三种尿毒素诱导高级氧化蛋白产物的生成

目的 探讨尿毒症患者体内长期积蓄的高水平尿毒素是否会通过参与高级氧化蛋白产物（AOPP）的生成而介导蛋白质的氧化损伤。 方法 以丙二醛(10 mmol/L)、马尿酸(20 mmol/L)和对甲酚(10 mmol/L)为尿毒素代表。人血清白蛋白(HSA)、健康人和尿毒症患者血浆用20 mmol/L的PBS(pH 7.4)统一调整到质量浓度为50 g/L，随后分别加入尿毒素至指定浓度。对照组内不加任何尿毒素。37℃分别温育0.5 h和24 h后，分别测定各组的AOPPs、蛋白巯基及二酪氨酸浓度。高效液相色谱（HPLC）法用于观察蛋白质的交联聚集情况。 结果 与对照组相比，尿毒素组的AOPP浓度平均增加了121.5％(P < 0.05)。尿毒素尚可降低蛋白巯基浓度，降低幅度平均达14.7％(P < 0.05)；同时蛋白二酪氨酸水平增至119.2％(P < 0.05)。HPLC结果表明尿毒素可以时间依赖性方式显著诱导高分子量AOPP(HMW-AOPPs)的生成，平均增幅为148.4％～333.3％(P < 0.05)。 结论 小分子类尿毒素可通过时间依赖性方式诱导HMW-AOPPs的生成而介导蛋白质的氧化损伤。除了髓过氧化物酶(MPO)-H2O2-Cl-通路的激活之外，尿毒素的介导损伤也是较为重要的体内AOPP生成机制之一。     

高级氧化蛋白产物的主要成分分析

目的 研究高级氧化蛋白产物(AOPPs)为何种蛋白氧化产物并进行表征。方法 羰基用于评定AOPPs中的氧化蛋白。天然血浆测得其蛋白浓度后，先按定义测定其AOPPs水平。血浆随即经超滤膜超滤、PBS清洗后制得血浆-AOPPs。排阻色谱法用于分析定量单个蛋白中的羰基水平。另用氯仿对血浆进行脱脂。脱脂产生的馏分同样进行羰基水平等的测定。 结果 无论是天然血浆、脱脂血浆或是氯仿脱脂产生的沉淀中，尿毒症患者的AOPPs和总羰基水平始终明显高于正常人。HPLC分析证明血浆白蛋白不仅具有最高的羰基水平，而且也是唯一一种在正常人和患者间差异具有统计学意义的蛋白。脱脂主要去除的是纤维原蛋白和一种未明大分子蛋白，这2种蛋白的氧化程度均较低。 结论 白蛋白是AOPPs的主要构成成分，而其它蛋白占AOPPs的构成比例较小，特别是IgG。     

尿毒症患者高级蛋白氧化产物与血管钙化的关系及其机制探讨

目的 研究CKDⅤ期患者血中高级蛋白氧化产物(AOPP)水平及其与动脉钙化的关系，并探讨AOPP可否诱导动脉平滑肌细胞向成骨细胞分化。 方法 50例CKDⅤ期患者为尿毒症组，10例肾功能正常的胸腺瘤患者作为对照组。测定血AOPP、钙、磷、甲状旁腺激素(iPTH)水平，同时分别取桡动脉和同级别的胸廓内动脉做组织学检查。体外用次氯酸处理的人血清白蛋白(AOPP-HSA)作用于主动脉平滑肌细胞（HASMC），以单纯人血清白蛋白(HSA)培养基和常规培养基作为对照，RT-PCR法检测核结合因子α-1(CBFα-1)及骨桥蛋白(OPN)水平。 结果 CKDⅤ期患者血浆AOPP水平明显高于对照组[(90.22±55.88) μmol/L 比 (35.79±4.31) μmol/L, P < 0.01]。50例桡动脉标本中44例有OPN沉积于中膜（88％），其中24例有明显的钙化(48％)，对照组无一例有OPN沉积及钙化。Pearson相关分析显示血清AOPP水平与桡动脉内膜中层厚度（IMT）(r ＝ 0.691，P ＜ 0.01）及管壁/管腔比值（r ＝ 0.354，P ＜ 0.05）呈正相关。血管钙化程度与AOPP（r ＝ 0.791，P ＜ 0.01）、血清磷（r ＝ 0.602，P ＜ 0.01）、iPTH水平（r ＝ 0.549，P ＜ 0.05）呈正相关。体外试验显示AOPP-HSA可诱导HASMC表达CBFα-1和OPN，而单纯HSA无此效应。 结论 CKDⅤ期患者普遍存在高AOPP血症和血管钙化，血AOPP水平与血管钙化密切相关。这可能与AOPP直接诱导动脉平滑肌细胞向成骨细胞分化有关。     

不同血液净化方式对清除晚期氧化蛋白产物的效果及对心血管预后的影响

目的观察尿毒症患者血清晚期氧化蛋白产物水平,对比不同血液净化方式对其清除效果,探讨其与心血管疾病的关系。方法将60例维持性血液透析患者随机分为单纯血液透析（HD）组、血液透析联合血液透析滤过（HD＋HDF）组和血液透析联合血液灌流（HD＋HP）组,每组20例;另设健康对照及尿毒症未透析组,观察12个月。结果尿毒症未透析组血清晚期氧化蛋白产物明显高于健康对照组（P〈0．01）,透析后进一步升高（P〈0．05）;12个月后,HD＋HDF组及HD＋HP组血清晚期氧化蛋白产物水平及心血管并发症发生率低于HD组（P〈0．05）。结论①尿毒症患者HD后血清晚期氧化蛋白产物水平升高;②HD＋HDF或HD＋HP血液灌流能降低尿毒症患者血清晚期氧化蛋白产物水平,改善维持性血液透析患者心血管预后。     

晚期氧化蛋白产物与骨质疏松症的研究进展

骨质疏松症(osteoporosis,OP)是一种受遗传和环境因素共同影响的代谢性疾病,其主要特点是骨量低下、骨脆性增加、易发生骨折。其发病病因多样,分子机制复杂,已成为影响人们特别是老年人生活质量的流行病之一。晚期氧化蛋白产物是一种新的氧化应激标志物,通过增加细胞活性氧释放、促使炎症因子生成,在促进衰老及老年相关性疾病发生发展中起到重要作用。本文就晚期氧化蛋白产物对骨形成主要细胞和破骨细胞的影响和作用机制,以及治疗骨质疏松症的新型抗氧化药物的研究进展做一综述。     

2型糖尿病患者尿蛋白水平与血清白细胞介素1β和晚期蛋白氧化产物的关系

目的观察不同尿白蛋白排泄率（UAER）的2型糖尿病患者血清白细胞介素18（IL-1β）和晚期蛋白氧化产物（AOPP）水平,探讨其在糖尿病蛋白尿发生和发展中的作用。方法选择2008年11月至2010年2月在我院住院的2型糖尿病患者62例,按照UAER水平分组：间断白蛋白尿组（n=20）,UAER〈20μg／min;微量白蛋白尿组（n=22）,UAER20-200μg／min;临床白蛋白尿组（n=20）,UAER〉200μg／min。选择同期健康体检者20例作为对照组。比较各组血清IL-1μ和AOPP水平。结果3组糖尿病患者血清IL-1β和AOPP水平均高于对照组（P〈0．05）,微量白蛋白尿组IL-1β和AOPP水平均高于正常白蛋白尿组（P〈0．05）,显性白蛋白尿组IL-1β和AOPP水平均高于微量白蛋白尿组和正常白蛋白尿组（P〈0．01）。血清IL-1β与AOPP呈正相关（r=0．760,P〈0．01）,血清IL-1β和AOPP与UAER呈正相关（r分别为0．809和0．813,P〈0．01）。结论IL-1β和AOPP可作为糖尿病肾脏微血管病变的早期预测因子,对预防糖尿病肾脏微血管病变有重要意义。     

单孔腹腔镜胆囊切除术对缺血修饰白蛋白水平的影响

目的:评估单孔腹腔镜胆囊切除术对缺血修饰白蛋白水平的影响。方法:对140例良性胆囊病变患者进行前瞻性研究,其中42例行单孔腹腔镜胆囊切除术,98例行腹腔镜胆囊切除术,两组均按标准麻醉方案施术。分别于术前、术后45 min、术后24 h分析患者血清缺血修饰白蛋白水平。结果:两组手术时间分别为(36.2±12.1)min与(44.2±14.1)min,两组患者手术时间、中转率、术后45 min、术后24 h缺血修饰白蛋白水平差异无统计学意义。手术时间延长(>30 min)时,可导致患者缺血修饰白蛋白水平的早期增加。结论:单孔腹腔镜胆囊切除术是良性胆囊疾病有效、安全的手术方法。手术时间延长可能增加组织缺血,但其与胆囊切除术操作本身无关。     

糖尿病肾脏疾病患者血清细胞间黏附分子1和晚期氧化蛋白产物水平的变化

目的：观察血清中细胞间黏附分子1（intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1）、晚期氧化蛋白产物（（advance oxidative protein products,AOPP）在不同尿蛋白排泄率的糖尿病肾脏疾病（diabetic kidney disease,DKD）患者体内的水平,探讨血清 ICAM-1、AOPP 在 DKD的发生、发展中的作用。方法将62例2型糖尿病患者依据尿微量白蛋白排泄率（urine cdbumin excretion rate, UAER）分为正常白蛋白（UAER200μg/min）20例（显性组）,所有患者被诊断有DKD在3年以内（含3年）,近3个月无心肌梗塞、脑梗塞等疾病,排除急慢性感染、各类肾炎、尿路感染、肾血管疾病,停用影响血小板药物如潘生丁、非甾体抗炎药1周,抽血时,血压控制在135/85 mm Hg以下。另选择健康体检正常者20例（对照组）,无高血压及内分泌代谢病,无心、肝、肾、脑病史。UAER均采用化学发光法测定,用夹心法酶联免疫吸附检测各组中 ICAM-1、AOPP 的水平。结果3组糖尿病患者 ICAM-1、AOPP水平均高于对照组,差异均有统计学意义（P〈0.05）;显性组 ICAM-1、AOPP水平高于微量组、正常组（P〈0.01）;微量组 ICAM-1、AOPP 水平高于正常组（P〈0.05）。血清ICAM-1与AOPP呈正相关（r=0.770,P〈0.01）,血清ICAM-1、AOPP水平与UAER呈正相关（r=0.805、0.811,P〈0.01）。结论血清 ICAM1、AOPP 可成为 DKD 的早期预测因子,与 UAER联合检测有助于早期诊断DKD,对其进行早期干预在预防DKD中有重要意义。     

重组人硫氧化还原蛋白对原代培养肝细胞的影响

目的探讨重组人硫氧化还原蛋白(rhTrx)对原代培养肝细胞生存生长的影响。方法逆转录聚合酶链反应法扩增出hTrx cDNA,并在原核表达系统中表达。IgM还原实验和胰岛素还原实验测定rhTrx的生物学活性。3H胸腺嘧啶核苷(TdR)掺入试验和细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放试验检测rhTrx对SD大鼠原代培养肝细胞生存生长的影响。结果克隆出hTrx开放阅读框cDNA并获得高效表达,可溶性目的蛋白回收率为23．20％,蛋白纯度为96．30％。IgM还原和胰岛素还原实验均显示制备的rhTrx具有较好的生物学活性(t=7．5860,P<0．01)。加入rhTrx培养的肝细胞生长旺盛,并维持了良好的细胞形态。rhTrx可促进原代培养肝细胞的DNA合成,并以剂量依赖方式明显抑制乙醇造成的肝细胞损害。结论制备出具有生物学活性的rhTrx,hTrx对原代培养肝细胞的生存具有促进作用。     

血浆白蛋白中胱氨酸和精氨酸是主要的氧化剂攻击基团

目的 探讨自由基攻击对白蛋白结构的影响。 方法 以正常人为对照组，尿毒症患者为实验组，高级氧化蛋白产物(AOPPs)和羰基为氧化应激指标。先对各组的氧化应激水平进行评价，随后从各组分离、纯化出白蛋白，再对其氨基酸组成进行分析比较。结果 尿毒症患者的AOPPs，及羰基水平约为正常人的2倍(P < 0.01)。同正常人相比，尿毒症患者水解出的17种白蛋白氨基酸组成大部分低10%左右，其中胱氨酸和精氨酸在两组间差异有统计学意义(P < 0.05)。结论 氨基酸的普遍损失是影响血浆蛋白结构和功能的关键因素，其中胱氨酸和精氨酸是自由基攻击的两个主要靶基团。     

氧化应激和骨代谢水平与老年原发性骨质疏松症间的相互关系

目的 探讨氧化应激、骨代谢水平与老年原发性骨质疏松症间的相互关系。方法 回顾性分析2012年5月至2013年12月间,我院体检的老年患者共62例,平均年龄为72.39岁（62~92岁）,其中男性30例,女性32例,根据BMD结果分为骨量正常组14例,骨量减少组19例,骨质疏松组29例。所有患者均抽取外周血,检测AOPP、SOD、β-CTX和tPINP水平。应用SPSS10.0对3组的数据进行比较分析。 结果 骨质疏松组中血清AOPP高于骨量减少组和骨量正常组,SOD水平则在骨质疏松组中最低（P<0.05）。各组间β-CTX和tPINP水平无统计学差异。相关性检测提示AOPP与BMD（r=-0.59,P<0.00）、SOD(r=-0.58,P<0.00)呈负相关,与β-CTX(r=-0.31,P<0.02)、年龄(r=0.53,P<0.00)呈正相关。同时,为明确各指标对BMD的影响,采用线性回归方程分析后发现,血清AOPP和SOD水平对BMD影响较大。结论 氧化应激可引起骨代谢紊乱,主要表现为骨破坏增加,可影响老年患者BMD,对老年原发性骨质疏松症的发生和发展有重要影响,抗氧化治疗可能对该病有一定的疗效。     

畸形精子症患者中氧化应激与精子DNA损伤的关系探讨

目的:探讨畸形精子症患者中氧化应激相关指标与精子DNA损伤变化的相关性,以期为男性不育诊治提供理论依据。方法:选取2019年1月至2019年8月在河北医科大学第四医院生殖医学科诊治的101例男性不育症患者作为研究对象,按精子形态将患者精液标本分为两组,A组为精子正常形态≥4,B组为精子正常形态<4,即畸形精子症组,按世...     

Mettl3介导m6A甲基化修饰对过氧化氢诱导的脊髓神经元氧化应激和凋亡的影响

【摘要】 目的：探讨Mettl3介导m6A甲基化修饰对过氧化氢（H2O2）诱导的脊髓神经元氧化应激和凋亡的影响。方法：分离新生（24h内）SD大鼠脊髓,经消化、离心后重悬沉淀,差速贴壁30min后收集未贴壁细胞培养于Neurobasal培养基中,经免疫荧光鉴定呈β3-tubulin阳性,确认为脊髓神经元。将脊髓神经元随机分为6组：空白组,细胞不予任何处理,正常培养;转染对照组,细胞转染阴性对照siRNA（si-NC）;转染组,细胞转染Mettl3 siRNA（si-Mettl3）;诱导组,细胞采用300μmol/L的H2O2处理;转染对照诱导组,细胞先转染si-NC,然后采用300μmol/L H2O2处理;转染诱导组,细胞先转染si-Mettl3,然后采用300μmol/L H2O2处理。实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测各组细胞Mettl3的mRNA表达水平,Western blot检测Mettl3、Bax、Bcl-2和cleaved Caspase-3的蛋白表达水平,免疫荧光检测Mettl3表达,酶标仪检测各组整体m6A水平,并检测白细胞介素（IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子（TNF）-α、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和丙二醛（MDA）水平,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：与空白组相比,诱导组的m6A甲基化修饰水平显著提高（P<0.05）,Mettl3的mRNA和蛋白表达水平显著性上调（P<0.05）,IL-1β（73.39±8.82ng/L vs 125.58±15.31ng/L）、IL-6（63.34±7.12ng/L vs 101.28±12.49ng/L）、TNF-α（103.29±12.19ng/L vs 204.37±23.65ng/L）和MDA（4.01±0.67pmol/L vs 9.23±1.05pmol/L）水平显著性升高（P<0.05）,SOD（28.37±3.72U/mg vs 17.23±2.05U/mg）和GSH-Px（158.19±19.26U/mg vs 83.35±9.05U/mg）水平显著性降低（P<0.05）,且Bax和cleaved Caspase-3的蛋白表达水平显著性上调（P<0.05）,Bcl-2的蛋白表达水平显著性下调（P<0.05）,细胞凋亡率显著升高[（8.30±0.68）% vs （34.29±3.16）%,P<0.05];与诱导组相比,转染诱导组的m6A甲基化修饰水平显著性降低（P<0.05）,Mettl3的mRNA和蛋白表达水平显著性下调（P<0.05）,IL-1β（125.58±15.31ng/L vs 96.28±11.27ng/L）、IL-6（101.28±12.49ng/L vs 84.56±10.24ng/L）、TNF-α（204.37±23.65ng/L vs 147.15±18.46ng/L）和MDA（9.23±1.05pmol/L vs 7.28±0.96pmol/L）水平显著性降低（P<0.05）,SOD（17.23±2.05U/mg vs 24.01±2.76U/mg）和GSH-Px（83.35±9.05U/mg vs 121.48±15.47U/mg）水平显著升高（P<0.05）,且Bax和cleaved Caspase-3的蛋白表达水平显著性下调（P<0.05）,Bcl-2的蛋白表达水平显著性上调（P<0.05）,细胞凋亡率显著性降低[（34.29±3.16）% vs （23.57±2.01）%,P<0.05]。与空白组相比,转染组的炎性因子、氧化应激和凋亡水平均无显著性差异（P>0.05）。结论：H2O2可上调脊髓神经元中m6A甲基化修饰水平,并可诱导氧化应激和细胞凋亡;抑制Mettl3表达能够降低H2O2诱导的脊髓神经元m6A甲基化修饰水平,进而缓解氧化应激和细胞凋亡。     

The effect of growth retardation and of osteomalacia on the uptake of albumin by bone

Summary ¹²⁵I-labeled rat albumin injected intravenously into rats was taken up by growing bone. Some of this radioactive albumin could be removed from bone by washing with saline, the proportion so removed decreasing from 82.5% at 1 day to 7.4% at 8 days. Both the total radioactivity, and that remaining in bone after saline wash, were reduced when growth was slowed by alteration or restriction of the diet. Although the amount of¹²⁵I albumin in rachitic bone was reduced, autoradiography showed that radioactivity was present in rachitic osteoid. Immunoprecipitation using anti-rat-albumin serum showed that about half of the radioactivity released from normal bone by EDTA was still attached to albumin. These results suggest that albumin plays some part in the growth of bone.Part of this work was presented at a meeting of the Australian Physiological and Pharmacological Society in May 1974     

Renoprotective effect of Bacopa monnieri via inhibition of advanced glycation end products and oxidative stress in STZ-nicotinamide-induced diabetic nephropathy

Hyperglycemia and oxidative stress are involved in the development of diabetic nephropathy (DN). This study was designed to evaluate the effect of alcohol and hydroalcohol extract of Bacopa monnieri and stigmasterol isolated from B. monnieri in the treatment of DN. Diabetes was induced in male wistar rats by streptozotocin (65?mg/kg i.p.) 15?min after nicotinamide (230?mg/kg, i.p.) administration. After 30 days, the rats were treated with different doses of extracts (100, 200, and 400?mg/kg) and stigmasterol (5 and 10?mg/kg) for 45 days to analyze their nephroprotective effect and produced significant attenuation in the serum glucose level, uric acid, creatinine, and lipid levels. Moreover, there is improvement in the level of superoxide dismutase (SOD), glutathione (GSH), and decrease in lipid peroxidation in terms of TBARS. The formation of AGEs in kidneys was also significantly reduced. These findings suggest that B. monnieri and its isolate (stigmasterol) might inhibit the progression of DN.     

维持性血液透析患者氧化应激、微炎症状态及其与透析时间的临床分析

目的探讨维持性血液透析(maintenance hemodialysis,MHD)患者氧化应激(oxidative stress,OS)、微炎症状态(micro-inflammatory state,MIS)指标与透析时间的关系。方法选择2012年12月在南通市第三人民医院血液净化中心稳定血液透析治疗3个月以上的慢性肾衰竭患者144例作为维持性血液透析组(MHD组),根据透析时间不同分为4个亚组:MHD-1亚组45例,透析时间3~24个月;MHD-2亚组41例,透析时间25~60个月;MHD-3亚组37例,透析时间61~120个月;MHD-4亚组21例,透析时间120个月。另选择健康体检者29名为对照组。入选对象均清晨空腹取外周静脉血标本。采用酶联免疫吸附法检测血清晚期氧化蛋白产物(advanced oxidation protein products,AOPP)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)与肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α),散射比浊法测定血清C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)。采用单因素方差分析、t检验、Pearson相关分析比较MHD组与对照组各指标及其与透析时间的相关性。结果①MHD各亚组患者血清AOPP水平均明显高于对照组(P0.05);②MHD各亚组患者血清CRP水平明显高于对照组(P0.05),IL-6、TNF-α在透析治疗24个月后与对照组比较差异有统计学意义(P0.05);③AOPP与CRP、IL-6、TNF-α呈正相关(r=0.810,P0.01;r=0.876,P0.01;r=0.919,P0.01);④AOPP、CRP、IL-6、TNF-α与透析时间均呈正相关(r=0.823,P0.01;r=0.894,P0.01;r=0.940,P0.01;r=0.929,P0.01)。结论 MHD患者体内存在明显的氧化应激和微炎症状态,二者关系密切,且均随透析时间延长而呈逐渐加重趋势。     

从“痰之本在肾”探讨线粒体氧化应激与骨骼健康

骨为肾所主,肾藏精,精能生髓,肾精亏虚将导致骨髓化生减少,骨失髓养,日久则发展为骨痿。线粒体是生命活动的“动力工厂”,人体细胞的增殖分化与凋亡有赖于线粒体正常的功能及相关信号通路的正常表达。中医认为元气藏于肾依赖于肾精充足,主导人的生长发育、激发代谢等生命活动的功能与现代医学中调控细胞生命活动的线粒体相似。水为肾所主,肾作为人体津液代谢的重要脏器之一,主要通过气化功能参与津液的输布和排泄,其功能失常将导致津液无以运化,壅聚成痰,随着近期对肾和津液关系研究的深入,“肾痰”理论逐渐深入人心。“百病多由痰作祟”,随着衰老的进行,肾精逐渐亏虚,肾气化生不足,将导致津液代谢失常而生“肾痰”,进而导致各种疾病的发生。氧化应激反应是多种疾病发生的危险因素,而作为其发生的重要影响因素,氧化自由基的蓄积与机体衰老有关,由此看来痰和氧化自由基无论在生成还是致病特点上都存在许多共同点。相关研究表明氧化应激引起的成骨细胞过量凋亡会导致骨质疏松发生的风险增加,其主要机制与线粒体功能的损害及Wnt/β-catenin等相关信号通路表达的失常明显相关。故本文从“痰之本在肾”探讨线粒体氧化应激与骨质疏松症之间的关系。