雌激素对大鼠脑缺血再灌注损伤脑皮质EAA含量的影响

目的 研究雌激素对雄性大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织兴奋性氨基酸(EAA)含量的影响。方法 采用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。模型建立后5min内腹腔注射雌激素。相应时间断头取脑。然后测定脑梗死体积、脑组织谷氨酸(GLU)、天门冬氨酸(ASP)及γ氨基丁酸(GABA)含量。结果 脑梗死体积治疗组较缺血对照组明显缩小，缺血对照组脑组织GLU、ASP含量明显高于治疗组。结论 雌激素对脑缺血再灌注损伤有保护作用。其可能的机制为：干扰脑缺血再灌注损伤中EAA代谢而发挥脑保护作用。     

γ-羟基丁酸对局部脑缺血再灌注损伤的保护作用

γ-氨基丁酸(GABA)类药物可治疗脑缺血后谷氨酸(EAA)大量释放引起的神经元损伤.我们观察γ-羟基丁酸(GHBA)对大鼠局部脑缺血再灌注后脑组织EAA含量的影响及其与脑梗死体积和脑水肿的关系,研究GHBA对脑缺血再灌注损伤的保护作用.     

大鼠全脑缺血再灌注损伤后海马自噬相关蛋白Beclin 1的表达变化

目的研究自噬相关蛋白Beclin 1在大鼠全脑缺血-再灌注损伤后海马中的表达情况,并探讨其意义。方法使用四动脉结扎法制作大鼠全脑缺血-再灌注损伤模型,实验动物随机分为：假于术组和缺血再灌注组。存全脑缺血15min后,分别再灌注0min、30min、3h、6h、12h、24h、1d、3d,使用Western blot检测各个时阃点大鼠全脑缺血-再灌后海马自噬相关蛋白Beclin1的表达情况。结果与假手术组比较,大鼠全脑缺血-再灌注损伤后1d,海马区Beclinl蛋白的表达最强（P〈0．05）。结论大鼠全脑缺血-再灌注损伤后海马自噬相关蛋白Beclinl表达上调,表明脑缺血-再灌注损伤后海马区域的自噬活性上调．     

大鼠全脑缺血再灌注损伤后海马白噬相关蛋白LC3表达变化的研究

目的研究自噬微管相关蛋白轻链3（microtubule—associated protein 1 light chain3,LC3）在大鼠全脑缺血损伤后海马的表达情况,并探讨自噬在脑缺血损伤中的意义。方法使用四动脉结扎法制作大鼠全脑缺血模型再灌注损伤模型,实验动物随机分为：假手术组（sham组）、缺血再灌注纽。在全脑缺血15min后,分别再灌注0,30min,3,6,12,24h,1,3d,使用Westernblotting的方法检测各个时间点大鼠全脑缺血／复灌后海马LC3Ⅱ／LC3 Ⅰ蛋白的表达情况来研究脑缺血再灌注损伤后海马自噬现象的变化情况。结果与假手术组相比,大鼠全脑缺血再灌注损伤后3h,海马区LC3Ⅱ／LC3Ⅰ蛋白的表达开始上调,在全脑缺血再灌注损伤后1d表达最强（P〈0．05）。结论大鼠全脑缺血再灌注损伤后海马LC3Ⅱ／LC3Ⅰ蛋白表达上调,表明脑缺血再灌注损伤后海马区域的自噬活性上调。     

富氢液多次给药对大鼠全脑缺血再灌注损伤的影响

目的 评价再灌注后多次给予富氢液对大鼠全脑缺血再灌注损伤的影响.方法 成年雄性SD大鼠,随机分为3组:假手术组(S组)、脑缺血再灌注组(I/R组)和富氢液多次给药组(H组).I/R组和H组采用四血管阻塞法制备全脑缺血再灌注损伤模型.H组大鼠于再灌注即刻及再灌注后2、4、6h分别腹腔注射0 6mmol/L富氢液5ml/kg.I/R组大鼠给予等容量的生理盐水.再灌注24h时,测定海马丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的含量;再灌注72h时,尼氏染色观察海马组织形态学变化.结果 与I/R组比较,H组海马组织MDA、TNF-α、IL-6含量降低(P＜0.05),尼氏染色见海马CA1区神经元、尼氏小体数目增多,细胞形态趋于正常.结论 再灌注后多次给予富氢液可减轻大鼠全脑缺血再灌注损伤,其机制与抑制脂质过氧化反应和炎性反应有关.     

短暂陛全脑缺血/再灌注损伤致大鼠海马组织BNIP3表达水平的改变

目的 观察全脑缺血/再灌注损伤后大鼠海马组织Bc12/腺病毒E1819kD相互作用蛋白3(BNIP3)表达水平的改变. 方法 取10只成年雄性Wistar大鼠,采用随机数字表法分为假手术组和全脑缺血/再灌注72h组,每组5只.通过尼氏染色检测缺血模型是否引起海马神经元死亡.另取14只成年雄性Wistar大鼠采用随机数字表法分为假手术组(4只)、全脑缺血/再灌注1h组(5只)、全脑缺血/再灌注6h组(5只).在全脑缺血/再灌注后,于对应时间点取三组大鼠海马组织制备蛋白样品.western blot检测各时间点BNIP3表达水平的改变. 结果 (1)与假手术组比较,全脑缺血/再灌注72 h组中海马CAI区神经元形态不规则.细胞皱缩.胞核碎裂消失,表明海马神经元死亡.(2)大鼠海马组织BNIP3单体表达水平在全脑缺血/再灌注后上调,与假手术组相比.全脑缺血/再灌注1 h组(2.543±0.473)与全脑缺血/再灌注6 h组(2.942±0.777)的海马组织BNIP3单体蛋白表达水平都升高,差异有统计学意义(P<0.05).但全脑缺血/再灌注1 h组与全脑缺血/再灌注6 h组间比较差异无统计学意义(P>0.05).BNIP3双聚体在各时间点表达水平差异无统计学意义(P>0.05). 结论 全脑缺血/再灌注损伤可以引起大鼠海马组织BNIP3单体表达水平上调.     

硫酸镁对兔全脑缺血后神经元凋亡及氨基酸影响的实验研究

目的 :观察镁对兔全脑缺血后神经元凋亡和氨基酸的影响。方法 :30只兔随机分为 3组 :对照组、缺血组和镁处理组。检测各组缺血再灌注 3d海马CA1区凋亡神经元密度及再灌注 30min海马氨基酸含量。结果 :镁处理组凋亡神经元密度显著低于缺血组 ;镁处理组海马天冬氨酸和甘氨酸含量显著低于缺血组 ,GABA含量显著高于缺血组。结论 :镁可抑制兔全脑缺血再灌注 3d海马神经元凋亡和抑制再灌注 30min海马天冬氨酸和甘氨酸的过度释放及GABA的耗竭     

葛根素对大鼠全脑缺血再灌注后学习记忆障碍保护作用及其机制的研究

目的 探讨葛根素对大鼠全脑缺血再灌注后学习记忆能力的影响及其机制。方法 采用四血管阻断法建立SD大鼠全脑缺血再灌注损伤模型，暗回避反应法测定学习记忆能力，并应用免疫组织化学法、原位末端标记法，检测大鼠全脑缺血再灌注海马CA，区的bcl-2阳性细胞数、凋亡细胞数的动态变化。结果 (1)与再灌注组相比，葛根素组大鼠潜伏期明显延长；(2)脑缺血再灌注后，海马CA1区bcl-2蛋白的表达随再灌注时间不同而变化，缺血20min后再灌注24h达高峰，葛根素组bcl2蛋白的表达于相应的时间点明显增多；(3)脑缺血再灌注后海马CA1区神经元凋亡损伤在再灌注72h损伤最重，葛根素组可减少相应时点神经细胞凋亡数。结论 葛根素对全脑缺血再灌注后大鼠学习记忆能力具有明显的改善作用，其作用机制可能与通过上调bcl-2基因表达从而抑制或延迟脑缺血再灌注后细胞凋亡有关。     

氯喹对大鼠全脑缺血/再灌注后学习能力的影响

目的观察氯喹对大鼠全脑缺血/再灌注后的学习能力的影响。方法采用Pulsinelli-Brierley 4动脉阻断方法制作大鼠全脑缺血/再灌注损伤模型,使用HE染色方法观察各组大鼠海马区的损伤情况,用Y型电迷宫检测各组大鼠的学习记忆能力。结果氯喹处理组大鼠海马区损伤较缺血损伤组大鼠减轻,氯喹处理组大鼠学习记忆能力强于缺血损伤组大鼠,但仍比假手术组大鼠差（P〈0.05）。结论氯喹可以通过减轻大鼠全脑缺血后海马损伤减轻学习记忆能力的损伤。     

亚硒酸钠对脑缺血再灌注损伤大鼠HIF-1α表达的影响

目的 研究亚硒酸钠对大鼠脑缺血再灌注损伤后海马神经细胞凋亡的保护作用及其对低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响.方法 48只SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组(模型组)及亚硒酸钠治疗组,每组16只,采用线栓法建立脑缺血再灌注模型,治疗组于再灌注后给予亚硒酸钠0.625 mg/(kg·d)腹腔注射7 d.各组大鼠经组织处理后用亚甲兰尼氏体染色及TUNEL染色,分别观察大鼠海马CA1区神经元存活和凋亡情况,Western Blot实验测定缺血组织HIF-1α水平的表达.结果 脑缺血再灌注损伤大鼠海马神经元数目明显减少,凋亡细胞明显增加(P<0.001),亚硒酸钠治疗后海马神经细胞存活数目明显增多,凋亡细胞明显减少(P<0.01);与假手术组比较,模型组大鼠海马HIF-1α水平表达明显增加(P<0.01),而经亚硒酸钠治疗后大鼠海马HIF-1α水平表达较模型组明显降低(P＜0.05).结论 亚硒酸钠可减轻脑缺血再灌注损伤大鼠神经元凋亡,同时能抑制组织HIF-1α的过度表达.     

托吡酯对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能的影响

目的分析托吡酯对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能的影响。方法随机双盲法将36只雄性SD大鼠分为3组,各12只,通过线栓法形成脑缺血再灌注模型,A组大鼠行假手术,B组大鼠行8mg/mL托吡酯治疗,A组、C组(脑缺血再灌注)则于同时间点给予10mL/kg生理盐水干预,比较B、C 2组大鼠神经功能评分,同时比较3组大鼠脑组织Glu、GABA、GABA/Glu水平。结果 A组大鼠无神经功能缺损症状发生,B组神经功能评分为(2.90±0.92)分,显著高于C组的(1.55±0.74)分,差异有统计学意义(P0.001)。3组大鼠Glu、GABA、GABA/Glu水平两两比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论托吡酯能明显促进脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能改善,可能是通过抑制Glu水平,增多GABA含量达到神经保护的目的。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后海马Bcl-2、Bax蛋白的表达

目的 探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后Bcl-2、Bax蛋白在海马表达的变化.方法 线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组化染色检测Bcl-2、Bax蛋白表达,应用TUNEL法检测海马区细胞凋亡.结果 缺血再灌注2h后海马神经元Bcl-2、Bax蛋白开始表达,Bcl-2蛋白12h达高峰,Bax蛋白12h～24h达高峰,之后开始下降.再灌注2h后海马凋亡细胞开始表达,随着再灌注时间的延长,其表达不断增加.Bcl-2/ Bax的比率在再灌注开始时升高,再灌注12h达高峰,随后开始下降.结论 凋亡是脑缺血再灌注损伤的重要形式之一,Bcl-2/ Bax的改变与缺血再灌注后海马的神经元存亡有关,缺血再灌注可导致海马神经元凋亡.     

大鼠脑缺血再灌注后海马区 cPLA2、Caspase-3的分布

目的　研究脑缺血再灌注后cPLA2 和Caspase 3在海马区的分布变化。方法　使用大鼠局灶性脑缺血再灌注模型 ,采用免疫组化方法 (SABC法 )。结果　脑缺血 2h再灌注 2h后即有cPLA2 和Caspase 3阳性表达 ;再灌注 2 4h后表达达到高峰。结论　大鼠脑缺血再灌后后 ,cPLA2 在损伤过程中起到非常重要的作用 ,同时Caspase 3水解cPLA2 ,对cPLA2 酶活性起到调节作用 ,它们共同参与海马区神经元的损伤。     

γ-氨基丁酸对慢性脑缺血致血管性痴呆大鼠学习记忆能力的影响

目的观察γ-氨基丁酸（GABA）对慢性脑缺血致血管性痴呆（VD）大鼠学习记忆能力及海马CA1区神经元形态学的影响。方法将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、GABA组,采用双侧颈总动脉永久性结扎法建立VD模型。GABA组术后腹腔注射GABA0.5g.kg-1.d-1,连续注射60d;用Morris水迷宫实验检测大鼠空间学习记忆能力;Nissl染色观察大鼠海马CA1区神经元形态学变化。结果 GABA能明显改善VD大鼠学习记忆能力,也能减轻海马CA1区神经元损伤。结论 GABA能改善慢性脑缺血致VD大鼠的学习记忆能力,减轻海马神经元损伤可能是其机制之一。     

大鼠前脑不全缺血再灌注后海马区β-淀粉样蛋白的表达

目的　观察大鼠不全性脑缺血再灌注损伤后海马区神经细胞死亡及β 淀粉样蛋白 (Aβ)的表达。方法　应用HE和免疫组化染色方法观察大鼠 2条血管闭塞致大脑不全性缺血再灌注后 6h及 2、3、7、14和 35d不同时间海马区神经细胞死亡和Aβ的表达。 结果　大鼠不全性脑缺血再灌注损伤 3d后 ,海马CA1区神经细胞发生迟发性死亡 ;再灌注 2d后 ,Aβ的表达开始增强 (A值为 0 0 82±0 0 11) ;再灌注 7d达到高峰 (A值为 0 175± 0 0 2 4) ,35d时消失 (A值为 0 0 12± 0 0 0 3)。结论　大鼠短暂性不全性脑缺血再灌注损伤后 ,海马CA1区神经细胞发生迟发性死亡 ,同时Aβ表达上调 ,提示Aβ可能在再灌注损伤后海马CA1区神经细胞迟发性死亡过程中起重要作用。     

慢性糖尿病大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后海马区Caspase-3和β-淀粉样蛋白的表达意义

目的 观察天冬酰胺内肽酶-3(Caspase-3)和β-淀粉样蛋白(Aβ)在慢性糖尿病(cDM)大鼠脑缺血再灌注海马神经元损伤中的表达意义.方法 采用链脲佐菌素(STZ)诱导和线栓法制备慢性糖尿病(cDM)和大脑中动脉闭塞模型(MCAO),分别在各时间点(1d、2d、3d、4d、5d、7d),应用HE染色和免疫组化方法比较慢性糖尿病脑缺血再灌注组(简称cDM组)与缺血再灌注组海马神经元缺失、Caspase-3和Aβ免疫组化阳性细胞数变化.结果 cDM组(慢性糖尿病脑缺血再灌注组)海马区神经元缺失,于2d开始出现,4d达高峰,7d减少,而且cDM组Caspase-3和Aβ表达上调,均在2d开始出现,4d达高峰,7d减少,在各时间点分别明显高于缺血再灌注组,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论慢性糖尿病大鼠脑缺血再灌注损伤后海马CA1区神经元发生严重缺失,Caspase-3和Aβ明显上调提示Caspase-3介导的细胞凋亡机制和Aβ神经毒性作用可能是慢性糖尿病加重脑缺血再灌注海马神经元损伤机制之一.     

大鼠脑缺血再灌注后大脑海马区自噬的研究

目的检测大鼠脑缺血再灌注后海马神经细胞损伤及自噬变化,并比较海马CA_1及CA_3区的自噬情况。方法用线栓法制作大鼠脑局部缺血再灌注模型,实验动物随机分为:对照组(Control组)、假手术组(Sham组)和大脑中动脉栓塞再灌注组(MCAO组)。HE染色检测大鼠海马神经细胞损伤。透射电镜下观察海马神经元内自噬小体。免疫荧光法检测自噬相关蛋白LC3、Beclin-1的表达水平。结果与Control组及Sham组比较,大鼠脑缺血再灌注后,海马神经细胞损伤严重;海马神经元内有自噬体形成;自噬标记物LC3、Beclin-1蛋白表达水平显著增加,且CA_1区的表达量明显高于CA_3区(差异均具有统计学意义P0.05)。结论脑缺血再灌注可激活海马神经细胞内的自噬,并进一步引起细胞损伤;模型动物海马CA_1区的自噬水平显著高于CA_3区,暗示CA_1区对脑缺血损伤具有较高的敏感度。     

脑缺血再灌注海马组织与正常海马组织腺苷脱氨酶性质的比较

目的 探讨脑缺血再灌注海马组织腺苷脱氨酶与正常海马组织腺苷脱氨酶性质的差别。方法 以测氨法、考马斯蓝染料法、caiyong SDS—PAGE、聚丙烯酰胺凝胶电泳、DNS—CI法测定再灌注海马组织腺苷脱氨酶与正常海马组织腺苷脱氨酶的酶活性、蛋白含量、分子量测、N-末端氨基酸。结果 正常大鼠及假手术大鼠脑海马组织、再灌注脑海马组织ADA的热稳定性、分子量、等电点、N-末端氨基酸、免疫原性及对巯基修饰的敏感性性质基本相似。再灌注脑海马组织巯基修饰的敏感性、热稳定性、酶活性则与正常大鼠及假手术大鼠脑海马组织ADA不同。正常大鼠及假手术大鼠脑海马组织ADA在低浓度PCMB时即被强烈抑制，DTT可使被抑制的酶活性得到部分恢复，说明巯基是正常大鼠．假手术大鼠海马组织ADA活性中心必需的基团。而脑缺血再灌注海马组织ADA在低浓度PC—MB活性无明明显变化，这说明再灌海马组织ADA中巯基不是其活性中心的必需基团。热稳定性测定结果表明：脑缺血再灌注海马组织ADA热稳定性较正常大鼠．假手术大鼠海马组织ADA热稳定性强。脑缺血再灌注海马组织ADA活性较正常大鼠。假手术大鼠海马组织ADA活性增强。ADA活性增强可能与热稳定性提高和活化基团不同有关。结论 脑缺血再灌注海马组织腺苷脱氨酶性质发生了改变，这些ADA酶性质的变化可能影响腺苷在脑缺血再灌注损伤中的作用。     

乌司他丁对脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障通透性和MMP-9活性的影响

目的 观察乌司他丁对大鼠局灶脑缺血再灌注损伤后血脑屏障(BBB)通透性和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)活性的影响.方法 采用栓线法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,腹腔注射乌司他丁,于脑缺血再灌注后6h、24h、48h、72h处死大鼠.通过测定损伤侧脑组织中伊文思蓝(EB)含鼍来观察BBB通透性的改变,用明胶酶谱法检测同侧脑部MMP-9活性变化.结果 脑缺血再灌注损伤后,大鼠EB含量增加,24h最明显;MMP-9活性明显升高,48h达高峰.乌司他丁处理组EB含量及MMP-9活性水平明显低于脑缺血再灌注组(P<0.05).结论 乌司他丁可抑制脑缺血再灌注后大鼠MMP-9的活性,减轻BBB通透性的破坏.     

大鼠全脑缺血再灌注损伤后海马CA1区神经元酪氨酸羟化酶和多巴胺-β-羟化酶表达的变化

目的　研究大鼠全脑缺血再灌注损伤后酪氨酸羟化酶 (TH)和多巴胺 β 羟化酶 (DβH)表达的改变及意义。方法　利用改良四血管闭塞法 ,建立大鼠全脑缺血模型。于缺血再灌注后 1,3,5d断头取脑 ,行免疫组化染色 ,在光镜下观察海马CA1区神经元TH及DβH表达的变化 ,并计数海马CA1区正常神经元。结果　全脑缺血再灌注后 1d ,TH及DβH的表达呈阴性 ,海马CA1区神经元未见显著的病理形态学改变 ;全脑缺血再灌注后 3d ,TH及DβH呈阳性表达 ,海马CA1区可见部分神经元死亡 ;全脑缺血再灌注后 5d ,TH及DβH呈明显阳性表达 ,海马CA1区可见大部分神经元死亡。结论　全脑缺血再灌注后 ,由于TH及DβH异常表达 ,使得儿茶酚胺生物合成增加 ,这可能是短暂性脑缺血损伤的机理之一。