TCF7L2基因rs7903146、rs12255372多态性与妊娠期糖尿病的Meta分析

目的:系统评价TCF7L2基因rs7903146、rs12255372多态性与妊娠期糖尿病(GDM)的关系。方法:通过Pub Med数据库、Wiley数据库、Elsevier数据库、中国生物医学文献数据库、万方数据库、重庆维普网、中国知网数据库查全关于TCF7L2基因rs7903146、rs12255372与GDM的研究,采用State11.0软件对纳入的文献进行Meta分析。结果:共纳入13篇关于rs7903146与GDM的研究。Meta分析结果显示rs7903146(TT+TC)/CC:OR=1.642,95%CI:1.493~1.806,P<0.001;T/C:OR=1.498,95%CI:1.392~1.612,P<0.001,且亚组分析欧洲、亚洲人群中差异有统计学意义,美洲人群中差异无统计学意义。关于rs12255372研究共纳入7篇与GDM的研究。Meta分析结果显示rs12255372(TT+TG)/GG:OR=1.569,95%CI:1.108~2.222,P=0.011;T/G:OR=1.491,95%CI:1.144~1.942,P=0.003。结论:TCF7L2基因rs7903146 TT+CT基因型、rs12255372 TT+GT基因型是GDM患者发病的危险因素;rs7903146等位基因T以及rs12255372等位基因T均是GDM患者发病的危险因素。     

TCF7L2基因rs7903146位点多态性与2型糖尿病胰岛β细胞早相功能的相关性

目的 探讨TCFL2基因rs7903146位点单核苷酸多态性与青岛2型糖尿病病人胰岛β细胞早相功能的相关性.方法 应用限制性片段长度多态性(RFLP)方法,对213例青岛及周边地区汉族人(其中2型糖尿病病人99例、正常对照114例)的TCF7L2基因rs7903146位点进行基因分型;用左旋精氨酸兴奋实验测定胰岛β细胞...     

TCF7L2基因rs3814570多态性与新疆维吾尔族人群T2DM的相关性研究

目的 探讨新疆地区维吾尔族人群转录因子7类似物2(TCF7L2)基因的rs3814570位点与2型糖尿病(T2DM)的相关性.方法 采用病例-对照研究设计,以经确诊的949例T2DM患者作为观察组,选取963例健康体检者作为对照组.应用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱分析质谱技术(MALDI-TOF)对TCF7L2基因多态性进行检测.结果 两组对象rs3814570位点基因型CC、CT和TT,等位基因C和T的分布比较,差异有统计学意义(P＜0.05),CT基因型携带者患T2DM的风险是CC基因型携带者的0.331倍(OR=0.331,95％CI:0.166～0.661,P=0.002),TT基因型携带者患T2DM的风险是CC基因型携带者的0.539倍(OR=0.539,95％CI:0.348～0.834,P=0.005),T等位基因携带者患T2DM的风险是C等位基因携带者的0.501倍(OR=0.501,95％CI:0.377～0.664,P＜0.01).两组对象中,TCF7L2基因rs3814570位点的CT+ TT基因型组的空腹血糖(FPG)水平均明显低于CC基因型组(P＜0.05).结论 TCF7L2基因的rs3814570位点可能与新疆维吾尔族人群T2DM的发生相关,T等位基因和TT基因型可能是T2DM发生的保护因素.     

IL-13基因多态性与喉癌遗传易感性的关联研究

目的:探讨白细胞介素-13(interleukin-13,IL-13)基因单核苷酸多态性(single-nucleotide polymorphism,SNP)与喉癌遗传易感性的关系?方法:通过病例-对照研究设计,以111例经病理确诊的喉癌患者和340例健康对照者为研究对象,选取IL-13基因3’-UTR的SNP位点rs1295685,采用TaqMan探针方法进行多态性检测,应用Logistic回归计算OR值及其95%CI,比较不同基因型与喉癌发病风险的关联?结果:病例组与对照组中rs1295685(IL-13C870T)位点基因型分布存在统计学差异,在调整年龄?吸烟?饮酒及肿瘤家族史因素后发现,与CC基因型相比,携带TT/CT基因型者喉癌发病风险显著增高(调整OR值为2.00,95%CI为1.23~3.27,P值为0.005)?与CC基因型相比,携带TT/CT基因型在年龄≤62岁?吸烟?饮酒?无肿瘤家族史各亚组中表现出更高的喉癌患病风险(OR = 2.72,95%CI:1.40~5.28; OR = 2.07,95%CI:1.19~3.58;OR = 1.96,95%CI:1.03~3.73;OR = 2.01,95%CI:1.18~3.41)?吸烟?饮酒均与TT/CT基因型存在协同作用(OR = 6.48,95%CI:2.77~15.14和OR = 7.35,95%CI:3.15~17.12)?而基因型分布在肿瘤分期?分级中未见显著差异?结论:IL-13基因rs1295685位点的单核苷酸多态性与喉癌遗传易感性有关联?     

S100B基因rs881827多态性与缺血性脑卒中的遗传易感性研究

目的探讨星形胶质源性蛋白(S100B)基因单核苷酸多态性(SNP)rs881827与缺血性脑卒中(IS)的相关性。方法采用单碱基延伸的PCR技术(SBE-PCR)和DNA测序法对396例IS患者(病例组)及398例体检者(对照组)的S100B基因rs881827位点进行基因分型;用非条件Logistic回归计算比值比(OR)、95%置信区间(95%CI)、显性模型(TT/CT vs.CC)、隐性模型(CT/CC vs.TT)和超显性模型(CC/TT vs.CT),从而分析rs881827多态性与IS的发病风险。结果两组间基因型和不同遗传模型比较结果显示,rs881827位点SNP可能与IS的遗传易感性无关(CT vs.TT:OR=0.79,95%CI 0.54~1.15,P=0.22;TT vs.CC:OR=0.65,95%CI 0.38~1.09,P=0.10;TT/CT vs.CC:OR=0.75,95%CI0.53~1.07,P=0.12;CT/CC vs.TT:OR=0.74,95%CI 0.46~1.19,P=0.22;CC/TT vs.CT:OR=0.90,95%CI 0.64~1.26,P=0.53)。结论 S100B基因rs881827位点SNP可能与IS的遗传易感性无关。     

红细胞补体受体1分子水平及其基因单核苷酸多态性与系统性红斑狼疮的关联研究

目的我国系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)发病率居世界首位,治疗属世界难题。SLE的发病机制尚不明确,许多研究表明,SLE患者红细胞补体受体1(complement receptor type 1,CR1)分子水平及功能低下,但未见研究对CR1基因与SLE遗传易感性的关联进行报道。文中旨在探讨红细胞CR1分子水平及其基因单核苷酸多态性(singlenucleotide polymorphisms,SNP)与SLE的关联。方法检测SLE患者(SLE组)及健康人(对照组)红细胞CR1分子水平及5个标签SNP位点基因型,比较对照组CR1基因各SNP位点基因型对应CR1分子水平的差异,以及SLE组和对照组组间红细胞CR1分子水平和CR1基因各SNP位点基因型、等位基因的分布差异,计算比值比(OR)及其95%CI。结果对照组CR1基因rs3818361C>T/TT基因型携带者红细胞CR1水平低于CC、CT基因型者(P<0.05),rs11118167T>C/TC、CC基因型携带者红细胞CR1水平低于TT基因型者(P<0.01),rs9429945C>T/CT、TT基因型携带者红细胞CR1水平低于CC基因型者(P<0.01)。SLE组CR1几何平均荧光强度比值(geometric mean fluorescence intensity ratio,GMFIR)低于对照组(P<0.01);有3个标签SNP位点与SLE发病关联(P<0.01或P<0.05),与非携带者比较,CR1-rs4844600G>A/GG基因型(OR:8.672,95%CI:3.864～19.462)及G等位基因(OR:7.419,95%CI:3.425～16.073)、CR1-rs3818361C>T/CC基因型(OR:1.872,95%CI:1.113～3.149)及C等位基因(OR:1.575,95%CI:1.067～2.325)、CR1-rs11118167T>C/TT基因型(OR:2.083,95%CI:1.065～4.071)及T等位基因(OR:1.941,95%CI:1.050～3.588)携带者患SLE风险增加。结论健康人CR1基因rs3818361C>T/TT基因型、rs11118167T>C/TC、CC基因型和rs9429945C>T/CT、TT基因型携带者红细胞CR1水平低于该SNP位点其他基因型携带者。SLE患者红细胞CR1分子水平降低,CR1基因rs4844600G>A、rs3818361C>T、rs11118167T>C等3个SNP位点与SLE发病关联,其易感基因型CR1-rs4844600G>A/GG、CR1-rs3818361C>T/CC和CR1-rs11118167T>C/TT与SLE患者CR1分子水平低无关。     

KCNQ1基因多态性与2型糖尿病易感性相关研究

目的探讨KCNQ1基因单核苷酸多态性(SNPs)与2型糖尿病易感性的关系。方法应用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱(MALD FTOF-MS)平台以及MassARRARY-iPLEX技术,分别对238例2型糖尿病患者和240例正常对照组KCNQ1基因的三个单核苷酸多态性位点(rs231361、rs231359和rs2237892)进行基因分型,并分析KCNQ1基因位点在两组间的差异。结果 rs2237892存在CC、TC、TT三种基因型多态性,在对照组中的基因型频率分别为45.5%、40.7%、13.8%,在病例组中的基因型频率分别为44.4%、49.6%、6.0%,该位点在对照组和病例组中分布差异有统计学意义(χ2=9.334,P=0.009)。相较于CC基因型,TT基因型其OR(95%CI)分别为0.416(0.206~0.840)(P=0.014)。位点rs231361和rs231359均存在三种多态性,但在病例组和对照组间差异无统计学意义。结论 KCNQ1基因位点rs2237892与2型糖尿病易感性相关,位点rs231361和rs231359与2型糖尿病易感性不相关。     

c.1311C>T和c.1004C>A与广西G6PD缺乏症的发病风险相关性

目的 探究广西人群葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)基因单核苷酸多态性(SNP)位点c.1311C>T和c.1004C>A与G6PD缺乏症的发病风险相关性。方法 随机选取417例G6PD缺乏症患者作为病例组,295例健康人群作为对照组。使用SNPscan^TM多重SNP方法对c.1311C>T和c.1004C>A进行基因分型,通过SHEsis分析两位点单倍型频率。结果 在病例组和对照组中,c.1311C>T位点的基因型TT,CC+CT和等位基因T的分布频率差异具有统计学意义[TT vs CC:(P=0.001,OR=0.373, 95%CI=0.204～0.683); TT vs CC+CT:(P=0.001,OR=0.371, 95%CI=0.203～0.678);T vs C:(P=0.002,OR=0.601, 95%CI=0.435～0.829)];而c.1004 C>A位点的基因型和等位基因分布频率差异不具有统计学意义(P>0.05)。速率法检测结果显示：相对于基因型CC,c.1311C>T位点的基因型CT增...     

GTF2H1基因rs3802967多态性与肺癌易感性的关联性

 目的  探索GTF2H1基因rs3802967位点多态性与肺癌相关性。方法  采集肺癌及健康受试者外周血进行基因分型, 非条件Logistic回归分析该位点多态性与肺癌易感性之间相关性。结果  共收集上海及泰州地区885例肺癌患者和896例健康受试者外周血进行基因分型分析, 结果显示rs3802967 CT+TT vs. CC总体上肺癌风险显著增加(OR=1.943, 95%CI:1.559～2.426, P=3.989×10-9), 吸烟患者(CT+TT vs. CC, OR=2.382, 95%CI:1.798～3.167, P= 1.813×10-9)、男性患者(CT+TT vs. CC, OR=2.141, 95%CI:1.644～2.796, P=1.852×10-8)以及男性吸烟患者(CT+TT vs. CC, OR=2.283, 95%CI:1.709~3.059, P=2.718×10-8)肺癌风险显著增加。结论  GTF2H1基因rs3802967 C>T与肺癌患病风险正相关, 尤其在男性、吸烟患者中显著, 该位点有望成为肺癌易感个体筛查参考指标。     

锌转运蛋白-8及转录因子7类似物-2基因多态性与中国南方汉族人2型糖尿病的相关性

目的 研究锌转运蛋白一8基因(SLC30A8)多态性位点rs13266634及转录因子7类似物-2基因(TCF7L2)多态性位点rs11196218与2型锫尿病(T2DM)以及相关代谢指标的关系.方法 T2DM患者(T2DM组)259例,健康者(NC组)200名,均来自上海及周边地区.应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术判断标本基因型,同时进行人体测量学及代谢指标的检测,并分别采用稳态模型评估胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)及胰岛B细胞分泌功能指数(HOMA-B)评估胰岛素抵抗和胰岛B细胞功能.结果 ①T2DM组中,rs13266634的C等位基因频率和CC基因型频率分别为57.3%和33.6%,均显著高于NC组的45.4%和17.2%(P值均<0.05).②C等位基因携带者患T2DM的风险是T等位基因携带者的1.59倍(OR=1.59,95%CJ为1.19～2.11,χ~2=9.831,P=0.002).与TT基因型相比,CC基因型患T2DM的风险增加2.63倍(OR=2.63,95%CI为1.42～4.87,χ~2=9.69,P=0.002).③T2DM组与NC组的TCF7L2(rs11196218)基因型及等位基因频率的差异均无统计学意义(P值均>0.05).④T2DM组中,CC基因型的HOMA-B显著低于TT基因型(P=0.002).结论 SLC30A8基因rs13266634多态性位点的C等位基因可能是中国人T2DM的风险等位基因,而TCF712基因rs11196218单核苷酸多态性可能与T2DM的遗传易感性无关.     

P2z/P2x7受体检测的研究

目的　检测白血病细胞的 P2 z/ P2 x7受体。方法　将 T淋巴细胞白血病细胞株 (CEM)、急性单核细胞白血病细胞株 (THP- 1)、M2 型白血病细胞株 (HL - 6 0 )、M3型白血病细胞株 (NB4 )、巨核细胞病细胞株 (Dam i/Dam)和伯基特淋巴瘤细胞株 (Raji)共六株白血病细胞株制成 2× 10 7/ m l的细胞悬液 ,分别加入 P2 z/ P2 x7受体的激动剂 ATP和 /或特异性抑制剂 KN- 6 2 ,测定加入前后细胞内荧光强度变化 ,同时以 P2 z/ P2 x7受体多克隆抗体免疫组化 ABC法鉴定 P2 z/ P2 x7受体。结果　 10 .4 mm ol/ L 的 ATP对于 THP- 1、NB4和 HL- 6 0细胞株钙离子通透性有较强的激活作用 ,其激活率分别为 5 4 .91%、39.4 5 %和 30 .4 6 % ;ATP对 CEM、Dam和 Raji细胞株的激活作用很弱 ,激活率分别为 10 .4 35 %、13.2 15 %和 2 .6 7% ;KN- 6 2对 THP- 1有很强的抑制作用 (抑制率达 88.74 % ) ,而对 NB4和 HL- 6 0的抑制作用很弱 (抑制率仅为 15 .81%和 12 .5 0 % ) ,对 Raji细胞株没有抑制作用 ;2免疫组化ABC法显示各对照细胞株均成阴性 ,而白血病细胞株均成阳性。结论　 THP- 1细胞含 P2 z/ P2 x7受体 ,NB4和 HL-6 0含 P2受体其它亚型的细胞株 ,CEM、Raji和 Dam细胞株不含 P2 z/ P2 x7受体 ;免疫组化 ABC法使用的多克隆抗     

P2X7受体和肾脏疾病

P2X7受体是三磷酸腺苷(ATP)门控阳离子通道受体,是嘌呤受体P2X家族受体亚型之一。P2X7受体信号通路与IL-1β、IL-6、COX-2等多种炎症因子的生成和释放相关,在多种疾病的发病过程中起到了至关重要的作用。目前以此受体为治疗靶点的P2X7受体拮抗剂已进入临床试验阶段,表现出良好的安全性和疗效。最新研究表明P2X7受体与多种肾脏疾病有关,P2X7受体拮抗剂具有潜在的肾脏疾病治疗作用。本文综述P2X7受体在肾脏疾病中的作用及其可能的作用机制,以期为肾脏疾病治疗的新靶点和新策略提供理论依据。     

HL7 Clinical Document Architecture,Release 2

Clinical Document Architecture, Release One (CDA R1), became an American National Standards Institute (ANSI)–approved HL7 Standard in November 2000, representing the first specification derived from the Health Level 7 (HL7) Reference Information Model (RIM). CDA, Release Two (CDA R2), became an ANSI-approved HL7 Standard in May 2005 and is the subject of this article, where the focus is primarily on how the standard has evolved since CDA R1, particularly in the area of semantic representation of clinical events. CDA is a document markup standard that specifies the structure and semantics of a clinical document (such as a discharge summary or progress note) for the purpose of exchange. A CDA document is a defined and complete information object that can include text, images, sounds, and other multimedia content. It can be transferred within a message and can exist independently, outside the transferring message. CDA documents are encoded in Extensible Markup Language (XML), and they derive their machine processable meaning from the RIM, coupled with terminology. The CDA R2 model is richly expressive, enabling the formal representation of clinical statements (such as observations, medication administrations, and adverse events) such that they can be interpreted and acted upon by a computer. On the other hand, CDA R2 offers a low bar for adoption, providing a mechanism for simply wrapping a non-XML document with the CDA header or for creating a document with a structured header and sections containing only narrative content. The intent is to facilitate widespread adoption, while providing a mechanism for incremental semantic interoperability.     

Grb2在MCF-7 乳腺癌细胞中的核定位研究

目的　构建Grb2的红色荧光蛋白融合表达质粒pDsRed1 C/Grb2 ,并观察Grb2在MCF 7乳腺癌细胞的核定位情况。方法　用PCR方法扩增Grb2cDNA ,与红色荧光蛋白表达质粒pDsRed1 C重组构建融合蛋白表达质粒pDsRed1 C/Grb2 ,酶切、测序鉴定后 ,瞬时转染MCF 7乳腺癌细胞株 ,用荧光显微镜观察Grb2的核定位情况。结果　pDsRed1 C/Grb2质粒有正确的阅读框 ,融合表达蛋白DsRed1 C/Grb2可定位于MCF 7乳腺癌细胞核内。结论　成功构建了Grb2的红色荧光蛋白融合表达质粒pDsRed1 C/Grb2 ,在MCF 7乳腺癌细胞株中 ,Grb2除存在于胞浆外 ,也可定位于细胞核内 ,可能与其参与核内基因的转录调控有关。     

人源醛酮还原酶7A2融合蛋白的纯化及其对苯代谢产物的催化活性

 目的使用FPLC系统纯化人源醛酮还原酶AKR7A2融合蛋白,并检测纯化的AKR7A2蛋白对苯的代谢产物的催化活性。方法将含有His-AKR7A2的重组质粒转化至BL21大肠杆菌,通过IPTG诱导AKR7A2融合蛋白的大量表达;利用FPLC系统通过HiTrap亲和柱和G25Sephadex凝胶色谱柱纯化AKR7A2融合蛋白,经SDS-PAGE和Westernblot鉴定。采用酶活性实验检测纯化的重组AKR7A2蛋白对苯甲醛、双苯醌和反向,反向-2,4-二烯-1,6-己二酮（MUC）的底物特异性。结果使用FPLC系统通过两步纯化法成功获得重组的His-AKR7A2融合蛋白。纯度高达98%。酶活性实验结果显示重组AKR7A2蛋白对苯甲醛有中等亲和力,对MUC亲和力较高,对双苯醌的亲和力较低。结论成功纯化了重组人源AKR7A2蛋白,并检测了其对3种苯代谢产物的底物特异性,AKR很可能在苯的代谢途径中扮演重要角色。结果显示：AKR7A2重组蛋白对苯甲醛的底物特异性为（62±5）nmol·min^-1·mg^-1,表现为中等亲和力;对MUC的底物特异性为（149±8）nmol·min^-1·mg^-1,表现为较高的亲和力;对对苯醌的亲和力较低,底物特异性为（26±3.2）nmol·min^-1·mg^-1（表1）。     

人ApoE转基因小鼠与TGE_（7－2） TGE_（7－3）转基因鼠系的建立

用含小鼠金属硫蛋白（ＭＴ－１）基因启动子与突变的人ＡｐｏＥ７基因的６．０ＫｂＤＮＡ片段作为目的基因制备转基因小鼠，利用显微注射法将目的基因导入４４１枚受精卵，移植于２０只假孕鼠，其中１５只受孕，共产仔鼠８０只，经ａ－３２Ｐ斑点杂交与Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交法鉴定出两只整合有人ＡｐｏＥ基因的转基因雌鼠，其拷贝数分别为２和５。将两只首建鼠（雌性Ｆｏ代）与正常雄鼠交配，建立Ｆ１代转基因鼠系ＴＧＥ７－２和ＴＧＥ７－３，为进一步从整体上研究ＡｐｏＥ在脂质代谢中的作用以及ＡｐｏＥ与动脉粥样硬化和Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ病的关系创造条件。     

TCF7L2基因多态性与2型糖尿病及发病风险的关系研究

目的 探讨湖北恩施地区汉族人群TCF7L2基因多态性与2型糖尿病及发病风险的关系。方法 采用PCR-RFLP法对湖北恩施地区258名新诊断2型糖尿病患者及239名健康对照者进行基因多态性检测,并进一步分析2型糖尿病及发病危险和TCF7L2基因多态性的关系。结果 ①2型糖尿病组的腰围、体重指数、空腹血糖、HbAlc和甘油三酯明显高于正常对照组。②2型糖尿病组和对照组相比．TCF7L2的TT基因型分布频率显著升高,且在人群中,携带TT基因型的患病风险是CC基因型的2．14倍。③Logistic 多元回归分析显示,HbAlc、BMI、TCF7L2基因多态性和TG与2型糖尿病的发生相关明显。进一步对2型糖尿病不同基因型的HbAlc、BMI和TG水平进行分析,发现在3个基因型之间这些因素存在差异。结论 在湖北恩施地区汉族人群中,TCF7L2基因多态性和2型糖尿病发生风险相关。     

N,N1−2, 7-fluorenylenebisacetamide (2, 7-F.A.A.)—Induced rat bowel cancer

Gastrointestinal serotonin levels, and the incidence of toxicity and cancer were studied in 12 control and 36 carcinogen-treated male Buffalo rats. Animals received Purina rat chow with a tryptophan content of 0.22%; treated rats received 0.025 g.% (w./w.) N, N′?2, 7-Fluorenylenebisacetamide (2, 7-F.A.A.) added to the chow for 8 months. Body weight gain was normal in control rats but greatly reduced with 2,7-F.A.A. feeding. Two control and 8 treated rats died of chronic bronchopneumonia; no tumours were found. Two control and 3 treated rats were examined histologically after 3 months; no tumours were found. The experiment was terminated at 8 months as the treated rats were emaciated. Serotonin was determined spectrophotofluorometrically after complexing with o-phthaldialdehyde in the mucosa of stomach fundus, pyloric antrum, upper duodenum, small bowel, ascending colon and descending colon from all rats, and in all tumours and adjacent macroscopically normal mucosa in treated rats. Detailed histological studies were also performed. No tumours were found in control rats and apart from mild chronic bronchopenumonia, histological examination was normal. The major pathological findings in the treated rats were atrophy of most body tissues and organs, severe chronic bronchopneumonia with bronchiectasis, and numerous cancers. Atrophy was particularly prominent in the stomach, small bowel, kidney, suprarenal, bladder, testes, heart, spleen, pancreas, and liver. Increased gastrointestinal mucin production was usual. Two rats had an adenoma in the heart and supra-renal gland, respectively; liver atrophy was followed by cirrhosis. Cancers occurred as follows (n=25): skin 4%, gastric rumen 12%, pyloric antrum 12%, upper duodenum 8%, small bowel 56%, ascending colon 12%, descending colon 8%, primary hepatoma 72%, cholangiocarcinoma 48%, reticulum cell sarcoma 12%, and lymphosarcoma 4%. Serotonin levels were, in general, significantly increased in non-malignant mucosa of treated rats compared to controls (P<0.05–0.001), and significantly reduced in cancer mucosa when compared to non-malignant mucosa from the same rat and to controls (P<0.05–0.001). It is suggested that a fall in gastrointestinal mucosal serotonin may be related to malignant degeneration in the bowel.     

pEGFP-C2-TRPM7重组质粒的构建及表达

从肝星状细胞(HSC-T6)中获得瞬时受体电位通道7(TRPM7)蛋白的cDNA,采用EcoR I和BamH I双酶切,用T4连接酶将该cDNA连接pEGFP-C2质粒将构建成功的pEGFP-C2-TRPM7质粒经PCR、限制性内切酶酶切和测序鉴定后转染非洲绿猴肾成纤维细胞(COS-7),荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,PCR鉴定基因表达。结果显示进行双酶切鉴定该质粒可见TRPM7片段,转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达,PCR结果也可检测到TRPM7基因表达。表明成功构建重组pEGFP-C2-TRPM7表达裁体,TR-PM7蛋白可与绿色荧光蛋白在COS-7细胞中融合表达。     

过表达P2x7受体引发小胶质细胞的炎症反应

目的研究嘌呤受体P2x7在小胶质细胞炎症反应中的作用。方法通过分子克隆的方法构建pCDNA3.1-P2x7重组质粒,构建成功后经测序确认质粒序列无误,通过Lipo2000转染小胶质细胞株BV-2细胞,采用PCR方法测定BV-2细胞内P2x7的表达,Westernblot法测定P2x7和Cox-2的蛋白表达。结果细胞经重组质粒转染成功后,pCDNA3.1-P2x7组P2x7和Cox-2蛋白表达水平分别为(4.21±0.13)%和(2.60±0.05)%,高于pCDNA3.1组的(2.61±0.05)%和(1.62±0.04)%,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论通过过表达P2x7受体,能引起小胶质细胞的激活,提示可进一步引发炎症反应。