端粒酶逆转录酶反义寡核苷酸(ASODN)下调端粒酶活性及其阻抑肝癌HepG2细胞周期的实验研究

目的探讨人类端粒酶催化亚单位(hTERT)基因关键区段的反义寡核苷酸(as-hTERT)对HepG2细胞端粒酶活性及细胞周期的影响。方法通过PCR合成as-hTERT、正义-hTERT序列,体外作用于HepG2细胞,TRAP法检测正、反义核酸作用后的端粒酶活性变化,流式细胞术观察as-hTERT对肿瘤细胞的凋亡及细胞周期的影响。结果as-hTERT作用浓度为10μmol/L时,肝癌细胞内端粒酶活性明显减低,细胞生长受抑制,细胞凋亡率增至16.02±2.11%。结论应用针对as-hTERT的反义技术在体外可通过下调hTERT基因表达,明显降低肝癌细胞HepG2的端粒酶活性,并抑制肿瘤细胞的生长,hTERT可望成为肝癌基因治疗的新靶点。     

反义寡核苷酸对肝癌细胞生长抑制作用的研究

目的：探讨互补于HBV X基因的翻译起始区（as-Xp)、ENⅡ（as-ENⅡ）区的反义寡核苷酸抑制HepG2.2.15细胞生长及抗病毒作用。方法：合成as-Xp、as-ENⅡ，体外作用于HBV DNA转染的HepG2.2.15利用，利用ELISA法检测反义核酸作用前后细胞上清中HBsAg和HBeAg的含量，以HepG2.2.15细胞接种裸鼠制备人肝癌模型，瘤内给予反义寡核苷酸100μg，连续给药5d，取瘤组织采用流式细胞仪（FCM）分析反义核酸诱导瘤细胞凋亡作用，并检测反义核酸作用裸鼠血清中病毒抗原表达情况。结果：as-Xp、as-ENⅡ作用72h的细胞凋亡峰值分别为24％和27．7％，对照为10．89％、7．92％；对荷瘤鼠体内HBsAg和HBeAg的抑制率分别为35％、34％和43％、49％，在体外分别为57％、52％和56％、56％。无关对照序列体内，外无明显的抑制瘤细胞生长和抗病毒作用。结论：as-Xp、as-ENⅡ体内应用可诱导瘤细胞凋亡，并可有效抑制体内，外HBV抗原表达。     

端粒酶反义寡核苷酸抑制端粒酶活性和诱导肺腺癌A549细胞凋亡的研究

目的 研究端粒酶反义寡核苷酸在肺腺癌A549细胞中抑制端粒酶活性和诱导细胞凋亡的能力.方法 用脂质体将荧光标记的端粒酶反义寡核苷酸转染入肺腺癌A549细胞后,TRAP-PCR-ELISA检测端粒酶活性变化,凋亡细胞用透射电镜(TEM)观察,TUNEL法检测各组细胞凋亡率.结果 转染72h后,端粒酶反义寡核苷酸进入A549细胞内,端粒酶活性显著降低.透射电镜下,端粒酶反义寡核苷酸转染组细胞凋亡增加,细胞凋亡率比其他组明显增高,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 端粒酶反义寡核苷酸能靶向端粒酶,抑制其活性,并诱导肺腺癌A549细胞凋亡.     

反义端粒酶不同给予方式抑制裸鼠人肝癌模型生长的研究

目的：研究人类端粒逆转录酶（hTERT）基因关键位点的反义寡核苷酸对人肝癌的抑制效应。方法：合成互补于hTERT关键区段的反义寡核苷酸（as-hTERT），以HBV DNA转染的HepG2.2.15细胞接种裸鼠制备人肝癌模型，通过连续用药，一次性用药，混合用药3种不同给予方式观察as-hTERT抑制瘤细胞生长作用。比较不同用药方法对裸鼠成瘤的影响，FCM分析as-hTERT诱导凋亡作用。结果：药物一次性与混合作用裸鼠表现为成瘤潜伏期延长，成瘤率明显低于瘤细胞未用药对照组（P＜0．05），瘤体生长缓慢；追加用药后无瘤体生长，瘤内用药9d FCM测细胞凋亡峰为26．95％，G2－M期细胞为1．70％，对照瘤体的各细胞周期分布正常。结论：as-hTERT不同给予方式均可抑制荷瘤裸鼠人肝癌的生长，以追加用药效果最佳，具有潜在的临床应用价值。     

HBVPreS2反义脱氧寡核苷酸对HepG2.2.15细胞系恶性表型的影响

目的:研制新型的抗肝癌药物,观察反义脱氧寡核苷酸(asON)对整合乙型肝炎病毒(HBV)的HepG2.2.15细胞系端粒酶活性及癌基因C-myc和N-ras蛋白表达的影响。方法:设计合成针对HBVPreS2基因翻译起始区的asON,并设非互补序列作对照,以肝癌细胞系HepG2.2.15为细胞模型,asON以10μmol/L浓度用药,用ELISA法观察了细胞培养上清液中HBsAg和HBeAg的变化;MTT法检测asON对细胞毒性作用;放射免疫方法检测细胞培养上清液中血清铁蛋白浓度;用银染—Trap法测定asON对HepG2.2.15细胞端粒酶活性的影响;免疫细胞化学染色检测asON对癌基因C-myc和N-ras蛋白表达的影响。结果:asON能有效地抑制HBV抗原表达,对HBsAg和HBeAg的抑制率分别为66%和91%。而asON以20或40μmol/L浓度用药4d对宿主细胞无毒性作用,asON以10μmol/L浓度用药后第2天用药组和对照组血清铁蛋白浓度分别为(28.26±0.02)ng/ml和(28.14±0.02)ng/ml,两者相比无统计学意义(P>0.05)。用药后第3天asON组比对照组端粒酶活性降低;用药后第3天C-myc和N-ras蛋白表达降低,和对照组相比有统计学意义(P<0.05)。结论:该段asON不仅抑制HBV抗原表达,而且抑制肝癌细胞的恶性表型而对宿主细胞无毒性,有可能成为有前途的抗肝细胞肝癌新药。     

HTR反义寡核苷酸抑制鼻咽癌细胞生长及对其致瘤能力的影响

目的:研究针对端粒酶RNA(Human telomerase RNA,HTR)的反义寡核苷酸(Antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)抑制鼻咽癌HNE-1细胞株生长及对其致瘤能力的影响.方法:PCR-ELISA法检测细胞内端粒酶活性.MTT法及平板集落形成实验评价细胞增殖活性.电镜观察细胞超微结构的改变.将经AS-ODN处理的HNE-1细胞接种于裸鼠皮下,观察其致瘤情况.结果:HTR反义寡核苷酸作用HNE-1细胞后,细胞端粒酶活性受到明显抑制;细胞增殖受到明显抑制,此作用有剂量、时间依赖性和序列特异性;电镜发现少量细胞肿胀坏死,但未见细胞凋亡和大片坏死灶.AS-ODN降低了HNE-1细胞的致瘤能力,裸鼠成瘤时间延长,肿瘤生长速度变慢.结论:HTR反义寡核苷酸可通过抑制鼻咽癌HNE-1细胞端粒酶活性而抑制细胞的生长,并抑制其对裸鼠的致瘤能力.     

端粒酶反义寡核苷酸对MCF—7细胞端粒酶活性及细胞生长的影响

为探讨端粒酶反义寡核苷酸对人乳腺癌MCF－7细胞端粒酶活性及细胞生长的影响,应用与人端粒酶RNA组分（hTR）模板区互补的硫代反义寡核苷酸处理MCF－7细胞。发现经反义hTR寡核苷酸作用后,细胞端粒酶活性明显受到抑制,至作用后72h,端粒酶活性较对照组降低61.0%（P＜0.05）;细胞生长明显受到抑制;细胞周期发生显著变化,G0／G1期细胞数增多,S期及G2／M期细胞数则减少;细胞增殖指数由0.46降低至0.29;并可观察到凋亡细胞的出现,凋亡发生率为10.7%;而无义寡核苷酸处理组及空白对照组以上各指标均无明显变化。提示：端粒酶反义寡核苷酸可明显抑制乳腺癌细胞端粒酶活性,抑制细胞生长和增殖,诱导细胞凋亡;表明应用反义技术抑制端粒酶活性治疗乳腺癌可能具有广阔的前景。     

PCR-ELISA定量检测as-hTERT对HepG2.2.15细胞端粒酶活性的抑制作用

目的：采用PCR－ELISA方法探讨人类端粒酶催化亚单位（hTERT)基因关键区段的反义寡核苷酸（as-hTERT)对HepG2.2．15细胞端粒酶活性抑制作用。方法：通过PCR合成as-hTERT及无关对照序列，体外作用于HBV DNA转染的HepG2.2.15细胞，用PCR－ELISA定量检测反义核酸作用后的端粒酶活性，MTT法观察as-hTERT对细胞生长的抑制作用，ELISA法检测as-hTERT对HBsAg和HBeAg表达的影响。结果：as-hTERT作用浓度为10μmol/L时，定量检测端粒酶活性，A450nm值为0．42，低于无关序列与生理盐水对照的A450nm值（分别为1．46，1．49），as-hTERT可抑制细胞生长，对HBsAg和HBeAg的最佳抑制率分别为76％和56％，结论：as-hTERT在体外可明显降低HepG2.215细胞的端粒酶活性，抑制细胞的生长，并可影响HBV抗原表达。     

Livin反义寡核苷酸对肝癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的 利用Livin反义寡核苷酸在裸鼠体内抑制Livin基因表达,探讨Livin反义核苷酸对肝癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用.方法 设计靶向Livin基因的反义寡核苷酸,以Lipofectamine2000作为载体导入裸鼠皮下移植瘤,观察肿瘤生长情况.采用RT-PCR方法检测实验组和对照组Livin基因表达,TUNEL法检测凋亡指数.结果 ASODN组裸鼠皮下移植瘤后14 d,肿瘤体积明显变小.Livin rnRNA表达明显降低.结论 Livin反义寡核苷酸可以明显抑制肝癌裸鼠移植瘤的增殖.     

HBVPreS2反义寡核苷酸对HepG 2.2.15细胞系HLA-I类抗原表达及生物活性的影响

目的 :观察针对乙型肝炎病毒 (HBV)PreS2 基因特异性反义寡核苷酸 (asON)对转基因细胞HepG2 .2 .15表面的人类白细胞I类抗原 (HLA I)基因表达的影响。方法 :设计合成互补于HBVPreS2 翻译起始区的反义寡核苷酸即序列I ,并设非互补序列作对照即序列II ,免疫细胞化学染色观察asON对HepG2 .2 .15表面表达的HLA I类抗原的影响 ,用ELISA法动态检测细胞上清液中HBsAg和HBeAg的变化 ,放射免疫测定法检测asON对宿主细胞自身分泌蛋白 血清铁蛋白的影响。结果 :HepG2 .2 .15细胞表面HLA I类抗原表达降低 ,用药组和对照组相比有统计学意义 (P <0 .0 5 )。asON能够抑制HBV表达HBsAg和HBeAg ,对HBsAg和HBeAg的抑制率分别为 6 6 %和 91% ,而序列II对HBsAg和HBeAg的抑制率均为 11%。asON对宿主细胞自身分泌蛋白无影响 ,即对宿主细胞无毒性作用。结论 :asON以序列特异性方式抑制HBV基因表达而对宿主细胞无毒性作用 ,HLA I类抗原表达降低 ,这对减轻过度炎症反应 ,阻止慢性肝炎至重症肝炎的发生具有重要意义     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

醋柳黄酮缓释片的药动学初步研究

目的:研究醋柳黄酮缓释片在家犬体内的药动学过程,测定其药动学参数,计算缓释片相对于普通片的生物利用度。方法:将实验动物分为两组,分别用醋柳黄酮缓释片和普通片进行口服给药,用高效液相色谱法测定血浆药物浓度,应用3P97软件求算药动学参数。结果:醋柳黄酮缓释片及普通片的tm ax分别为4.87 h和2.87 h,Cm ax分别为每小时0.46μg.L-1和每小时0.56μg.L-1,缓释片的相对生物利用度为111.7%。结论:醋柳黄酮缓释片与普通片均符合一室模型,缓释片与普通片具有生物等效性,且醋柳黄酮缓释片有明显的缓释效果。     

主动脉窦瘤破裂的外科治疗

报告２０例主动脉窦瘤破裂修复术的结果。１７例男性，３例女性。年龄７～５６岁。痊愈１９例，另一例因急性肾功能衰竭一周后死亡。作者就发病机理，诊断和合并畸形的处理进行了讨论。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

扩张兔皮肤超微结构的变化

目的：动态观察扩张兔皮肤超微结构的变化。方法：选用2--3kg新西兰大白兔64只，分为2大组，快速扩张组和常规扩张组，每组32只，每大组再分为4组，为扩张完成后即时、1周、12周、24周组。每组8只，其中4只为实验组，另4只植入扩张器不扩张作为对照组。透射电子显微镜观察各组皮肤超微结构的变化。结果：表皮扩张后经历--由扩张刺激引起的创伤至完全修复的过程。扩张后即时真皮中成纤维细胞大量增生，功能由静止转向活跃，胶原纤维碎裂成片，弹力纤维部分断裂，炎症细胞浸润；扩张后1周常规扩张组基底膜连续性基本恢复。显示成纤维细胞合成功能活跃。扩张后12周、24周，成纤维细胞趋于稳定、形态狭长，部分胶原排列紊乱，部分有似癜痕样改变。结论：扩张刺激可致兔皮肤创伤。扩张后真皮不可完全修复。     

芹黄素对大鼠缺血视网膜功能恢复的作用

目的观察芹黄素对大鼠缺血视网膜功能恢复的作用。方法30只Long-Evans大鼠用动脉结扎法造成视网膜缺血模型,其中治疗组20只腹腔注射芹黄素,对照组10只注射溶媒二甲基亚酚。用视觉电生理仪检查视网膜功能恢复情况。结果芹黄素治疗组视网膜功能恢复明显好于对照组(P<0.05)。结论芹黄素能促进大鼠缺血视网膜的功能恢复。      

上颌骨牙源性囊肿刮除手术的疗效观察

目的探讨对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术的临床疗效。方法对我科在2010年1月～2017年9月收治的73例上颌骨牙源性囊肿患者行囊肿彻底刮除手术治疗,对患者术区肿胀消退、术后伤口感染、伤口愈合、牙龈再附着、术后复发、骨质改建、骨质修复等情况随访观察。结果 73例患者术后肿胀消退时间为1～4 d。73例患者术后均未发生伤口感染,伤口均一期愈合。所有患者牙龈再附着情况好,术后均未见复发。术后未见并发症。骨质改建效果好,骨质修复的效果因影像学资料过少,缺乏客观依据,暂不下有效结论。结论对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术,术后患者的恢复情况良好,值得在临床治疗上进行推广。     

阴道炎1236例病原检查分析

对１２３６例阴道炎患者的阴道分泌物作直接镜检和病原菌分离培养检查；结果，细菌感染９００例，念珠菌２３４例，滴虫１０２例。９００例细菌经鉴定；葡萄球菌３００例，阴道加特纳菌２７６例，淋病奈瑟菌１７０例，其它细菌１２４例。结果表明，葡萄球菌，阴道加特纳菌，淋病奈瑟菌是细菌性阴道炎最常见的致病菌。