一种简捷人胚纤维母细胞非S期DNA合成检测系统的建立

本研究将简单的盖玻片法和人胚纤维母细胞(HEF)结合起来,建立一种简敏感快捷的UQS方法。也即利用HEF在盖玻片上贴壁生长至细胞触合,经含0.5％小牛血清培养基同步培养24h和10mM羟基脲预处理1h后,以每片盖玻片为单位进行药物处理,加入3~H-TdR培养4h后,盖玻片经8％三氯醋酸和甲醇各处理15分钟完成细胞收获,以每片盖玻片为单位作液闪放射活度计数。本系统利用盖玻片法大大简化了药物处理和细胞收获步骤,使一次完成多样本处理成为可能。     

香烟烟雾提取物对人呼吸道上皮细胞DNA损伤和凋亡的影响

背景与目的:香烟烟雾可以致多种细胞发生DNA损伤已有报道证实。本研究旨在进一步阐明香烟烟雾提取物(cigarettesmokeextract,CSE)作用于正常人类支气管上皮细胞系(normalhumanbronchialepithelialcells,NHBE)和肺腺癌细胞系SPC-A1后引起的DNA损伤和凋亡情况。方法:不同浓度的CSE作用于NHBE和SPC-A1细胞,用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测两种细胞活性。荧光标记的磷酸化H2AX组蛋白(γ-H2AX)抗体特异性标记细胞核内DNA双链断裂(DNAdouble-strandbreaks,DSBs)处的γ-H2AX,然后用流式细胞仪定量检测并分析DNA损伤。用免疫印迹检测γ-H2AX表达。同时,亚G1峰法(SubG1peak)和AnnexinⅤ-FITC/碘化丙啶双染色流式细胞术检测CSE诱导的细胞凋亡。用激光共聚焦显微镜观察细胞损伤和凋亡形态学变化。结果:MTT结果显示,随CSE浓度和作用时间增加,细胞活性均逐渐降低。CSE可引起细胞DNA双链断裂,γ-H2AX最大值在作用后4h左右,然后逐渐降低。DNA损伤后平均12h可以出现凋亡。另外,激光共聚焦显微镜观察到两种细胞内的γ-H2AX量在细胞受到CSE刺激后快速大量的积聚,呈现典型细胞损伤的形态学变化,较为明显的凋亡形态学特征4h后方可出现。结论:CSE能直接引起NHBE和SPC-A1细胞的DNA损伤和凋亡,且存在着浓度和时间依赖关系。     

端粒酶在人胚肾上皮细胞转化中的作用

目的:利用原代人胚肾上皮细胞转化模型阐明端粒酶在细胞癌变过程中的作用。方法:用逆转录病毒介导的基因导入法,使人端粒酶催化亚基(humantelomerasecatalyticsubunit,hTERT)、HRas癌基因、猿猴病毒40(simianvirus40,SV40)编码的早期抗原在原代人胚肾上皮细胞中稳定地表达,观察细胞的生长特性、染色体畸变率以及细胞转化特征。结果:端粒酶的激活虽然能延长细胞的寿命,但不能使细胞永生化。如果细胞同时表达端粒酶和SV40编码的大T抗原(largeTantigen,LT),细胞就能获得永生化。在此永生化细胞株中导入HRas癌基因以及SV40编码的小T抗原(smallTantigen,ST),细胞发生恶性转化,表现为在软琼脂上形成克隆并在裸鼠皮下形成肿瘤。与原代细胞相比,永生化细胞株的染色体畸变率无改变,而恶性转化细胞的畸变率明显增加。此外在转化细胞和几种肿瘤细胞中表达阻抑人端粒酶的特异性siRNA,能显著地抑制肿瘤细胞的生长、诱导细胞凋亡并减少软琼脂上形成的克隆数目。结论:细胞永生化是癌变过程的必要阶段,端粒酶的激活不仅是细胞永生化的重要环节,而且在维持肿瘤细胞生长中起重要的作用。     

简化人全血细胞DNA非程序合成检测化学致癌物研究

细胞的DNA非程序合成(简称UDS)作为一种反映DNA修复合成的指标,已广泛应用于研究化学物质和物理因子的细胞遗传毒理作用,并已被认为可用作致癌物的快速筛选。过去,研究者曾采用体外培养的人外周血淋巴细胞、人成纤维细胞、HeLa细胞、大鼠肝原代培养细胞等,成功地显示了由致癌性化合物所诱导的UDS,其中人外周血淋巴细胞的UDS,由于其取材方便,已在国内许多实验室建立。但以往的方法,常用PHA激活淋巴细胞,需时较长,操作较繁琐。本     

TPA对EB病毒体外转化人胚鼻咽上皮细胞的影响

ＴＰＡ对ＥＢ病毒体外转化人胚鼻咽上皮细胞的影响贺智敏，陈主初，邵细芸，何春梅（湖南医科大学肿瘤研究所长沙４１００７８）流行病学资料显示：鼻咽癌（ＮＰＣ）地理区域分布与含ＴＰＡ植物分布明显相关。ＴＰＡ属佛波醇二酯（ＰｈｏｒｂｏｌＥｓｔｅｒ）类，是肿瘤高...     

交链孢酚单甲醚诱发人胚肺2BS细胞程序外DNA合成的研究

食管癌高发区林县粮食中的优势污染菌互隔交链孢酶能够诱发动物前胃和食管乳头状瘤,为进一步了解其主要产物交链孢酚单甲醚(AME)对人类细胞DNA的作用,我们应用程序外DNA合成(UDS)的放射自显影显示法测定了AME对人胚肺2BS细胞的诱变性。     

人胃粘膜上皮细胞DNA修复能力与胃癌高患病率研究

 本工作以体外短期培养的人胃粘膜上皮细胞为材料,采用羟灰石柱层析及液体闪烁计数的方法,分析了49例福建省胃癌高发区及17例胃癌低发区人群胃粘膜上皮细胞DNA修复能力,发现胃癌高发区人群组胃粘膜上皮细胞DNA修复能力显著低于低发区人群组。     

化学致癌物和紫外线诱发人外周血淋巴细胞非程序DNA合成的研究

 正常人外周血淋巴细胞处于细胞周期G₀期,很少有丝分裂、DNA半保留复制合成、具有DNA修复能力和一定的代谢活化前致癌物的能力,适合于DNA损伤/修复的测定。     

鱼露促进小鼠前胃上皮细胞癌变及DNA合成的研究

我们首先报导广东汕头食管癌高发区的民用鱼露有致染色体畸变的作用,并阐明肝微粒体酶有明显的促进性影响,说明鱼露须经体内代谢才能显示其致诱变的作用。鱼露在体内对食管及前胃鳞状上皮是否有致癌及促癌作用,及对上皮细胞DNA合成情况均不了解,本文为探讨此问题,进行以下研究。     

肝癌高发区饮用塘水浓缩物诱发人肝细胞非程序DNA合成的研究

利用人原代肝细胞非程序ＤＮＡ合成试验（ＵＤＳ）对广西某肝癌高发区的居民饮用塘水浓缩物进行检测，结果发现：塘水浓缩物的浓度在０．１０ｍｇ／ｍｌ－０．５０ｍｇ／ｍｌ时，可诱导人肝细胞ＵＤＳ反应，对ＤＮＡ具有明显的损伤作用，且显示出一定的剂量一效应关系，表明塘水中存在有基因毒性物质，提示该地区居民的肝癌高发与长期饮用糖水有关。     

食管癌高发区青年人食管上皮细胞DNA合成与可疑致癌因素的关系

本文利用１９８８年在一组青年人群食管炎患病率与有关因素调查基础上，随机观察了３８例食管上皮的３Ｈ－ＴｄＲ标记，将食管上皮细胞标记指数（ＬＩ）分别与性别、年龄、家族史、吸烟、正常食管与食管炎及饮食中动物蛋白和水果蔬菜的数量等方面进行了相关性研究，结果显示除食用动物蛋白外，ＬＩ与上述因素均呈显著性相关。食管上皮细胞的３Ｈ－ＴｄＲ的标记方法，在进一步证实食管炎与食管癌关系的研究方面，是一个可靠的生物学中间终末指标之一。     

几种金属化合物在人胚细胞DNA修复中的作用

在建立人胚纤维母细胞(HEF)非S期DNA合成检测系统的基础上,我们研究了四种金属元素(锗-132,钼酸钠,亚砷酸钠和硫酸镍)对DNA修复合成的影响。MMS和UV诱发UDS反应分别代表2类不同修复类型,即“短补该修复”和“长补该修复”、本研究利用MMS和UV作为HF-DNA修复合成诱导剂来研这四种金属化合物对DNA修复合成的影响。每种金属化合物,在不同剂量水平、不同时点加入实验系统。实验结果表明:在排除锗-132与UV有协同DNA毒作用     

α粒子诱发人支气管上皮细胞癌变的DNA修复基因表达谱研究

背景与目的 :DNA修复系统在细胞基因组完整性维持中发挥重要作用 ,本研究探讨α粒子辐射诱发人支气管上皮细胞癌变的DNA修复基因表达谱变化。 材料与方法 :采用Cy5和Cy3分别标记的癌变细胞BERP35T4和亲本细胞BEP2D的cDNA探针与DNA修复基因cDNA微矩阵杂交、ScanArray3000扫描仪扫描和ImaGene3.0软件分析比较基因表达差异。 结果 :分析比较了人支气管上皮细胞癌变前(BEP2D)和后(BERP35T4)126个DNA修复相关基因的表达谱 ,发现细胞癌变后有10个修复基因的表达降低 ,这些基因分别参与DNA链断裂修复、核苷酸切除修复和碱基切除修复反应 ,3个基因(DNA_PKcs、SMUG和RAD18)表达上调。结论 :细胞DNA修复表达改变是辐射诱发细胞恶性转化的机制之一。     

鼻咽癌患者外周淋巴细胞非程序DNA合成的研究

鼻咽癌患者外周淋巴细胞经紫外线或化学致癌剂N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)处理后,其非程序DNA合成(UDS)值比健康人的为低;三个鼻咽癌高发家系中,鼻咽癌患者及其血缘亲属的UDS值亦比对照者的为低,而其非血缘亲属与对照者之间的UDS值则无统计学的显著差异。这结果表明鼻咽癌患者淋巴细胞DNA损伤后的修复功能有缺陷,这一缺陷可能与遗传易感因素有关。     

肝癌家系外周血淋巴细胞DNA非程序合成的研究

Levels of unscheduled DNA synthesis (UDS) of peripheral blood lymphocytes were measured by liquid scintigraphy in 23 patients with hepatocellular carcinoma (HCC), 42 first-degree relatives of HCC, 17 carriers of HBsAg, and 47 controls in order to evaluate the effects of HN2.HCl on the damage and repair of cell DNA, the effects of genetic susceptibility on the development of HCC, and the relationship between genetic susceptibility and hepatitis B virus (HBV) infection. The results were: 1. UDSs were significantly increased in the peripheral blood lymphocytes from patients with HCC and their first-degree relatives, and higher than those of the controls (P less than 0.005). 2. UDS in HBsAg carriers was significantly higher than that of the controls (P less than 0.05), 3. The difference of UDS was also remarkable between the HBsAg-negative patients with HCC and their first-degree relatives and the controls (P less than 0.01). These results suggest that the development of HCC might be due to the combined effects of environmental factors and genetic susceptibility. As an environmental factor, HBV infection might play role in hepato-carcinogenesis in individuals with or without a genetic background.     

β—胡萝卜素对人淋巴细胞DNA合成的影响

β—胡萝卜素(β—C)对肿瘤防治作用的研究一直为学者所关注。β—胡萝卜素是植物中含量较高的一种类胡萝卜素,广泛存在于自然界中,没有任何毒副作用并具有食用的安全性。有文献报道,它可以明显地预防紫外线、γ射线及χ射线对机体造成的损伤,对吸烟引起的肺癌具有潜在的预防作用,所以目前对β—胡萝卜素生物学效应的研究日益增多。但其对人体淋巴细胞DNA合成的影响国内外报道尚不多见,本文仅就其在体外对胎儿胸腺和脾脏淋巴细胞的增殖作用进行探讨。     

亚硒酸钠和维甲酸对MNNG诱导人全血白细胞非程序DNA合成的影响

本文应用非程序ＤＮＡ合成（ＵＤＳ）试验，观察了亚硒酸钠（Ｎａ２ＳｅＯ３）和维甲酸（ＲＡ）单独和联合作用对致癌物ＭＮＮＧ诱发的人全血白细胞ＤＮＡ损伤的影响。结果表明，Ｎａ２ＳｅＯ３和ＲＡ均具有抗诱变作用；当Ｎａ２ＳｅＯ３（０．１μｇ／ｍｌ）和ＲＡ（０．１μｇ／ｍｌ）联合作用时，也可明显降低ＭＮＮＧ诱发的ＵＤＳ值，其联合抑制作用大于Ｎａ２ＳｅＯ３的单独作用。实验结果还显示，Ｎａ２ＳｅＯ３作为抗癌剂，它在高剂量时又呈现遗传毒性。