吲哚美辛诱导HL-60细胞凋亡过程中伴有β-catenin/c-myc信号转导途径的抑制

目的：研究吲哚美辛对HL-60细胞的增殖抑制和凋亡诱导效应,从β-catenin信号转导途径揭示其分子机制。方法：以不同浓度的吲哚美辛(0,25,50,100,200,400μmol/LL)作用于HL-60细胞,以锥虫蓝染色确定干预后的HL-60细胞活力;分析HL-60细胞增殖能力;DNA梯状胶电泳鉴定细胞凋亡。Western印迹证明凋亡调节蛋白caspase-3的裂解激活以及β-catenin,c-myc蛋白质的表达。结果：吲哚美辛能明显抑制HL-60细胞增殖和诱导细胞凋亡,并表现出浓度和时间依赖性;HL-60细胞凋亡伴有caspase-3蛋白的表达上调和裂解活化;β-catenin蛋白表达呈吲哚美辛浓度依赖性下调和降解;c-myc蛋白表达呈吲哚美辛浓度依赖性下调。结论：吲哚美辛能抑制HL-60细胞增殖和诱导HL-60细胞凋亡。β-catenin→c-myc信号转导途径受抑与吲哚美辛的抗白血病效应存在一定的联系。     

异硫氰酸苯已酯抑制T细胞白血病Jurkat细胞Wnt/β-catenin信号通路的研究

本研究目的在于探索研究异硫氰酸苯己酯(PHI)在体外对人类T细胞白血病Jurkat细胞Wnt/β联蛋白(catenin)信号通路及组蛋白调控、细胞凋亡和增殖的影响。用MTT方法检测PHI作用后Jurkat细胞的增殖率变化;用流式细胞术观察细胞凋亡;用Western blot观察Jurkat细胞Wnt/β-catenin信号转导通路相关蛋白β-catenin、TCF、c-myc、cyclinD1水平的变化,以及组蛋白甲基化H3K4,H3K9、乙酰化H3,H4的变化。结果表明,PHI可抑制Jurkat细胞增殖,诱导细胞凋亡,呈浓度和时间依赖性,48 h的IC50约为20μmol/L;PHI处理3 h后上调组蛋白乙酰化H3、H4和组蛋白甲基化H3K4,下调组蛋白甲基化H3K9,7 h时作用更明显;PHI作用3 hβ-catenin表达水平无变化,7 h后Wnt/β-catenin信号转导通路β-catenin及其周期相关基因TCF、c-myc、cyclinD1表达均下降。结论:PHI抑制Jurkat细胞Wnt/β-catenin信号转导通路,调控组蛋白甲基化、乙酰化,从而诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖。     

IL-1β对小鼠软骨细胞中 c-myc 蛋白表达的影响

目的：通过观察不同浓度IL-1β对软骨细胞c-myc蛋白表达的影响,探讨IL-1β在骨关节炎软骨损伤中的作用及机制并寻找有效治疗骨关节炎的方法。方法选用20只C57BL/6小鼠,体外进行关节软骨细胞的分离及原代培养;将原代培养的软骨细胞分为4组：A 组为空白对照组,采用含10% FBS 的RPMI-1640常规培养基培养;B、C、D组为IL-1β处理组,分别用含有1、10和100 ng/ml IL-1β的常规培养基培养,12 h后进行实验分析。采用Western blot和流式细胞仪检测法,观察各组c-myc蛋白表达情况及细胞凋亡情况。结果原代培养细胞24 h后开始贴壁,呈圆形或多角形,传至第4代、第5代细胞体积变大,逐渐成为梭形,甲苯胺蓝染色为软骨细胞内见蓝紫色异染颗粒。与对照组相比较,不同浓度IL-1β处理组软骨细胞 c-myc 蛋白表达水平逐渐增高,呈剂量依赖性（P＜0.05）;与对照组相比较,不同浓度 IL-1β处理组软骨细胞凋亡率逐渐增高,呈剂量依赖性（P＜0.05）。结论实验体外分离小鼠关节软骨,可成功获得高纯度,且传至3代以内活性率超过90%的软骨细胞;IL-1β可以按照剂量依赖方式上调软骨细胞c-myc蛋白的表达,同时增加软骨细胞凋亡率,说明IL-1β可能通过c-myc蛋白诱导软骨细胞凋亡。     

姜黄素对人口腔鳞癌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨姜黄素对人口腔鳞癌细胞Tca8113及Tb增殖的抑制及诱导凋亡作用。方法分别应用6．25、12．50、25．00、50．00μmol／L的姜黄素作用Tca8113及Tb细胞24h,采用MTT法检测姜黄素对口腔鳞癌细胞Tca8113及Tb增殖的抑制作用,形态学观察及流式细胞仪测定细胞凋亡。结果6．25～50．00μmol／L姜黄素能显著抑制口腔鳞癌细胞Tca8113和Tb细胞的增殖（F＝793．94、391．08,q＝6．00～62．68,P〈0．05）。流式细胞仪检测显示口腔鳞癌细胞凋亡率随姜黄素浓度升高而增加。倒置显微镜下可观察到部分凋亡细胞出现染色质凝集、核固缩、核碎裂等形态学改变。结论姜黄素对人口腔鳞癌细胞Tca8113及Tb的增殖具有显著的抑制作用,并可诱导细胞凋亡。     

黄连素促进肝癌细胞凋亡的氧化应激Wntβ-catenin信号通路机制研究

目的对黄连素促进肝癌细胞凋亡的的氧化应激Wntβ-链蛋白(β-catenin)信号通路机制进行分析,为临床治疗提供借鉴。方法将生长状态良好的肝癌细胞随机分为4组:对照组、黄连素低剂量(1 m M)、中剂量(10m M)和高剂量(100 m M)组(n=8)。除对照组外,其余各组细胞给予对应剂量的黄连素共培养,分析各组细胞凋亡蛋白及氧化应激-Wntβ-catenin信号通路蛋白的表达。结果黄连素能剂量依赖性地增强肝癌细胞中Bax、Caspase3、Caspase9、P22、P67和Gp91蛋白表达而抑制Bcl2、Wnt、β-catenin、MMP2、MMP3、MMP9、TIMP1、TIMP2和TIMP3蛋白表达,差异有显著的统计学意义(P0.05)。结论黄连素能有效促进肝癌细胞凋亡过程,且可能与其调控细胞内氧化应激及Wntβ-catenin信号通路机制有关。     

姜黄素对SMMC-7721人肝癌细胞凋亡和细胞周期的影响

目的探讨姜黄素对体外培养SMMC-7721人肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法选用SMMC-7721人肝癌细胞进行体外培养至对数生长期,以5～160μmol/L姜黄素(5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、160μmol/L)分别处理SMMC-7721人肝癌细胞24、48、72h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验测定细胞的生长抑制率;流式细胞仪检测不同浓度药物对细胞周期及凋亡率的影响。结果 MTT显示姜黄素对SMMC-7721人肝癌细胞增殖抑制率随药物浓度增加及作用时间延长有升高趋势,呈时间剂量依赖性。流式细胞术显示,随着浓度的升高细胞凋亡率提高,但姜黄素对SMMC-7721人肝癌细胞并不发生周期阻滞作用。结论姜黄素对SMMC-7721人肝癌细胞的生长有显著的抑制作用,并能诱导其凋亡,但不产生周期阻滞作用。     

姜黄素对大鼠肺成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨姜黄素对肺纤维化大鼠肺成纤维细胞增殖、凋亡的影响。方法:将体外培养的正常大鼠肺成纤维细胞(NLF)和肺纤维化大鼠肺成纤维细胞(MLF)分别于不同浓度的姜黄素中孵育;观察细胞生长状态变化;MTT法检测吸光值,计算细胞抑制率;流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果:姜黄索对MLF有抑制作用,存在剂量依赖(r=0.723;P<0.01)与时间依赖性(r=0.625,P<0.05)。流式细胞分析显示,姜黄素处理组MLF凋亡率较阴性对照组(4.29%)显著升高(P<0.01),并呈药物浓度依赖性。姜黄素不能抑制NLF增殖,对其凋亡影响无显著性。结论:姜黄素在体外对MLF具有抑制增殖、诱导凋亡的作用;而对NLF无明显影响。提示姜黄素可以通过诱导肌成纤维细胞的凋亡而起到抗纤维化的作用。     

三氧化二砷对K562细胞增殖抑制作用及其机制研究

目的:研究三氧化二砷(ATO)抑制K562细胞增殖的机制,探索慢性髓系白血病(CML)治疗的新靶点。方法:体外培养人CML细胞株K562细胞,采用不同浓度ATO处理K562细胞;MTT法检测经ATO处理24、48和72 h后细胞的增殖状况;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡、细胞周期变化、K562细胞表面分子CD44的表达水平;RT-PCR分析K562细胞β-catenin和cyclinD1基因的改变。结果:2μmol/L ATO处理的细胞即出现显著的细胞增殖抑制效应,且抑制率呈时间和剂量依赖性(r=0.997,r=0.813),随着药物浓度的增加及作用时间的延长,CD44的表达率逐渐下降。AnnexinV/PI双染FCM显示,2.5-10μmol/L的ATO作用48 h均可诱导K562细胞凋亡,且呈剂量依赖性(r=0.985)。不同浓度ATO作用细胞48 h后,G_0/G_1期的细胞比例随药物浓度的增加逐渐增高(r=0.813),S期细胞比例逐渐降低(r=-0.800)。RT-PCR结果显示,随着ATO浓度的增加K562细胞β-catenin及CylinD1的表达水平逐渐下降(r=-0.924)。结论:在一定的浓度范围内ATO能够抑制K562细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用机制可能是通过下调CD44影响Wnt/β-catenin通路的传导,使细胞周期停滞在G0/G1期,影响基因转录,从而抑制K562细胞的增殖。     

黄芪注射液对人子宫内膜癌细胞β-catenin和E-cadherin表达的影响

目的研究黄芪注射液对子人宫内膜癌HEC-1-B 细胞β-catenin 和E-cadherin 基因和蛋白表达的影响。 方法分别采用RT-PCR和免疫组化的方法检测β-catenin和E-cadherin基因和蛋白的表达。用含不同浓度的黄芪注射液的条件培养基分别培养人子宫内膜癌细胞株HEC-1-B 24、48 、72 h后,应用RT-PCR检测各组细胞中β-catenin、E-cadherin基因表达,应用免疫细胞化学法检测HEC-1-B中β-catenin、E-cadherin蛋白表达。 结果RT-PCR显示,随着子宫内膜癌细胞在含有黄芪注射液的条件培养基中培养时间的延长,细胞中E-cadherin基因表达逐步增强（P＜0.05）,而β-catenin基因表达逐步减弱（P＜0.05）。免疫组化染色结果显示,与对照组比较,黄芪注射液可明显降低子宫内膜癌HEC-1-B细胞中β-catenin蛋白的表达、增加E-cadherin蛋白的表达（P＜0.05）,而且黄芪注射液浓度越高处理时间越长β-catenin表达更低（P＜0.05）,黄芪注射液浓度越高E-cadherin表达更高（P＜0.05）。结论黄芪注射液可呈剂量和时间依赖性促进E-cadherin基因和蛋白的表达、抑制β-catenin基因和蛋白的表达,从而使WNT信号通路受到抑制。这可能是其发挥抗肿瘤作用的机制之一。      

siRNA 干扰的 DKK1低表达对子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭、迁移的影响及机制研究

目的：探讨DKK1 siRNA干扰的DKK1低表达对子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭、迁移能力的影响及作用机制。方法瞬时转染DKK1 siRNA至培养的子宫内膜癌Ishikawa细胞;应用实时定量PCR和蛋白免疫印迹方法分别检测转染前后细胞中DKK1的mRNA和蛋白表达;应用Transwell实验检测癌细胞侵袭、迁移能力。应用荧光显微镜观察转染前后Wnt/β-catenin信号通路中活性β-catenin、MMP14表达情况。结果转染DKK1 siRNA至Ishikawa细胞使细胞中DKK1基因表达水平降低21.00%（t＝3.05,P＜0.05）, DKK1蛋白表达降低39.35%（t＝40.97,P＜0.01）。侵袭实验中DKK1 RNAi组的细胞均数140.8±4.733,高于空白对照组的细胞均数123.7±6.700,癌细胞的侵袭能力增强13.82%。迁移实验中DKK1 RNAi组细胞均数（152.0±3.528）高于空白对照组（130.6±4.061）,癌细胞的迁移能力增强16.39%。DKK1 siRNA处理后,细胞中活性β-catenin、MMP14荧光增强,提示表达水平上升。结论 DKK1具有抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭、迁移的作用。Wnt/β-catenin信号通路参与了DKK1这一作用过程。DKK1不失为抑制子宫内膜癌转移的有效治疗靶点。     

姜黄素对肝癌细胞分化相关代谢指标的影响

【目的】研究姜黄素对肝癌细胞BEL-7402诱导细胞分化的机制。【方法】用酶促反应试剂盒检测细胞浆中γ-谷氨酰转肽酶（γ-GT）活性,免疫组化染色检7714细胞浆中甲胎蛋白（AFP）合成情况,放免法检测细胞AFP和白蛋白（ALB）分泌量。观察不同浓度姜黄素对以上指标的影响。【结果】①各实验组γ-GT活性在培养过程中逐渐下降,自d2开始显著下降,d3～5缓慢下降,且较同期培养的对照组显著性降低（P〈0．01）。②细胞免疫组化结果显示,对照组细胞AFP表达较强,着色较深,呈棕黄色,主要成团浓集分布于胞浆中。实验组AFP在胞浆内均匀分布,呈黄色,着色较淡。随姜黄素浓度的增加而阳性程度减弱。③各实验组AFP分泌量均于d2显著下降,d5降至最低值。实验组细胞AFP分泌量较同天培养的对照组细胞显著降低（P〈0．01）。④对照组ALB分泌量自d2开始明显升高,自d5开始有小幅度下降,实验组细胞ALB分泌量较同天培养的对照组细胞显著性升高（P〈0．01）。【结论】姜黄素可影响肝癌细胞BEL-7402代谢指标,诱导其在体外向正常肝细胞分化。     

C-myc 参与β-Catenin 介导的肺腺癌 A549／DDP细胞的化疗耐药的实验研究

目的探讨C-myc与β-Catenin介导的肺腺癌A549/DDP的耐药相关性。方法 MTT细胞毒实验比较A549与A549/DDP细胞对顺铂的敏感性;Western blot检测在顺铂作用前、后β-catenin及C-myc在肺腺癌A549及A549/DDP中的蛋白表达及免疫荧光定位;流式细胞仪检测不同剂量的顺铂作用下两株细胞以及A549/DDP转染C-myc siRNA前后的凋亡和周期变化。结果 MTT细胞毒实验结果显示顺铂对A549和A549/DDP细胞的IC50值分别为（5.769±0.24）μmol/L和（28.373±0.96）μmol/L,与A549细胞比较． A549/DDP顺铂耐药4.92倍。 Western blot 结果显示β-Catenin 及C-myc蛋白在A549/DDP细胞的表达较A549高,顺铂作用48 h后A549细胞的β-catenin及C-myc表达较顺铂作用前下调（ P＝0.007）, A549/DDP细胞的β-catenin及C-myc表达较顺铂作用前上调（ P＝0.006）;免疫荧光定位结果显示顺铂作用48 h后A549及A549/DDP细胞的β-Catenin由膜/质/核表达转为质/核表达,C-myc表达由浆/核表达转为核表达。流式结果显示随着顺铂剂量的增加,细胞凋亡率成剂量依赖性增加。 A549/DDP中转染C-myc siRNA 48 h后引起细胞S期阻滞,G0/G1期细胞积聚,凋亡率增加（P＝0.013）,IC50值明显下降（P＝0.009）。结论β-catenin的下游靶基因C-myc在调节A549/DDP的耐药性中起到一定作用,C-myc siRNA可以提高A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。     

塞来昔布对人白血病细胞株HL-60细胞增殖及凋亡的影响及其作用机制

本研究旨在探讨塞来昔布（celecoxib）对人急性髓系白血病细胞株HL-60细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。不同浓度塞来昔布作用于HL-60细胞24h后,CCK-8法测定细胞增殖活性,流式细胞技术分析细胞凋亡及细胞周期分布的变化,定量RT—PCR的方法检测细胞周期蛋白DJ、EI及COX-2mRNA的表达。结果表明,不同浓度塞来昔布作用于HL-60细胞24h后,细胞增殖明显受抑,且呈-定的浓度依赖性（r=0．955）,24h的IC50值为63．037μmol／L。塞来昔布可诱导HL-60细胞的凋亡,也呈剂量依赖性（r=0．988）。塞来昔布可使HL-60细胞明显阻滞于G0／G1期,可下调cyclinD1、cyclinE1mRNA的表达。塞来昔布可使细胞COX-2mRNA表达水平降低。结论：塞来昔布呈浓度依赖性抑制HL-60细胞增殖,并可能通过下调cyclinD1、cyclinE1的表达引起细胞G0／G1,期阻滞,下调COX-2的表达诱导细胞凋亡。     

阻断血管内皮生长因子与表皮生长因子受体协同信号影响HepG2肝癌细胞生长的实验研究

目的探讨阻断血管内皮生长因子（VEGF）与表皮生长因子受体（EGFR）协同信号对HepG2肝癌细胞生长的影响。方法体外培养HepG2肝癌细胞株,分别将含不同浓度（10-2、10-3、10-4、10-5μg/μL）抗VEGF抗体与抗EGFR抗体的培养液与HepG2肝癌细胞共同培养12、24、4-8h,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT）比色法计算细胞生长抑制率。以抗体的不同浓度对HepG2肝癌细胞抑制率作图,得到剂量反应曲线。结果抗VEGF抗体和抗EGFR抗体对HepG2肝癌细胞生长的抑制均呈浓度依赖性,并且有一定的量效关系。结论阻断VEGF与EGFR协同信号可抑制HepG2抗体肝癌细胞的增殖,具有剂量依赖性,可诱导细胞凋亡。     

姜黄素雷公藤内酯醇对前列腺癌细胞PC3及血管内皮生长因子影响的比较

目的研究姜黄素（curcumin,Cur）、雷公藤内酯醇（triptolide,TL）对非雄激素依赖性前列腺癌细胞株PC3细胞体外作用及其血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达的影响。方法分别用梯度浓度的Cur和TL作用于PC3细胞,MTT法检测细胞生长活性;流式细胞仪测定细胞周期及凋亡的变化;半定量RT-PCR法检测PC3细胞内VEGF mR-NA的表达;ELISA检测细胞上清液中分泌VEGF蛋白的浓度。结果Cur及TL都能呈剂量与时间依赖性显著抑制PC3细胞的生长,不同浓度组之间及不同作用时间组之间的差异均有统计学意义（P〈0.01）。Cur、TL诱导PC3细胞分别出现剂量依赖性G2/M、S期阻滞（P〈0.01）,且各浓度组凋亡细胞比例差异有统计学意义（P〈0.01）;PC3细胞内VEGF mRNA的表达和细胞上清液中分泌VEGF蛋白亦呈剂量依赖性降低。结论Cur、TL能显著抑制体外PC3细胞的生长,分别促进细胞周期阻滞于不同时期,增加凋亡,并且VEGF mRNA及蛋白的表达明显降低,两药抑制肿瘤和血管生长机制不同。     

链球菌蛋白对人肝癌Bel-7402细胞的增殖抑制作用及其分子机制

目的:从分子水平观察链球菌蛋白质对人肝癌Bel-7402细胞的生长增殖的抑制作用。方法:实验于2005-10/2006-11在首都医科大学病原生物学系实验室完成。①链球菌32080株购自中国医学细菌保藏管理中心,人肝癌Bel-7402细胞株由首都医科大学细胞生物学系惠赠。②常规培养链球菌并按照Winters方法提取细菌蛋白。③用0,10,20,100mg/L细菌蛋白作用于单层培养的Bel-7402细胞24,48,72h,采用MTT法检测链球菌蛋白对细胞的增殖抑制作用。④Bel-7402细胞经10mg/L或50mg/L细菌蛋白分别作用48,72h后,流式细胞术检测细菌蛋白对癌细胞生长周期时相分布。⑤Bel-7402细胞经50mg/L的细菌蛋白分别作用24,48,72h后,Annexin-v PI双染法检测Bel-7402细胞凋亡率。⑥用50mg/L的链球菌蛋白分别作用于Bel-7402细胞0,24,48,72h后,Western Blot检测链球菌蛋白对Bel-7402细胞凋亡相关蛋白的影响。结果:①链球菌蛋白对Bel-7402细胞的抑制作用:链球菌蛋白能显著抑制人肝癌Bel-7402细胞增殖,100mg/L细菌蛋白作用于细胞24,48,72h的抑制率分别为15.6%,35.6%,50%,呈剂量和时间依赖关系。②细菌蛋白对肝癌细胞生长周期时相分布及细胞凋亡率的影响:经链球菌蛋白(10,50mg/L)作用后,G2/M期Bel-7402细胞比率较正常对照组增加,差异有显著性(P<0.05);流式细胞术检测显示,经50mg/L链球菌蛋白作用后,实验组Bel-7402细胞凋亡率明显高于对照组细胞(P<0.01)。③Bel-7402细胞凋亡相关蛋白的变化:Bel-7402细胞经50mg/L链球菌蛋白分别作用24,48,72h后,细胞色素C的释放逐渐增多,Procaspase-3及Bcl-2蛋白水平降低。结论:链球菌32080株蛋白对人肝癌Bel-7402细胞的生长抑制作用存在着剂量和时间依赖性,并能将细胞的生长周期阻滞于G2/M期,诱导细胞凋亡,影响Bcl-2,procaspase-3和细胞色素C等重要的凋亡相关蛋白水平。     

雌激素通过NF-κB信号通路影响肝癌细胞的肿瘤学行为研究

目的探讨雌激素对HepG2和BEL7402两种肝癌细胞增殖及迁移能力的抑制和诱导凋亡的作用及其相应机制。方法利用MTS试验检测不同浓度的雌激素在不同时间点对HepG2和BEL7402两种肝癌细胞增殖能力的影响。Annexin V/PI流式细胞术检测不同浓度的雌激素诱导HepG2和BEL7402细胞凋亡的情况。Transwell迁移实验检测雌激素对HepG2和BEL7402细胞迁移能力的影响。采用Western blotting法检测不同浓度下雌激素对肝癌细胞中NF-κB信号通路的活性及其下游相关基因c-Myc、Cyclin D1、基质金属蛋白酶(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)和Bcl-2表达的影响。结果 MTS试验结果显示,在不同时间点雌激素有效抑制了HepG2和BEL7402细胞的增殖,并随着雌激素浓度的升高其抑制肝癌细胞增殖的效果逐渐增强,与此同时,雌激素也降低了c-Myc、Cyclin D1等增殖相关基因的表达。Annexin V/PI流式细胞术数据显示雌激素诱导HepG2和BEL7402细胞的凋亡并呈明显剂量依赖性,而抗凋亡蛋白Bcl-2的表达出现下降。Transwell迁移实验证明雌激素明显抑制了HepG2和BEL7402细胞的迁移能力并且降低了MMP-9和VEGF的表达。验证了雌激素可有效抑制HepG2和BEL7402肝癌细胞中NF-κB信号通路的活性。结论雌激素通过下调NF-κB信号通路的活性及下游相关分子的表达,而抑制肝癌细胞的增殖与迁移并诱导其凋亡。     

2,5二羟基苯乙酮通过Wnt/β-catenin信号通路诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡

目的观察2,5二羟基苯乙酮(DHAP)对多发性骨髓瘤(MM)细胞的影响,并探索其相关作用机制。方法体外培养RPMI8226细胞,分别加入浓度为100μM、200μM、400μM DHAP,对照组加入等量磷酸盐缓冲液(PBS)处理。48 h后收集各组细胞,利用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。实时荧光PCR检测各组细胞Wnt/β-catenin信号通路相关基因β-catenin、Survivin、C-myc以及C-cyclin D1 mRNA表达。Western blotting检测β-catenin、Survivin、Cmyc以及C-cyclin D1蛋白表达。结果 48 h后对照组细胞凋亡率为(0.02±0.01)%,100μM、200μM、400μM DHAP组细胞凋亡率为(7.34±2.56)%、(12.18±3.07)%、(15.76±2.77)%,并呈剂量依赖趋势(P0.05);实时荧光PCR结果显示,DHAP组β-catenin,Survivin、C-myc以及C-cyclin D1 mRNA表达显著低于对照组,并呈剂量依赖趋势(P0.05);Western blot显示,DHAP组β-catenin、Survivin、C-myc以及C-cyclin D1蛋白表达显著低于对照组,并呈剂量依赖趋势(P0.05)。结论 2,5二羟基苯乙酮呈剂量依赖性诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡,可能与Wnt/β-catenin信号通路相关。     

吉非替尼对肝癌Bel7402细胞株放射增敏作用机制的探讨

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂Gefitinib对人肝癌Bel7402细胞株的放射增敏作用及机制。方法实验分四组:实验组(药物Gefitinib+放疗)、药物组、放疗组、对照组(无药物和放疗),采用流式细胞技术分别检测四组作用于肝癌Bel7402细胞株后细胞周期分布状况。细胞免疫化学方法从形态学上观察相关蛋白(Mre11、P53、CDK1)在各实验组的表达情况,Westernblot方法分别检测四组作用肝癌Bel7402细胞株后Mre11、P53、CDK1蛋白的表达情况。结果 (1)流式细胞技术显示:药物组G0/G1期细胞比例略有增长,S期细胞比例减少;放疗组G2/M期细胞比例呈上升趋势,而S期细胞比例下降;实验组G2/M期细胞比例显著增加,G0/G1期及S期细胞均呈现明显下降趋势,且其对S期细胞的比例减少更优于其他三组(P<0.05)。(2)细胞免疫化学法显示Mre11、P53、CDK1蛋白在肝癌Bel7402细胞中均有表达,P53实验组面密度、光密度值与其他三组比较均升高,有显著差异,Mre11、CDK1实验组面密度、光密度值均低于其他三组。(3)Westernblot结果显示,在对肝癌Bel7402细胞株Mre11、CDK1蛋白的表达中,药物组及对照组无明显变化,放疗组及实验组均可使其表达下降,而以实验组对其表达下降的趋势更加显著。实验组与其他组比较P53表达水平明显增高。结论 (1)Gefitinib与射线共同作用于肝癌Bel7402细胞株后放射敏感的G2/M期阻滞增加,放射耐受的S期比例下降。(2)实验组可使Mre11、CDK1蛋白表达下降,实验组下降更明显,实验组与其他组比较:P53表达水平明显增高,Gefitinib可能上调人肝癌Bel7402细胞放射敏感性。     

熊果酸联合Wnt信号通路抑制剂影响急性白血病细胞增殖和凋亡的实验研究

目的采用前瞻性研究探讨熊果酸联合Wnt信号通路抑制剂对急性白血病细胞增殖和凋亡的影响。方法用不同浓度的熊果酸作用急性白血病细胞U937后,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,计算半数抑制浓度。U937细胞分为对照组、熊果酸组、抑制剂组和联合组,联合组细胞用半数抑制浓度的熊果酸和Wnt信号通路抑制剂FH-535共同处理,熊果酸组用半数抑制浓度的熊果酸处理,抑制剂组用Wnt信号通路抑制剂FH-535处理,MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、β-连环蛋白(β-catenin)、Wnt信号通路下游靶基因(c-myc)蛋白水平。结果 0、4、8、16、32μmol/L的熊果酸作用后的U937细胞存活率依次降低。熊果酸组、抑制剂组、联合组细胞存活率、β-catenin和c-myc表达水平明显低于对照组,而细胞凋亡率和Cleaved Caspase-3水平明显高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。联合组细胞存活率、β-catenin和c-myc表达水平明显低于熊果酸组和抑制剂组,而凋亡率和Cleaved Caspase-3水平明显高于熊果酸组和抑制剂组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论单纯使用熊果酸或者Wnt信号通路抑制剂均能够抑制白血病细胞增殖,促进急性白血病细胞凋亡,并且熊果酸和Wnt信号通路抑制剂联合使用对白血病细胞增殖抑制作用和凋亡促进作用更大。