强骨抗萎方对模拟失重条件下体外培养成骨细胞的影响

背景：航天环境中，失重对骨质代谢的影响被认为是对人体最严重的危害之一。目的：探讨复方强骨抗萎方对模拟失重条件下体外培养的成骨细胞的影响，拟揭示该方对抗骨丢失的分子生物学作用。设计：随机对照观察。单位：航天医学工程研究所。材料：实验于1997-04／12在北京航天医学工程研究所完成。选择SD乳鼠。药物：强骨抗萎方（熟地、骨碎补、龟板、怀牛膝等）。方法：乳鼠15只，随机分为5组，每组3只。分离乳鼠颅骨成骨细胞，体外培养后，分为正常对照、失重模型、强骨抗萎方大（2．0％）、中（1．0％）、小（0．5％）剂量5组。置回旋器，30r／min，连续回旋60h模拟失重，观察该方对回旋12，30，60h时大鼠成骨细胞碱性磷酸酶和骨钙素生成及碱性磷酸酶基因转录水平（mRNA）的影响。主要观察指标：强骨抗萎方对体外模拟失重条件下成骨细胞培养液中碱性磷酸酶活性、骨钙素含量及碱性磷酸酶mRNA表达的影响。结果：纳入的15只乳鼠均进入结果分析，实验中无脱失。①与正常对照组比较，模型组成骨细胞在回旋12，36，60h不同时间点的细胞培养液中的碱性磷酸酶活性均明显降低，其中12，60h时差异显著l（45．0l&;#177;12．50），（96．18&;#177;12．34）；（13．17&;#177;5．33），（137．36&;#177;137．86）nkat／L．P〈0．05]，碱性磷酸酶mRNA表达低微；骨钙素活性均减低，60h时差异显著[（30．3&;#177;2．75），（42．0&;#177;10．0）μg/L P〈0．05]。②与模型组比较，中药复方不同剂量组于回旋不同时间点细胞培养液中的碱性磷酸酶活性均有不同程度升高[其中60h的小、中、大剂量组分别为（143．70&;#177;123．86）．（54．5l&;#177;13．17）；（156．53&;#177;133．69）nkat／L，P〈0．051；碱性磷酸酶mRNA表达活性也较高；但骨钙素活性无明显变化。结论：该方能改善模拟失重条件下成骨细胞的功能，缓解其分化抑制状态，促进骨基质的形成和成熟。     

补肾中药血清对体外培养成骨细胞合成碱性磷酸酶及骨钙素的调控

目的：观察补肾中药对成骨细胞的作用，并探讨最佳的血清制备时间点和含药浓度。方法：①实验于2004-10／2004-12在南方医科大学中医系实验室完成。选用雄性SPF级SD大鼠12只。将大鼠分为4组：高、中、低剂量中药组和空白对照组，每组3只。②高、中、低剂量中药组分别灌胃剂量为每毫升中药中含生药为7．08，3．54，1．77g的补肾中药，2次／d，共3d；空白对照组灌服生理盐水，2次／d，共3d，于末次喂药后45，60及75min采集血清制备含药血清。（④用含不同浓度中药血清体外培养成骨细胞，于培养后72h收集培养上清，采用麦芽凝集素沉淀法和放射免疫法测定成骨细胞培养上清骨性碱性磷酸酶（碱性磷酸酶）和骨钙素（骨钙素）含量：④多组间的计量资料比较采用随机分组的方差分析，组间比较采用SNK检验。结果：末次给药后60和75min高、中、低剂量中药组培养上清骨钙素和碱性磷酸酶含量明显高于末次给药后45min（P〈0．05），以末次给药后60min时作用最明显。末次给药后45，60，75min中高剂量中药组培养上清骨钙素和碱性磷酸酶含量明显高于相应时间点低剂中药组和空白对照组（P〈0．05～0．01）。结论：①补肾中药能够显著促进成骨细胞合成碱性磷酸酶和骨钙素。②在中等浓度组末次给药后60min，补肾中药药效作用最佳。     

补肾中药血清对体外培养成骨细胞合成碱性磷酸酶及骨钙素的调控

目的:观察补肾中药对成骨细胞的作用,并探讨最佳的血清制备时间点和含药浓度。方法:①实验于2004-10/2004-12在南方医科大学中医系实验室完成。选用雄性SPF级SD大鼠12只。将大鼠分为4组:高、中、低剂量中药组和空白对照组,每组3只。②高、中、低剂量中药组分别灌胃剂量为每毫升中药中含生药为7.08,3.54,1.77g的补肾中药,2次/d,共3d;空白对照组灌服生理盐水,2次/d,共3d,于末次喂药后45,60及75min采集血清制备含药血清。③用含不同浓度中药血清体外培养成骨细胞,于培养后72h收集培养上清,采用麦芽凝集素沉淀法和放射免疫法测定成骨细胞培养上清骨性碱性磷酸酶(碱性磷酸酶)和骨钙素(骨钙素)含量。④多组间的计量资料比较采用随机分组的方差分析,组间比较采用SNK检验。结果:末次给药后60和75min高、中、低剂量中药组培养上清骨钙素和碱性磷酸酶含量明显高于末次给药后45min(P<0.05),以末次给药后60min时作用最明显。末次给药后45,60,75min中高剂量中药组培养上清骨钙素和碱性磷酸酶含量明显高于相应时间点低剂中药组和空白对照组(P<0.05～0.01)。结论:①补肾中药能够显著促进成骨细胞合成碱性磷酸酶和骨钙素。②在中等浓度组末次给药后60min,补肾中药药效作用最佳。     

次声波对成骨样细胞生物学特性的影响

目的：观察100dB条件下不同频率次声波对小鼠成骨样细胞增殖和分泌功能等生物学特性的影响。方法：实验于2003-03／06在解放军第四军医大学放射生物学教研室完成。复苏培养后的细胞随机分为空白对照组、4Hz100dB组、12Hz100dB组、20Hz100dB组。将冻存的细胞株复苏。选择对数生长期的细胞，以1&;#215;10^7L^-1细胞浓度接种在48孔培养板中，共接种4板并确定细胞贴壁。次日起每天上午8时将各组细胞放人次声仓内。4Hz100dB组、12Hz100dB组、20Hz100dB组分别给予相应频率和声压级参数的次声作用，空白对照组在次声仓内无次声输出，30min／d。共5d。5d后进行细胞增殖计数。观察次声波作用后小鼠成骨样细胞碱性磷酸酶活性和骨钙素表达的变化。结果：①不同参数的次声波对小鼠成骨样细胞增殖的影响：小鼠成骨样细胞的形态为不规则的多角形。受次声波作用后形态无明显改变。次声波作用第5天。4Hz100dB组、12Hz100dB组，20Hz100dB组小鼠成骨样细胞密度均明显高于空白对照组【（52．25&;#177;8．52），（50．33&;#177;7．99），（49．82&;#177;7．05），（39．92&;#177;7．38）10^7L^-1，P均〈0．051。②次声波作用后小鼠成骨样细胞骨钙素的表达情况：次声波作用5d后。4Hz100dB组、12Hz100dB组、20Hz100dB组小鼠成骨样细胞骨钙素浓度均明显高于空白对照组『（1．4012&;#177;0．53l9），（0．8775&;#177;0．2589），（2．2575&;#177;0．8307），（0．5925&;#177;0．1725）μg／L；P=0．001，0．023，0．00051。（3）次声波作用后小鼠成骨样细胞碱性磷酸酶活性的变化：次声波作用5d后．各组的小鼠成骨样细胞碱性磷酸酶表达均较低，4Hz100dB组、12Hz100dB组、20Hz100dB组与空白对照组的吸光度值基本相似（0．016&;#177;0．008，0.013&;#177;0．005。0．014&;#177;0．005．0．013&;#177;0．005．P=0．92，1．0．0．95）。结论：4．12Hz100dB次声波作用可明显促进细胞增殖，20Hz100dB次声波作用具有显著分泌骨钙素的作用。提示100dB次声波不同频率下可以促进成骨样细胞的体外增殖和分泌功能。     

体外培养人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的流体剪切应力参数

目的：流体剪切力是骨骼组织中骨骼细胞所感受到的主要应力刺激，可促进骨骼细胞的增殖、分化及保持细胞正常的生理功能。应用流体剪切力刺激体外培养的人骨髓间充质干细胞，观察其向成骨细胞分化的可行性。方法：实验于2004—04／12在第三军医大学西南医院完成，骨髓来源于正常志愿献髓者。进行人骨髓间充质干细胞的分离培养，实验组应用平行平板流动腔对自愿捐献的人骨髓间充质干细胞给予强度为0．3Pa的流体剪切力刺激30min，对照组不加此干预，两组物理环境相同。应用流式细胞仪检测细胞周期，应用透射电镜观察细胞超微结构，检测细胞内碱性磷酸酶含量。评估其向成骨细胞分化和具备功能的特征。放免法检测培养上清液骨钙素含量。评估其是否向成骨细胞成熟晚期分化。并与静态培养对照组作对比。结果：①实验组经流体剪切力作用后，细胞胞体变大，突起较多，多角形细胞较对照组增多；透射电镜观察可见细胞胞浆丰富、核浆比例小，有较多的内质网，高尔基体发达，核仁明显，呈成熟细胞表现。②实验组细胞S期(DNA合成期)比例较对照组明显增高[(13．53&;#177;1．47)％，(7．56&;#177;2．54)％，P&;lt;0．01]。③实验组细胞内碱性磷酸酶含量第9天开始增高，且随时间延长，增高速度加快。④第12天及第24天检测的上清液骨钙素含量两组无明显差别(t=0．263，-0．406，P&;gt;0．05)。结论：本实验发现强度为0．3Pa作用30min的流体剪切力可以使人骨髓间充质干细胞早期的细胞内碱性磷酸酶含量增高，细胞开始向成骨细胞分化，但未能促使晚期的骨钙素表达升高，说明此强度的流体剪切力不能成功促进人骨髓间充质干细胞最终实现向成骨方向分化。需要继续探索能够促进人骨髓间充质干细胞向成骨方向分化的流体剪切力的更有效的参数。     

巴戟天多糖及其水提取物对体外培养成骨细胞活性的影响

目的:体外培养成骨细胞,观察巴戟天多糖和巴戟天水提物对成骨细胞活性的影响。方法:实验于2004-09/2005-08在福建省骨伤研究所骨伤分子生物学实验室完成。①提取24h内新生SD大鼠头盖骨成骨细胞,分别用50,100,200g/L巴戟天多糖及50,100,200g/L巴戟天水提物药物血清进行体外培养。对照组用含50,100,200g/L无药血清的DMEM培养液培养。培养72h后进行相关指标检测。②通过MTT方法检测巴戟天多糖、巴戟天水提取物对成骨细胞增殖的影响。③检测碱性磷酸酶、细胞内骨钙素、转化生长因子β1基因表达等指标,观察巴戟天多糖、巴戟天水提取物对成骨细胞活性的影响。结果:①药物血清对成骨细胞增殖的影响:100g/L巴戟天水提物组和100g/L巴戟天多糖组吸光度大于对照组,差异有非常显著性(P<0.01),且100g/L巴戟天多糖组吸光度高于100g/L巴戟天水提物组(0.4302±0.0193,0.3829±0.0228,P<0.01)。②药物血清对成骨细胞活性的影响:巴戟天水提物组与巴戟天多糖组碱性磷酸酶比活性、细胞内骨钙素含量、转化生长因子β1mRNA相对表达量均高于对照组[碱性磷酸酶比活性:(16.89±2.09),(20.68±2.44),(11.23±2.40)μkat/g;骨钙素含量:(3.74±0.82),(3.97±0.69),(2.63±0.34)ng/106;转化生长因子β1 mRNA相对表达量:2.97±0.37,4.23±0.30,0.07±0.27,P均<0.01]。巴戟天多糖碱性磷酸酶比活性、转化生长因子β1 mRNA相对表达量高于巴戟天多糖组(P<0.01)。结论:巴戟天水提物与巴戟天多糖均能显著促进体外培养成骨细胞增殖、促进成骨细胞分泌碱性磷酸酶与骨钙素、促进成骨细胞转化生长因子β1 mRNA的表达,并且巴戟天多糖优于巴戟天水提物。     

模拟失重对大鼠承重骨骨髓基质细胞数量及体外成骨能力的影响

背景:骨组织在特殊物理环境如失重环境下,代谢活动会发生显著的变化,而成骨细胞是骨代谢和骨形成的核心部分,其对重力环境的变化敏感。目的:观察模拟失重条件对大鼠股骨骨髓基质细胞数量体外成骨能力的影响,揭示骨丢失的机制。设计:随机配对,对照实验。单位:解放军第四军医大学航空航天医学系和口腔医学院病理科。材料:选用20只成年健康雄性SD大鼠。实验开始当日按体质量随机分为对照组和悬吊组,每组10只。碱性磷酸酶试剂盒由北京中生生物工程高技术公司生产。方法:实验于1999-11/2000-07在解放军第四军医大学口腔医学院病理科完成。将SD大鼠随机配对分为鼠尾悬吊组和对照组,每组10只。悬吊组大鼠做尾部悬吊28d,大鼠始终保持30°头低位及后肢自由悬垂不负重状态。对照组正常饲养。实验期满,取股骨,将股骨骨髓基质细胞进行原代和传代细胞培养。主要观察指标:采用细胞计数法和噻唑蓝法绘制原代和传代培养细胞的生长曲线,进行碱性磷酸酶活性及体外矿化小结形成量的检测。结果:①碱性磷酸酶活性:原代和传代培养悬吊组低于对照组,差异有显著性意义(P<0.05)。②钙化小结形成数:悬吊组少于对照组,差异有显著性意义(P<0.05)。③细胞生长:原代和传代股骨间充质细胞的生长曲线呈"S"形,悬吊组和对照组细胞倍增时间相近。④股骨骨髓基质细胞数:原代细胞培养系中,悬吊组比对照组约少50%(P<0.05)。结论:模拟失重条件下,大鼠骨髓基质细胞数明显减少,后肢承重骨成骨细胞数减少,体外成骨能力降低。     

模拟失重条件下骨形态发生蛋白2诱导成骨细胞蛋白激酶MEK 1的活性变化

背景：模拟失重条件下，骨形态发生蛋白2诱导的大鼠骨肉瘤成骨样细胞（ROS17／2．8）的Ⅰ型胶原αⅠ链的基因表达下降，而丝裂原激活的蛋白激酶信号传导通路中的蛋白激酶MEK1参与了骨形态发生蛋白2对成骨细胞Ⅰ型胶原αⅠ链mRNA表达的调节过程，但是在模拟失重条件下MEK1的活性如何变化尚不清楚。目的：观察模拟失重条件下由骨形态发生蛋白2诱导的ROS17／2．8细胞中MEK1激酶活性的变化。设计：不完全随机对照的实验。单位：解放军第四军医大学航空航天生物动力学教研室。材料：大鼠骨肉瘤成骨样细胞。方法：实验于2002-08／2003-01在北京航天医学工程研究所航天细胞与分子生物学实验室完成。在地面1G和回转器模拟失重条件下培养ROS17／2．8细胞，培养时间分别为24，48和72h。分为7组：第1组，空白对照组，即1G条件下不加骨形态发生蛋白2培养24h；第2组．1G培养24h；第3组，失重培养24h；第4组，1G培养48h；第5组，失重培养48h；第6组，1G培养72h；第7组，失重培养72h；第2组至第7组均加入骨形态发生蛋白2，培养结束前1h加入骨形态发生蛋白2（500mg／L），1h后提取细胞蛋白，应用Western Blotting法检测MEK1的活性。主要观察指标：观察细胞中的总ERK1／2和磷酸化ERK1／2（p-ERK1／2）的含量。结果：①模拟失重条件下骨形态发生蛋白2诱导后ROS17／2．8细胞的总ERK1／2的表达：各实验组细胞的总ERK1／2蛋白表达量无明显差异：②模拟失重条件下骨形态发生蛋白2诱导后ROS17／2、8细胞的磷酸化ERK1／2的表达：第1组，细胞培养液中不含骨形态发生蛋白2在1G重力条件下培养24h，p-ERK1／2呈低水平表达，第2组，即培养液中加入骨形态发生蛋白2在1G条件下培养24h，p-ERK1／2的表达量明显高于第1组（P〈0．01）。各模拟失重组p-ERK1／2表达量均低于相同时间点1G重力对照组，即第3，5，7组的表达分别低于第2，4，6组（P〈0．01），且随着失重时间延长，第3，5，7组的p-ERK1／2表达量呈逐渐降低的趋势（P〈0．01）。结论：模拟失重条件下骨形态发生蛋白2诱导的成骨细胞丝裂原激活的蛋白激酶信号通路中蛋白激酶MEK1的活性下降。     

次声波对成骨样细胞生物学特性的影响

目的:观察100dB条件下不同频率次声波对小鼠成骨样细胞增殖和分泌功能等生物学特性的影响。方法:实验于2003-03/06在解放军第四军医大学放射生物学教研室完成。复苏培养后的细胞随机分为空白对照组、4Hz100dB组、12Hz100dB组、20Hz100dB组。将冻存的细胞株复苏,选择对数生长期的细胞,以1×107L-1细胞浓度接种在48孔培养板中,共接种4板并确定细胞贴壁。次日起每天上午8时将各组细胞放入次声仓内,4Hz100dB组、12Hz100dB组、20Hz100dB组分别给予相应频率和声压级参数的次声作用,空白对照组在次声仓内无次声输出,30min/d,共5d。5d后进行细胞增殖计数,观察次声波作用后小鼠成骨样细胞碱性磷酸酶活性和骨钙素表达的变化。结果:①不同参数的次声波对小鼠成骨样细胞增殖的影响:小鼠成骨样细胞的形态为不规则的多角形,受次声波作用后形态无明显改变。次声波作用第5天,4Hz100dB组、12Hz100dB组,20Hz100dB组小鼠成骨样细胞密度均明显高于空白对照组犤(52.25±8.52),(50.33±7.99),(49.82±7.05),(39.92±7.38)107L-1,P均<0.05犦。②次声波作用后小鼠成骨样细胞骨钙素的表达情况:次声波作用5d后,4Hz100dB组、12Hz100dB组、20Hz100dB组小鼠成骨样细胞骨钙素浓度均明显高于空白对照组犤(1.4012±0.5319),(0.8775±0.2589),(2.2575±0.8307),(0.5925±0.1725)μg/L;P=0.001,0.023,0.0005犦。③次声波作用后小鼠成骨样细胞碱性磷酸酶活性的变化:次声波作用5d后,各组的小鼠成骨样细胞碱性磷酸酶表达均较低,4Hz100dB组、12Hz100dB组、20Hz100dB组与空白对照组的吸光度值基本相似(0.016±0.008,0.013±0.005,0.014±0.005,0.013±0.005,P=0.92,1.0,0.95)。结论:4,12Hz100dB次声波作用可明显促进细胞增殖,20Hz100dB次声波作用具有显著分泌骨钙素的作用。提示100dB次声波不同频率下可以促进成骨样细胞的体外增殖和分泌功能。     

体外培养人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的流体剪切应力参数

目的:流体剪切力是骨骼组织中骨骼细胞所感受到的主要应力刺激,可促进骨骼细胞的增殖、分化及保持细胞正常的生理功能。应用流体剪切力刺激体外培养的人骨髓间充质干细胞,观察其向成骨细胞分化的可行性。方法:实验于2004-04/12在第三军医大学西南医院完成,骨髓来源于正常志愿献髓者。进行人骨髓间充质干细胞的分离培养,实验组应用平行平板流动腔对自愿捐献的人骨髓间充质干细胞给予强度为0.3Pa的流体剪切力刺激30min,对照组不加此干预,两组物理环境相同。应用流式细胞仪检测细胞周期,应用透射电镜观察细胞超微结构,检测细胞内碱性磷酸酶含量。评估其向成骨细胞分化和具备功能的特征。放免法检测培养上清液骨钙素含量。评估其是否向成骨细胞成熟晚期分化。并与静态培养对照组作对比。结果:①实验组经流体剪切力作用后,细胞胞体变大,突起较多,多角形细胞较对照组增多;透射电镜观察可见细胞胞浆丰富、核浆比例小,有较多的内质网,高尔基体发达,核仁明显,呈成熟细胞表现。②实验组细胞S期(DNA合成期)比例较对照组明显增高[(13.53±1.47)%,(7.56±2.54)%,P<0.01]。③实验组细胞内碱性磷酸酶含量第9天开始增高,且随时间延长,增高速度加快。④第12天及第24天检测的上清液骨钙素含量两组无明显差别(t=0.263,-0.406,P>0.05)。结论:本实验发现强度为0.3Pa作用30min的流体剪切力可以使人骨髓间充质干细胞早期的细胞内碱性磷酸酶含量增高,细胞开始向成骨细胞分化,但未能促使晚期的骨钙素表达升高,说明此强度的流体剪切力不能成功促进人骨髓间充质干细胞最终实现向成骨方向分化。需要继续探索能够促进人骨髓间充质干细胞向成骨方向分化的流体剪切力的更有效的参数。     

大豆苷元对原代培养大鼠成骨细胞功能的影响

目的：了解大豆苷元对原代培养大鼠成骨细胞增殖、分化、钙含量及矿化功能的影响。 方法：实验于2004—08／2005—06在北京同仁医院检验科完成。选取出生24h以内的SD大鼠30只，断颈处死，无菌取头盖骨，获取成骨细胞进行培养。分为对照组、大豆苷元10μmol／L组、大豆苷元5μmol／L组和大豆苷元1μmol／L组。应用四甲基偶氮唑盐法、对硝基苯磷酸盐法、原子吸收分光光度法及茜素红染色方法观察大豆苷元对体外培养成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶表达、基质钙含量及矿化结节形成的影响。 结果：①各浓度组与对照组相比均可增加吸光度值，刺激成骨细胞的增殖，其中大豆苷元10μmol／L组与对照组相比，差异有显著性意义（大豆苷元10μmol／L组为0．82130&;#177;0．10130，大豆苷元5μmol／L组为0．66370&;#177;0．04749，大豆苷元lμmol／L组为0．67750&;#177;0．05392，对照组为0．66250&;#177;0．07382。P〈0．005）。②各浓度组大豆苷元作用于成骨细胞48h，均可使碱性磷酸酶活性增加，差异有显著性意义（大豆苷元10μmol／L组为1．10917&;#177;0．34190，大豆苷元5μmol／L组为0．97433&;#177;0．33267．大豆苷元1μmol／L组为0．84033&;#177;0．20408，对照组为0．55050&;#177;0．15489，P〈0．005或0．02）；各浓度组大豆苷元作用于成骨细胞72h，均可使碱性磷酸酶活性增加，差异有显著性意义（大豆苷元10μmol／L组为1．04667&;#177;0．12217，大豆苷元5μmol／L组为0．95000&;#177;0．07330，大豆苷元lμmol／L组为1．07700&;#177;0．14704．对照组为0.81867&;#177;0．07829，P〈0．005或0.02）。③各浓度组大豆苷元处理细胞18d，可增加细胞基质钙含量，其中大豆苷元5μmol／L组与对照组相比，差异有显著性意义[大豆苷元10μmol／L组（0．69975&;#177;0．13809）mg／L，大豆苷元5μmol／L组（1．01225&;#177;0．13277）mg／L，大豆苷元1μmol／L组（0．70375&;#177;0．07146）mg／L，对照组（0．60000&;#177;．10494）mg／L，P〈0．005]。④大豆苷元1μmol／L和5μmol／L组处理细胞18d，形成矿化结节数高于对照组[大豆苷元5μmol／L组（182．7&;#177;30．1）个，大豆苷元1μmol／L组（117．0&;#177;41．9）个，对照组（74．7&;#177;9．5）个，P〈0．0051。 结论：大豆苷元具有刺激成骨细胞增殖，提高碱性磷酸酶活性、细胞基质钙含量及矿化结节形成的数量的作用。     

大豆苷元对原代培养大鼠成骨细胞功能的影响

目的:了解大豆苷元对原代培养大鼠成骨细胞增殖、分化、钙含量及矿化功能的影响。方法:实验于2004-08/2005-06在北京同仁医院检验科完成。选取出生24h以内的SD大鼠30只,断颈处死,无菌取头盖骨,获取成骨细胞进行培养。分为对照组、大豆苷元10μmol/L组、大豆苷元5μmol/L组和大豆苷元1μmol/L组。应用四甲基偶氮唑盐法、对硝基苯磷酸盐法、原子吸收分光光度法及茜素红染色方法观察大豆苷元对体外培养成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶表达、基质钙含量及矿化结节形成的影响。结果:①各浓度组与对照组相比均可增加吸光度值,刺激成骨细胞的增殖,其中大豆苷元10μmol/L组与对照组相比,差异有显著性意义(大豆苷元10μmol/L组为0.82130±0.10130,大豆苷元5μmol/L组为0.66370±0.04749,大豆苷元1μmol/L组为0.67750±0.05392,对照组为0.66250±0.07382,P<0.005)。②各浓度组大豆苷元作用于成骨细胞48h,均可使碱性磷酸酶活性增加,差异有显著性意义(大豆苷元10μmol/L组为1.10917±0.34190,大豆苷元5μmol/L组为0.97433±0.33267,大豆苷元1μmol/L组为0.84033±0.20408,对照组为0.55050±0.15489,P<0.005或0.02);各浓度组大豆苷元作用于成骨细胞72h,均可使碱性磷酸酶活性增加,差异有显著性意义(大豆苷元10μmol/L组为1.04667±0.12217,大豆苷元5μmol/L组为0.95000±0.07330,大豆苷元1μmol/L组为1.07700±0.14704,对照组为0.81867±0.07829,P<0.005或0.02)。③各浓度组大豆苷元处理细胞18d,可增加细胞基质钙含量,其中大豆苷元5μmol/L组与对照组相比,差异有显著性意义犤大豆苷元10μmol/L组(0.69975±0.13809)mg/L,大豆苷元5μmol/L组(1.01225±0.13277)mg/L,大豆苷元1μmol/L组(0.70375±0.07146)mg/L,对照组(0.60000±0.10494)mg/L,P<0.005犦。④大豆苷元1μmol/L和5μmol/L组处理细胞18d,形成矿化结节数高于对照组犤大豆苷元5μmol/L组(182.7±30.1)个,大豆苷元1μmol/L组(117.0±41.9)个,对照组(74.7±9.5)个,P<0.005犦。结论:大豆苷元具有刺激成骨细胞增殖,提高碱性磷酸酶活性、细胞基质钙含量及矿化结节形成的数量的作用。     

锶盐与模拟失重大鼠骨细胞的凋亡

背景:模拟失重促进成骨细胞、骨细胞凋亡,而锶能降低失重状态下骨组织中成骨细胞、骨细胞凋亡率,促进骨形成.目的:观察锶盐对失重状态下骨组织中细胞凋亡的防治效应.方法:5周龄SD大鼠建立失重动物模型,在悬吊前3 d或悬吊时开始以锶盐灌胃.建模后7 d,使用全自动生化仪检测大鼠血清中钙、磷、碱性磷酸酶水平,放射免疫分析法测定骨钙素质量浓度,原位细胞凋亡检测技术检测骨组织中细胞凋亡,免疫组化方法检测骨组织中Fas蛋白水平.结果与结论:模型组大鼠血清中碱性磷酸酶、骨钙素水平均显著低于相应对照组(P<0.05),但血钙,磷浓度均较相应对照组升高(P<0.05),骨组织中成骨细胞、骨细胞及骨髓间充质细胞凋亡指数、骨组织中Fas抗原水平均高于相应对照组(P<0.01).悬吊前3 d始及悬吊时始锶盐灌胃组碱性磷酸酶,骨钙素水平均显著高于模型组(P<0.05),而血钙、骨组织中成骨细胞、骨细胞及骨髓间充质细胞凋亡指数、骨组织中Fas抗原水平均显著低于模型组(P<0.05).说明尾部悬吊模拟失重增加骨组织中Fas蛋白表达,从而增加大鼠骨组织中成骨细胞、骨细胞及骨髓间充质细胞凋亡,而锶盐可降低失重状态下大鼠骨组织Fas蛋白表达,从而降低成骨细胞、骨细胞及骨髓间充质细胞凋亡.     

Metabolic changes in simulated weightlessness

8 healthy subjects participated in 2 series of experiments on the comparative studies of two techniques of respiratory therapy employing multicomponent anesthesia during controlled lung ventilation in normal conditions and in experimental weightlessness. It has been established that experimental weightlessness, as compared to normal conditions of controlled lung ventilation, was more favourable for the maintenance of effective energy exchange in erythrocytes and tissue O2 consumption. Both techniques of respiratory therapy during controlled lung ventilation are recommended in these conditions.     

模拟失重雌性大鼠L5椎骨的应力松弛特点

背景:航天医学有必要了解模拟失重对雌性大鼠承重骨应力与时间的变化规律.目的:观察模拟失重对雌性大鼠承重骨应力松弛的影响,为航天医学提供模拟失重动物椎骨应力松弛数据.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005-07/09在吉林大学力学实验中心完成.材料:6月龄雌性大鼠30只,体质量275-296 g,随机分为正常对照组、失重组各15只.方法:大鼠复制失重骨质疏松动物模型.在日本岛津电子万能试验机上对正常和失重组各10个试样进行应力松弛实验,应力松弛实验的应变增加速度为50%/min,设定时间为7 200 s,采集100个数据以一元线性回归分析的方法处理实验数据.主要观察指标:①应力松弛实验数据和曲线.②归一化应力松弛函数计算.结果:正常和失重组应力松弛最初600 s变化较快,之后应力缓慢下降,对照组7 200 s应力松弛量为0.88 MPa,失重组7 200 s应力松弛量为0.62 MPa.结论:应力松弛曲线是以对数关系变化的,失重骨质疏松对应力松弛具有一定影响.     

脱氢表雄酮对体外培养大鼠成骨细胞和骨保护素的影响

背景:脱氢表雄酮主要来自肾上腺皮质,在相关外周组织中转化为雄激素或雌激素而发挥间接的生物学作用.目的:实验拟验证脱氢表雄酮促进成骨细胞增殖的作用及其机制.设计、时间及地点:分组对照观察,于2006-01/2007-02在上海交通大学附属第六人民医院和上海复旦大学放射医学研究所合作完成.材料:1日龄SD新生大鼠10只,雌雄不拘.脱氢表雄酮为美国Sigma公司产品.方法:体外分离培养SD大鼠成骨细胞,取传l代细胞,分别给予(1×1-5,1×10-7,1×10)mmol/L脱氢表雄酮培养72h,以1×108 mmol/L雌二醇为阳性对照,另设空白对照组.主要观察指标:以细胞形态学和碱性磷酸酶染色进行成骨细胞鉴定.应用光镜、四甲基偶氮唑盐法检测细胞的生长和增殖.茜素红染色观察成骨细胞矿化结节形成功能;同时双抗体夹心ABC-ELISA法测定不同浓度脱氢表雄酮培养液中对骨保护素浓度的影响.结果:①原代培养细胞碱性磷酸酶染色成阳性鉴定为成骨细胞.②不同浓度脱氢表雄酮组成骨细胞增殖能力均有上升,其中以1×107mmol/L脱氧表雄酮组最显著(P＜<0.01),其作用和雌二醇相似(P＞0.05).③不同浓度脱氢表雄酮组碱性磷酸酶的活性均升高.亦以1×107mmol/L脱氢表雄酮组最显著(P＜0.01),1×10-7mmol/L,1×1-9mmol/L脱氢表雄酮的作用和雌二醇和相似(P＞0.05).④1×10-9mmol/L脱氢表雄酮组单位细胞数的碱性磷酸酶活性高于空白对照组(P＜0.05).⑤不同浓度脱氧表雄酮组矿化面积及矿化面积比均有显著增加(P＜0.01),其作用和雌二醇相似.⑥l×109mmol/L脱氢表雄酮组培养72 h时骨保护素反应最活跃(JD＜0.01),与成骨细胞增殖能力呈正相关.结论:脱氢表雄酮能够促进SD大鼠成骨细胞生长和增殖,浓度适当时与雌二醇无显著差别,最佳浓度为1×107～109)mmol/L,其作用可能与刺激骨保护素因子有关.当浓度升高至1×10-5mmol/L时,并不利于成骨细胞的增殖.     

模拟失重状态下人体焦虑状况及心理状态调查分析

[目的]了解模拟失重状态下人体的焦虑状况及心理状态。[方法]应用状态-特质焦虑量表(STAI-FormX)以及症状自评量表(SCL-90),以第四军医大学航空航天医学系12名学员为调查对象,测量他们在模拟失重状态下的焦虑状况及心理状态。[结果]测试前后学员的焦虑程度比较,差异无统计学意义(P>0.05);症状自评量表中除躯体化症状方面外,12名测试者其他因子得分均低于常模,强迫症状、抑郁、焦虑、敌对及偏执因子与常模比较差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]模拟失重状态下航空航天医学系学员具有较高的心理承受能力。     

孕酮对体外培养人成骨细胞增殖和分化的促进作用

目的:探讨孕酮对正常成人成骨细胞的作用,验证孕激素治疗绝经后骨质疏松症的假设机制。方法:以正常成年女性松质骨分离培养的人成骨细胞为对象,用10-10,10-8,10-6M孕酮干预。四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖情况;半定量反转录聚合酶链反应和免疫印记法测定孕激素受体mRNA和蛋白质表达;半定量RT-PCR测定c-fos,c-jun和骨钙素基因表达。结果:与对照组相比较,10-10,10-8,10-6M孕酮增加人成骨细胞增殖达9.8%,23.0%和32.8%。孕酮不影响孕激素受体mRNA和蛋白质表达,但可增加c-fos,c-junmRNA表达,分别为5.4%,15.3%,35.5%和7.2%,20.1%,40.3%。孕酮增加骨钙素mRNA表达为12.2%,23.7%和45.5%。结论:孕酮可促进人成骨细胞的增殖和分化,可用于治疗绝经后骨质疏松症。     

壮筋续骨汤含药血清体外培养大鼠成骨细胞的增殖

背景：壮筋续骨汤具有促进胫骨骨折愈合的作用。目的：观察壮筋续骨汤含药血清对体外培养大鼠成骨细胞增殖的影响。方法：大鼠灌胃给予壮筋续骨汤后制备含药血清。取第2代生长状况良好出生48h内的SD大鼠成骨细胞,对照组和壮筋续骨汤组分别加入5%,10%,20%的正常SD大鼠血清和含药血清培养72h。结果与结论：MTT法检测发现壮筋续骨汤含药血清对成骨细胞的增殖有明显的促进作用,以10%壮筋续骨汤组作用最明显（P〈0.05）。流式细胞仪检测各组细胞DNA合成期（S期）的比例,发现壮筋续骨汤组处于S期的细胞比例明显大于对照组（P〈0.05）。说明壮筋续骨汤含药血清能促进成骨细胞DNA的合成,使更多的细胞进入S期,促进体外培养的成骨细胞增殖。