含去痴灵挥发油的大鼠血清对体外培养新生小鼠皮层神经元的营养作用*

目的:研究含去痴灵挥发油的大鼠血清对体外培养新生小鼠皮层神经元的营养作用。方法:采用血清药理学方法,制备含去痴灵挥发油的大鼠血清。体外培养新生小鼠皮层神经元,在无血清培养液中加入含去痴灵挥发油的大鼠血清,使培养基中含药血清的最终体积分数分别为0.1%,0.5%和2.5%,设立空白血清对照组和重组人碱性成纤维细胞生长因子(rhbFGF,终浓度为20 ng.mL-1)阳性对照组。观察培养48 h细胞的形态学改变,定量比较神经元突起数目和长度;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测培养d 4和d 8神经元存活数;并用RT-PCR测定培养d 4时神经元细胞的微管相关蛋白2(MAP2)的mRNA含量。结果:0.5%和2.5%的含去痴灵挥发油的大鼠血清均能使神经元突起数目和长度增加、不同培养期细胞存活数增加、MAP2基因表达量增加。结论:含去痴灵挥发油的大鼠血清对新生小鼠皮层神经元具有营养作用。     

八月札乙醇提取物含药血清通过抑制糖酵解调控BEL-7404细胞增殖与凋亡

目的 研究八月札乙醇提取物含药血清对BEL-7404细胞增殖和凋亡及糖酵解的影响,探讨其可能的作用机制。方法 制备八月札乙醇提取物低(生药3.15 g·kg^–1)、中(生药6.30 g·kg^–1)、高(生药12.60 g·kg^–1)剂量组及空白对照组的含药血清作用于体外培养的BEL-7404细胞。采用CCK-8法检测八月札乙醇提取物含药血清对细胞增殖的影响,采用DAPI荧光染色法观察八月札乙醇提取物含药血清对细胞凋亡的影响,采用Annexin V-FITC/PI双染法检测八月札乙醇提取物含药血清对细胞凋亡率的影响,采用葡萄糖检测试剂盒、乳酸检测试剂盒测定葡萄糖摄取量、乳酸生成量,采用Western blotting检测八月札乙醇提取物含药血清对BEL-7404细胞中活化的半胱氨酸蛋白酶-3(cleavedcaspase-3)、活化的多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved poly ADP-ribose polymerase,cleaved PARP)、己糖激酶2(hexokinase 2,HK2)、丙酮酸激酶(pyru...     

葛根对大鼠成骨细胞增殖分化影响的血清药理学实验

目的:观察葛根含药血清对新生大鼠颅骨成骨细胞增殖分化的影响.方法:将32只SD大鼠随机分为实验组与对照组,在同等条件下制备葛根处理大鼠含药血清和对照血清,观察不同采血时间及血清添加量对成骨细胞增殖和碱性磷酸酶(ALP)的影响.结果:葛根末次灌胃后1～2小时采血的含药血清对成骨细胞增殖和ALP的作用明显(P＜0.01),随着含药血清添加量的增加,对成骨细胞增殖和A"的作用明显增强(P＜0.01).结论:含葛根处理大鼠血清可促进成骨细胞增殖和分化.     

活血消瘿片含药血清对FRTL-5细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨活血消瘿片(Huoxuexiaoying Tablet)含药血清对大鼠甲状腺细胞FRTL-5增殖和凋亡的影响。方法:用SD大鼠制备活血消瘿片含药血清及空白血清;采用CCK-8法检测不同浓度活血消瘿片含药血清对FRTL-5细胞增殖活性的影响;按含药血清比例分为对照组和活血消瘿片含药血清低、中、高剂量组,加药作用24h后,采用流式细胞术检测活血消瘿片含药血清对FRTL-5细胞周期及凋亡的影响;采用Western blot法检测各组细胞中特异性周期蛋白-D1(Cyclin D1)、增殖细胞核抗原(PCNA)、半胱天冬氨酸酶-3(Caspase-3)、活化的Caspase-3(Cleaved-Caspase-3)、半胱天冬氨酸酶-9(Caspase-9)以及活化的Caspase-9(Cleaved-Caspase-9)蛋白的表达情况。结果:活血消瘿片含药血清呈浓度依赖趋势将FRTL-5细胞周期阻滞于G0/G1期;与对照组比较,各给药组细胞凋亡率显著升高(P<0.01);Western blot结果表明活血消瘿片含药血清低、中、高剂量组细胞中Cyclin D1、PCNA、Caspase-3、Caspase-9蛋白的相对表达量显著降低,Cleaved-Caspase-3、Cleaved-Caspase-9蛋白的相对表达量显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:活血消瘿片含药血清对FRTL-5细胞的增殖具有抑制作用,并可诱导其凋亡。其机制可能与抑制CyclinD1、PCNA的表达,促进Caspase-3、Caspase-9的活化有关。     

Effect of traditional Chinese medicine YiKang decoction on endometrial receptivity

目的 探讨中药抑抗汤含药血清对体外培养的小鼠子宫内膜容受性的影响.方法 40只实验小鼠随机分为两组,分别用中药抑抗汤0.8ml和等量生理盐水灌胃28d,制备含药血清和空白血清.提取妊娠第4天(D4)雌鼠子宫内膜细胞后分为含药血清(A组)、胎牛血清(B组)和空白血清(C组)三组进行细胞培养.黏附实验检测子宫内膜细胞的黏附能力,ELISA法检测细胞培养液白血病抑制因子(LIF)水平,Western blot检测整合素ανβ3蛋白水平.结果 A组细胞黏附能力、LIF和整合素ανβ3蛋白表达均较B、C组显著增加(P＜0.05).结论 抑抗汤可能是通过增强细胞黏附功能,增加LIF和整合素ανβ3的表达来改善子宫内膜容受性.     

蛇黄肝炎汤含药血清对免疫抑制大鼠免疫功能的调节作用

目的：观察蛇黄肝炎汤含药血清对环磷酰胺致免疫抑制模型大鼠免疫功能的影响。方法：通过注射环磷酰胺建立免疫抑制模型大鼠,制备免疫抑制大鼠脾T淋细胞及腹腔巨噬细胞,采用MTT法检测蛇黄肝炎汤含药血清对脾T淋巴细胞增殖及腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响。结果：不同浓度含药血清均能协同有丝分裂原ConA刺激免疫抑制大鼠脾T淋巴细胞的增殖,并可明显促进免疫抑制模型大鼠PMφ吞噬能力。结论：蛇黄肝炎汤含药血清可通过增强机体免疫功能,从而发挥抗肿瘤作用。     

黄芩含药血清对3种巨噬细胞的抗炎免疫活性

目的 考察黄芩提取物(SBE)含药血清对正常的及细菌脂多糖(LPS)激活的3种单核巨噬细胞一氧化氮(NO)释放的影响.方法 将SBE灌胃大鼠后,在0.5～6 h内,眼眶取血,分离血清,将血清加入正常的及LPS活化的3种巨噬细胞培养液内,培养24 h后,检测培养液内NO含量.结果 SEB不同给药时间的含药血清,在不影响细胞存活率的情况下,可以不同程度的降低正常的及LPS激活的3种巨噬细胞NO的释放量.结论 SBE含药血清具有一定的免疫抑制及抗炎活性.     

茵陈蒿汤保肝作用的血清药理学研究

目的建立茵陈蒿汤血清药理学研究方法。方法建立CCl4诱导的大鼠肝细胞损伤细胞模型,SD大鼠为含药血清供体,以含药血清对损伤肝细胞增殖(WST-8法)的影响为指标,采用正交试验法优选含药血清的制备方法,并确定体系中血清添加量。结果每天以成人等效剂量10倍的茵陈蒿汤水提醇沉液间隔8 h分2次给正常大鼠灌胃给药,连续3 d,末次给药后1 h采集血浆,体系中加入20%含药血清能明显提高损伤肝细胞的增殖能力。结论适宜条件下制备的茵陈蒿汤含药血清对CCl4诱导的肝细胞损伤具有明显保护作用,血清药理学研究方法可以用于该方剂的药效评价。     

锁阳含药血清对MC3T3-E1成骨细胞增殖分化及矿化的影响

目的:研究锁阳含药血清对体外培养小鼠成骨细胞的增殖、分化以及矿化的影响。方法:小鼠灌胃14天后摘眼球取血制备含药血清,分别将10%浓度的各组含药血清及对照组血清(生理盐水组血清)分别加入细胞培养液中培养成骨细胞。采用CCK8法检测成骨细胞增殖能力,钙钴法检测其碱性磷酸酶活性,0.2%茜素红染色法观察成骨细胞钙化结节情况。结果:同一时间点,与生理盐水血清组比较,锁阳含药血清各组均能促进MC3T3-E1成骨细胞增殖,其中,锁阳含药血清中剂量组与高剂量组在三个时间点均能够显著促进细胞增殖(p0.01);锁阳含药血清能够增强MC3T3-E1成骨细胞分泌碱性磷酸酶(ALP),且有一定的浓度依赖性;随着锁阳含药血清浓度的增加,钙化结节数量也呈现增加的趋势。结论:锁阳含药血清能够促进MC3T3-E1成骨细胞增殖分化与矿化,且在一定浓度范围内,浓度越高,促进作用愈明显。     

肉桂油抗柯萨奇病毒B3的血清药理学研究

目的 利用血清药理学方法 探讨肉桂油抗柯萨奇病毒B3(CVB3)的作用机制. 方法 制备SD大鼠乳鼠心肌炎细胞模型,72 h后,加入肉桂油静脉给药所得的大鼠含药血清至感染细胞模型,同时设立模型组与空白对照组,测定血清中不同时间点桂皮醛与肉桂酸的含量,并采用实时定量聚合酶链反应(PCR)法测定各组CVB3mRNA的相对含量,噻唑蓝(MTT)比色法测定各组心肌细胞存活率. 采用SPSS统计学软件对其进行单因素相关性分析. 结果肉桂油含药血清对心肌细胞存活率和CVB3mRNA的相对含量的影响与肉桂酸的浓度相关(P<0.05或P<0.01),而与桂皮醛的浓度无显著相关. 结论 肉桂油对病毒性心肌炎具有抗病毒活性,肉桂酸是肉桂油抗病毒的活性成分.     

海风藤挥发油的β-环糊精包合工艺研究

目的：优选出海风藤挥发油β-环糊精包合最佳工艺。方法：以挥发油包合率、包合物收率为指标,采用正交试验优选海风藤挥发油β-环糊精包合的最佳工艺条件。结果：最佳包合工艺条件为包合比为1：10,包合温度60℃,包合时间2h。结论采用优选的包合工艺条件制备的包合物包合率及收率较高。     

血清药理学方法观察复方斑蝥胶囊对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响

目的 :研究复方斑蝥胶囊含药动物血清对人肝癌细胞SMMC -7721增殖的影响。方法 :采用血清药理学方法 ,对兔灌胃给予不同剂量 (临床等效剂量、2倍临床等效剂量和3倍临床等效剂量 )的复方斑蝥胶囊混悬液 ,应用MTT比色法观察含药血清对人肝癌细胞SMMC -7721增殖的抑制作用 ,同时观察临床等效剂量组各采血时间点的抑制作用。结果 :3个剂量组的含药血清对SMMC -7721细胞增殖均有抑制作用 (P<0 01) ,其中以3倍临床等效剂量组含药血清的抑制率最高 ;临床等效剂量组各采血时间点的含药血清对SMMC -7721细胞增殖均有抑制作用 (P<0 05) ,其中3h时含药血清的抑制率最高。结论 :复方斑蝥胶囊含药动物血清对人肝癌细胞SMMC -7721增殖具有一定的抑制作用 ,并具有剂量依赖性。     

痛泻要方对FD大鼠Cajal间质细胞内、外游离Ca~(2+)浓度的影响

目的:观察痛泻要方对功能性消化不良(FD)大鼠Cajal间质细胞内、外游离Ca~(2+)浓度的影响。方法:通过夹尾刺激法制备FD模型,以痛泻要方灌胃为干预手段,最后一次灌胃结束24小时后处死大鼠,腹主动脉采血,制备含有痛泻要方组分的血清(含药血清)。分别并培养幼鼠小肠Cajal间质细胞,将已制备的含药血清分两次分别加入Cajal间质细胞培养瓶中,微板法检测Cajal间质细胞内、外Ca~(2+)浓度。结果:含痛泻要方血清可显著升高Cajal间质细胞内Ca~(2+)浓度,降低Cajal间质细胞外Ca~(2+)浓度。结论:含药血清对Cajal间质细胞内、外Ca~(2+)浓度的影响可能是痛泻要方调节FD胃肠动力障碍的作用机制之一。     

纯化雄黄体内外抗肿瘤作用

目的:研究纯化雄黄的体内外抗肿瘤作用.方法:建立移植瘤小鼠S180肉瘤模型,观察纯化雄黄高、中、低剂量(2,1,0.5 g·kg-1,灌胃,qd)连续给药14 d对荷瘤小鼠的瘤重、胸腺指数和脾脏指数的影响,实验同时设溶媒对照组和环磷酰胺阳性对照组(CTX,100 mg·kg-1,腹腔注射1次).另外制备荷瘤小鼠含药血清和正常大鼠的含药灭活血清,通过血清药理学研究方法观察含药血清对人食管癌细胞株Ec9706的体外增殖抑制作用.结果:纯化雄黄可抑制小鼠S180肉瘤的生长,高、中、低剂量组抑瘤率分别为39.1%,29.2%和21.1%,对胸腺指数和脾脏指数无明显影响;荷瘤小鼠含药血清及正常大鼠的含药灭活血清均可抑制人食管癌细胞株Ec9706生长,且在48 h抑制作用达到最强,抑制率分别为42.9%和27.7%.结论:纯化雄黄在体内和体外均有明显的肿瘤抑制作用.     

降糖舒心颗粒对晚期糖化终产物致离体血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:观察降糖舒心颗粒对晚期糖化终产物(AGEs)致离体血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响.方法:分离正常大鼠胸主动脉VSMCs,并传代培养,用AGEs造成胸主动脉VSMCs增殖模型.给正常大鼠灌胃降糖舒心颗粒混悬液10d,制备含药血清,采用噻唑蓝(MTT)比色法和3H-TdR掺入试验测定其吸收度和3H-TdR掺入量(cpm值).结果:AGEs能明显促进VSMCs增殖,降糖舒心颗粒含药血清能抑制胸主动脉VSMCs的增殖及3H-TdR掺入(与对照组比P＜0.05或P＜0.01),并呈现一定的量效关系.结论:降糖舒心颗粒对AGEs诱导VSMCs的增殖有一定的抑制作用.     

中药抑抗汤含药血清对子宫内膜容受性的影响

目的探讨中药抑抗汤含药血清对体外培养的小鼠子宫内膜容受性的影响。方法40只实验小鼠随机分为两组,分别用中药抑抗汤0.8ml和等量生理盐水灌胃28d,制备含药血清和空白血清。提取妊娠第4天(D4)雌鼠子宫内膜细胞后分为含药血清(A组)、胎牛血清(B组)和空白血清(C组)三组进行细胞培养。黏附实验检测子宫内膜细胞的黏附能力,ELISA法检测细胞培养液白血病抑制因子(LIF)水平,Western blot检测整合素ανβ3蛋白水平。结果 A组细胞黏附能力、LIF和整合素ανβ3蛋白表达均较B、C组显著增加(P<0.05)。结论抑抗汤可能是通过增强细胞黏附功能,增加LIF和整合素ανβ3的表达来改善子宫内膜容受性。     

四种含药血清对小鼠B16黑素瘤细胞黑素合成及酪氨酸酶活性的影响

目的研究传统医学文献中专治白癜风的常用药物诃子、余甘子、柴胡及药群组合(含木香、胡椒、干姜等)的药物血清对小鼠B16黑素瘤细胞黑素合成及酪氨酸酶活性的影响。方法采用"通法"制备上述药物高、低不同剂量的大鼠含药血清及不含药物的空白血清,以体外培养的小鼠B16黑素瘤细胞为模型,采用MTT法测定各组受试血清对B16细胞增殖活性的影响;NaOH细胞裂解法测定黑素合成量,L-DOPA氧化法测定对酪氨酸酶活性的影响。结果与正常对照组(含10%小牛血清)相比,除组合低剂量组外,其他受试血清均不影响小鼠B16细胞的增殖活性(P>0.05);与空白血清组相比,柴胡和药群组的高、低剂量组含药血清均对B16黑素瘤细胞黑素合成有促进作用(P<0.05,P<0.01),而诃子低剂量、牛柑子高剂量组含药血清具有促进黑素合成的作用(P<0.05,P<0.01);与空白血清组相比,四种受试药物的高低剂量组含药血清对小鼠B16细胞酪氨酸酶活性均有激活作用(P<0.05,P<0.01)。结论四种受试药物含药血清除组合低剂量组外,均在不影响小鼠B16细胞增殖活性的基础上,表现出不同程度的促进其黑素合成的作用,此作用与提高酪氨酸酶活性有一定关系。     

海风藤挥发油抗风湿作用的药效学

目的：通过药理实验确定海风藤挥发油抗风湿作用。方法：采用热板法、棉球肉芽法、耳肿胀法。结果：海风藤挥发油各剂量组均表现出明显的抗炎镇痛作用。结论：实验结果提示海风藤挥发油具有抗风湿作用。     

Glucan在Con A所致免疫性肝损伤中的作用

目的观察Glucan对刀豆蛋白A(ConA)所致小鼠免疫性肝损伤的干预效果及其作用机制。方法ConA尾静脉注射制备小鼠免疫性肝损伤模型,在ConA注射前1h腹腔注射Glucan,观察正常对照组、ConA损伤组、Glucan/ConA组肝损伤的情况,检测血清谷丙转氨酶(ALT)、α肿瘤坏死因子(TNF-α)及组织中一氧化氮(NO)含量的变化,并用DNAladder检测肝细胞凋亡的变化。结果ConA尾静脉注射后,出现明显的肝损伤,血清ALT、TNF-α及组织中NO水平明显升高,DNAladder检测可见明显的梯状条带;预先应用Glucan后,可减轻这些改变。结论Glu-can对ConA所致小鼠免疫性肝损伤有保护作用。     

斑秃患者血清对人头皮毛囊体外生长的影响及自拟生发方的干预作用

目的观察斑秃患者血清对人头皮毛囊体外生长的影响及自拟生发方的干预作用。方法门诊斑秃患者1例,服药前空腹采血制备不含药血清;给予20 g/kg剂量的自拟生发方口服,连续10 d,于第11天清晨空腹服药后采血制备含药血清。复制人头皮游离毛囊体外培养模型,分为3组:空白对照组加Williams E无血清培养基,不含药斑秃血清组加入体积分数为20%血清,含药斑秃血清组加入体积分数为20%的自拟生发方含药血清。采用倒置显微镜观察毛囊大体形态变化,并测量毛囊生长长度和生长时间,计算前4 d平均生长速度和最终生长长度。结果不含药斑秃血清组前4 d平均生长速度、生长时间、最终生长长度均减少,与空白对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01);而含药斑秃血清均可不同程度升高以上指标(P<0.05或P<0.01)。结论自拟生发方具有促进毛囊生长、维持毛囊正常形态的作用,而斑秃血清对毛囊生长具有一定的负影响。