TPA和IFN-γ活化角朊细胞对T淋巴细胞增殖和细胞因子分泌的作用

角朊细胞激活对T淋巴细胞增殖和细胞因子分泌的作用。TPA和IFN γ联合作用 ,激活角朊细胞表达表面分子 ,FACS检测MHCI、II类分子和CD80、CD86分子水平 ,RT PCR检测B7 H1共刺激分子表达。由激活角朊细胞提供T淋巴细胞激活的第二信号 ;绵羊红细胞花环沉淀分离纯化T细胞 ,抗CD3单抗提供第一信号 ,建立体外混合培养系统 ,3 H TdR渗入法检测T细胞增殖 ,ELISA检测培养上清细胞因子浓度。结果显示 ,TPA和IFN γ联合作用可诱导角朊细胞表达B7 H1共刺激分子 ,并上调其MHCII类分子。以B7 H1为第二信号 ,可以协同抗CD3单抗对T细胞的增殖作用 ,并呈现独特的细胞因子分泌格局。因此角朊细胞激活后表达B7 H1共刺激分子 ,此第二信号可刺激T淋巴细胞增殖 ,对其功能分化具有调节作用     

B7-H1/PD-1共刺激途径对慢性乙型肝炎患者HBV特异性T淋巴细胞功能的影响

目的研究B7-H1／PD-1共刺激信号途径对慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B，CHB）患者HBV特异性T淋巴细胞免疫功能的影响。方法流式细胞术检测CHB患者和健康人外周血髓样树突细胞（myeloid dendritic cells，mDC）上B7-H1及T淋巴细胞上PD-1的表达水平，并分析患者B7-H1和PD-1的表达水平与ALT水平的相关性；体外培养CHB患者单核细胞来源的树突细胞（monocyte-derived cells，MoDC），HBcAg负载后用“细胞因子鸡尾酒”（TNF-α、IL-6、IL-1β和PGE2）促成熟。MoDC和自体T淋巴细胞混合培养，并对B7-H1／PD-1途径进行阻断处理，^3H-TdR掺入法检测HBV特异性T淋巴细胞增殖的能力；ELISA法检测混合淋巴细胞培养上清中细胞因子的浓度；ELISPOT法检测分泌IFN-γ的T淋巴细胞频数。结果B7-H1及受体PD-1在CHB患者外周血mDC和T淋巴细胞上的表达水平明显升高，且B7-H1和PD-1的表达水平与患者的ALT水平呈明显的正相关；阻断B7-H1／PD-1共刺激途径，不但能够促进HBV特异性T淋巴细胞的增殖和Ⅰ型细胞因子分泌，同时可以提高分泌IFN-γ的抗原特异性T淋巴细胞的频数。结论CHB患者B7-H1和PD-1表达水平的升高，降低了HBV特异性T淋巴细胞免疫功能。     

共刺激对T细胞功能和细胞因子格局的作用

利用Ｂ７－１单抗和环孢素Ａ处理ＡＰＣ：Ｔ细胞反应系统,探讨了Ｂ７／ＣＤ２８芡刺激对Ｔ细胞增殖及细胞因子产生的影响,并用ＲＴ－ＰＣＲ方法分析了细胞因子基因格局的改变。结果表明Ｂ７－１单抗可抑制特异性抗原诱导的Ｔ细胞增殖和ＩＬ－２的产生,Ｂ７－１单抗瑟ＣｓＡ联用可阻断Ｔ细胞增殖和ＩＬ－２产生。Ｂ７－１单抗绎ＩＬ－４的产生未显示明显的影响,而Ｂ７－１单抗与ＣｓＡ联用ＩＬ－４仍可检测到。     

B7-H3：一种新的共刺激分子

B7-H3是B7家族的最新成员，B7-H3 mRNA广泛存在于非淋巴组织，其受体在活化的T细胞表面可被诱导表达，且此受体不同于CTLA-4、ICOS和PD-1。在抗人CD3单克隆抗体存在的情况下，B7-H3可增加CD4^ 和CD8^ 细胞的生成，且是剂量依赖性的，并可选择性的增加IFN-γ的生成，参与T、B细胞的活化和机体免疫，在肿瘤治疗、器官移植和自身免疫病的治疗方面具有重要的作用。     

B7-H1/PD-1共刺激途径与病毒感染

B7-H1及其受体PD-1是共刺激分子B7-CD28家族的重要成员.B7-H1在淋巴组织及外周非淋巴组织广泛诱导性表达,PD-1则主要表达在活化的T细胞、B细胞及髓系细胞表面.B7-H1/PD-1共刺激途径主要作用是负性调节T、B细胞的免疫反应,参与维持外周组织的免疫耐受.病毒感染可以上调B7-H1及PD-1的表达,抑制病毒特异性T细胞的免疫功能,B7-H1/PD-1途径是病毒逃避免疫监视,引发慢性感染的重要通路,因而阻断B7-H1/PD-1共刺激途径能够恢复病毒特异性T细胞的功能,清除病毒感染,这对于病毒感染的免疫治疗,尤其是病毒慢性感染的免疫治疗具有重要意义.     

B7-H3:一种新的共刺激分子

B7 H3是B7家族的最新成员 ,B7 H3mRNA广泛存在于非淋巴组织 ,其受体在活化的T细胞表面可被诱导表达 ,且此受体不同于CTLA 4、ICOS和PD 1。在抗人CD3单克隆抗体存在的情况下 ,B7 H3可增加CD4 + 和CD8+ 细胞的生成 ,且是剂量依赖性的 ,并可选择性的增加IFN γ的生成 ,参与T、B细胞的活化和机体免疫 ,在肿瘤治疗、器官移植和自身免疫病的治疗方面具有重要的作用     

小胶质细胞表达B7-H1及LPS刺激对其表达影响的研究

目的 了解共刺激分子B7-H1在小鼠中枢神经系统小胶质细胞上的表达,及LPS刺激后的表达变化情况,探讨小胶质细胞在大脑炎症状态下的免疫功能变化。方法利用小鼠小胶质细胞株N9,以LPS刺激其活化,应用RT-PCR、定量PCR、流式细胞术、免疫组化检测B7-H1在刺激前后的表达变化规律;分离培养小鼠原代小胶质细胞并进行GSA-IB4染色鉴定。应用免疫组化检测原代小胶质细胞在LPS刺激前后的表达变化。结果①小鼠小胶质细胞株N9在未刺激状态下表达B7-H1的mRNA和蛋白分子;LPS刺激细胞活化后释放肿瘤坏死因子α,一氧化氮增加,同时B7-H1的mRNA和蛋白表达水平增加。②分离培养的小鼠原代小胶质细胞经GSA-IB4染色鉴定纯度在95％以上,免疫组化显示原代小胶质细胞组成性表达B7-H1,LPS刺激后表达明显上调。结论小鼠小胶质细胞株N9小胶质细胞组成性表达共刺激分子B7-H1,LPS刺激后表达上调,提示其参与了中枢神经系统免疫应答的调节。     

混合皮肤移植中自体角朊细胞表达B7-H1 诱导免疫抑制的相关研究

目的:探讨自体角朊细胞表达的B7-H1 分子在混合皮肤移植中的作用和相关机制。方法:体外模拟混合皮肤移植模拟系统(MELC 体系),通过流式细胞术检测角朊细胞B7-H1 和淋巴细胞PD-1 的表达。同时,实时荧光定量PCR 检测淋巴细胞IL-10、Foxp3、GATA-3 mRNA 的表达。结果:流式细胞仪检测结果显示,在有自体角朊细胞参与的MELC 体系中,随着作用时间增加,角朊细胞上B7-H1 的表达和淋巴细胞上PD-1 的表达水平均明显升高,且具有时间依赖性(P<0.01);实时荧光定量PCR 检测结果显示,随着作用时间增加,与无自体角朊细胞参与的MELC 体系相比,在自体角朊细胞参与的MELC体系中,淋巴细胞IL-10、GATA-3、Foxp3 mRNA 的表达水平均明显升高,且具有时间依赖性(P<0.01)。结论:在体外混合皮肤移植模拟系统中,自体角朊细胞通过表达共刺激分子B7-H1,上调淋巴细胞表面PD-1 的表达,二者相结合,诱导Th2 细胞和Foxp3+的Treg 细胞分化,从而负向调节免疫反应。     

协同刺激分子B7-H2对致敏小鼠气道炎症的作用

淋巴细胞的激活对过敏性哮喘气道炎症的形成至关重要。T淋巴细胞的激活除了依赖识别信号外,还依赖于抗原呈递细胞(APC)表面的协同刺激分子与T淋巴细胞表面的受体结合产生的协同刺激信号。1999年Hutloff等发现了诱导性协同刺激因子(induciblecostimulator,ICOS) ,不久B7同源蛋白2(B7homolog2 ,B7 H2 )被认定为ICOS的配体〔1,2〕。本文旨在探讨ICOS/B7 H2协同刺激信号对小鼠气道炎症的影响。材料和方法哮喘模型的建立:6～8周龄雌性BALB/c小鼠(中国医科大学实验动物中心)于第1天、第14天腹腔注射0 .1ml以磷酸盐缓冲液(PBS)溶解的…     

乳鼠角朊细胞分离表达共刺激分子CD80/CD86

以往研究认为角朊细胞不表达共刺激分子CD80／CD86，无法提供淋巴细胞增殖过程中关键的共刺激信号，但培养的角朊细胞膜片移植后，最终供者细胞被完全排斥，具体机理不明。本实验使用近交系小鼠，有和无血清两种体系培养角朊细胞1、4、7d，采用流式细胞技术、激光共聚焦技术，RT-PCR方法检测角朊细胞在培养过程中MHCⅠ类、Ⅱ类抗原，及CD80、CD86的表达。证实培养的细胞中不含郎格罕氏细胞，首次发现乳鼠角朊细胞在培养过程中表达CD80，但不表达CD86，可刺激异基因淋巴细胞增殖，执行抗原递呈细胞功能。本研究结果为角朊细胞膜片移植排斥提出另一种可能的解释：MHCⅠ／Ⅱ类分子和CD80的表达，使培养的异体角朊细胞兼具外来抗原和抗原递呈细胞的功能，刺激受体淋巴细胞增殖，参与排斥反应。     

Potential targeting of B7-H4 for the treatment of cancer

Observations noting the presence of white blood cell infiltrates within tumors date back more than a century, however the cellular and molecular mechanisms regulating tumor immunity continue to be elucidated. The recent successful use of monoclonal antibodies to block immune regulatory pathways to enhance tumor-specific immune responses for the treatment of cancer has encouraged the identification of additional immune regulatory receptor/ligand pathways. Over the past several years, a growing body of data has identified B7-H4 (VTCN1/B7x/B7S1) as a potential therapeutic target for the treatment of cancer. The potential clinical significance of B7-H4 is supported by the high levels of B7-H4 expression found in numerous tumor tissues and correlation of the level of expression on tumor cells with adverse clinical and pathologic features, including tumor aggressiveness. The biological activity of B7-H4 has been associated with decreased inflammatory CD4⁺ T-cell responses and a correlation between B7-H4-expressing tumor-associated macrophages and FoxP3⁺ regulatory T cells (Tregs) within the tumor microenvironment. Since B7-H4 is expressed on tumor cells and tumor-associated macrophages in various cancer types, therapeutic blockade of B7-H4 could favorably alter the tumor microenvironment allowing for antigen-specific clearance tumor cells. The present review highlights the therapeutic potential of targeting B7-H4.     

B7-H1 and B7-H4 expression in colorectal carcinoma: Correlation with tumor FOXP3 regulatory T-cell infiltration

B7-H1 and B7-H4 are newly discovered members of the B7-CD28 family. They can inhibit T cell activation and proliferation and regulate T cell immune response negatively. Both B7-H1 and B7-H4 are expressed in many tumors and are classified as co-inhibitors of cell-mediated immunity. FOXP3⁺ regulatory T cells (Tregs) play an important role in the maintenance of tumor immunity tolerance. However, the implication of B7-H1 and B7-H4 expression and their interaction with Tregs infiltration in colorectal cancer are unknown. The present study aimed to determine the expression of B7-H1 and B7-H4 as well as Tregs infiltration in colorectal cancer and to explore the clinical and pathological implication of suppressor immune cells and molecules. Frozen sections and immunohistochemical assay were undertaken to assess B7-H1, B7-H4 expression and Tregs infiltration in fresh specimens collected from 56 patients with colorectal carcinoma. The results showed that expression of B7-H1 and B7-H4 in colorectal carcinoma tissues was significantly higher than in adjacent normal mucosa (P < 0.001). B7-H1 expression was positively correlated to the infiltration depth, lymph node metastasis and advanced Duke's stage (P < 0.05, P < 0.05 and P < 0.05, respectively), whereas B7-H4 expression was positively related to the infiltration depth and lymph node metastasis (P < 0.01 and P < 0.05, respectively). Furthermore, Tregs infiltration was more frequent in tumor tissue than in adjacent normal mucosa and was associated with poor differentiation and positive lymph node metastasis (P < 0.01, and P < 0.01, respectively). The statistical analysis indicated a significant correlation between Tregs infiltration and B7-H1 or B7-H4 expression respectively. These results suggest that over-expression of B7-H1 and B7-H4 has stronger prognostic significance and promote tumor tolerance, and they might contribute to Tregs development in the colorectal carcinoma tolerogenic milieu.     

B7-H1阻断对CD3AK细胞体外生物学活性的影响

目的: 探讨B7-H1阻断对CD3AK细胞增殖活化及其抗肿瘤免疫效应的影响.方法: 利用CD3单克隆抗体(mAb)刺激健康人外周血淋巴细胞诱导产生CD3AK细胞,然后利用B7-H1阻断型抗体阻断B7-H1通路,3H-TdR渗入法检测阻断后CD3AK细胞的增殖能力,ELISA法检测阻断后CD3AK细胞分泌IFN-γ、 TNF-α和IL-10的水平,同时将CD3AK细胞作用于膀胱肿瘤BIU-87细胞,MTT法检测阻断后CD3AK细胞的杀伤活性.结果: B7-H1阻断后,CD3AK细胞的增殖能力明显增强,体外存活时间明显延长;其分泌IFN-γ、 TNF-α的水平明显提高,而分泌IL-10的水平明显下降;同时CD3AK细胞对BIU-87细胞的杀伤活性亦明显升高.结论: 阻断B7-H1通路可以促进和维持CD3AK细胞的增殖和活化,并增强其抗肿瘤的免疫效应.阻断B7-H1通路将有望成为肿瘤免疫治疗的新策略.     

B7-H1协同刺激淋巴细胞增殖并诱导产生抑制性T细胞

目的：探讨B7-H1分子在抗原诱导的免疫反应中的作用。方法：在可溶性抗原PPD诱导淋巴细胞增殖体系中,加入中和抗体检测B7-H1的协同刺激作用。转染表达B7-H1的ECV304细胞,观测其对PPD诱导的淋巴细胞增殖、细胞因子分泌及淋巴细胞亚群比例的影响。将刺激后的淋巴细胞过继至自体或同种异体增殖体系中,检测其功能。结果：抗B7-H1中和抗体可降低PPD诱导的淋巴细胞增殖反应和细胞因子分泌;转染B7-H1的ECV304细胞可协同刺激抗原诱导的淋巴细胞增殖,促进细胞因子IL-10的表达,并改变T细胞亚群分布,增加CD4^＋T细胞亚群比例;自体或同种异体过继实验显示,B7-H1刺激后的淋巴细胞具有显著的免疫抑制功能。结论：B7-H1分子可协同刺激淋巴细胞增殖并诱导产生具有免疫抑制功能的T细胞亚群。     

人结肠直肠癌组织中B7-H1的表达及其临床意义

探讨共刺激分子B7-H1在人结肠直肠癌组织中的表达及其意义。运用免疫组织化学SP法检测B7-H1分子在60例结肠直肠癌组织中的表达,并对其表达水平与结肠直肠癌临床病理参数之间的关系进行相关性分析。结果显示,B7-H1分子在结肠直肠癌组织中的阳性表达显著高于正常结肠直肠组织(P<0.01);B7-H1在结肠直肠癌组织中阳性表达率为60%,与患者性别、年龄、肿瘤组织的类型、分级和分期无关(P>0.05),而与淋巴结是否转移显著相关(P<0.01)。B7-H1在结肠直肠癌组织中的高表达,可能在肿瘤的发生、发展中起到一定作用,有望成为结肠直肠癌免疫治疗的一个新靶点。     

人B7-H3基因转染及其生物学功能的研究

B7 H3是新近发现的B7家族新成员。为探讨其体外生物学功能及单克隆抗体的研制构建了B7 H3基因转染细胞。利用PCR的方法扩增出B7 H3基因 ,继而插入逆转录病毒载体pGEZ Term ,重组逆转录病毒载体与两个辅助病毒载体脂质体法共转染包装细胞 2 93T ,经用含有完整病毒颗粒的 2 93T细胞的培养上清感染L92 9细胞 ,Zeocin筛选获得B7 H3的基因转染细胞。RT PCR、Westernblot和流式细胞仪表型分析等方法鉴定表明 ,B7 H3/L92 9基因转染细胞能稳定表达人B7 H3蛋白。继而基因转染细胞对T细胞体外培养试验显示该基因转染细胞与T细胞共培养可抑制其体外增殖。ELISA法分析表明该基因转染细胞抑制活化T细胞IFN γ及IL 10的分泌。CD2 8信号可以逆转B7 H3对活化T细胞的抑制效应。综上结果证实 ,B7 H3对体外活化的T细胞具有负性调控作用。     

Characterization and application of two novel monoclonal antibodies against 2IgB7-H3: expression analysis of 2IgB7-H3 on dendritic cells and tumor cells

2IgB7-H3 has recently been identified as a new member of the B7 family. Its expression at the protein level remains largely unknown due to the lack of the specific monoclonal antibody (mAb). To characterize the expression of 2IgB7-H3, we newly generated two mouse antihuman 2IgB7-H3 mAbs (4H7 and 21D4). We found the constitutive expression of 2IgB7-H3 on a series of tumor cell lines. Furthermore, the expression was examined on monocyte-derived dendritic cells (Mo-DCs) and DCs from CD34(+) hematopoietic progenitor cells (HPC) by means of mAb staining. The results showed that 2IgB7-H3 was expressed on Mo-DCs at a high and stable level during differentiation in vitro. With the maturation of DCs from CD34(+) HPCs, the expression of the molecule was upregulated. However, the 2IgB7-H3 was not expressed on fresh isolated T and B lymphocytes, monocytes, or CD34(+) HPCs. These results suggested that 2IgB7-H3 may be a valuable surface antigen for the detection of DCs.