沉默CFTR对H_2O_2诱导的大鼠神经元细胞凋亡的影响

目的探讨沉默囊性纤维化跨膜传导调节因子(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator,CFTR)对大鼠过氧化氢(hydrogen peroxide,H_2O_2)诱导的神经元细胞凋亡的影响。方法 48只新生SD大鼠取其脑组织分离海马神经元,分为空白对照组(不进行转染)、阴性对照组(转染阴性对照siRNA)、CFTR siRNA组(转染CFTR siRNA),CFTR siRNA组再分为50MOI亚组(转染50MOI CFTR siRNA)和100MOI亚组(转染100MOI CFTR siRNA)。各组采用Western blot法测定神经元细胞CFTR蛋白表达量,将生长良好的神经元细胞分为对照组(不转染、不加H_2O_2培养)、H_2O_2组(不转染、加H_2O_2培养)、H_2O_2+阴性对照组(转染阴性对照siRNA、加H_2O_2培养)、H_2O_2+CFTR siRNA组(转染CFTR siRNA、加H_2O_2培养),采用流式细胞仪测定神经元细胞凋亡率。结果 100MOI亚组神经元细胞CFTR蛋白相对表达量(0.32±0.05)低于50MOI亚组(0.58±0.06)(P0.05),50MOI和100MOI亚组低于空白对照组(1.00±0.02)和阴性对照组(1.04±0.08)(P0.05),空白对照组与阴性对照组神经元细胞CFTR蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P0.05);H_2O_2组、H_2O_2+阴性对照组、H_2O_2+CFTR siRNA组神经元细胞凋亡率[(23.25±4.28)%、(22.07±3.67)%、(53.62±6.79)%]明显高于对照组(4.31±0.64)%(P0.05),H_2O_2+CFTR siRNA组高于H_2O_2组和H_2O_2+阴性对照组(P0.05),H_2O_2组与H_2O_2+阴性对照组神经元细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P0.05)。结论沉默CFTR可降低大鼠海马神经元细胞中CFTR蛋白表达,促进H_2O_2诱导的神经元细胞凋亡。     

黄芩素对H_2O_2诱导肾小管上皮细胞凋亡的影响机制研究

目的探究黄芩素对过氧化氢(H_2O_2)诱导肾小管上皮细胞活性、凋亡的影响及其机制。方法将体外培养的肾小管上皮NRK52E细胞株随机分为5组,对照组为正常培养,H_2O_2组为500μmol/L H_2O_2干预细胞24 h,H_2O_2组+黄芩素(50μmol/L)、H_2O_2组+黄芩素(100μmol/L)、H_2O_2组+黄芩素(200μmol/L)为加入不同浓度黄芩素和500μmol/L H_2O_2处理细胞;四甲基偶氮唑(MTT)检测细胞的活性,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞的凋亡率,蛋白质印迹法(Western Blot)检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、活化的Caspase-3(Cleaved Caspase-3),试剂盒检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)。结果 H_2O_2诱导NRK52E细胞活性降低(P0.05)、凋亡率增加(P0.05),SOD活性降低(P0.05),MDA活性增加(P0.05),Cleaved Caspase-3蛋白水平显著升高(P0.05);与H_2O_2组相比,不同浓度黄芩素提高NRK52E细胞的活性(P0.05),降低凋亡率(P0.05),提高SOD活性(P0.05),降低MDA活性和Cleaved Caspase-3蛋白水平(P0.05)。结论黄芩素可抑制肾上腺上皮细胞氧化应激反应,并通过下调磷酸化Caspase-3蛋白水平,从而抑制细胞凋亡,减轻细胞损伤。     

Bax对过氧化氢作用后的血管内皮细胞MDA生成及内皮素释放影响研究

目的研究Bcl-2相关X蛋白(Bax)对过氧化氢(H_2O_2)作用后的血管内皮细胞丙二醛(MDA)生成及内皮素(ET)释放的影响。方法血管内皮细胞分为对照组、si-NC组、si-Bax组、H_2O_2组、si-NC组+H_2O_2组、si-Bax+H_2O_2组共6组,对照组:不做任何处理,常规培养;si-NC组:血管内皮细胞中转染siRNA Control,常规培养;si-Bax组:血管内皮细胞中转染siRNA Bax,常规培养;H_2O_2组:血管内皮细胞不做转染,用100μmol/L的H_2O_2处理;si-NC+H_2O_2组:血管内皮细胞中转染siRNA Control后24 h,用100μmol/L的H_2O_2处理;si-Bax+H_2O_2组:血管内皮细胞中转染siRNA Bax后24 h,用100μmol/L的H_2O_2处理。qRT-PCR和Western blot测定细胞中Bax mRNA和蛋白的表达水平。在血管内皮细胞中转染Bax小干扰RNA和小干扰RNA阴性对照,用H_2O_2处理后,硫代巴比妥酸法检测各组培养液中MDA含量,Griess法测定各组培养液中一氧化氮(NO)含量,二硝基苯肼法测定各组培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量,放射免疫法测定各组培养液中ET含量,流式细胞术测定各组细胞凋亡情况。结果 H_2O_2组细胞中Bax mRNA和蛋白水平高于对照组。si-Bax组细胞中Bax mRNA和蛋白水平低于对照组。si-NC组细胞中Bax mRNA和蛋白水平与对照组相比差异无统计学意义(P0.05)。H_2O_2组细胞培养液中MDA、LDH、ET水平均升高,NO水平下降,细胞凋亡率升高,与对照组相比差异具有统计学意义(P0.05)。si-Bax+H_2O_2组细胞培养液上清中的MDA、LDH、ET水平有所降低,NO水平升高,细胞凋亡率有所降低,与H_2O_2组相比,差异具有统计学意义(P0.05)。si-NC+H_2O_2组细胞清中的MDA、LDH、ET、NO水平及细胞凋亡率与H_2O_2组相比,差异无统计学意义(P0.05)。结论 H_2O_2诱导血管内皮细胞氧化损伤,而下调Bax表达可以减少血管内皮细胞释放MDA、ET、LDH,促进细胞中NO合成,减少细胞凋亡,Bax可以减弱H_2O_2诱导的血管内皮细胞损伤。     

双氧水肝脏声学造影方法改进

经直肠肝脏H_2O_2声学造影对肝脏疾患的诊断有一定价值,但H_2O_2有刺激性,致使许多受检查者产生腹痛、腹泻等下消化道症状而使检查中断。本文报道采用H_2O_2加利多卡因、地塞米松做肝声学造影,经50例临床观察表明,显影效果良好,操做简便,不良反应少。现介绍如下:一、方法:造影时将备用的输液器胶管(未启用的一次性输液器胶管30cm,一端剪成斜面)徐徐插入肛门约15～20cm,注入1.5％～2％H_2O_215～20ml(3％H_2O_210ml加2％利多卡因2ml、地塞米松5mg加生理盐水15～20ml混匀)观察肝内显示情况,1～2分钟后经胶管注入1:40000高锰酸钾溶液20ml拔管即可。二、结果:50例病人显影满意者47例,占     

血清过氧化氢酶活性的简便测定

本文建立了一个快速、经济的分光光度法测定血清过氧化氢酶活性,它是最适条件和分光光度法的结合,测定过氧化氢和钼酸铵形成的稳定的复合物。血清过氧化氢酶活性升高可作为急性胰腺炎、溶血性疾病和某些肝脏疾病诊断的指标。静脉取血,迅速分离血清。最适测定条件:0.2ml 血清与1.0ml 基质液(60mmol/L 钠—钾磷酸盐缓冲液,pH7.4,含H_2O_2 65μmol/ml)37℃温育60秒。然后加1.0ml 32.4mmol/L 钼酸铵(CN-H_2)_6M_(07)O_(24)·4H_2O)终止反应,405nm 波长测定钼     

ELA对骨髓间充质干细胞氧化应激损伤的保护作用

目的:观察ELABELA(ELA)对过氧化氢(H_2O_2)诱导骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,ELA(500 nM,1μM,5μM,10μM)组。利用H_2O_2诱导MSCs凋亡模型,即H_2O_2组细胞加入含400μM H_2O_2的无血清培养基,在37℃条件下培养6小时。MTS法检测细胞增殖及细胞活力,DCFH-DA荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)含量。结果:与Control组相比,H_2O_2组细胞的存活能力显著降低(P0.05),伴有细胞内活性氧水平明显升高(P0.05);与H_2O_2组相比,ELA组细胞的存活率显著增加(P0.05),且细胞内活性氧水平显著降低(P0.05),其中以5μMELA治疗对MSCs的保护作用最佳。结论:ELA能够减轻过H_2O_2诱导的MSCs氧化应激损伤,其中以5μM浓度ELA的保护效应以达到最佳。     

中心输氧终端氧气插孔细菌污染情况及消毒效果观察

目的 了解中心输氧终端氧气插孔的细菌污染情况,并探讨2种消毒方法的消毒效果,加强医护人员对输氧装置消毒管理的重视,预防医院感染.方法 将4个病区360个中心输氧终端氧气插孔分为3组,分别进行消毒前采样、0.5%碘伏和500 mg/L含氯消毒剂擦拭10 min后采样各120份样本,观察消毒前氧气插孔的细菌污染情况和2种消毒剂的消毒效果.结果 消毒前120份样本细菌培养阳性率为95.0%,主要菌种为金黄色葡萄球菌(23.7%)、肺炎克雷伯菌(18.4%)、铜绿假单胞菌(12.3%);2种消毒剂消毒后均达到标准要求,未检出致病菌,碘伏消毒后无菌率(96.7%)高于含氯消毒剂(92.5%),差异有统计学意义(P<0.05).结论 中心输氧终端氧气插孔的细菌污染相当严重,安装氧气表前,必须对输氧终端插孔进行消毒;碘伏消毒剂擦拭消毒效果最佳,且操作简便,建议临床采用0.5%碘伏擦拭消毒中心输氧终端氧气插孔.     

阴道分泌物功能酶检测联合常规镜检在阴道微生态改变中的应用价值

目的探讨阴道分泌物功能酶检测联合常规镜检在阴道微生态变化中的应用价值。方法对来该院妇科门诊就诊的患者样本进行阴道分泌物功能酶和常规镜检联合检测,并对结果进行综合分析。结果在13 175例检测样本中,功能酶指标过氧化氢(H2O2)、白细胞酯酶(LE)、β-葡萄糖醛酸苷酶(GUS)、唾液酸酶(SNa)、凝固酶(GADP)阳性率分别为82.72%、79.97%、12.34%、15.63%、14.45%;H_2O_2阳性率随年龄增长呈上升趋势,差异有统计学意义(P0.05)。在阴道清洁度Ⅰ～Ⅱ度的样本中,H_2O_2、LE、GUS、SNa、GADP的阳性率分别为79.29%、73.38%、3.66%、3.46%、6.81%,SNa+H_2O_2、GUS+GADP、GUS+H_2O_2、GADP+H_2O_2的阳性率分别为3.11%、0.43%、5.83%、2.31%。结论阴道分泌物功能酶检测联合常规镜检可提示阴道微生态的早期改变,功能酶多指标联合分析有助于全面了解阴道微生态状况,对有效诊治阴道感染性疾病有重要的临床意义。     

气体信号分子硫化氢对蚕豆诱导氧化应激小鼠的影响

目的探讨气体信号分子硫化氢(H_2S)与小鼠体内氧化应激的关系。方法取C3He小鼠24只随机均分空白组(不含蚕豆成分的正常饲料喂养)、蚕豆组(每4 h灌胃1次10 g/kg蚕豆处理饲料)、H_2S组(每4 h灌胃1次10 g/kg蚕豆处理饲料加4 h腹腔注射25μm/kg硫氢化钠)。24 h后,测定各组小鼠血浆中过氧化氢(H_2O_2)、H_2S、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量及过氧化氢酶(CAT)活性,以及超氧化物歧化酶1(SOD1)、超氧化物歧化酶2(SOD2)、CAT及谷胱甘肽还原酶(GSR)等抗氧化基因的表达。结果饲养24 h后,与空白组相比,蚕豆组H_2O_2、MDA、H_2S含量显著升高,CAT活性显著下降,差异均有统计学意义(P均0.05)。与蚕豆组相比,H_2S组H_2O_2、MDA含量显著下降,H_2S、GSH显著升高,CAT活性显著下降,差异均有统计学意义(P均0.05)。饲养24 h后,与空白组相比,蚕豆组谷胱甘肽过氧物酶3(GPX3)、硫氧还蛋白过氧化物酶3、含铜超氧化物歧化酶(Cu SOD)和肿瘤坏死因子-α基因表达显著增加(P均0.05)。与蚕豆组相比,H_2S组SOD1、SOD2、CAT、谷胱甘肽过氧物酶1、GPX3、GSR、Cu SOD、转化生长因子β1基因表达量显著增加(P均0.05)。结论 H_2S可以通过调控小鼠氧化应激相关基因的表达,抑制蚕豆诱导小鼠的氧化应激状态。     

过氧化氢溶液的新用途

过氧化氢溶液(H_2O_2)俗称双氧水,为无色透明液体,具有消毒防腐和除臭作用。3％溶液常作外科消毒剂。近年来其在诊断和治疗方面又有新的用途。现介绍如下:     

活性氧代谢与心脏疾病

活性氧是由氧形成,含氧而且性质活泼的几种物质的总称.它包括1.自由基:超氧化物阴离子自由基(·O_2~-)与氢氧自由基(·OH);2.过氧化物:过氧化氢(H_2O_2)与脂质过氧化物(ROOH);3.单线态分子氧(1O_2).近年来研究表明,活性氧代谢与心脏疾病密切相关.一、生物体内的活性氧代谢1.活性氧的生成(1)氢氧自由基:近年来认为该自由基是O_2获得三个电子的反应产物:     

血浆血红蛋白的ABTS比色测定

近来,有人报道用ABTS [2,2’-Azino-di(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid)]测定粪便潜血具有与联苯胺相同的灵敏度。本文作者将其用于血浆血红蛋白(Hb)的测定。Hb的拟过氧化物酶活性,在过氧化氢(H_2O_2)存在下使ABTS氧化产生绿色。〔试剂〕①ABTS液:溶解150mg ABTS于10ml蒸镏水中,加90ml醋酸,混匀,当天使用。②Hb标准液:取1ml压积红细胞用2ml等渗NaCl液     

测定血清睡液酸的又一种酶学法

目前测定血清唾液酸的方法较多,其中酶法所用的辅助酶(auxiliary enzymes)丙酮酸氧化酶或乳酸脱氢酶可因待检血清标本中有丙酮酸存在而影响测定结果.为了避免这种影响,作者建立了一种测定血清唾液酸的高度敏感的酶学终点法.机制:结合型唾液酸游离型唾液酸丙酮酸+N-已酰-D-甘露糖胺N-乙酰-D-葡糖胺N-乙酰葡糖胺酸+H_2O_2H_2O_2+4-氨基安替比林+N-乙基N-(3-硫代丙基)     

输氧装置结构改良在氧气雾化吸入疗法中的应用

目的探索输氧装置结构改良在氧气雾化吸入疗法中的应用效果。方法选取住院患者300例作为研究对象，并分为2组，各150例，对照组使用普通壁式输氧装置，观察组使用改良后壁式输氧装置，研究2组患者在相同氧流量、相同雾化药液量，并持续不间断吸入药液的情况下，氧气雾化吸入所需时间的差异以及改良前后〈1d、1～3d、〉3d输液装置不同部位的细菌检出结果和污染细菌分布情况。结果对照组氧气雾化吸入所需时间均比观察组长（P〈O．05）；对照组呼吸道感染率高于观察组（P〈O．01）。结论经过改良后的输氧装置减少了消毒程序，可有效降低患者呼吸道的感染率，缩短氧气雾化吸入时间，减少护士的工作量，减少用氧量，节约医疗成本，具有明显的创新性和实用性，值得临床广泛推广。     

右美托咪定对减轻下肢手术患者止血带诱发肢体缺血—再灌注损伤的效果

目的探讨右美托咪定对减轻骨科下肢手术患者止血带导致缺血-再灌注损伤的效果。方法将该院骨科病房收治的62例需行下肢手术的患者按照随机数字表法分为右美托咪定组(n=24)、咪达唑仑组(n=23)及对照组(n=15)。所有患者均采用蛛网膜下腔阻滞联合硬膜外麻醉,右美托咪定组于穿刺后给予,负荷量1μg/kg,维持量0.5μg/(kg·h);咪达唑仑组于穿刺后给予,负荷量0.06mg/kg,维持量0.05μg/(kg·h)。对照组给予等量生理盐水。于使用止血带前(T0),松开止血带时(T1),松开止血带后30min(T2)时,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清羟自由基(OH)、超氧阴离子(O_2~-)、过氧化氢(H_2O_2)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平。结果 3组患者血清各氧化应激相关指标在T0时差异无统计学意义(P0.05),右美托咪定组患者血清OH、O_2~-、H_2O_2、MDA水平在T1时低于咪达唑仑组和对照组,血清SOD水平在T2时高于咪达唑仑组和对照组(P0.05);右美托咪定组患者血清O_2~-、H_2O_2水平在T2时仍低于咪达唑仑组和对照组,SOD仍高于咪达唑仑组和对照组(P0.05);与T0时相比,3组患者血清OH、O_2~-、H_2O_2、MDA水平在T1时均升高,SOD均降低,咪达唑仑组和对照组血清OH、O_2~-、H_2O_2、MDA在T2时均升高,SOD均降低(P0.05);与T0时相比,右美托咪定组血清OH、H_2O_2、MDA水平在T2时明显升高(P0.05),但右美托咪定组血清O_2~-、SOD水平在T2时差异无统计学意义(P0.05)。结论右美托咪定可减轻骨科下肢手术患者使用止血带诱发的肢体缺血-再灌注损伤。     

自制双人简易输氧装置

输氧是抢救患者的首要和重要的过程之一 ,但是在实际医疗过程中 ,往往出现中心给氧出气口不足的情况。为了满足 2位患者同时利用单个给氧装置吸氧 ,并能够依据病情分别调整氧气流量。我们研制了一种双人简易输氧装置 ,经临床运用 ,效果满意 ,现介绍如下。材料与方法　 (1)材料。取 3L袋上的三叉管和输液调节器各 1个 ,1ml注射器的空筒 (以下简称空筒 ) 1个 ,直径0 .35cm的塑料小球 (以下简称小球 ) 1个 ,输血器上的硬接头(见图 1) 2个。 (2 )方法。首先将塑料小球放入空筒中作为流量浮标 ,再将空筒的带柄端口插入一个硬接头 ,然后将该硬接…     

输氧装置

输送氧气的装置一般分为两大类:低流量和高流量。低流量装置的输氧量随病人呼吸状态不同而变化,而高流量输氧则比较恒定,可增加到病人最大呼吸所需要的量。低流量装置包括鼻套管和导管、简单面罩、部分再呼吸和非再呼吸面罩。高流量装置如文丘理面罩(Venturi mask),下面将输氧的装置。使用方法等作一简单介绍。     

外源性H2O2对小鼠骨骼肌细胞MG53膜修复作用的影响

目的:研究不同浓度外源性H_2O_2干预对骨骼肌细胞MG53(Mitsugumin 53)膜修复作用的影响,探讨H_2O_2与MG53的关系。方法:培养C2C12细胞,不同浓度外源性H_2O_2干预后检测MG53蛋白表达;培养MG53基因敲除(MG53 KO)小鼠原代骨骼肌细胞,转染绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein, GFP)-MG53质粒后用不同浓度外源性H_2O_2干预,活细胞成像系统观察细胞膜损伤后MG53的修复过程,用荧光相对改变量ΔF/F0表示MG53修复能力。结果:①外源性H_2O_2能显著促进MG53蛋白表达升高;②高浓度的H_2O_2能显著增强MG53的膜修复作用。结论:H_2O_2能促进MG53蛋白表达并增强其修复作用。     

利用Trinder反应测定血浆（脑脊液）游离血红蛋白

原理:血红蛋白(Hb)中的亚铁血红素具有过氧化物酶作用,能使H_2O_2放出新生态氧,氧化苯酚和4-AA 成红色的醌亚胺物质,在500nm 处有一较大吸收峰.当加入苯酚、4-AA 和H_2O_2一定量时,Hb 的含量与颜色深浅成正比.1 材料1.1 色原缓冲液苯酚4.75g,4-AA0.5g 溶于0.1     

白藜芦醇对H_2O_2诱导的人脐带间充质干细胞凋亡的保护作用

目的探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对H_2O_2诱导的人脐带间充质干细胞(hucMSCs)凋亡的保护作用。方法体外培养hucMSCs,采用细胞实时监测和MTT法分析不同浓度Res对hucMSCs增殖的影响;以H_2O_2处理hucMSCs构建氧化应激模型,分别设对照组、H_2O_2诱导组和Res干预组; western blot检测各组细胞活化的凋亡蛋白3(Actived-caspase3)水平; TUNEL实验检测细胞的凋亡情况,qRT-PCR法检测核因子E2相关因子2(Nrf 2)的表达水平。结果低浓度(1、5、10、20μmol/L) Res对hucMSCs的增殖无影响,而50、100μmol/L Res对hucMSCs增殖具有明显的抑制作用;与对照组(0.05±0.01)相比,H_2O_2诱导组Actived-caspase3的表达水平(0.36±0.01)明显增加(q=9.968,P0.05),而Res干预组Actived-caspase 3的表达水平(0.13±0.07)较H_2O_2诱导组明显下调(q=7.283,P0.05); TUNEL实验证实Res预处理能明显改善H_2O_2诱导的hucMSCs凋亡;与对照组(1.00±0.06)相比,H_2O_2诱导组Nrf 2的表达水平(0.50±0.07)明显降低(q=9.026,P0.01),而Res干预组明显升高(2.10±0.14),差异有统计学意义(q=28.37,P0.01)。结论 Res可减轻H_2O_2诱导的hucMSCs的凋亡,且与其增强细胞抗氧化能力有关。