睾丸特异性基因TSF22在小鼠中的表达研究

目的 筛选与精子发生相关的基因。方法 将4、9、18、35、54日龄和6月龄小鼠睾丸组织cDNA探针与Affymetrix全基因组芯片进行杂交，筛选出差异表达的基因。利用网络信息资源对该基因进行生物学信息分析。RT-PCR分析该基因在小鼠睾丸不同发育阶段及小鼠不同组织中的表达。结果 芯片结果分析筛选出一个差异表达杂交点（GenBank登录号：NM_199034），生物信息学分析发现该基因全长1597bp，含有570bp的完整ORF，编码190个氨基酸、分子量为22．106kDa的蛋白质，我们将其命名为TSF22。RT-PCR分析表明TSF22基因特异性表达于睾丸组织及18日龄小鼠睾丸中。结论 TSF22基因的表达与小鼠精子发生的过程一致，可能在精子发生中起重要作用。     

睾丸特异性新基因TSC23在小鼠和人睾丸组织中的表达分析

目的筛选与精子发生相关的睾丸特异性新基因，并探讨其在精子发生过程中所起的作用。方法将不同发育阶段的小鼠睾丸组织cDNA探针与Affymetrix全基因组芯片进行杂交，通过杂交信号的比较，筛选出差异表达的基因。用生物学信息软件对该基因进行生物学信息分析。RT-PCR分析该基因在小鼠不同发育阶段睾丸、小鼠不同组织及人不同组织中的表达。结果通过4、9、18、35、54d和6月龄小鼠睾丸的芯片信号比较筛选出一个差异表达基因（GenBank登录号：AK016041），全长有803bp，含有606bp的完整ORF，编码一个有201氨基酸、分子量为22．686kDa的蛋白质，我们将其命名为TSC23。亚细胞定位预测显示TSC23基因可能在细胞核中表达。SMART功能域分析表明氨基酸序列1-18区域为信号肽功能域，36-58区域为穿膜功能域。TSC23蛋白在人的同源基因GenBank登录号为XM-371248，在201个氨基酸区域内有75％的同源性。RT-PCR分析表明TSC23基因特异性表达于人和小鼠睾丸组织中，且只在38d和6月龄小鼠睾丸中表达。结论TSC23为人和小鼠睾丸特异性表达基因，只在38d和6月龄小鼠睾丸中表达，提示其可能在精子发生中起着重要作用。     

睾丸特异性基因BAFL在人和小鼠中的表达及其生物信息学分析

目的 筛选与精子发生相关的基因.方法 将4d、9d、18d、35d、54d和6月龄小鼠睾丸组织cDNA探针与Affymetrix全基因组芯片进行杂交,筛选出差异表达的基因.利用网络信息资源对该基因进行生物学信息分析.RT-PCR分析该基因在小鼠睾丸不同发育阶段4d、9d、11d、14d、18d、21d、38d、6月龄及人和小鼠不同组织心、肝、脾、肺、肾、脑、附睾和睾丸中的表达.结果 芯片结果分析筛选出1个差异表达杂交点,生物信息学分析发现该差异点是BAFL基因,该基因全长527bp,含有273bp的完整ORF,编码90个氨基酸、相对分子量(Mr)为10.266kDa的蛋白质.RT-PCR分析表明小鼠mBAFL基因在小鼠21d龄睾丸及之前没有表达,在35d龄睾丸后开始高表达并特异性地表达于睾丸组织.人hBAFL基因在所检测的8种组织中,也只在睾丸组织中表达.结论 BAFL基因为睾丸特异性基因,小鼠mBAFL的表达与小鼠精子发生的过程一致,可能在精子发生中起重要作用.     

TNP2基因在小鼠睾丸组织中的表达研究

目的 筛选与精子发生相关的基因.方法 将4d、9d、18d、35d、54d和6月龄小鼠睾丸组织cDNA探针与Affymetrix全基因组芯片进行杂交,筛选出差异表达的基因.通过RT-PCR分析差异表达基因在小鼠睾丸不同发育阶段中的表达.结果 对Affymetrix全基因组芯片杂交结果分析后,筛选得到1个差异表达杂交点,通过NCBI网站与小鼠全基因组序列Blast分析可知,该差异表达基因是TNP2基因.小鼠TNP2基因全长724bp,其编码框大小为375bp.RT-PCR结果表明TNP2基因在小鼠21d龄及之前的睾丸中没有表达,在35d龄睾丸开始高表达.结论 TNP2基因为小鼠年龄依赖性表达基因,小鼠TNP2基因的表达与小鼠精子发生过程有很强的一致性,因此,可以推测该基因在精子发生中可能起重要作用.     

Pgk2在小鼠中的年龄依赖性表达特征分析

目的 利用基因芯片技术筛选与精子发生相关的基因,并研究其表达特点.方法 将4d、9d、18d、35d、54d龄和6月龄小鼠睾丸组织cDNA探针与Affymetrix全基因组芯片进行杂交,筛选出差异表达的基因.然后通过RT.PCR分析差异表达基因在小鼠睾丸不同发育阶段中的表达.结果 对Affymetrix全基因组芯片杂交结果分析后,筛选得到1个差异表达杂交点,通过在NCBI网站与小鼠全基因组序列Blast分析可知该差异表达基因是Pgk2基因.该基因在4d、9d、18d、35d、54d龄和6月龄小鼠睾丸中信号强度分别是1.7(A)、161.5(e)、634(P)、1881.3(P)、3123.7(P)和3440.4(P)表明Pgk2基因在4d龄小鼠睾丸中无表达,9d低表达,从18年龄后开始高表达;RT-PCR结果表明:小鼠Pgk2基因在小鼠9d龄及之前的睾丸中无表达或低表达,在18d龄睾丸后开始高表达,与芯片数据的结果相一致.结论 Pgk2基因为小鼠年龄依赖性表达基因,推测其在精子发生过程中有重要作用.     

Tesmin基因在小鼠睾丸中的表达分析

目的 研究Tesmin基因的表达特点值.方法 将4d、9d、18d、35d、54d和6月龄小鼠睾丸组织提取RNA,通过RT-PCR分析差异表达基因Tesmin在小鼠睾丸不同发育阶段中的表达.结果 基因芯片结果显示4d、9d、18d、35d、54d和6月龄小鼠睾丸中分别是31.4(A)、34(A),1292(P)、865.6(P)、977.2(P) 和830.7(P),代表Tesmin基因在4d,9d小鼠中无表达,18d龄后开始高表达,RT-PCR结果表明小鼠Tesmin基因在小鼠9d龄及之前的睾丸中没有表达,在18d龄后睾丸中开始高表达,与基因芯片分析结果相一致.结论 Tesmin基因为小鼠年龄依赖性表达基因,小鼠Tesmin基因的表达与小鼠精子发生有很强的一致性,推测该基因可能在精子发生中起重要作用.     

CatSper基因家族在人和小鼠组织中的表达特征

目的研究CatSper基因家族在人和小鼠组织中的分布特点。方法将不同发育阶段的小鼠睾丸组织cDNA与Affymetrix全基因组芯片探针进行杂交,筛选出差异表达基因CatSper基因家族。RT—PCR验证差异表达基因在不同发育阶段的小鼠睾丸组织的表达特征,及其在人和小鼠不同组织中的分布。结果基因芯片分析发现CatSper1、CatSper2和CatSper3在小鼠睾丸的表达呈阶段特异性。RT-PCR结果表明该基因家族在睾丸的表达丰度明显高于其它组织;CatSper1和CatSper4在人体睾丸组织中特异性表达。结论CatSper基因家族在人和小鼠中呈现睾丸特异性表达或高表达,可能在精子发生中发挥重要功能。     

ACRV1在人睾丸组织中的表达特征分析

目的 分析ACRV1基因在人睾丸组织中的表达变化,方法 采用人全基因组Affymetrix表达谱芯片,分析一个27岁正常男人睾丸和6月龄胎儿睾丸的差异表达基因谱,筛选得到ACRV1基因的表达值,然后通过免疫组织化学的方法鉴定ACRV1基因在人睾丸组织中的表达定位.结果 对Affymetrix全基因组芯片杂交结果分析后,筛选得到ACRV1基因在芯片上表达值,代表ACRV1基因的探针208013_s_at在6月龄胎儿睾丸和27岁成人睾丸中的表达值分别是5.8(A)和1210.7(P),表明该基因在胎儿期睾丸中没有表达,在成年期睾丸中出现高表达,免疫组织化学实验显示该基因的蛋白质只表达于成人睾丸组织中的长形精子的头部,在睾丸组织的其他位置均无表达.结论 ACRV1基因特异性地表达于成人精子细胞的头部,提示该基因在精子发生中起着重要作用.     

1700001O22RIK基因在小鼠睾丸的特异表达及生物信息学分析

目的:研究1700001O22RIK(RIKEN c DNA 1700001O22)基因在小鼠睾丸的表达特征,结合生物信息学分析初步探讨其功能。方法:通过分析小鼠基因表达谱芯片,发现1700001O22RIK基因特异性表达于睾丸组织。采用RT-PCR、实时PCR、Western印迹及免疫组化等方法分析该基因在成年C57BL/6J小鼠各组织中的表达特征,以及不同发育阶段小鼠的睾丸组织中的表达变化。利用生物信息学软件对该基因进行相关生物信息学分析。结果:1700001O22RIK基因在小鼠睾丸组织中呈现特异性表达,表达水平具有年龄依赖性,在成年期表达最强;1700001O22RIK蛋白在成年小鼠睾丸组织中主要定位于精原细胞、精母细胞及圆形精子细胞。经生物信息学分析,1700001O22RIK基因编码蛋白氨基酸序列在人和小鼠具有高度同源性,提示该基因在哺乳动物进化过程中十分保守。结论:1700001O22RIK属于睾丸特异性基因,主要表达于生精小管的精原细胞、精母细胞及圆形精子细胞,提示其可能参与精子发生的调节。     

小鼠睾丸新基因TSEG-2的克隆及表达分析

目的:利用生物信息学手段克隆小鼠睾丸特异性基因TSEG-2。方法:从二级表达序列标签(EST)数据库ZooDDD中获得小鼠正常睾丸表达的EST,通过dbEST数据库检索出与其高度同源的EST序列,构建EST叠加群,Biolign软件拼接,GeneScan软件预测contigs对应的基因组序列中的外显子、内含子;针对开放阅读框设计引物序列,采用RT-PCR从小鼠睾丸组织中克隆新基因的cDNA,分析该基因在小鼠睾丸不同发育阶段、隐睾中及各脏器中的表达,并对测序结果进行生物信息学分析。结果:成功克隆了小鼠睾丸新基因TSEG-2,全长451bp,开放阅读框为267bp,编码88个氨基酸。RT-PCR证实该基因开放阅读框正确,TSEG-2在小鼠睾丸组织中高表达,在4、9、14、18、21、38日龄和2、6月龄小鼠睾丸组织中呈现规律性表达,在隐睾组织中表达减弱,且与小鼠其他cDNA无同源性,获得GenBank登录号EU079025。功能区分析发现,小鼠TSEG-2cDNA序列定位于染色体15qE3,为可溶性非分泌型蛋白,有2个可能的蛋白激酶C(PKC)磷酸化位点,1个酪蛋白激酶Ⅱ(CK2)磷酸化位点,并可能是一种核蛋白。结论:获得小鼠睾丸特异性表达基因TSEG-2,诱导小鼠隐睾发生的17-β雌二醇可引发基因TSEG-2的下调,为进一步研究该基因的生物学功能和表达调控奠定了基础。     

Mm．158494基因在白消安引起的无精子症小鼠中的表达

目的建立一个小鼠无精子症模型,并探讨Mm.158494基因在无精子症中的表达及意义。方法建立无精子症小鼠模型,观察小鼠睾丸生精小管结构的变化。筛选与精子发生相关的睾丸特异性新基因,利用网络信息资源对该基因进行生物学信息分析,RT-PCR分析该基因在无精子症小鼠睾丸中的表达。结果生物信息学分析发现Mm.158494基因cDNA序列全长1046bp,含有762bp的完整开放阅读框。编码253个氨基酸、分子量为29.432kDa的蛋白质。小鼠无精子症模型中微弱表达Mm.158494基因。结论Mm.158494基因在无精子症中表达明显降低,提示该基因可能在精子发生中起重要作用。     

Developmental expression of ACRV1 in humans and mice

To identify the developmental expression of the ACRV1 gene in humans and mice, testes cDNA samples were collected at different post-natal days (days 4, 9, 18, 35, 54, and 6 months) from Balb/c mice and were hybridised to the mouse whole genome 430 2.0 Array (Affymetrix Inc.) chip. The characteristics of ACRV1 were analysed using various cellular and molecular biotechnologies. The results showed that the expression of mouse ACRV1 was not detected in mouse testes on days 4, 9, and 18 but was present on days 35, 54, and 6 months. Using RT-PCR analysis of mouse ACRV1, we determined that mouse ACRV1 was expressed specifically in the mouse testis, and its expression began at days 35. Western blot analysis demonstrated that human ACRV1 was primarily expressed in human testes, and immunofluorescent and immunohistochemistry staining showed that human ACRV1 protein was predominantly located in round and elongated spermatids in human testes, indicating that ACRV1 may play an important role in mammalian spermatogenesis and may be a target of a contraceptive vaccine.     

小鼠睾丸组织Bmi1基因的克隆及原核表达

目的:克隆小鼠Bm i1 cDNA并进行原核表达,为下一步制备BM I1多克隆抗体奠定基础。方法:从小鼠睾丸组织中克隆Bm i1 cDNA,测序并利用BLAST程序比对证明该基因序列正确后,构建原核表达载体pET-28 c-Bm i1,将其转入大肠埃希菌BL21中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并通过免疫印迹检测重组目的蛋白。结果:成功克隆了小鼠Bm i1 cDNA,原核表达的融合蛋白可与H is标签抗体和BM I1单克隆抗体特异性结合。结论:小鼠睾丸组织中Bm i1基因有表达;成功克隆了小鼠Bm i1 cDNA并在大肠埃希菌BL21中正确表达了重组蛋白rBM I1。     

Identification of a novel testis-specific gene and its potential roles in testis development／spermatogenesis

Aim: To identify and characterize a novel gene with potential roles in testis development and spermatogenesis.Methods: A cDNA microarray was constructed from a human testis large insert cDNA library and hybridized with probes of human or mouse adult and fetal testes. Differentially expressed genes were isolated and sequenced. RT-PCR was used to test the tissue distribution of the genes of interest and in situ hybridization was performed to localize the gene expression in the mouse testis. A range of bioinformatical programs including Gene Runner, SMART, NCBI Blast and Emboss CpGPlot were used to characterize the new gene‘s feature. Results: A novel testis-specific gene,NYD-SPS, was differentially expressed in fetal and adult testes. The deduced protein structure of NYD-SP5 was found to contain an IQ motif (a short calmodulin-binding motif containing conserved lie and Gin residues), a Carbamate kinase-like domain, a Zn-dependent exopeptidase domain and a lactate dehydrogenase (LDH) C-terminal-like domain. RT-PCR analysis revealed that NYD-SP5 was predominantly expressed in the testis but not in other 15 tissues examined. In situ hybridization and RT-PCR examinations revealed that the expression of NYD-SP5 was confined in the male germ cell but not present in the somatic cell in the testes. Conclusion: NYD-SP5 is a newly found testisspecific gene with potential roles in testis development and spermatogenesis through a calmodulin-activated enzyme.