邻苯二甲酸二丁酯对斑马鱼胚胎发育毒性的研究

目的对成年斑马鱼进行邻苯二甲酸二丁酯(DBP)急性染毒,观察其胚胎发育过程,探索DBP对其胚胎发育的影响。方法选取健康成年斑马鱼80条,雌雄各半,适应性分开饲养1个月后,分别分成4组,给予1250μg/L和625μg/L DBP经水染毒,同时设溶剂(0.01%丙酮)对照组和空白对照组。染毒7天后,按雌雄1∶1的比例交配,在倒置显微镜下观察整个胚胎发育过程,并计算受精率、72h死亡率、仔鱼72h孵化率及出生体重和身长。结果各组的2h受精率的大小如下:空白对照组>丙酮对照组>625μg/L DBP染毒组>1250μg/L DBP染毒组,分别为98.09%、95.76%、95.31%和94.42%。而各组的72h死亡率分别为18.29%、23.34%、49.45%和72.41%,72h孵化率分别为96.43%、82.37%、48.11%和26.79%。染毒组的死亡率高于非染毒组,孵化率低于非染毒组。与正常组和丙酮对照组相比,1250μg/L和625μg/L DBP染毒组胚胎发育明显迟缓,仔鱼身长明显变短,并有统计学差异。暴露剂量越大,身长越短。结论625μg/L以上剂量的DBP染毒能导致斑马鱼胚胎发育迟缓。     

邻苯二甲酸二丁酯宫内和哺乳期染毒对F_1代雄性大鼠的生殖发育毒性

目的　观察邻苯二甲酸二丁酯 (DBP)对F1代仔鼠的发育状况及性成熟期雄性仔鼠生殖系统损害情况 ,并期望得到现有文献中缺如的DBP对F1代仔鼠生殖发育毒性的最大无作用剂量 (NOAEL)。方法　选择在宫内暴露期和哺乳期 (受孕第 2天至仔鼠 2 1天断奶 ) ,通过灌胃方式给母鼠染毒 (DBP终浓度分别为 0、5 0、2 5 0和 5 0 0mg (kg·d) ,观察对仔鼠的影响。结果　DBP对母鼠无明显影响 ,中高剂量组 [2 5 0、5 0 0mg (kg·d) ]对F1代雄性仔鼠的出生体重、每窝活产数、体重增长及雄性仔鼠肛殖距有明显影响 ,对性成熟期雄性仔鼠生殖系统损害尤为严重 ,可观察到小睾丸、附睾发育不全甚至缺失、睾丸未降等现象 ,附睾尾精子参数和睾丸精子头计数及附睾、肝、肾、前列腺的脏器系数明显降低 ,而与激素合成相关的垂体系数却略有上升。低剂量组未观察到有害影响。结论　雄性生殖系统是DBP作用的主要靶器官 ,幼年敏感期所受的损害部分不可逆 ,并得到DBP经口染毒对F1代仔鼠生殖发育毒性的NOAEL为 5 0mg (kg·d)。据此 ,进一步提出DBP经口摄入的参考剂量 (RfD)为 5 0 0 μg (kg·d)。     

城市生活污水对水生动物斑马鱼的发育毒性研究

[目的]探讨城市生活污水对斑马鱼的毒性效应。[方法]利用斑马鱼作为受试对象,在实验室控制条件下,观察不同浓度的生活污水对斑马鱼的发育毒性。[结果]在早期生命阶段,高浓度的生活污水对斑马鱼有急性毒性效应。在性发育阶段,暴露组雄鱼的体长(F=5.85,P﹤0.05)和体重均高于对照组(F=5.85,P﹤0.05),并随污水浓度增高而增加;暴露组雌性个体的性腺指数明显高于对照组(F=5.94,P﹤0.01),且随污水浓度的升高而增加。在整生命期暴露期,暴露组雌鱼卵子数、体长和体重均低于对照组;雌鱼的性腺指数有所增高,而雄鱼的却略微降低。[结论]城市生活污水可能对水生动物的各个发育阶段产生生殖毒性。     

双酚A对断乳期SD大鼠F1子代雄性生殖发育影响

[目的]探索双酚A(BisphenolA,BPA)对断乳期F1雄性子代SD大鼠生殖和发育的影响. [方法]从孕0 d对母鼠染毒50 mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kgBPA至断乳期停止染毒,对睾丸的Bax、Bcl-2、PCNA、ER的表达进行免疫组织化学分析. [结果]图象分析结果表明,随着BPA染毒剂量的增高,Bax表达的细胞灰度值有降低的趋势,50 mg/kg、100 mg/kg和200 mg/kg BPA组的Bax与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);而Bcl-2表达的细胞灰度值有增高的趋势;100 mg/kg、200 mg/kg BPA组的Bcl-2与对照组相比,差异有统计学意义(P(0.05);PCNA表达的细胞灰度值50 mg/kg,100 mg/kg,200 mg/kg BPA组与对照组相比.差异均有统计学意义(P<0.05);生精细胞ER表达的灰度值有增高的趋势,50 mg/kg,100 mg/kg,200 mg/kg BPA组与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05).[结论]BPA导致F1雄性子代生殖发育毒性的机制,可能是导致生精细胞凋亡增强,增殖减慢,细胞内转录、表达受阻.     

邻苯二甲酸二丁酯通过AMPK/mTOR信号通路对大鼠睾丸间质细胞凋亡的影响及其机制研究

目的:探讨邻苯二甲酸二丁酯（dibutyl phthalate,DBP）通过腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（AMP activated protein kinase/mammalian rapamycin target protein,AMPK/mTOR）信号通路对大鼠睾丸间质细胞（Leydig）凋亡的影响...     

邻苯二甲酸二丁酯对睾酮合成的影响

目的探讨邻苯二甲酸二丁酯(DBP)对睾酮合成的影响及相关机制。方法6周龄雄性SD大鼠随机分成0,250,500和1 000 mg/(kg.d)4组,每组8只,灌胃给予DBP。放免法测定黄体生成素(LH)、17β雌二醇(17βE2)、睾酮(T)。RT-PCR法测定细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)mRNA和3β类固醇脱氢酶(3βHSD)mRNA的相对表达量。结果血清17βE2浓度在DBP250和1 000 mg/(kg.d)剂量组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。血清和匀浆T浓度500和1 000 mg/(kg.d)剂量组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。P450scc mRNA和3βHSDmRNA表达水平随着染毒剂量的增加下降趋势明显。相关与回归分析结果显示,mRNA(Y)表达水平与染毒剂量(对数,X)之间存在明显的剂量-依赖关系,P450scc mRNA:r=0.78,Y=0.54-0.10X(P<0.01);3βHSD mRNA:r=0.79,Y=0.79-0.13X(P<0.01)。结论间质细胞是DBP的主要靶细胞之一。DBP导致T合成减少的可能机制包括T合成相关酶mRNA表达水平的下调和17βE2水平的上升干扰了下丘脑-垂体-睾丸轴的生理平衡。     

邻苯二甲酸二丁酯对F1 代仔鼠睾丸损害的可逆性恢复特性

目的研究和探讨邻苯二甲酸二丁酯(DBP)对F1代仔鼠睾丸损害是否具有可逆性恢复的特性。方法在宫内暴露和哺乳期(妊娠1d至仔鼠出生21d),每日每kg体重0、50、250和500mg DBP灌胃染毒孕鼠(每组10只),从解剖学、病理学等角度观察DBP对不同发育阶段(出生14、21和70d)F1代雄性大鼠的睾丸损害。结果与对照组相比,虽然不同发育阶段大鼠睾丸重量及系数没有明显统计学意义,但与对照组相比较,250、500mg／L组出生14d大鼠生精上皮变薄,Sertoli细胞数量明显减少(分别减少至对照组的84％和86％),并出现空泡样改变;出生21d时,Sertoli细胞数量和形态基本恢复正常,但有少量生精细胞脱落;至出生70d时,个别大鼠睾丸出现曲细精管变性、生精上皮萎缩等不可逆性损害。结论DBP宫内暴露和哺乳期染毒可损害F1代大鼠睾丸Sertili细胞,但随着仔鼠的发育,DBP致Sertoli细胞损害作用具有部分可逆性恢复的特性。     

连接蛋白Cx50 S258F突变体对斑马鱼晶状体发育的影响

目的:研究与先天性白内障相关的连接蛋白Cx50 S258F突变体对斑马鱼晶状体发育的影响。方法:将野生型和携带S258F突变的Cx50编码区分别构建到pcDNA3.1myc/his真核表达载体上,通过体外转录获得相应的RNA产物,将RNA产物分别显微注射到1细胞期的斑马鱼胚胎,通过显微镜观察斑马鱼晶状体表型,并利用全胚原位杂交技术分析过表达野生型和突变型Cx50对晶状体标志基因Cx23表达的影响。结果:与野生型胚胎相比,S258F突变型Cx50过表达引起斑马鱼胚胎白内障表型,过表达野生型Cx50也引起白内障表型,但是畸形数量明显少于突变型,野生型和突变型Cx50的过表达均下调了Cx23的表达。结论:连接蛋白Cx50S258F突变体可引起斑马鱼白内障表型,提示Cx50的S258F突变体是造成先天性白内障的原因。     

农药代森锌对斑马鱼胚胎脊索发育的影响

目的检测广泛应用的农药代森锌的毒性。方法运用斑马鱼胚胎进行生物学评价。结果 0.0025,0.005,0.01,0.02,0.03,0.05,0.1,和1.0μmol/L代森锌染毒并没有引起斑马鱼明显死亡,但脊索却发生了明显的弯曲,弯曲比率分别是1.42%,10.5%,5.27%,26.25%,44.11%,66.25%,100%和100%,这种特异的弯曲与胶原蛋白无明显关联。结论实验表明短时间低浓度的代森锌可以致使胚胎畸形,也表明斑马鱼作为环境污染监测,是一种非常优良的动物模型。     

邻苯二甲酸二丁酯对小鼠卵巢功能的影响

目的 探讨邻苯二甲酸二丁酯(DBP)对小鼠卵巢功能的影响.方法 将雌性昆明小鼠按体重随机分为高(400mg/kg)、中(40mg/kg)、低(4mg/kg)DBP染毒组和1个溶剂对照组(二甲基亚砜),每组12只.每天腹腔注射1次[0.005ml/(g·d)],连续染毒14 d.阴道脱落细胞涂片法观察动情周期变化,分别于终止染毒第1、14天处死,分离卵巢和子宫,计算脏器系数,并观察卵巢病理变化.结果 各染毒组小鼠食欲降低,活动减少,精神萎靡不振,被毛光泽度下降,部分出现腹泻,体重下降;对照组小鼠食欲正常,精神较好,被毛有光泽.不同组别小鼠染毒前、后体重比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).中、高剂量组小鼠动情后期、间期和动情周期时间长于对照组,高剂量组小鼠动情后期、间期和动情周期时间长于低剂量组,差异均有统计学意义(P＜0.05).随着染毒剂量的增加,小鼠动情周期时间逐渐延长,呈剂量-反应关系(rs=0.677,P＜0.001),并主要表现为动情后期和动情间期的延长.终止染毒第1、14天,高、中、低剂量组小鼠卵巢脏器系数与对照组相比,差异均无统计学意义(P＞0.05).终止染毒第1天,高、中、低剂量组小鼠子宫脏器系数高于对照组,终止染毒第14天,中、高剂量组小鼠子宫脏器系数高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).随染毒剂量的增高,子宫脏器系数有升高的趋势,呈剂量-反应关系(rs=0.564,P=0.010).终止染毒第1天,高剂量组成熟卵泡数低于对照组,中、高剂量组闭锁卵泡数高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.01);终止染毒第14天,高剂量组闭锁卵泡数高于对照组,差异有统计学意义(P《0.05).结论 邻苯二甲酸二丁酯可影响小鼠卵巢的内分泌功能及卵泡的发育、成熟,在体内可能具有类雌激素作用.     

邻苯二甲酸二丁酯对大鼠生殖相关元素影响

目的 探讨邻苯二甲酸二丁酯(DBP)对大鼠血液中生殖相关元素的影响。方法 6周龄雄性大鼠分为5组,其中4组为DBP实验组,1组为对照组。经口灌胃DBP,每天1次,连续30 d。染毒结束后采血,摘取睾丸和附睾称重并计算脏/体比;火焰原子吸收法测定血液中锌、锰、镁和铜元素含量。结果 0.50 g/kg及以上DBP组睾丸脏/体比明显低于对照组(P<0.05);1.00和2.00 g/kg DBP组附睾脏/体比也明显低于对照组(P<0.05)。1.00和2.00g/kg DBP组血液元素锌和锰水平〔(45.52±6.60),(48.21±8.08)和(1.71±0.97),0.68±0.73)〕明显低于对照组〔(64.39±11.68)和(4.40±0.82)〕,呈剂量-反应关系(P<0.05);但血液中铜和镁元素水平无明显变化。结论 邻苯二甲酸二丁酯可能通过影响机体内锌、锰等元素水平而产生睾丸毒性。     

ERK-MAPK通路在DBP致大鼠睾丸缝隙连接损伤中作用

目的 探讨邻苯二甲酸二丁酯（DBP）对大鼠睾丸的损害作用及与细胞外调节蛋白激酶（ERK）信号通路激活、缝隙连接损伤关联性。方法 SD大鼠随机分为3个DBP剂量组（50、500、1 000 mg/kg）和溶剂对照组,经口灌胃染毒,每日1次,持续5周。酶联免疫吸附试验检测大鼠血清卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、睾酮等生殖激素水平;精子分析仪分析精子密度、活率和总畸形率;苏木素-伊红染色法观察睾丸组织结构变化;Western blot法检测ERK1/2和p-ERK蛋白表达;RT-PCR法检测缝隙连接蛋白43（Cx43）mRNA表达。结果 与对照组比较,中、高剂量DBP组大鼠血清睾酮水平[（6.65±0.97）、（3.57±0.54）nmol/L]明显降低（P<0.05）,高剂量DBP组大鼠精子密度（64.71±11.36）10⁵个/mL显著降低（P<0.05）,中、高剂量DBP组大鼠精子总畸形率[（13.64±1.68）%、（19.54±2.86）%]明显升高（P<0.05）;随DBP剂量升高大鼠睾丸组织结构损伤程度增加;与对照组比较,中、高剂量DBP组大鼠睾丸组织中p-ERK表达明显升高,各剂量DBP组大鼠睾丸组织中Cx43 mRNA表达均明显下降,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 DBP可激活ERK通路、下调Cx43表达,引起大鼠睾丸组织结构和功能损伤。     

多种载体对邻苯二甲酸二丁酯降解优势菌吸附性能的比较

目的寻求廉价而有效的邻苯二甲酸二丁酯(DBP)降解优势菌吸附载体。方法以硅藻土、斜发沸石、丝光沸石和粉煤灰作为备选吸附载体,进行改性处理,分别测定备选材料对一定浓度DBP降解优势菌的吸附能力和吸附强度。结果改性的粉煤灰、斜发沸石、丝光沸石和硅藻土对DBP降解优势菌的吸附能力分别是原状载体的1.66、1.37、1.49和1.16倍。对各改性载体吸附能力的比较试验表明,硅藻土、斜发沸石、丝光沸石、粉煤灰的吸附能力分别为94.4%、84.0%、71.6%和44.2%;吸附强度依次为91.1%、90.1%、90.5%和72.1%;对初浓度为100mgL的DBP试验水样进行降解试验,24小时降解率分别为90.2%、89.9%、76.3%和62.4%。结论硅藻土、斜发沸石、丝光沸石和粉煤灰等吸附载体经过改性对DBP降解优势菌的吸附能力明显提高。各种载体对DBP降解优势菌的吸附能力和吸附强度从强到弱依次为:硅藻土、斜发沸石、丝光沸石、粉煤灰。     

邻苯二甲酸二丁酯与邻苯二甲酸单丁酯对睾丸间质细胞睾酮水平和胰岛素样因子3表达的影响

目的 观察邻苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate,DBP)、邻苯二甲酸单丁酯(monobutyl phthalate,MBP)对小鼠睾丸间质瘤细胞(MA-10)中胰岛素样因子3(insulin-like factor 3,INSL3) mRNA 及蛋白的表达量和细胞睾酮分泌水平的影响.方法 以小鼠睾丸间质瘤细胞(MA-10)为模型,经过DBP、MBP直接染毒后,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞培养基上清中睾酮的含量,采用荧光定量PCR测定细胞中INSL3 mRNA的表达,采用蛋白免疫印迹法(western blot)测定INSL3蛋白的表达水平.结果 与对照组比较,MA-10细胞睾酮合成量在低染毒剂量(10-9～10-6 mol/L)时均表现出刺激效应,睾酮含量增加;在高染毒剂量(10-3 mol/L)时表现抑制效应,随着染毒时间的延长,睾酮水平逐渐降低.荧光定量PCR以及Western blot测定结果显示,DBP在10-6、10-4 mol/L染毒时,INSL3 mRNA及蛋白表达水平较对照组降低,差异有统计学意义(P＜0.05);随着MBP染毒剂量的增加,INSL3 mRNA及蛋白表达水平呈现下降趋势,但MBP在10-7 mol/L时,与对照组相比,对MA-10细胞中INSL3蛋白表达表现出刺激作用.结论 DBP、MBP染毒对MA-10细胞睾酮分泌表现出高剂量抑制、低剂量刺激的双向效应;DBP、MBP染毒可抑制MA-10细胞中INSL3 mRNA和蛋白的表达.     

硅藻土吸附固定化微生物对邻苯二甲酸二丁酯的降解特性研究

目的研究以硅藻土作载体的播种式固定化微生物对邻苯二甲酸二丁酯(DBP)的生物降解特性。方法将改性硅藻土作为载体,制成吸附DBP降解优势菌的固定化微生物,然后在不同DBP初浓度、振荡速度、pH值、温度及重金属化合物存在的条件下对DBP进行降解试验,并进行降解动力学分析。结果在DBP初浓度为100～500mgL范围内,吸附固定化微生物对DBP的降解均保持较高的活性,24h降解率可达80%以上;游离与吸附固定化微生物在振荡条件下的降解活性高于静置时的降解活性;在pH值为6.0～9.0范围内,固定化微生物的活性均高于游离态微生物,24h的降解率可达82%以上;在20～40℃的温度范围内,固定化微生物24h降解率达84.5%;若试验水样中加入金属化合物,对游离和固定化微生物的降解活性均有明显的抑制作用;吸附固定化微生物对DBP降解过程可用一级反应动力学模型表达。结论硅藻土吸附固定化微生物,可有效降解DBP;吸附固定化微生物较游离态微生物对DBP负荷、温度、pH值具有更宽的适应能力;重金属化合物对其降解能力均有抑制作用;吸附固定化微生物对DBP的降解符合一级反应动力学模型。     

水中邻苯二甲酸二丁酯的光催化降解

目的：研究光降解饮用水中邻苯二甲酸二丁酯化合物。方法：水中DBP在紫外光照射下，紫外光和臭氧共同作用下，以及加入纳米TiO2进行光催化降解。结果：紫外光和臭氧共同处理对DBP的降解有协同作用，单紫外光照射的半衰期是10．6min，紫外光与臭氧协同降解的半衰期是7．8min，而光催化的半衰期则小于1min，较小的粒经20～30nm的TiO2光催化效果要好于较大粒经30～50nm的TiO2光催化效果，加入20～30nmTiO2光催化剂的最佳剂量是0．5g／L，初始pH越大越有利于DBP的光催化降解。结论：光催化可有效降解水中邻苯二甲酸二丁酯。     

邻苯二甲酸二丁酯宫内暴露对大鼠子代的生殖发育毒性研究

[目的]研究邻苯二甲酸二丁酯(DBP)宫内暴露对亲代孕鼠及F1代子鼠生殖毒性的影响。[方法]染毒组通过灌胃方式给母鼠染毒,染毒剂量分别为20 mg/(kg·d)、100 mg/(kg·d)和500 mg/(kg·d)。用酶联免疫法检测血清中雌二醇(E2)、黄体生成素(LH)、促卵泡刺激素(FSH)及睾酮(T)的水平。[结果]本实验剂量的DBP对母鼠各脏器无明显毒作用,但对血清中性激素水平影响显著,与溶剂对照组相比,中、高剂量组(100、500 mg/(kg·d))母鼠的T水平均明显下降(P<0.05),而高剂量组的母鼠血清中FSH含量增加(P<0.001);随着DBP染毒剂量增加,母鼠妊娠期体重增长明显下降(P<0.05);雌性子鼠血清中性激素水平测定结果显示:分娩后第7天(PND7),雌性子鼠的LH、T水平随DBP染毒剂量增加而下降,各处理组间均存在差异(P<0.05);至第26天(PND26),雌性子鼠的E2水平随染毒剂量的增加下降明显,各组间差异显著(P<0.05),中、高剂量组的雌性子鼠FSH水平低于对照组(P<0.05),高剂量组的T水平明显升高(P<0.05)。[结论]母鼠妊娠后期DBP暴露对子代有明显的毒性效应,较低剂量的DBP也可改变子代血清中性激素水平。