bFGF促进异种脱钙骨愈合过程中VEGF的表达

目的 观察碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)与异种脱钙骨复合修复骨缺损时骨修复效果及血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达情况.方法 在15只成年新西兰兔双侧下颁骨下缘形成15 mm×5 mm全层骨膜骨质缺损,每一缺损作为1个实验单位,按自身同期配对设计,分别植入复合骨(实验组)和单纯异种脱钙骨(对照组).术后2、4和8周取材作组织学检查,采用图像分析软件量化计算成骨量和VEGF蛋白表达水平,并分析其相互关系.结果 术后2、4和8周实验组与对照组相比,成骨量分别增加193.9%、160.1%和124.5%,VEGF的蛋白表达相应地增加424.4%、540.5%和290.2%,VEGF表达和新骨形成呈密切相关(r=0.94,P＜0.0001).结论 bFGF复合的异种脱钙骨可显著地上调骨移植区VEGF的表达,bFGF通过上调VEGF的表达以促进血管化从而增强异种脱钙骨的愈合.     

环孢素预处理对同种带瓣主动脉移植后钙含量的影响及意义

目的探讨环孢素预处理对同种异体带瓣主动脉移植后钙含量的改变及其意义。方法 4周龄的白兔50只(取带瓣动脉)为供体,体重0.30～0.35 kg;8周龄白兔50只,体重3.00～3.50 kg,随机分2组为受体,25只(环孢素预处理移植带瓣主动脉)实验组,25只(环孢素预不处理移植带瓣主动脉)对照组,分别于术后2、4、8周取出血管测定CD25和CD40的表达,原子吸收光谱法测定组织钙含量。结果①对照组CD25和CD40表达水平的高峰在移植后2周,此后逐渐回落,实验组在移植后2～4周的表达明显低于对照组(P<0.01);②实验组在2、4、8周3个不同时间点的钙含量明显低于对照组(P<0.01)。结论移植后使用环孢素抑制了早期的免疫排斥反应,降低了同种带瓣血管的钙化程度。     

XDBM生物相容性以及促进大鼠桡骨缺损修复

目的探讨异种脱钙骨基质（Xenogeneic Demineralized Bone Matrix,XDBM）的体内、外生物相容性以及促进骨缺损修复愈合,为临床应用提供实验依据。方法新生sD颅盖骨成骨细胞培养。取人及大鼠松质骨制备人（异种）及大鼠（同种）脱钙骨基质;观察成骨细胞在XDBM表面的黏附、增殖;行一侧大鼠骶棘肌肌袋内植入异种脱钙骨基质（实验组）,对侧植入同种脱钙骨基质（对照组）。分别于术后2,4,8周取材。另取8周龄大鼠造桡骨中段5mm节段性骨缺损模型。分为异种脱钙骨组（实验组）及同种脱钙骨组（对照组）。分别于2、4、8、12周处死动物并取材。大体、组织学观察及CD34免疫组化染色计数微血管密度。结果成骨细胞在XDBM贴壁生长、增殖、分泌骨基质;XDBM植入肌袋内各时间点均未见炎症、坏死及排斥。桡骨缺损区域微血管密度增加,新骨形成最终缺损区被新骨代替。结论XDBM具有良好的生物相容性、可降解性及良好骨传导及骨诱导作用。当植入大鼠桡骨缺损后具有促进骨再生的能力,有望成为理想的骨组织工程支架材料。     

重组成骨生长肽对同种异体骨移植愈合的实验研究

目的　观察重组成骨生长肽 (rOGP)对兔同种异体皮质骨移植愈合的影响。方法　采用日本大耳白兔造成桡骨中段 1.0cm缺损植以同种异体骨的动物模型 ,4 2只兔被分成实验组和对照组 ,每组 2 1只。从术后第 1天至取材的前 1天实验组动物每日经耳缘静脉注射rOGP 0 .5 μg/kg ,对照组注射同等剂量的生理盐水。于术后第 4 ,8,12周取材分别行大体、放射线和HE染色组织学观察愈合情况。结果　实验组和对照组组织愈合情况相似 ,实验组有多量的纤维结缔组织包裹连接处 ,放射线观察第 12周骨髓腔通畅及骨改建好于对照组。术后第 8,12周实验组移植骨和宿主骨连接处新生骨小梁多于对照组 (P <0 .0 5 )。结论　全身应用rOGP能促进兔的同种异体骨移植的愈合     

同种异体骨移植后小鼠脾脏T淋巴细胞亚群的变化

目的　通过植入不同方法处理的同种异体骨 ,观察移植免疫排斥中脾脏T细胞的总数与亚群的变化 ,探讨同种异体骨移植后机体的免疫反应。方法　取 64只C5 7BL/6、1 6只BALB/C小鼠的双侧肱骨、股骨及胫骨 ,制成新鲜异体骨、冷冻干燥异体骨、冷冻干燥脱脂异体骨、脱脂脱钙异体骨四种同种异体骨 ,及新鲜自体骨 ;每只小鼠骨对等分为 2份 ,分别植入 1 60只BALB/C小鼠双侧股四头肌囊袋内。于术后 1、2、4、8周处死 ,提取脾脏T淋巴细胞。用FITC特异性荧光标记的CD3、CD4、CD8单克隆抗体作用后 ,FACS流式细胞仪检测 ,得到T淋巴细胞及其亚群百分数。结果　接受C5 7BL/6同种异体骨移植后BALB/C小鼠T细胞总数及亚群于术后 1周、2周渐升高 ,4周开始下降 ,8周基本恢复正常。其中新鲜异体骨移植组显著高于其它各组 (P <0 .0 0 5 ) ,冷冻干燥异体骨、冷冻干燥脱脂异体骨、脱脂脱钙异体骨之间的差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。不同时间点的差异有统计学意义 (P <0 .0 0 5 )。结论　冷冻干燥异体骨、冷冻干燥脱脂异体骨、脱脂脱钙异体骨移植后的细胞免疫水平相似。创伤对脾脏T细胞总数及亚群的变化有影响     

脱钙骨植入修复桡骨缺损的动物实验

在54只兔的108例桡骨上分别造成1cm的骨缺损,将其平分为三组,分别植入脱钙同种异体骨、新鲜自体骨和新鲜同种异体骨。并于第1、3、5、7、10和13周,每组杀3只兔,用X线照片及组织学切片观察骨的愈合情况。结果发现新鲜异体骨植入后有排斥反应,而脱钙异体骨植入无此反应。实验证明脱钙同种异体骨是一种较好的植入物。彼优于新鲜异体骨,与新鲜自体骨植入无显著差异。新骨及软骨出现在植入物中而不在邻近宿主骨处,表明新骨形成可能是骨诱导作用的结果。     

重组成骨生长肽对兔同种异体骨移植的成骨影响

目的　观察重组成骨生长肽 (rOGP)静脉应用对兔同种异体骨移植愈合过程中成骨活性的影响。方法　4 2只日本大耳白兔选择一侧前肢造成桡骨中段骨缺损 ,植入常温储存的异体骨 ,随机分成二组。实验组从术后第1d开始每天注射rOGP0 .5 μg kg ,至取材前 1d ,对照组注射同样剂量的生理盐水。术后 4、8、1 2周每组各处死 7只 ,测血清ALP、BGP水平 ,同时取材摄X线片。结果　放射线学显示 ,实验组术后 8周植骨与宿主骨愈合 ,对照组术后 1 2周植骨与宿主骨愈合。实验组血清碱性磷酸酶 (ALP)、骨钙素 (BGP)水平高于对照组 ,术后 4周差异非常显著 (P <0 .0 1 ) ,术后 8、1 2周显著差异 (P <0 .0 5 )。结论　全身应用rOGP通过提高宿主体内成骨细胞的活性 ,促进同种异体骨移植的愈合。     

带血供骨膜瓣与同种异体脱钙骨联合修复大段骨缺损的实验研究

目的　探讨带血供骨膜瓣与同种异体脱钙骨联合修复大段骨缺损的效果。方法　以兔桡骨中段 15mm的大段骨缺损为模型 ,通过X线lane评分、组织学观察、电镜扫描 ,评价术后 4、8、12、16周时带血供骨膜瓣与同种异体脱钙骨联合修复骨缺损的效果。结果　带血供的骨膜瓣与同种异体脱钙骨联合修复效果明显好于单纯脱钙骨组 ,前者在Lane评分 (P <0 .0 5 )、组织学观察等方面均优于后者。结论　带血供骨膜瓣与同种异体脱钙骨联合修复大段骨缺损效果优于单纯脱钙骨。     

环孢素A防治同种异体带瓣大血管移植后钙化的研究

目的:探讨同种瓣移植后早期环孢素A(CsA)的钙化防治作用。方法:成年SD大鼠为供体,Wistar大鼠为受体,行同种异体带瓣主动脉腹主动脉的异位移植,分为CsA组、对照组和同基因组3组。CsA组移植后给予CsA15mg/(kg·d),共2周;对照组不做任何处理;同基因组行同一种系的近交系大鼠同种异体瓣膜移植。各组随机分为5组,每组8只,分别于术后2、4、8、12、16周采用流式细胞仪测定大鼠CD25、CD71的表达,取出移植物,原子火焰吸收法测定钙含量,对移植物行电镜观察。结果:①对照组移植后CD25和CD71表达的高峰时段主要在移植后早期,此后逐渐回落,12周后维持在低水平。CsA组在移植后2～4周CD25和CD71的表达明显低于对照组(P<0.01),但8周后的表达水平与对照组无差异(P>0.05);②对照组的钙含量从4周开始随时间的推移逐渐升高,12周达到高峰,此后进入平台期。CsA组的钙含量在移植后4、8、12、16周4个不同时点显著低于对照组(P<0.01);③移植后早期,CsA组的内皮细胞脱落和平滑肌细胞的坏死情况较对照组轻。结论:同种瓣移植后早期使用环孢素A具有抗钙化作用。     

复合环孢菌素同种异体骨与冻干同种异体骨修复兔桡骨缺损效果比较

目的对比研究复合环孢菌素同种异体骨(CAB)与冻干同种异体骨(FDAB)修复兔桡骨缺损效果。方法30只新西兰大白兔,随机分为材料提供组、实验组、对照组3组,每组10只。取材料提供组双侧髂骨制备CAB及FDAB。制备兔右侧桡骨中段10mm的骨与骨膜缺损,实验组植入CAB修复,对照组植入FDAB修复。术后4、12周每组各处死5只动物,进行大体标本、X线片和组织学观察。结果术后4周,实验组X线片评分高于对照组(P=0.001),缺损区新骨形成量及异体骨与受体骨融合性均高于对照组;术后12周,实验组X线片评分高于对照组(P=0.001),缺损区骨塑形效果优于对照组。结论CAB修复兔桡骨缺损效果优于FDAB,是否为局部免疫反应状态的不同造成这种差异需进一步探讨。     

纯钛表面吸附硫酸软骨素A对成骨细胞生长的影响

目的：在体外研究纯钛表面吸附硫酸软骨素A(CS-A)后对成骨细胞生物学行为的影响。方法：在吸附不同浓度的CS-A钙处理钛片表面培养成骨细胞,检测其生长情况、碱性磷酸酶活性及细胞层钙含量。结果：钙处理钛片在吸附CS-A后促进了成骨细胞的增殖,增加了成骨细胞层钙聚集,促进成骨细胞的矿化,同时还增高了成骨细胞的碱性磷酸酶活性,促进了细胞的分化。结论：钛吸附CS-A后提高了其生物相容性。     

Local changes in aluminium, calcium and phosphorus content of bone caused by alumina implant.

Thirty rabbits were divided equally into 5 groups randomly. A hole, 6 mm in diameter and 2 mm deep, was bored on each iliac crest. Two pieces of alumina were implanted into the hole of one side, while the opposite side served as control. These rabbits were killed on 10, 20, 40, 60 and 90 days after operation. Calcium, phosphorus and aluminium contents of iliac bone on both sides were determined by Inductively Coupled Plasma--Atomic Emission Spectrometry. The results showed that the aluminium content of the implanted side in each group was higher than that of the control and difference was significant in 10, 40 and 60 day groups (P < 0.05). This shows that the implant releases aluminium into the bone. Moreover, the calcium and phosphorus contents were significantly lower on the implanted side than on the control side in 10 and 20 day groups (P < 0.05-0.001). Apparently, the aluminium released from the implant in the early stage can interfere with the local calcium and phosphorus metabolism and delay the mineralization of the bone.

     

骨髓间充质干细胞复合脱钙骨基质修复兔膝关节全层软骨缺损的实验

目的:研究骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)复合脱钙骨基质(deminerized bone matrix, DBM)修复兔膝关节全层软骨缺损的疗效. 方法:MSCs取自4～6 mo龄2.5～3.5 kg的青紫兰兔,体外分离培养后种植于DBM支架上体外培养,再移植于兔膝关节全层软骨缺损模型处. 实验动物选用健康的青紫兰兔36只,随机分成A, B, C 3个处理组各12只,A处理组(MSCs/DBM)双侧股骨髁间窝软骨缺损处植入DBM吸附体外分离培养的自体MSCs复合物;B处理组(DBM)单纯植入DBM;C处理组(对照)不作任何植入. 分别于术后4, 8和12 wk各处死4只兔子,取材进行大体、组织学及免疫组化染色观察,根据关节软骨组织学计分标准进行评分,数据输入SPSS 10.0软件统计分析,比较各组的评分差异是否具有统计学意义. 结果:MSCs复合DBM所修复组织为透明软骨样修复;而单纯DBM移植组和对照组为纤维性修复. 对术后12 wk大体及组织学形态进行评分. 按完全随机设计进行方差分析和SNK-q检验,结果显示,SMCs/DBM组明显优于DBM植入组和对照组(P<0.05);DBM组优于对照组(P<0.05). 结论:运用软骨组织工程的原理,以DBM为支架材料的自体MSCs移植是一种修复软骨缺损的行之有效的方法.     

复方健骨胶囊对大鼠卵巢切除诱导的骨质疏松症的影响

目的观察复方健骨胶囊对大鼠卵巢切除诱导的骨质疏松症的影响。方法共60只雌性SD大鼠,其中50只制作成卵巢切除诱导的骨质疏松症模型,按低(200 mg/kg)、中(400 mg/kg)、高(800 mg/kg)剂量,每个剂量10只大鼠,给予复方健骨胶囊,称为低、中、高剂量组;10只给予碳酸钙溶液(阳性药对照组);10只给予蒸馏水代替复方健骨胶囊(模型组)。另外10只大鼠不切除卵巢,只切除1小块脂肪代替,也给予蒸馏水(假手术组)。给药90 d后测定各组骨钙含量和骨密度。结果模型组的骨钙含量和骨密度明显低于假手术组,表明造模成功。复方健骨胶囊中、高剂量组与模型组相比,骨钙的含量显著提高(P<0.05);高剂量组骨密度与模型组相比显著升高(P<0.05)。结论复方健骨胶囊具有增加骨钙含量、提高骨密度的作用,具有抗骨质疏松的作用。     

脱矿骨的制备及其骨诱导活性的实验研究

目的研究运用超声与盐酸结合的方法制备脱矿骨的脱矿效果及骨诱导活性。方法采用超声条件下酒精脱脂、盐酸脱矿、冻干辐照的方法,制备人类脱矿皮质骨,检测其pH值、钙含量,并比较超声波对脱矿速度的影响。腹腔注射地塞米松造成大鼠的免疫抑制,将所制备脱矿骨异位植入大鼠的股部肌袋,术后不同时间取材,行组织学观察及碱性磷酸酶活性测定以观察脱矿骨的骨诱导活性。结果超声波条件下脱矿速度明显加快;脱矿骨异位植入后4周开始形成软骨细胞与软骨基质,5、6周形成较多的软骨组织,表现出良好的骨诱导活性。结论本研究所制备的脱矿骨具有良好的骨诱导成骨活性,是良好的骨移植材料。     

珍珠层/聚乳酸重组人工骨修复动物骨干缺损的实验研究

目的 探讨珍珠层/聚乳酸重组人工骨(NPCB)在体内的生物相容性、降解情况及成骨特点,评价其性能,为进一步的应用提供实验依据。方法 将NPCB随机植入成年新西兰白兔1.5 cm的桡骨缺损内,并设立不植入任何材料的空白对照,观察NPCB植入后动物的局部反应,检测动物术后1周、4周的血钙值,并与术前1天比较;于术后6、8、12、16周取材,作X线、骨矿含量、大体标本及组织形态学观察,分析不同时期组织反应、骨缺损修复及材料降解情况。结果 NPCB植入后无明显的局部不良反应,术后1周、4周血钙值与术前1天相比无明显差异。植入NPCB的骨缺损内骨矿含量在6~12周时升高幅度明显高于空白对照组,但12周后植入NPCB的骨缺损内骨矿含量出现下降。X线检查、大体标本及组织形态学观察显示NPCB的成骨方式主要是骨传导成骨,至术后16周时骨缺损基本修复,NPCB与宿主骨结合紧密,而空白对照骨缺损断端仅有少量骨修复,形成骨不连。NPCB植入后即开始其降解过程,12周以后材料周围出现较多吞噬有材料颗粒的巨噬细胞和多核巨细胞,16周时仍有部分材料未降解吸收。结论 NPCB具备良好的生物相容性和骨传导能力,可以在体内逐渐发生生物降解。     

Diaphyseal defect repair with nacre/polylactic acid composite artificial bone in rabbits]

OBJECTIVE: To evaluate the biocompatibility, degradation and bone formation activity of a new bone substitute for bone grafting, nacre/polylactic acid composite artificial bone (NPCB). METHODS: Radial bone defects 1.5 cm in length were induced in 32 New Zealand rabbits and immediately filled with NPCB or nothing. The animals' local and whole body responses to the implants were observed after the operation, and the serum calcium levels were detected 1 week and 4 weeks postoperatively. Tissue response, new bone formation in the defects and degradation of the implants were evaluated by X-ray, and examination of the bone mineral content (BMC) in the defects and histomorphological analysis were performed after the rabbits were sacrificed. RESULTS: All the rabbits survived the operation and the incisions healed smoothly. No significant difference was noted in the serum calcium level between 1 day before operation, 1 week and 4 weeks postoperation. BMC in the defects of the rabbits with NPCB grafts increased more rapidly than that in the control group 6-12 weeks after the operation and began to decrease after 12 weeks. Gross, X-ray and histological observations revealed that NPCB possessed osteoconductive activity and new bone ingrowth in the implants was found during the whole experiment. At 16 weeks, the defects grafts were almost completely repaired with NPCB while the defects in the control group remained nonunion. Biodegradation of the implants was observed early at 6 weeks, with numerous macrophage and multinuclear giant cells containing phagocytosed NPCB particles around the implants at 12 weeks, but NPCB remnants were still visible at 16 weeks. CONCLUSION: As a bone substitute, NPCB possesses good biocompatibility, biodegradability and osteoconductive activity.     

废用性骨质疏松动物承重骨的骨改建活动和力学性能变化的研究

目的:探讨构建废用性骨质疏松动物模型的方法,及废用性骨质疏松发展过程中不同时间内骨的结构、矿物质含量以及受其影响的骨的生物力学性能的变化情况。方法:选用雄性日本大耳白兔55只,随机石膏固定50只兔的右后肢作为实验侧,左侧后肢作为自身对照侧,另5只作为空白对照组饲养3个月。固定后2、4、6、8、12周各处死10只兔。取双侧胫腓骨行力学试验,测定钙元素的含量。取双侧跖骨头,进行HE染色和Masson染色,组织学观察。结果:对于最大负荷、弹性模量和骨钙含量等指标,实验侧胫腓骨在不同固定时间的差别,实验侧和对照侧间的差别均有统计学意义(P<0.05);对照侧和空白对照组间,对照侧间的差别无统计学意义(P>0.05)。实验侧骨皮质变薄,孔隙增多,骨小梁稀疏、纤细并有多处断裂,小梁间吻合减少,骺板下区空旷,髓腔扩大,破骨细胞数增多。Masson染色见随着废用时间的延长,新生胶原的量也在减少。结论:石膏固定实验动物肢体,限制其负重,是有效的构建废用性骨质疏松动物模型的方法。在废用性骨质疏松形成过程中,骨钙含量、骨的整体生物力学性能持续下降,但速度趋缓,以适应所处的应力环境和功能状态。     

脱钙骨基质复合牛骨形态发生蛋白修复兔桡骨缺损实验的放射学评价

目的:对异体脱钙骨基质复合BMP修复节段性骨缺损能力进行放射学评价.方法:64只新西兰大白兔采用桡骨15 mm节段性骨缺损模型,随机分为4组,A组植入异体脱钙骨基质(Demineralized BoneMatrix,DBM)与牛骨形态发生蛋白(Bovine Bone Morphogentic Protein,bBMP)复合材料,B组植入异体DBM,C组植入异体骨粒,D组为空白对照组.术后4 w、8 w、12 w、16 w,进行放射学检查和相应的组织学检查.结果异体DBM与bBMP复合材料组X线和组织学检查显示骨愈合修复情况要明显优于异体DBM组、异体骨粒组和空白对照组.结论:DBM经bBMP复合后,可提高修复骨缺损的能力,是一种较为理想、具有高效成骨活性的植骨材料.