碱性成纤维细胞生长因子对牙髓干细胞矿化能力影响的研究

目的:探讨在不同培养条件下,碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factorb,bFGF)对牙髓干细胞矿化能力的影响。方法:酶消化法获得原代培养的牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DP-SCs),有限稀释法进行克隆培养。取3代DPSCs,以不同的培养条件将其分为5个大组,用含bFGF(5 ng/mL)的培养液和矿化液为实验组,不含bFGF的培养液和矿化液为对照组,以不同培养条件培养DPSC后,用茜素红定量法对其矿化能力进行检测,分析不同培养条件对DPSC矿化能力的影响。结果:含bFGF的培养液预培养DPSCs1周后其矿化能力增强(P<0.05),2周后其矿化能力减弱(P<0.05);含bFGF的矿化液培养DPSCs其矿化能力减弱(P<0.05),bFGF对DPSCs的影响在细胞传代后依然存在。结论:在不同培养条件下,bFGF对牙髓干细胞矿化能力的影响不同,这种影响与预培养的时间相关,预培养1周其矿化能力增强,预培养2周其矿化能力减弱。同时,bFGF对DPSCs的影响在细胞传代后依然存在。     

矿化液对人牙髓干细胞生物学特性的影响

目的 探讨矿化液对人牙髓干细胞(DPSCs)生长特性的影响.方法 用含一定浓度的β-甘油磷酸钠、抗坏血酸和地塞米松的矿化液诱导人牙髓干细胞,通过倒置相差显微镜、透射电镜、免疫细胞化学染色、von Kossa染色方法,观察和检测矿化液诱导后细胞形态、超微结构、表型和矿化基质分泌的变化,以未诱导组为对照.结果 矿化液连续培养7d,人DPSCs细胞形态明显改变,呈牙本质样极化细胞表现,另一侧为增大的胞体;超微结构显示,诱导后的细胞体积增大,核浆比例下降,胞浆细胞器丰富;诱导前细胞不表达牙本质涎磷蛋白(DSPP)和骨钙素(OC),诱导后均表达;连续培养21d,诱导组细胞形成多个矿化结节.结论 矿化液能诱导人DPSCs向成牙本质细胞样细胞分化并产生矿化基质.本研究从细胞水平上揭示了人DPSCs向成牙本质细胞分化机理,为人DPSCs应用于牙髓损伤的修复再生提供了依据.     

模拟微重力对人牙髓干细胞-PLGA复合物矿化的影响

目的:研究模拟微重力(SMG)对人牙髓干细胞(hDPSCs)在聚乳酸-羟基乙酸(PLGA)支架上矿化的影响。方法:采用酶消化法分离、培养人牙髓干细胞,并进行鉴定。hDPSCs常规接种于PLGA支架,24h后,模拟微重力环境和普通环境下分别矿化诱导。矿化诱导第3、5、7、10、14天时进行碱性磷酸酶活性检测,第21天时进行茜素红染色以观察人牙髓干细胞在PLGA支架上矿化结节形成情况。结果:模拟微重力环境下的碱性磷酸酶活性明显低于普通环境(P<0.01),茜素红染色显示模拟微重力环境下形成的矿化结节较普通环境下的小且数量少。结论:模拟微重力环境抑制hDPSCs在PLGA支架上的矿化。     

白细胞介素1β对牙髓干细胞矿化潜能的影响

目的 通过体内、外实验探讨促炎性细胞因子白细胞介素1β(IL-1β)对牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSC)矿化潜能的影响,以期了解IL-1β在早期炎症中对DPSC的作用.方法 体外培养大鼠DPSC,将DPSC分为3组,依次为IL-1β处理组、矿化液诱导组及未处理的阴性对照组,分别培养3、...     

碱性成纤维细胞生长因子对牙髓干细胞矿化能力影响的研究

酶消化法获得原代培养的牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs),有限稀释法进行克隆培养。取3代DPSCs,以不同的培养条件将其分为5个大组,用含bFGF(5ng/mL)的培养液和矿化液为实验组,不含bFGF的培养液和矿化液为对照组,以不同培养条件培养DPSC后,用茜素红定量法对其矿化能力进行检测,分析不同培养条件对DPSC矿化能力的影响。结果:含bFGF的培养液预培养DPSCs1周后其矿化能力增强(P<0.05),2周后其矿化能力减弱(P<0.05);     

机械压应力刺激对人牙髓干细胞体外增殖矿化的影响

目的:研究不同大小的周期性机械压应力刺激对人牙髓干细胞(h DPSCs)体外增殖和矿化的影响。方法:用体外离心力加压模式,对各组h DPSCs施加30 min/d、大小分别为170、210、250 g的周期性机械压应力刺激,以不加力组作为对照。分别利用CCK-8试剂盒及碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测各组h DPSCs的增殖情况及ALP活性;茜素红染色检测各组h DPSCs的矿化能力;透射电镜观察各组h DPSCs的超微结构。结果:3种大小的机械压应力刺激均可显著抑制h DPSCs增殖、ALP活性显著下降(P<0.05);各加力组形成的矿化结节明显减少,且以250 g的应力刺激对矿化能力的抑制最为显著(P<0.05)。结论:一定大小、频率范围内的周期性机械压应力刺激可抑制人牙髓干细胞体外增殖和矿化,且对矿化的抑制作用与周期性机械压应力大小成正相关。     

表皮生长因子与碱性成纤维细胞生长因子对人牙髓干细胞分化的影响

目的探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblastgrowth factor,bFGF)对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的影响。方法确定EGF与bFGF最大效应浓度后,对细胞分组,根据EGF和bFGF单独或联合应用,分为4组:EGF组、bFGF组、EGF联合bFGF组、不加任何生长因子的对照组。作用1、3、5、7、14 d后,采用ALP活性检测法(酶动力法)检测hDPSCs细胞ALP活性。结果 1～14 d bFGF组ALP活性与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);在5、7、14 d,EGF组和EGF联合bFGF组ALP活性显著高于对照组(P<0.05);EGF联合bFGF组的ALP活性明显高于bFGF组(P<0.05),但EGF联合bFGF组ALP活性与EGF组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论 bFGF单独应用不能诱导hDPSCs分化,EGF在hDPSCs的分化中发挥作用,EGF和bFGF无明显协同作用。     

模拟微重力对人牙髓干细胞在裸鼠体内矿化能力的影响

目的:研究模拟微重力环境对聚乳酸-羟基乙酸(PLGA)支架上的人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells, hDPSCs)在裸鼠体内矿化能力的影响。方法:分离、培养hDPSCs并进行鉴定,然后将hDPSCs接种到PLGA支架上培养72 h后随机分为两组,普通重力组和模拟微重力组,经矿化诱导液培养1周后分别将细胞支架复合物移植到裸鼠体内,植入术后4周取材,进行组织学(HE和Vonkossa)和免疫组织化学(DSPP)检测。结果:HE染色均可见有血管生成,Vonkossa染色均为阳性,模拟微重力组DSPP的表达水平明显高于普通重力组(P<0.05)。结论:模拟微重力有利于hDPSCs在裸鼠体内的矿化。     

神经营养素对牙髓干细胞神经向分化的影响

牙髓干细胞(dental pulp stem cells, DPSCs)是一类具有高度增殖、多向分化潜能的成体干细胞,其来源丰富,具有提取较为便捷、伦理争议较小的优势。由于DPSCs具有多向分化的潜能,可以在一定条件下诱导成神经向分化,在神经损伤的修复和神经遗传性疾病的治疗等方面应用前景广阔。神经营养素(neurotrophin, NT)是一类能够促进轴突生长、利于神经细胞分化与存活的由神经所支配的组织或细胞产生的蛋白质分子,可以分为神经营养因子(neurotrophic factor, NTFs)家族、胶质细胞源性神经营养因子(glial cell-derived neurotrophic factor, GDNF)家族、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)细胞因子家族、成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor, FGF)家族等,NT作为促进神经细胞分化的营养因子,也能够促进干细胞神经向分化,其对DPSCs神经向分化有一定的引导作用。该文简要介绍了NT在促进细胞神经向分化方面的作用,就NT对DPSCs神经向分化的影响和应用前景进行概述。     

大鼠牙髓干细胞可塑性研究

目的:研究大鼠牙髓干细胞向脂肪、神经、肌肉三个方向的横向分化能力。方法:采用地塞米松、IBMX、牛胰岛素和indomethacin对大鼠牙髓干细胞进行程序诱导,RT-PCR和油红O染色方法进行检测;采用bFGF和RDPSCs对大鼠牙髓干细胞进行诱导,RT-PCR方法进行检测;采用5-azacytidine对大鼠牙髓干细胞进行诱导,免疫组织化学染色和RT-PCR的方法进行检测。结果:经脂肪细胞系诱导后,大鼠牙髓干细胞出现脂肪细胞特异性PPARg阳性表达,油红O染色出现阳性脂滴颗粒;经神经细胞系诱导后,大鼠牙髓干细胞未出现预期的神经细胞特异性nestin表达;经肌细胞系诱导后,大鼠牙髓干细胞未出现预期的肌细胞特异性MHC表达,免疫组织化学染色肌动蛋白表达阴性。结论:大鼠牙髓干细胞经过一定的诱导后,可以向脂肪细胞方向分化,具有一定的可塑性;在常规诱导条件下,大鼠牙髓干细胞不能向神经、肌肉方向分化。     

牙髓干细胞的研究

牙髓干细胞是存在于牙髓组织中的一种成体干细胞，具有高度增殖、自我更新的能力和多向分化的潜能。牙髓干细胞的研究对牙组织工程和牙齿的再生将产生重要的意义。本文就牙髓干细胞的研究现状作一综述，并对其应用前景以及目前存在的问题进行讨论。     

牙髓干细胞分化的研究进展

牙髓干细胞(DPSC)是一种具有高度增生、自我更新能力和多相分化潜能的成体干细胞,在一定条件下可向特定的细胞类型分化,在牙髓修复和牙齿再生中发挥着重要的作用。本文主要就DPSC成骨向分化、成牙本质向分化的研究进展作一综述。     

Isolation and characterization of dental pulp stem cells from a supernumerary tooth

Background: Dental pulp stem cells (DPSCs) were primarily derived from the pulp tissues of primary incisors and permanent third molar teeth, whereas no report to our knowledge has yet been documented on deriving DPSCs from the other tooth types. The aim of this study is to present a novel approach of harvesting stem cells from a supernumerary tooth (a mesiodens). Materials and methods: The pulp tissues from a mesiodens of a 20‐year‐old healthy male patient and the left lower deciduous canine of a healthy 10‐year‐old boy (the positive control) were extracted and cultured for DPSCs, which were examined with stem cells (Oct‐4, Nanog and Rex‐1) and differentiation (Osteonectin and Nestin) markers. Furthermore, DPSCs were directionally differentiated to osteogenic and adipogenic cell lineages. Results: Dental pulp stem cells derived from the mesiodens were capable of differentiating into adipogenic and osteogenic lineages. The mesioden’s DPSCs also expressed stem cell and differentiation markers, which suggested their stem cell origin and differentiation capability. All the aforementioned results for the mesiodens were consistent with those of the DPSCs derived from the positive control. Conclusion: We have demonstrated the feasibility of deriving DPSCs from a usually discarded tissue such as a supernumerary tooth.     

牙髓干细胞诱导分化为血管内皮细胞的研究进展

血管内皮细胞是血管的核心,表达一些特异性标志物如血管内皮生长因子受体2（VEGFR2）、CD31和血浆血管性血友病因子等,具有在基质胶上形成管状结构的特征。牙髓干细胞是具有自我更新能力和多向分化潜能的一类成体间质干细胞,在添加不同成分诱导物的条件培养基中可定向分化为成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞和神经细胞。体外研究发现,在添加血管内皮生长因子、成纤维细胞生长因子成分的低血清培养基培养一段时期后,牙髓干细胞可以表达内皮细胞标志物,同时具有形成血管状结构能力;体内研究发现,牙髓干细胞可促进低血区域组织血管生成和血流灌注,进一步证实牙髓干细胞亦可定向分化为内皮细胞。     

Human dental pulp stem cells derived from different cryopreservation methods of human dental pulp tissues of diseased teeth

J Oral Pathol Med (2011) 40 : 793–800 Background: Successful isolation of human dental pulp stem cells (hDPSCs) has been documented at least 120 h after tooth extraction. Viable hDPSCs have been isolated chiefly from cryopreserved healthy molar teeth and their undigested dental pulp tissue. Isolation of hDPSCs from diseased but vital teeth after cryopreservation has not been reported. This study aimed to isolate hDPSCs from cryopreserved diseased but vital teeth of various tooth types. Materials: Fifty tooth samples were divided into group A (n = 20) – freshly derived dental pulp tissues, group B (n = 20) – liquid nitrogen (liq N₂)‐stored dental pulp tissues and group C (n = 10) – liq N₂‐stored intact teeth. Methods and results: The success rate for hDPSCs isolation was 100% for groups A and B and only 20% for group C. hDPSCs from all groups demonstrated self‐renewal properties and similar multipotent potential characteristics of adipogenic, chondrogenic and osteogenic differentiation. In addition, hDPSCs showed high expression of bone‐marrow mesenchymal stem‐cell markers (CD29, CD90 and CD105) and very low expression of specific hematopoietic cells markers (CD14, CD34 and CD45). Conclusion: Our results indicate that hDPSCs isolated from diseased but vital teeth of various tooth types can be stored in liq N₂ for future usage.     

牙髓干细胞、外胚间充质干细胞生物学特陛比较研究

目的：以骨髓间充质干细胞BMSC为参照,从形态学和生长增殖活性等方面对牙髓干细胞DPSC、外胚间充质干细胞EMSC进行观察分析,研究二者的关系,为牙组织工程研究中种子细胞的筛选提供细胞学依据。方法：通过观察原代培养DPSC、EMSC、BMSC的生长情况和细胞形态,检测细胞克隆形成能力,绘制生长曲线,测定细胞增殖率,测定增殖周期等观察比较DPSC,EMSC生物学特性。结果：原代培养的DPSC细胞组成相对单一,EMSC包含有多种间充质类型细胞：EMSC体外增殖形成克隆的能力高于DPSC和BMSC,DPSC的增殖能力较BMSC强,EMSC生长增殖能力较强;DPSC、EMSC处于G1的细胞含量较低,而处于S期的细胞含量较高,细胞处于增殖分化的活跃期。结论：DP—SC、EMSC具有与BMSC相似的间充质干细胞形态;EMSC有可能作为口腔颌面部问充质干细胞的来源,包含有多种间充质类型细胞,细胞增殖能力较强。DPSC作为组织中的专能干细胞,细胞形态均一,细胞增殖能力弱于EMSC。     

牙髓干细胞的可塑性研究

牙髓干细胞的可塑性是将其应用于临床的基础.下面就牙髓干细胞的可塑性和影响可塑性的因素以及牙髓干细胞可塑性的应用和前景作一综述.     

干细胞表面标志物在牙髓干细胞中的表达

目的:探讨磁珠分选后培养的人牙髓干细胞的表面标记抗原随培养代数增加的变化情况。方法:改良组织块法培养的人牙髓细胞,至第2代（P2）时,用磁珠方法分选出STRO-1阳性细胞,用流式细胞术分别检测P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8代的干细胞表面标志物CD73、CD90、CD105、 CD166、STRO-1。取P3代细胞,分别进行成骨诱导和成脂诱导。21 d后,分别行茜素红染色和油红O染色,观察矿化物形成情况和脂滴形成情况,同时以未诱导细胞为对照。结果:STRO-1在牙髓干细胞表面随代数增加而下降,CD73、CD90、CD105、 CD166的表达比较稳定,茜素红染色可见矿化结节形成,油红O染色显示形成大量脂滴。结论:STRO-1在牙髓干细胞表面随代数增加而下降,其他干细胞标志物比较稳定。