法将miRNA-195转染至人膀胱癌细胞5637(miRNA-195组),同时以只转染病毒载体的5637细胞作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测转染细胞中miRNA-195的表达量。采用噻唑蓝(MTT)法、细胞计数法和集落形成实验测定miRNA-195对5637细胞体外增殖的影响。采用划痕试验、Transwell实验、Matrigel肿瘤细胞侵袭实验检测miRNA-195对5637细胞迁移、侵袭能力的影响。结果实时荧光定量PCR检测结果表明转染后的5637细胞高表达miRNA-195。MTT法、细胞计数法及集落形成实验证明miRNA-195可以抑制5637细胞在体外的增殖,miRNA-195组和对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。划痕实验、Transwell实验以及Matrigel肿瘤细胞侵袭实验证明miRNA-195可以抑制5637细胞的迁移和侵袭能力,miRNA-195组和对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论 miRNA-195能够抑制膀胱癌细胞5637在体外的增殖、迁移以及侵袭能力。     

miRNA-155表达对人肺癌细胞A549增殖的影响

【目的】探讨miRNA-155在正常肺组织和非小细胞肺癌组织中的表达及miRNA-155对人肺癌细胞A549增殖的影响。【方法】采用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）技术检测15例非小细胞肺癌组织及其癌旁组织中miRNA-155的表达;A549细胞分别转染miR-NC和miRNA-155 mimic ,采用Real-time PCR技术检测转染后A549细胞中的miRNA-155表达水平,同时采用MTT 技术和流式细胞技术检测转染后A549细胞增殖情况,Western印迹法检测转染后A549细胞中Akt、p-Akt（Ser473）、p27、bcl-2、bax的表达。【结果】miRNA-155在非小细胞肺癌组织中的表达情况明显高于癌旁组织（ P ＜0．05）;与转染 miR-NC 组相比, A549细胞转染miRNA-155 mimic后miRNA-155表达水平明显增高（ P ＜0．001）,MTT实验和流式细胞技术显示miRNA-155促进A549细胞的增殖;Western印迹法结果显示：转染miRNA-155的A549细胞p-Akt （Ser473）,bcl-2的表达水平增高,p27、bax的表达水平降低。【结论】miRNA-155可能通过促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,上调p-Akt（Ser473）、bcl-2表达,同时抑制p27、bax的表达来促进非小细胞肺癌的发生发展。     

人瘢痕疙瘩成纤维细胞中P53蛋白对血管内皮细胞生长因子表达的影响

目的:观察人瘢痕疙瘩成纤维细胞中的P53蛋白对血管内皮细胞生长因子表达的影响作用。方法:实验于2005-05/11在哈尔滨医科大学第二临床医学院实验室完成。成纤维细胞来源哈尔滨医科大学附属第二医院整形美容激光中心收治的烧伤患者的瘢痕疙瘩组织(临床病理证实)。将瘢痕疙瘩切成1mm×1mm组织块,用含体积分数为0.2的胎牛血清的1640培养液,置于37℃,体积分数为0.05的CO2条件下培养,取3～6代细胞。采用腺病毒介导法将野生型p53基因转染至人瘢痕疙瘩成纤维细胞中,非转染细胞为对照组。应用间接免疫荧光法和westernblott法检测P53蛋白;应用酶联免疫吸附法检测血管内皮细胞生长因子表达。结果:①间接免疫荧光法检测P53蛋白:P53蛋白表达在细胞核内,转染组和非转染组细胞中均有P53蛋白表达,转染组细胞内P53蛋白表达明显高于非转染组细胞。②Westernblot法检测P53蛋白:转染组和非转染组细胞中均有P53蛋白表达,但非转染组细胞内P53蛋白表达量很少;转染组细胞在转染48h后,细胞中P53蛋白表达量高;明显高于非转染组细胞。③酶联免疫吸附法测定血管内皮细胞生长因子:转染组和非转染组细胞中均检测出血管内皮细胞生长因子表达,但转染组细胞血管内皮细胞生长因子表达显著低于非转染组细胞(P<0.01)。结论:P53蛋白能够明显抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞血管内皮细胞生长因子表达。     

miRNA-132、miRNA-125b、miRNA-143和miRNA-145表达对多发性骨髓瘤细胞自噬及凋亡的影响

目的:探讨多发性骨髓瘤细胞miRNA-132、miRNA-125b、miRNA-143和miRNA-145表达与自噬和凋亡的关系。方法:选取人骨髓瘤细胞株U266及正常CD138+浆细胞为研究对象,临床研究对象分为骨髓瘤组45例,健康对照组40例。实时定量PCR测定细胞中miRNA-132、miRNA-125b、miRNA-143和miRNA-145表达水平,Western blot测定自噬相关蛋白(LC3-Ⅱ,LC3-Ⅰ、P62、Beclin-1)表达量,凋亡相关分子(cleaved-Caspase3、cleaved-Caspase7、BCL-2、BAX)表达量;流式细胞术测定细胞凋亡率。分析miRNA表达水平与临床相关指标包括M蛋白、血红蛋白、β2-MG、乳酸脱氢酶、白蛋白、肌酐、血清钙的相关性。结果:与正常浆细胞对比,骨髓瘤细胞的miRNA-132和miRNA-125b表达显著增加(P 0.05),miRNA-143,miRNA-145表达显著降低(P 0.05);LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ显著增加(P 0.05),Beclin-1表达显著增加(P 0.05),P62表达显著降低(P 0.05);BAX、cleaved-Caspase3、cleaved-Caspase7表达显著降低(P 0.05),BCL-2表达显著增加(P0.05);细胞凋亡率降低(P 0.05)。阳离子脂质体转染miRNA-125b mimic和miRNA-143 inhibitor后,正常浆细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ显著增高(P 0.05),Beclin-1表达显著增高(P 0.05),P62表达也显著增加(P 0.05),细胞凋亡率降低(P 0.05);上述反应体系加入自噬抑制剂3-MA后,细胞凋亡率则无明显改变(P 0.05)。miRNA-132、miRNA-125b、miRNA-143和miRNA-145表达在不同DS与ISS分期组,染色体核型异常组与正常核型组间均有显著性差异(P 0.05)。miRNA-125b和miRNA-143与β2-MG、白蛋白、血红蛋白水平均有显著相关性(P 0.05)。结论:miRNA-132、 miRNA-125b、 miRNA-143和miRNA-145表达与多发性骨髓瘤患者临床特征密切相关,miRNA-125b过表达和miRNA-143表达下调通过上调自噬水平抑制骨髓瘤细胞凋亡。     

长链非编码RNA MEG3对鼻咽癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探究长链非编码RNA母系表达基因3(MEG3)对鼻咽癌细胞增殖和侵袭的影响。方法体外培养鼻咽癌细胞系5-8F、CNE-2,转染MEG3分为空白对照组(转染试剂转染)、阴性转染组(MEG3阴性对照质粒转染)、MEG3转染组(MEG3 mimis质粒转染)。实时定量PCR(qRT-PCR)检测MEG3 mRNA表达;MTT法检测细胞增殖情况;平板细胞克隆实验检测菌落形成情况;流式细胞仪检测细胞凋亡以及周期分布情况;裸鼠模型肿瘤形成实验评估体内肿瘤生长情况;蛋白免疫印迹法(WB)检测细胞中Snail、N-钙黏着蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、E-钙黏着蛋白(E-cadherin)蛋白表达情况。结果与正常鼻咽上皮细胞系NP69相比,5-8F、CNE-2细胞中MEG3 mRNA表达均降低(P0.05)。在5-8F、CNE-2细胞中,与空白对照组、阴性转染组相比,MEG3转染组细胞中MEG3mRNA表达升高(P0.05)。在5-8F、CNE-2细胞中,随着细胞培养时间延长,MEG3转染组细胞抑制率逐渐升高;同一时间点,与空白对照组、阴性转染组相比,MEG3转染组细胞抑制率均升高(P0.05)。与空白对照组、阴性转染组相比,MEG3转染组细胞菌落数量、细胞迁移、侵袭数量均降低(P0.05)。与空白组、阴性转染组对比,MEG3转染组细胞凋亡率、G1期DNA含量均升高,差异有统计学意义(P0.05)。与空白组、阴性转染组对比,在1、2周MEG3转染组肿瘤体积均变小(P0.05)。与空白组、阴性转染组相比,MEG3转染组Snail、N-cadherin、Vimentin蛋白表达均降低,E-cadherin蛋白表达升高(P0.05)。结论 MEG3在鼻咽癌中表达降低,MEG3表达升高后可抑制鼻咽癌细胞的增殖、侵袭、迁移,使细胞周期停留在G1期,促进细胞凋亡,其机制可能与抑制上皮细胞-间充质转化有关。     

国人弥漫大B细胞淋巴瘤P53表达的判读标准及预后价值探讨北大核心CSCD

目的探索在国人弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中免疫组织化学染色(IHC)检测P53蛋白表达状态预测TP53基因突变风险的能力,以及P53表达差异的预后评估价值。方法收集北京高博博仁医院2021年1月至2021年12月同时进行二代测序(NGS)和IHC检测的DLBCL病例51例,依据P53的IHC染色将P53蛋白表达状态分为缺失(<1%)、弥漫(>80%)和不均一(1%~80%)3组,将缺失及弥漫表达归为TP53突变高风险组;与NGS结果对比分析IHC预测TP53突变风险的敏感性和特异性。收集北京大学肿瘤医院2016年6月至2019年9月有完整随访资料的DLBCL患者131例,制作组织芯片并通过IHC检测P53表达,评估P53表达差异的预后价值。结果51例同时行IHC和NGS检测的病例中,TP53突变高风险23例(7例缺失,16例弥漫),NGS证实22例存在TP53突变;TP53突变低风险组28例,仅1例证实有TP53突变。IHC预测TP53突变风险敏感性95.7%,特异性96.4%。NGS共检出26个TP53突变位点,等位基因突变频率为61.57%(13.41%~86.25%),P53弥漫组检出16个错义突变、2个剪切位点突变;缺失组检出6个截短突变、1个剪切位点突变;不均一组检出1个截短突变。纳入预后分析的131例DLBCL患者中,IHC显示29.0%(38/131)为TP53突变高风险(17例弥漫、21例缺失)。多因素分析显示TP53突变高风险(HR=2.612,95%CI 1.145~5.956,P=0.022)是影响总生存的独立危险因素。结论IHC检测P53蛋白表达缺失(<1%)或弥漫(>80%)TP53突变风险高,IHC预测TP53突变的敏感性与特异性高,TP53突变高风险是预后不良的独立影响因素。     

miRNA-21对宫颈癌Hela细胞顺铂化疗增敏作用的研究

目的探讨microRNA-21 (miRNA-21)对宫颈癌Hela/DDP耐药的影响及其相关机制。方法实时荧光定量PCR(Real-PCR)检测Hela细胞、Hela/DDP、转染后miR-21-siRNA组及miR-21-neg中miRNA-21的表达量。MTT法检测顺铂(DDP)对Hela/DDP增殖的影响;流式细胞仪分析Hela/DDP细胞周期及凋亡率;Western blot检测顺铂处理过的Hela/DDP中PTEN蛋白的表达。结果在Hela/DDP组中miRNA-21明显高于Hela组,差异具有统计学意义(P0.05);转染miRNA-21siRNA后,Hela/DDP中miRNA-21明显低于空白对照组及阴性对照组,差异具有统计学意义(P0.05);与空白对照组及阴性对照组相比,顺铂作用Hela/DDP后,转染miRNA-21 siRNA组细胞增殖抑制率、凋亡率及PTEN蛋白表达水平均升高,并呈现G0/G1期阻滞作用,差异具有统计学意义(P0.05)。结论 miRNA-21可抑制Hela/DDP细胞增殖、阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡,进而提高Hela/DDP细胞对顺铂的敏感性,可能与宫颈癌Hela/DDP细胞中PTEN蛋白合成增加有关。     

miRNA-19b过表达对P19细胞分化的影响

目的通过过表达miRNA-19b,研究miRNA-19b对P19细胞分化的影响。方法脂质体2000转染miRNA-19b过表达质粒与空载质粒进入P19细胞,通过杀稻瘟菌素筛选出稳定株;实时定量聚合酶链反应检测miRNA-19b表达水平以及分化基因(c Tn T、ANP、GATA4)的表达水平。结果 miRNA-19b过表达载体与细胞系成功建立(P0.05);在P19细胞分化过程中,miRNA-19b过表达组心肌标志物均显著高于对照组(P均0.05)。miRNA-19b显著促进P19细胞向心肌细胞分化。结论 miRNA-19b可以显著促进P19细胞向心肌细胞的分化,为以后其用于心脏发育的进一步研究奠定基础。     

Shh在糖尿病肾病患者肾组织中的表达及对肾小管上皮细胞凋亡的影响研究

目的探讨音猥因子(Shh)在糖尿病肾病患者肾组织中的表达水平及对肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法Western blot检测糖尿病肾病患者肾组织和肾癌患者正常肾组织中Shh的水平。实验分为5组,依次为低糖组、对照组、PCDNA3.1组、PCDNA3.1-Shh组、抑制剂组。低糖组用葡萄糖浓度为5.8 mmol/L的细胞培养液培养细胞,PCDNA3.1组、PCDNA3.1-Shh组、抑制剂组、对照组均用葡萄糖浓度为30 mmol/L的细胞培养液培养细胞,PCDNA3.1-Shh组细胞转染Shh过表达载体PCDNA3.1-Shh,PCDNA3.1-Shh组细胞转染空载体PCDNA3.1,抑制剂组细胞与JNK信号通路抑制剂作用。Western blot检测对照组、PCDNA3.1组、PCDNA3.1-Shh组细胞中Shh水平。流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。Western blot检测各组细胞中Bcl-2、Bax、JNK、p-JNK表达水平。结果 Shh在糖尿病肾病患者肾组织中的表达水平明显低于正常肾组织(P0.05)。PCDNA3.1-Shh组细胞中Shh表达水平明显高于对照组和PCDNA3.1组(P0.05)。对照组细胞凋亡率明显高于低糖组(P0.05)。PCDNA3.1-Shh组细胞凋亡率明显低于对照组和PCDNA3.1组(P0.05)。对照组Bax和p-JNK水平明显高于低糖组,而Bcl-2水平明显低于低糖组(P0.05)。PCDNA3.1-Shh组细胞Bax和p-JNK水平明显低于对照组,而Bcl-2水平明显高于对照组(P0.05)。抑制剂组细胞凋亡趋势与PCDNA3.1-Shh组细胞相一致。结论 Shh在糖尿病肾病患者肾组织中表达下调。Shh能够明显改善高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡,作用机制与JNK信号通路有关。     

原钙黏蛋白7对小鼠皮层神经元细胞凋亡的影响

目的探讨原钙黏蛋白7(protocadherin 7, Pcdh7)基因在促进小鼠皮层神经元细胞凋亡中的作用及可能机制。方法原代培养的C57BL/6小鼠皮层神经元细胞,随机分为空载组(转染空白质粒)、Pcdh7过表达组(转染Pcdh7过表达质粒)、Ca~(2+)通道阻滞组(转染Pcdh7过表达质粒及Ca~(2+)通道抑制剂西尼地平)。转染48 h,采用流式细胞仪检测3组神经元细胞内Ca~(2+)荧光强度,CCK-8法检测3组神经元细胞存活率,荧光探针法检测3组神经元细胞凋亡率。结果 Pcdh7过表达组神经元细胞内Ca~(2+)荧光强度[(30.57±4.34)MFI]高于空载组[(18.60±0.57)MFI]和Ca~(2+)通道阻滞组[(18.63±1.97)MFI](P0.05),空载组与Ca~(2+)通道阻滞组比较差异无统计学意义(P0.05);Pcdh7过表达组神经元细胞存活率吸光度值(0.64±0.04)低于空载组(1.01±0.03)和Ca~(2+)通道阻滞组(0.84±0.02)(P0.05),且Ca~(2+)通道阻滞组低于空载组(P0.05);Pcdh7过表达组神经元细胞凋亡率[(34.10±4.00)%]高于空载组[(13.56±2.48)%]和Ca~(2+)通道阻滞组[(13.98±3.00)%](P0.05),空载组与Ca~(2+)通道阻滞组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论过表达Pcdh7基因可诱导小鼠皮层神经元细胞凋亡,其机制可能与促进细胞内Ca~(2+)内流有关。     

siRNA靶向抑制CXCR4基因表达对鼻咽癌细胞增殖及侵袭的影响及机制研究

目的探讨抑制鼻咽癌细胞趋化因子受体-4(CXCR4)基因表达对癌细胞增殖、侵袭的影响及机制。方法回顾性收集鼻咽癌42例临床资料及相应的癌旁组织。RT-PCR和Western bloting分别检测鼻咽癌及相应的癌旁组织中CXCR4基因的mRNA及蛋白表达;人鼻咽癌细胞系CNE-2Z分为空白组(细胞未做任何处理)、NC-siRNA组(细胞转染无义siRNA序列)和CXCR4-siRNA组(细胞中转染CXCR4的靶向siRNA序列)。转染48 h后Western bloting检测各组细胞中CXCR4、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期素D1(Cyclin D1)蛋白表达;CCK8实验和Transwell小室分别检测细胞的增殖及侵袭能力。结果鼻咽癌中CXCR4基因的mRNA及蛋白表达均显著高于癌旁组织(P0.01);转染CXCR4-siRNA组后CXCR4的蛋白表达显著降低;NC-siRNA组细胞存活率、细胞侵袭数及MMP-2、MMP-9、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达与空白组差异无统计学意义(P0.05);CXCR4-siRNA组细胞存活率、细胞侵袭数及MMP-2、MMP-9、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达均显著低于空白组(P0.01)。结论抑制鼻咽癌细胞CXCR4基因表达可显著降低癌细胞的增殖与侵袭能力,其机制与下调Wnt/β-catenin信号通路有关。     

miR-122a诱导喉癌细胞多西他赛增敏的信号机制研究

目的 本研究主要探讨微小RNA-122a (microRNA-122a,miR-122a)在人喉癌细胞对多西他赛(Docetaxel,DOC)敏感性中的作用和作用机制。方法 慢病毒转染法上调人喉癌Hep-2细胞中miR-122a水平并设为过表达组,转染相应空载体作为空载对照组,以未转染细胞作为空白对照组;实时荧光定量聚合酶链反应(RTFQ-PCR)检测细胞miR-122a水平。DOC处理细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力并计算DOC半数抑制浓度(IC50);结晶紫染色检测细胞贴壁存活能力。蛋白质印迹法(Western blot)和免疫荧光实验检测细胞p-EGFR和p-AKT蛋白表达。结果 过表达组细胞miR-122a表达水平明显高于空载对照组(P<0.001)。与空载对照组比较,DOC对过表达组细胞的IC50值明显降低(P<0.001)。DOC (5.56μg/mL)处理24 h后,过表达组细胞贴壁存活率明显低于空载对照组(P=0.001)。过表达组细胞p-EGFR和p-AKT相对蛋白表达水平明显低于空载对照组(均P<0.001)。与空载对照组比较,过表达组...