精密肝切片中乙醛活化肝星状细胞模型的建立

目的:在精密肝切片中利用乙醛激活肝星状细胞,建立一种星状细胞激活的体外模型,为研究和筛选阻抑肝纤维化发生的药物奠定基础。方法:利用振荡切片机制备精密肝切片,建立培养系统。以700μmol·L-1乙醛孵育切片,培养0、2、4、6h,测定培养基和组织匀浆中谷胱甘肽S-转移酶(GST)、乳酸脱氢酶(LDH)和羟脯氨酸(Hyp)含量,观察病理切片中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达。结果:与0h相比,乙醛培养2、4、6h培养基的GST、LDH漏出量均显著升高(P<0.05)。切片组织Hyp含量6h较0h相比明显升高(P<0.05)。免疫组化片镜下可见4、6h有α-SMA阳性细胞表达,图像分析显示面积和阳性率较0h明显增加(P<0.05)。结论:精密肝切片与终浓度为700μmol·L-1乙醛共孵育6h可活化切片中星状细胞,该技术可作为良好的体外肝星状细胞激活模型。α-SMA免疫组化是一鉴定体外星状细胞激活的可靠指标。     

红景天苷对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞增殖及胶原基因表达的影响

目的探讨红景天苷对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)增殖、α1(I)型胶原mRNA合成、IκB和NF-κB表达的影响。方法用原位杂交、免疫细胞化学和凝胶电泳迁移率技术(EMSA)检测HSC的增殖和胶原基因表达。结果乙醛刺激HSC增殖、α1(I)型胶原mRNA合成 ,使IκB表达下降、NF-κB活性增加。红景天苷(0.5～2.5 mg·mL^-1)对上述影响有抑制作用,且以1.5 mg·mL^-1组效果最好。结论红景天苷明显抑制乙醛刺激的HSC增殖及胶原基因的表达。     

排钱草生物碱对乙醛刺激的人源肝星状细胞增殖及细胞外基质的影响

目的 研究排钱草生物碱对乙醛刺激的人源肝星状细胞（LX-2）的增殖抑制作用及其对细胞外基质生成的影响。方法 采用MTT法检测排钱草生物碱对乙醛刺激下人源肝星状细胞的增殖的作用;LDH比色法检测排钱草生物碱对LX-2的细胞毒性;运用Real-time PCR技术检测细胞中α-SMA、Co1-Ⅰ、MMP-2及TIMP-1 mRNA的表达情况。结果 排钱草生物碱对乙醛刺激下的肝星状细胞的增殖具有明显抑制作用,呈剂量依赖性。排钱草生物碱各剂量组培养上清液中LDH活力差异无显著性。LX-2细胞中的α-SMA、Co1-Ⅰ、及TIMP-1 mRNA随药物浓度增加,其表达下降,MMP-2 mRNA表达上升。结论 排钱草生物碱可能通过抑制LX-2细胞的增殖和减少细胞外基质的合成,从而发挥抗肝纤维化作用。     

西红花酸对乙醛诱导的肝星状细胞增殖和胶原合成的影响

目的:探讨西红花酸(Crocetin)对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC)增殖和胶原合成的影响及其作用机制.方法:培养大鼠肝星状细胞HSC-T6,建立乙醛诱导的HSC纤维化模型;用不同浓度的西红花酸(10-6、10-7、10-8 mol/L)对乙醛刺激的HSC-T6进行处理,MTT法检测细胞增殖;羟脯氨酸测定检测HSC-T6胶原含量;流式细胞分析仪测定细胞凋亡;Western blot检测细胞ERK1/2、Bax、Bcl-2蛋白的表达;RT-PCR检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白、间质胶原酶(MMP-2)、组织金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)的基因表达.结果:在一定浓度范围里,西红花酸能抑制乙醛引起的HSC增殖和胶原合成;西红花酸诱导乙醛刺激的HSC细胞凋亡;西红花酸能增加Bax蛋白表达,降低乙醛刺激升高的ERK1/2、Bcl-2蛋白表达;西红花酸能明显降低Ⅰ型、Ⅲ型胶原、TIMP-1的表达,提高MMP-2的表达.结论:西红花酸通过抑制乙醛诱导的HSC增殖和胶原合成以及促进活化的HSC凋亡起到抗肝纤维化作用,其机制可能与ERK信号传导通路和对基质金属蛋白酶的调节有关.     

肝星状细胞凋亡机制研究进展

肝星状细胞(hepatic stellate cell，HSC)是肝脏产生细胞外基质的主要来源，其大量增殖和凋亡相对不足在肝纤维化(hepatic fibrosis)的发生中起桉心作用，抑制其增殖和诱导其凋亡是逆转肝纤雏化的重要对策。肝星状细胞的凋亡受到凋亡和抗凋亡基因、细胞因子等的调控。现将Fas／Fasl系统、Bcl-2、Bax、p^53、Caspase家族及p^53与肝星状细胞凋亡研究概况综述如下。     

内毒素刺激的Kupffer细胞对肝星状细胞增殖的影响

目的　探讨内毒素 (LPS)及其刺激的Kupffer细胞对大鼠肝星状细胞 (HSC)增殖的影响。方法　用链酶蛋白酶和胶原酶原位灌流 ,Nycodenz密度梯度离心分离大鼠肝脏HSC和Kupffer细胞 ,制备LPS刺激的Kupffer细胞培养上清液 (KCCM ) ,并以MTT法观察LPS及KCCM对HSC增殖的效应。结果　无LPS刺激和浓度为 1μg/ml的LPS刺激所得的KCCM对HSC有显著增殖作用 (P <0 0 1) ,且两组之间有差异 (P <0 0 5 ) ;浓度为 10 μg/ml的LPS刺激所得的KCCM对HSC无影响 (P >0 0 5 ) ;加入兔抗人转化生长因子 β1(TGF β1)可抑制低浓度LPS刺激的KCCM对HSC的增殖作用 (P <0 0 1) ;LPS浓度为 1μg/ml和 10 μg/ml对HSC直接作用均无增殖效应 (P >0 0 5 )。 结论　内毒素刺激的KCCM可促进HSC增殖 ,与肝纤维化的发生可能有关     

白芍总苷治疗四氯化碳致大鼠肝纤维化的作用与其影响肝星状细胞功能的关系*

目的:研究白芍总苷(TGP)通过影响肝星状细胞(HSC)的功能发挥治疗四氯化碳(CCl_4)致大鼠肝纤维化的作用。方法:建立CCl_4诱导化学性肝纤维化模型,全自动生化仪检测血清中丙氨酸氯基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)水平;放免法检测血清及体外HSC培养上清中透明质酸(HA)和Ⅲ型前胶原(PCⅢ)的含量;流式细胞仪检测HSC凋亡率。苏木素-伊红染色处理肝脏组织切片,光镜观察病理学改变。结果:在CCl_4诱导大鼠肝纤维化模型,TGP给药(40,80,160mg·kg~(-1),ig)均明显降低血清ALT,AST,ALP,HA和PCⅢ水平;升高白蛋白水平及白蛋白球蛋白比值(A/G)。TGP(60,120和240mg·L~(-1))能明显降低HSC体外分泌的HA和PCⅢ水平,促进HSC凋亡,明显改善肝脏病理组织状况。结论:TGP对CCl_4致大鼠肝纤维化具有治疗作用,该作用与其降低HSC分泌HA和PCⅢ、促进HSC凋亡有关。     

夏枯草总三萜调控ERK、TGF-β1/Smad通路对肝纤维化大鼠的保护作用研究

目的研究夏枯草总三萜(TTP)对四氯化碳(CCl4)致肝纤维化大鼠的保护作用及其分子机制。方法 SD大鼠随机分为正常组、模型组、TTP(25、50、100 mg·kg-1)组和阳性对照组(秋水仙碱0.1 mg·kg-1),除正常组外,其余各组分别于大鼠背部皮下注射CCl40.1 ml·(100 g)-1,每周2次,连续12周,自造模第5周起开始给药,各给药组分别给予相应的药物,正常组、模型组给予等体积的溶媒,每天1次。实验结束后,比色法测定血清中丙氨酸氨基转氨酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)含量;放免法测定透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(CⅣ)含量;同时取固定部位肝组织,苏木精伊红染色(HE)、Masson染色观察肝纤维化程度;制备100 g·L-1肝匀浆,进行丙二醛(MDA)、超(过)氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、羟脯氨酸(Hyp)含量测定;RT-PCR法检测α-SMA、Procollagen I、Smad2、Smad3和Smad7 mRNA表达;Western blot法检测pERK蛋白表达。结果与模型组相比,TTP(25、50、100 mg·kg-1)给药组不仅能降低肝纤维化大鼠ALT、AST、HA、CⅣ、PCⅢ、Hyp水平,改善肝脏病变程度,降低MDA水平,增强SOD以及GSH-Px活性,还可抑制肝组织中α-SMA、Procollagen I、Smad2、Smad3及p-ERK表达,升高Smad7表达。结论夏枯草总三萜对CCl4诱导的肝纤维化大鼠具有较好的保护作用,其机制可能与下调p-ERK表达,调控TGF-β1/Smad信号通路有关。     

酒精性肝纤维化中肝星状细胞活化的机制研究进展

肝星状细胞(HSC)活化是各种病因所致肝纤维化过程中的关键环节。在酒精性肝病的发展过程中,乙醇和代谢产物乙醛可改变机体氧化还原状态,活化枯否细胞,释放大量细胞因子,诱导HSC活化、增殖和胶原合成,形成肝纤维化。本文将对酒精性肝纤维化中HSC活化的机制和相关靶点加以综述,为开发抗肝纤维化药物和临床治疗提供新的思路。     

夏枯草中2个三萜类化合物的体外抗肿瘤活性研究

目的观察夏枯草中2个三萜类化合物3α,19α,24-三羟基-乌苏-12-烯-28-酸（Ⅰ）,3β,16α,24-三羟基-齐墩果-12-烯-28-酸（Ⅱ）对人肺癌细胞株A549的抑制作用。方法采用MTT法测定2个三萜类化合物各自对人肺癌细胞株A549在24h、48h和72h时的生长抑制情况。结果化合物I和II对A549瘤株有明显的抑制作用（P〈0.05）,并随着药物浓度增加和时间推移抑制作用增强。结论化合物Ⅰ和Ⅱ初步确定为夏枯草中抗肿瘤的活性成分。     

Two new triterpenoids from Lycopodium obscurum L.

Two new onoceranoid triterpenoids, (3α,8β,14α,21β)-26,27-dinoronocerane-3,8,14,21-tetrol (1) and 26-nor-8β-hydroxy-α-onocerin (2), were isolated from Lycopodium obscurum L. Their structures were elucidated on the basis of spectroscopic analyses.     

夏枯草的化学成分及生物活性研究进展

目的对中药夏枯草的化学成分和生物活性作一综述。方法按照化合物的结构类型对夏枯草的化学成分进行分类综述 ,并且对其主要的生物活性进行综述。结果夏枯草含有多种活性化学成分 ,主要有三萜类、甾体类、黄酮类、香豆素类等化合物 ,它具有降压、抗菌、抗病毒及抗炎和抗肿瘤等生物活性。结论为夏枯草的研究与开发提供了参考     

鬼针草总黄酮提取工艺中试研究

目的对鬼针草总黄酮提取工艺进行研究,确定生产工艺路线,并进行中试生产初步试验,为工业生产打下基础。方法先以70%乙醇提取,再通过HPD100大孔树脂吸附纯化,最后用乙醇进行纯化;以提取物中总黄酮和金丝桃苷含量为考察指标,考察鬼针草的提取工艺。结果确定鬼针草总黄酮制备工艺路线,制得鬼针草总黄酮(总黄酮含量50%),平均产率为1%。结论该工艺稳定可行,适合于工业化大生产。     

夏枯草硫酸多糖对四氯化碳致大鼠肝纤维化的干预作用

摘要： 目的 探讨夏枯草硫酸多糖 （PVSP） 对四氯化碳 （CCl4 ） 致大鼠纤维化的干预作用。方法 采用 CCl4-橄榄油腹腔注射诱导建立 SD 大鼠肝纤维化模型, 将造模成功的大鼠随机分成 3 组, 每组 10 只, 分别为模型组 （Model 组）、 PVSP 高剂量组 （PVSP-H 组： 400 mg/kg） 和 PVSP 低剂量组 （PVSP-L 组： 100 mg/kg）。并设空白对照组 （Blank 组） 和溶剂对照组 （Solvent 组）。采用全自动生化分析仪测定血清丙氨酸转氨酶 （ALT） 和天冬氨酸转氨酶 （AST） 的含量, HE 和天狼猩红染色比较炎症及肝纤维化程度; 采用 qRT-PCR 和免疫组织化学分析肝组织中Ⅰ型胶原 （Col- Ⅰ）、 平滑肌肌动蛋白 （α-SMA） mRNA 和蛋白的表达量。结果 Solvent 组大鼠血清中 ALT、 AST 及肝组织中 Col-Ⅰ、 α-SMA mRNA 和蛋白与 Blank 组相比差异均无统计学意义; 与 Model 组相比, PVSP 能显著降低血清 ALT 和 AST （P＜0.05）; HE 和天狼猩红染色结果显示 PVSP 能减轻炎症及纤维化程度; qRT-PCR 和免疫组织化学结果显示 PVSP 明显降低大鼠肝脏内 Col-Ⅰ、 α-SMA mRNA 和蛋白表达 （P＜0.05）。结论 PVSP 具有减轻大鼠肝纤维化作用, 其机制可能与抑制Col-Ⅰ、 α-SMA 表达, 减少细胞外基质的生成并促进细胞外基质的降解有关。     

近红外光谱法结合PLS测定夏枯草中的水分

采用近红外(NIR)光谱技术结合偏最小二乘法(PLS)测定夏枯草中的水分.运用NIR漫反射光谱技术采集夏枯草的NIR光谱,以烘干法测得的水分含量为参考值,结合PLS法建立夏枯草中水分测定的NIR分析模型,并以未知样品验证.所建模型的校正集内部交叉验证相关系数(R2)、校正均方差(RMSEC)和预测均方差(RMSEP)分别为0.988 2、0.129和0.134,验证集的NIR预测值与烘干法的参考值之间的差异无统计学意义.     

红旱莲总黄酮的含量分析

目的测定红旱莲中总黄酮的含量。方法以芦丁为对照品,用分光光度法于410 m处测定红旱莲中总黄酮的含量。结果红旱莲总黄酮含量为2.75%,芦丁在12.688-76.128 mg·L^-1（r=0.9999）范围内线性关系良好,平均回收率为97.38%。结论该测定方法简便易行,准确可靠,可作为红旱莲总黄酮质量控制的方法。     

Effect of indole-3-carbinol on ethanol-induced liver injury and acetaldehyde-stimulated hepatic stellate cells activation using precision-cut rat liver slices

1. Indole-3-carbinol (I3C), a major indole compound found in high levels in cruciferous vegetables, shows a broad spectrum of biological activities. However, few studies have reported the effect of I3C on alcoholic liver injury. In the present study, we investigated the protective effect of I3C on acute ethanol-induced hepatotoxicity and acetaldehyde-stimulated hepatic stellate cells (HSC) activation using precision-cut liver slices (PCLS). 2. Rat PCLS were incubated with 50 mmol/L ethanol or 350 μmol/L acetaldehyde, and different concentrations (100-400 μmol/L) of I3C were added into the culture system of these two liver injury models, respectively. Hepatotoxicity was assessed by measuring enzyme leakage and malondialdehyde (MDA) content in tissue. Activities of alcoholic enzymes were also determined. α-Smooth muscle actin (α-SMA), transforming growth factor (TGF-β(1) ) and hydroxyproline (HYP) were used as indices to evaluate the activation of HSC. In addition, matrix metalloproteinase-1 (MMP-1) and the tissue inhibitor of metalloproteinase (TIMP-1) were observed to estimate collagen degradation. 3. I3C significantly reduced the enzyme leakage in ethanol-treated slices. In I3C groups, cytochrome P450 (CYP) 2E1 activities were inhibited by 40.9-51.8%, whereas alcohol dehydrogenase (ADH) activity was enhanced 1.6-fold compared with the ethanol-treated group. I3C also showed an inhibitory effect against HSC activation and collagen production stimulated by acetaldehyde. After being incubated with I3C (400 μmol/L), the expression of MMP-1 was markedly enhanced, whereas TIMP-1 was decreased. 4. These results showed that I3C protected PCLS against alcoholic liver injury, which might be associated with the regulation of ethanol metabolic enzymes, attenuation of oxidative injury and acceleration of collagen degradation.     

沙棘总黄酮对改善神经细胞损伤的作用

目的探讨沙棘总黄酮(TFH)对神经细胞的保护作用及其机制。方法采用培养PC12细胞NaCN及缺糖引起的细胞损伤模型,以及Na2S2O4、KCl分别诱导PC12细胞缺氧损伤和Ca2+超载损伤模型,研究TFH对神经细胞损伤的保护作用。结果TFH对PC12细胞损伤有明显的保护作用。结论TFH具有保护神经细胞的作用。     

巴豆总生物碱的纯化工艺研究

目的 研究大孔树脂分离纯化巴豆总生物碱的工艺.方法 采用分光光度法测定总生物碱,筛选HPD400、AB-8、NKA-9、ADS-17、D101树脂对巴豆总生物碱的吸附和解吸附能力,并优化分离纯化条件.结果 优选出D101树脂,上样液浓度为生药1.5 g ·mL-1,吸附流速1.5 BV·h-1,药材量∶树脂量=9∶2,4 BV水除杂后用4 BV 30％乙醇冲洗收集目标滤液.结论 该方法简便易行,适合于巴豆总生物碱的分离纯化.