腺病毒介导的PML基因对银屑病样小鼠模型的作用

目的研究腺病毒介导的PML基因对银屑病样小鼠模型的作用。方法采用小鼠阴道上皮及鼠尾鳞片表皮实验模型,观
察PML基因重组腺病毒乳膏外用对鼠尾鳞片及阴道上皮细胞分裂的影响。结果PML基因重组腺病毒乳膏具有显著抑制阴
道上皮细胞有丝分裂、促进表皮颗粒层生成的作用。结论PML基因对银屑病样小鼠模型的作用可能与促进表皮细胞正常分
化和抑制表皮细胞增殖有关,PML基因局部外用有望用于银屑病等角化异常性疾病的治疗。
     

大鼠SOCS3腺病毒的构建及鉴定

目的:构建大鼠细胞因子信号途径抑制物3(SOCS3)腺病毒载体,并对腺病毒感染后的HEK293细胞的SOCS3表达情况进行观察。方法:提取大鼠腹腔巨噬细胞中总RNA,克隆出SOCS3基因,亚克隆于含有GFP报告基因的穿梭质粒pAdtrack-CMV,通过pAdeasy-1腺病毒系统将含有目的基因的穿梭质粒和骨架质粒共转入BJ5183感受态细胞。线性化重组的病毒转染入HEK293细胞,并在其中对重组的腺病毒进行包装及扩增。结果:构建的大鼠SOCS3腺病毒能够高效率的感染HEK293细胞,mRNA和蛋白水平均证实SOCS3表达显著增加。结论:大鼠SOCS3腺病毒载体构建成功,可用于体内转染或细胞试验的进一步研究。     

重组腺病毒介导的FLT3配体和阿霉素联合治疗小鼠肝癌

目的:将重组腺病毒介导的FLT3配体(FLT3 ligand,FL)与阿霉素(adriamycin,ADM)联合治疗小鼠肝癌,探索基因治疗和化疗相结合治疗肿瘤的新方法。方法:构建携带鼠FL的重组腺病毒载体(AdmFL),单独用其或ADM以及两者联用对实验性肝癌小鼠进行治疗,观察抗肿瘤效果。结果:(1)FL+ADM组小鼠肝癌生长抑制率最大值为56.5％,明显高于ADM组和FL组的27.5％和26.6％(P<0.01);(2)FL+ADM组小鼠早期死亡率为8.3％,明显低于ADM组的37.5％(P<0.01);FL十ADM组小鼠长期生存率为86.4％,明显高于ADM组和FL组的50.0％和41.5％(P<0.01)。结论:(1)FL和ADM治疗小鼠肝癌具有协同作用,FL可显著增强化疗效果;(2)FL能明显降低化疗不良反应。     

腺病毒介导的小鼠Flt3配体抗肝癌基因治疗的研究

目的　观察腺病毒载体介导的小鼠Flt3配体 (mFL)对小鼠肝癌的基因治疗效果。方法　腺病毒体外感染小鼠肝癌细胞株Hepa1 6 ,4 8h后 ,用绿色荧光蛋白的表达检测感染的效率 ,ELISA检测培养上清中mFL的表达量 ,每天细胞计数 (连续 14d)观察细胞的生长曲线。建立小鼠肝癌模型 ,肿瘤局部分别单次注射 1× 10 9表达形成单位的mFL重组腺病毒、空载体对照和PBS ,观察肿瘤大小和小鼠生存期。治疗 2 0d后 ,取肿瘤消退小鼠的脾细胞过继至正常小鼠 ,3d后接种Hepa1 6细胞 ,观察肿瘤大小 ;治疗 38d后 ,再接种Hepa1 6细胞或EL4细胞对照于肿瘤消退小鼠原接种部位的对侧 ,观察肿瘤大小并作统计学处理。结果　腺病毒体外能有效地感染靶细胞Hepa1 6 ,培养上清中mFL表达量为 80 .5ng·10 -6·2 4h-1± 7.3ng·10 -6·2 4h-1,感染后Hepa1 6的生长未受到明显抑制。瘤体内注射mFL重组腺病毒导致 90 %的小鼠肿瘤消退 ,并显著延长小鼠生存期 ;脾细胞过继能保护正常小鼠免于Hepa1 6细胞的攻击 ;再接种Hepa1 6细胞于肿瘤消退小鼠 ,未见肿瘤生长 ,而再接种的EL4细胞呈渐进性生长 ,与对照组无显著差异。结论　腺病毒介导的小鼠Flt3配体的基因治疗导致肿瘤消退 ,并能激发可过继的、特异性免疫保护反应 ,可能成为有效的肝癌基因治疗的候     

复方银屑颗粒治疗小鼠银屑病模型的实验研究

目的：探讨复方银屑颗粒对小鼠银屑病模型的治疗作用。方法：小鼠灌服给予复方银屑颗粒后,观察药物对小鼠阴道上皮细胞有丝分裂以及鼠尾鳞片表皮颗粒细胞数的变化。结果：复方银屑颗粒能明显降低小鼠阴道上皮细胞有丝分裂、促进鼠尾表皮颗粒细胞形成。结论：复方银屑颗粒对小鼠银屑病模型有较好的治疗作用。     

腺病毒介导的ING4诱导人前列腺癌细胞凋亡的实验研究

1研究背景前列腺癌是男性生殖系统常见的恶性肿瘤,其发病率及病死率都很高,目前首选的治疗方法仍然是手术治疗,但效果尚不理想。基因治疗作为肿瘤治疗的一种新模式,越来越受到人们的重视。     

腺病毒介导人血管内皮细胞生长因子基因感染NIH3T3细胞的实验研究

目的:探讨腺病毒介导人血管内皮细胞生长因子(hVEGF)基因感染NIH3T3细胞后目的基因表达情况及其对细胞增殖分化的影响,并观察体内移植后的表达情况及其血管生成效应.方法:构建含hVEGF基因重组腺病毒Ad.hVEGF,体外感染NIH3T3细胞,采用荧光显微镜和流式细胞术检测其转染效果和转染率,采用免疫组化、RT-PCR和ELISA法分别检测转染后的NIH3T3细胞VEGF的表达情况.将转染后的NIH3T3细胞移植于小鼠背部皮肤缺损模型上,1周后取创面覆盖的脱细胞真皮组织标本,免疫组化检测组织VEGF的表达,并行组织新生血管计数.结果:携带hVEGF基因的重组腺病毒对于NIH3T3细胞具有较高的转染效率,转染效率与病毒感染复制数(multiplicities of infection,MOI)具有量效关系.MOI为100倍时,转染效率达95%.RT-PCR和免疫组化检测到,Ad.hVEGF感染NIH3T3细胞24 h后即可在基因和蛋白质水平表达,ELISA法检测到VEGF第3日表达分泌较高,7 d时达到表达高峰(1052 pg/ml),13 d后仍可检测到VEGF的表达.2周内MTT法动态检测D值,转染组细胞与未转染组细胞比较无显著性差异(P＞0.05).转染细胞体内种植后在组织中亦可明显表达VEGF,实验组新生血管数显著高于对照组(P＜0.01).结论:腺病毒介导的VEGF基因可有效转染NIH3T3细胞,体内外均可有效表达目的基因,并可促进移植组织血管新生.     

RNAi介导的SOCS3基因沉默对高脂肥胖大鼠瘦素抵抗的影响

目的研究RNA干扰(RNAi)介导的细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)基因沉默对高脂肥胖大鼠瘦素抵抗的影响。方法选用5周的SD大鼠60只,随机分为3组,实验组:下丘脑注射SOCS3基因RNA干扰慢病毒(LV-shSOCS3),高脂饲料喂养;阴性组:下丘脑注射阴性序列慢病毒(LV-negtive),高脂饲料喂养;对照组:下丘脑注射生理盐水,高脂饲料喂养。饲养8周末,检测血总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇,放射免疫法检测血清瘦素,利用荧光实时定量PCR(real-time PCR)技术检测各组下丘脑内SOCS3和瘦素受体(OB-Rb)的mRNA表达水平。结果实验组体重、瘦素、三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇低于阴性组和对照组(P<0.05)。实验组下丘脑的SOCS3mRNA水平低于阴性组和对照组(P<0.05)。实验组下丘脑的OB-RbmRNA水平高于阴性组和对照组(P<0.05)。而阴性组和对照组比较无差异(P>0.05)。结论下调SOCS3基因可以减轻高脂肥胖大鼠瘦素抵抗,对肥胖症可能有预防和治疗作用。     

细胞因子信号转导抑制因子1和3在脓毒症小鼠脾脏中表达量的变化

目的探讨细胞因子信号转导抑制因子-1和3(SOCS1和SOCS3)的含量在脓毒症小鼠脾脏中的变化情况以及可能的作用机制。方法采用盲肠结扎并穿刺术(CLP)制作脓毒症模型,提取脾脏组织的RNA及蛋白质,采用RT-PCR测定组织中SOCS1和SOCS3 mRNA的相对含量,用免疫印迹方法测定组织中SOCS1和SOCS3相对蛋白含量,用SPSS统计软件测定上述指标之间的变化关系。结果脓毒症手术后SOCS1在脾脏中仅检测到基因表达,随时间逐渐上升,并一直保持高位;SOCS3在脾脏内的基因表达和蛋白表达在术后2h迅速升高,至12h达峰值(P<0.05);统计分析发现SOCS1和SOCS3的基因表达呈明显正相关性(P<0.05)。结论 CLP导致的脓毒症可以诱导SOCS1和SOCS3在脾脏中表达增多,提示SOCS1和SOCS3在脓毒症出现后的免疫变化中有重要作用,可能可利用它们对脓毒症进行干预,以改善脓毒症的预后。     

SOCS2、SOCS5 在儿童过敏性紫癜中的表达及其意义

目的 探讨细胞因子信号传导抑制蛋白2（SOCS2）和SOCS5 在儿童过敏性紫癜（HSP）中的表达及其意义。方法 应用逆转录聚合酶链反应检测HSP 患儿（36 例）和正常健康对照儿童（17 例）外周血单个核细胞中SOCS2 和SOCS5 mRNA 表达水平。结果 HSP 患儿SOCS2 和SOCS5 mRNA 表达水平高于对照儿童（P <0.05）。混合型HSP 患儿SOCS2 和SOCS5 mRNA 表达水平较单纯型患儿升高（P <0.05）。HSP 患儿SOCS2 和SOCS5 mRNA 表达水平无性别差异（P >0.05）。结论 SOCS2、SOCS5 可能参与儿童HSP 的发病。     

支气管哮喘小鼠肺组织SOCS-3 mRNA和Muc5ac蛋白的表达及其关系的研究

目的探讨支气管哮喘(以下简称哮喘)小鼠肺组织细胞因子信号抑制因子-3(SOCS-3)mRNA和粘蛋白基因Muc5ac蛋白的表达及其二者的相关性.方法制作小鼠哮喘模型,应用RT-PCR法测定哮喘组及对照组肺组织SOCS-3 mRNA的表达,应用免疫组织化学法测定两组气道粘蛋白基因Muc5ac蛋白的表达.结果小鼠哮喘组肺组织SOCS-3 mRNA的表达较正常组明显升高,两组分别为(0.9045±0.01444和(0.5010±0.0206),差异显著(P＜0.01);小鼠哮喘组气道粘蛋白基因Muc5ac蛋白的表达较对照组明显增高,两组分别为(0.1930±0.0047)和(0.1186±0.0061),差异显著(P＜0.01);哮喘组小鼠肺组织SOCS-3 mRNA与气道Muc5ac蛋白呈显著的直线正相关(p＜0.01).结论哮喘时肺组织SOCS-3 mRNA表达升高可能与气道Muc5ac蛋白的表达升高有关,从而促进了气道黏液过度分泌.     

胃癌中p-Stat3活化和SOCS3表达的临床病理意义及其对预后的影响

目的：探讨胃癌及癌旁组织中信号传导与转录激活因子3（Stat3）的活化及细胞因子信号转导抑制蛋白3（SOCS3）的表达水平对胃癌的发生、发展以及预后的影响。方法应用免疫组织化学Envision法检测53例胃癌以及其中27例相应癌旁组织中活化的Stat3（p‐Stat3）的活化及SOCS3的表达水平,并结合患者的临床病理及随访资料进行分析。结果胃癌组织细胞核中p‐Stat3的活化水平显著高于癌旁组织,细胞质中SOCS3的阳性表达明显低于非癌组织（P＜0．05）。胃癌组织中p‐Stat3活化水平与肿瘤浸润深度、分化程度和TNM分期呈明显正相关,SOCS3的表达与肿瘤浸润深度、TNM分期及淋巴结转移存在明显的负相关（P＜0．05）。胃癌中p‐Stat3活化水平与SOCS3表达水平呈明显负相关（r＝－0．492,P＜0．05）。Kaplan‐Meier生存分析结果显示,p‐Stat3的活化水平与患者生存率呈显著负相关（χ2＝－5．05,P＜0．05）;相反,SOCS3表达水平则与患者生存率呈显著正相关（χ2＝10．852,P＜0．05）。结论p‐Stat3水平增高及负调节分子SOCS3的表达减少可能参与胃癌的发生、发展,可为评估胃癌预后的潜在临床指标。     

细胞因子信号转导抑制因子在内毒素耐受大鼠肝组织中的作用

目的 研究内毒素耐受(endotoxin tolerance,ETT)及正常大鼠接受D-胺基半乳糖(D-galactosamine,D-GaiN)/脂多糖(lipopolysacharide,LPS)刺激后肝组织细胞因子信号转导抑制因子(SOCSs)基因表达的异同,探讨内毒素耐受的可能机制.方法 雄性SD大鼠随机分为急性肝功能衰竭模型组(acute liver failure,ALF组)和内毒素耐受组(ETT组).ETT组及ALF组先分别以0.1mg/kg LPS和生理盐水腹腔注射,每日1次,连续5次,于LPS或生理盐水第5次注射24 h后同时腹腔注射D-GaIN 800 ms/kg和LPS 8μg/只,分别在注射D-GaIN/LPS前(0 h)和注射后2.6、12、24和48 h 6个时间点留取大鼠血及肝脏标本.HE染色及透射电镜下观察肝组织病理及超微结构变化;RT-PCR法检测动物肝组织中SOCS1和SOCS3 mRNA表达;采用鲎试剂基质显色法测定血清内毒素水平,ELISA法检测TNF-α水平.结果 ETT组大鼠肝组织病理改变及超微结构变化明显轻于ALF组,其血清内毒素、TNF-α水平明显低于ALF组.内毒素:6 h组分别为1.11±0.38和0.74±0.22,24h组分别为1.12±0.24和0.86±0.21,均P<0.05,12 h组分别为1.88±0.35和0.62±0.16,48 h组分别为1.10±0.13和0.84±0.19,均P<0.01.TNF-α:6 h组分别为86.9±12.6和70.0±12.8,P<0.05,12 h组分别为77.0±18.1和48.8 ±12.8,24 h组分别为63.8±9.2和39.1±5.7,48 h组分别为53.2±8.3和38.2±9.9,均P<0.01.ALF组大鼠肝组织SOCS1和SOCS3 mRNA表达均明显上调,造模后2 h即明显高于对照组,分别于12 h、6 h达峰值,ETT组的SOCS1和SOCS3 mRNA表达较模型组明显上升.SOCS1:6 h组分别为0.955±0.186和1.349±0.390,48 h组分别为0.766±0.145和0.970±0.205,均P<0.05,2 h组分别为0.554±0.164和0.841±0.175,12 h组分别为1.130±0.181和1.888±0.573,24 h组分别为0.990±0.212和1.550±0.439,均P<0.01.SOCS3:6h组分别为0.914±0.054和1.039±0.109,12 h组分别为0.781±0.044和0.863±0.063,均P<0.05,2 h组分别为0.681±0.139和0.898±0.058,24 h组分别为0.700±0.065和0.811±0.055,均P<0.01.结论 内毒素耐受时,大剂量的D-GalN和LPS腹腔注射引起的肝脏损害减轻,内毒素、TNF-α释放减少,可能与肝组织SOCS1、SOCS3的高表达有关.     

SOCS3在早期流产患者蜕膜及绒毛组织中的表达

目的探讨细胞因子信号转导负调控因子3(SOCS3)在早期流产患者蜕膜及绒毛膜绒毛组织中的表达。方法选择早期流产患者40例为早期流产组,以同期非意愿条件下行人流术的正常妊娠妇女40例为正常对照组,采用免疫组化SP法和逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测两组妊娠蜕膜及绒毛组织SOCS3蛋白及mRNA的表达水平,进行半定量分析。结果①早期流产患者组年龄、孕周与正常对照组年龄、孕周之间比较,差异无统计学意义;②SOCS3在两组蜕膜及绒毛组织中均有表达,早期流产组的蜕膜及绒毛组织中SOCS3蛋白表达量明显低于正常对照组;SOCS3 mRNA在早期流产组的蜕膜及绒毛组织中表达量明显低于正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论SOCS3蛋白及mRNA在早期流产组表达降低,可能与早期妊娠流产有关;SOCS3可能对早期妊娠的维持起保护作用。     

瘦素对大鼠脂肪细胞SOCS-3表达的影响

目的:探讨瘦素对脂肪细胞SOCS-3表达的影响及机制.方法:分离并培养大鼠成熟脂肪细胞,采用50 nmol·L-1重组瘦素对脂肪细胞分别处理0.5、2、6 h,免疫共沉淀结合Western blotting法检测SOCS-3、p-STAT1、p-STAT3蛋白表达.结果:瘦素未处理的脂肪细胞中有少量SOCS-3表达,在...     

SOCS3基因转染对小鼠CD4＋T h细胞分化及炎症细胞因子表达的影响及机制研究

目的：观察SOCS3基因对小鼠CD4＋Th细胞分化及细胞因子表达的影响。方法分离、培养并转染小鼠CD4＋Th细胞,以植物血凝素（PHA）刺激靶细胞,采用逆转录聚合酶链反应（RT‐PCR）检测相应细胞因子基因表达;蛋白质印迹法（West‐ernblot）检测目的细胞因子蛋白表达。结果与对照组相比较,转染组T‐bet、白细胞介素（IL）‐2、干扰素‐γ（IFN‐γ）、信号转导及转录激活因子（STAT）4、IL‐12Rβ2基因表达明显下调,细胞因子信号抑制物（SOCS）3、GATA‐3、IL‐4、IL‐6、IL‐10、STAT6基因表达明显上调,T‐bet、IL‐2、IFN‐γ、STAT4、IL‐12Rβ2蛋白表达明显下调,SOCS3、GATA‐3、IL‐4、IL‐6、IL‐10、STAT6蛋白表达明显上调,差异均有统计学意义（P＜0．01）。结论SOCS3基因转染可上调小鼠CD4＋Th细胞SOCS3基因表达,下调STAT4活化和磷酸化,抑制Th1细胞分化,并下调炎症细胞因子基因和蛋白表达,同时间接促进Th2细胞分化,并上调相应炎症细胞因子基因和蛋白表达。     

过表达细胞因子信号转导抑制因子2调控JAK2/STAT3通路抑制直肠癌细胞活性和移植瘤生长

目的：　探究细胞因子信号转导抑制因子2（suppressor of cytokine signaling 2,SOCS2）过表达对直肠癌细胞生长、运动和JAK2/STAT3通路的影响。方法：　HCT8细胞分为对照组、pcDNA组和pcDNA-SOCS2组,根据组别转染pcDNA空载体或pcDNA-SOCS2重组表达载体,RT-PCR检测SOCS2基因表达,BrdU染色检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell检测细胞侵袭,Western blot检测细胞SOCS2、上皮钙黏蛋白、波形蛋白、纤连蛋白表达以及JAK2和STAT3的磷酸化。另设BALB/c nu/nu裸鼠分为对照组、pcDNA-SOCS2组,建立HCT8皮下移植瘤模型,称取移植瘤质量,免疫组化检测Ki-67和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）平均光密度,Western blot检测瘤组织JAK2和DTAT3磷酸化。结果：　离体实验中,RT-PCR结果显示,与对照组（1.00±0.00）比较,pcDNA-SOCS2组细胞SOCS2 mRNA水平（4.70±0.27）明显升高（P=0.000）。Western blot结果显示,pcDNA-SOCS2组细胞SOCS2蛋白表达（0.130±0.020）较对照组（0.010±0.005）明显上调（P=0.000）。BrdU阳性百分比明显降低（P=0.000）;流式细胞术结果显示,pcDNA-SOCS2组[（35.0±5.0）%]HCT8细胞凋亡率较对照组[（6.0±3.4）%]明显升高（P=0.000）。Transwell分析结果显示,pcDNA-SOCS2组（89.0±10.0）HCT8细胞侵袭数目较对照组（87.0±13.0）明显减少（P=0.000）。Western blot结果显示,pcDNA-SOCS2组HCT8细胞中上皮钙黏蛋白水平（0.120±0.030）较对照组（0.010±0.004）明显升高（P=0.000）,同时波形蛋白水平（0.008±0.004）和纤连蛋白水平（0.010±0.005）较对照组（0.170±0.024,0.070±0.020）明显降低（P=0.000）,JAK2和STAT3磷酸化水平降低（P=0.000）。在体实验中,pcDNA-SOCS2组瘤体质量（0.14±0.06）较对照组（0.45±0.08）明显减轻（P=0.000）。免疫组化结果显示,pcDNA-SOCS2组Ki-67和VEGF平均光密度（17.0±6.0,7.0±6.0）较对照组（52.0±9.0,43.0±9.0）明显降低（P=0.000）,瘤体JAK2和STAT3磷酸化水平明显下调（P=0.000）。结论：　SOCS2过表达可抑制直肠癌HCT8细胞的增殖和运动能力并促进其凋亡,这一作用与JAK2/STAT3通路有关。     

SOCS3诱导反复自然流产患者蜕膜及绒毛组织Th1/Th2转换的作用

[目的]探讨细胞因子信号转导负调控因子(SOCS3)诱导反复自然流产(RSA)患者蜕膜及绒毛组织Th1/Th2转换的作用.[方法]采用ELISA方法检测27例RSA患者蜕膜及绒毛组织Th1细胞因子(IL-2、IFN-γ)和Th2细胞因子(IL-4、IL-10)的表达水平,采用流式细胞仪检测蜕膜及绒毛组织中Th1和Th2细胞水平及其比率,采用western-blot方法检测蜕膜及绒毛组织SOCS3蛋白表达水平,同时与30例正常妊娠行人工流产者比较.[结果]RSA组患者蜕膜及绒毛组织中IL-2、IFN-γ表达水平明显高于对照组(P＜0.05),而RSA组患者蜕膜及绒毛组织中IL-4、IL-10表达水平明显低于正常对照组(P＜ 0.05);RSA组患者蜕膜及绒毛组织中Th1细胞水平及Th1/Th2比率明显高于对照组(P＜0.05),而Th2细胞水平明显低于对照组(P＜ 0.05);RSA组患者蜕膜及绒毛组织中SOCS3蛋白表达水平明显低于对照组(P＜0.05).[结论]RSA患者蜕膜及绒毛组织中SOCS3蛋白表达过低可诱导Th1/Th2失衡,使得Th1细胞介导的免疫损伤作用占主导地位,最终导致RSA发生.